Effect of Mcl-1 on osteosarcoma cells under doxorubicin-induced apoptosis

目的 研究阿霉素诱导骨肉瘤细胞凋亡过程中Mcl-1含量的变化以及Mcl-1对骨肉瘤细胞凋亡的调控作用.方法 采用半定量PCR法检测Mcl-1、Bcl-2、β-actin的mRNA水平变化;Western blot法检测Mcl-1、Bcl-2、β-actin蛋白变化;转染pcDNA3-Mcl-1质粒使细胞高表达Mcl-1、Bcl-2;采用Caspase3/7活性试剂盒检测Caspase3/7活性.结果 骨肉瘤细胞在阿霉素作用下,Mcl-1和Bcl-2的mRNA水平无变化,而蛋白水平下调;过表达Mcl-1可以明显抑制凋亡标志物PARP的剪切,而Bcl-2不具有抑制效应;同样,过表达Mcl-1可以抑制阿霉素作用下Caspase3/7的活化.结论 阿霉素作用下,Mcl-1蛋白水平下降是骨肉瘤细胞发生凋亡的重要原因,并且该凋亡过程与Caspase的活化有关.     

Bcl-2抑制剂S1诱导人卵巢癌细胞凋亡及其机制的研究

目的:以人卵巢癌细胞SKOV3为研究对象,探讨Bcl-2抑制剂S1诱导人卵巢癌细胞凋亡的机制。方法:通过MTT法检测S1作用下卵巢癌细胞的生存率;S1 10μmol/L作用不同时间,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot检测凋亡相关蛋白Mcl-1的变化。结果:与对照组相比S1能明显抑制SKOV3的生存率;流式细胞术结果显示,S1引起SKOV3细胞凋亡明显升高;蛋白水平检测S1作用8 h能明显抑制SKOV3细胞Mcl-1蛋白表达。结论:S1可能通过抑制Mcl-1蛋白诱导人卵巢癌细胞凋亡。     

促炎性细胞因子对大鼠胰岛β细胞miR-29家族及抗凋亡蛋白表达水平的影响

目的:探讨促炎性细胞因子对胰岛β细胞miR-29家族及抗凋亡蛋白水平的影响?方法:将大鼠胰岛细胞系INS-1细胞在加或不加促炎性细胞因子混合物(IL-1β 10 ng/mL?TNF-α 50 ng/mL?IFN-γ 50 ng/mL)的培养液中培养24 h,设立对照组?促炎性细胞因子干预组?流式细胞仪测细胞凋亡,实时荧光定量PCR检测INS-1细胞miR-29a/b/c表达以及抗凋亡基因骨髓细胞白血病蛋白1(myeloid cell leukemia 1,Mcl-1)mRNA?B细胞淋巴瘤蛋白2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2) mRNA的表达水平,Western blot技术检测Mcl-1?Bcl-2蛋白的表达情况?结果:①促炎性细胞因子干预的INS-1细胞miR-29a/b表达水平较正常对照组增加,差异有统计学意义(P < 0.05),miR-29c表达水平较正常对照组有上升趋势,但无统计学差异(P > 0.05);②促炎性细胞因子干预组INS-1细胞Mcl-1 mRNA?Bcl-2 mRNA表达水平较对照组减少,但差异无统计学意义(P > 0.05);③促炎性细胞因子干预组INS-1细胞抗凋亡蛋白Mcl-1?Bcl-2表达水平较正常对照组明显下降,差异有统计学意义(P < 0.01);④促炎性细胞因子干预组细胞凋亡率增高,与正常对照组相比差异有统计学意义(P < 0.05)?结论:促炎性细胞因子刺激处理的INS-1细胞miR-29a/b表达均上调,抗凋亡蛋白Mcl-1?Bcl-2下调,凋亡率上升,推测促炎性细胞因子可能通过调节miR-29家族及抗凋亡蛋白的表达水平诱导胰岛β细胞凋亡,从而促进1型糖尿病的发生?     

Mcl-1、PI3K通路活化对胃癌细胞生长及化疗敏感性的影响

目的:探讨Mcl-1以及PI3K通路活化对胃癌细胞生长及化疗敏感性的影响。方法:分别用阿霉素、足叶乙甙和PI3K通路抑制剂(wortmannin)在不同时间段处理胃癌细胞BGC-823后,采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞对药物的敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况并分析细胞周期,Western blot法测定细胞Mcl-1蛋白活性,RT-PCR法测定细胞Mcl-1 mRNA活性。结果:阿霉素、足叶乙甙作用BGC-823 24 h后,Mcl-1蛋白活性降低,Mcl-1 mRNA表达下降。加用Wortmannin后,阿霉素、足叶乙甙对BGC-823凋亡诱导和周期阻滞作用持续增强,Mcl-1蛋白及mRNA表达进一步降低,肿瘤细胞对药物保持较高敏感性。结论:阿霉素、足叶乙甙至少部分是通过下调Mcl-1的表达诱导胃癌细胞凋亡。Mcl-1、PI3K通路活化可促进胃癌细胞的生存,降低化疗敏感性。     

米托蒽醌对人卵巢癌COC1细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制

目的：研究米托蒽醌（Mitoxantrone,MXT）对人卵巢癌COC1细胞体外增殖与凋亡活性,及凋亡相关基因Mcl-1表达的影响。方法应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度的MXT对COC1细胞体外增殖活性的影响;流式细胞分析方法（FCM）定量检测不同浓度的MXT作用后COC1细胞的凋亡率;Western-blot检测active caspase-3蛋白和Mcl-1蛋白定量;RT-PCR检测Mcl-1 mRNA的表达变化。结果COC1细胞生长抑制率和凋亡率均随MXT浓度的增加递增（P〈0.05）;COC1细胞生长抑制率随MXT作用时间的延长而增高（P〈0.05）;active caspase-3蛋白水平随着MXT作用浓度增高递增（P〈0.05）;Mcl-1 mRNA和蛋白表达水平随着MXT作用浓度增高递减（P〈0.05）。结论米托蒽醌能抑制卵巢癌COC1细胞的增殖,诱导其凋亡,此作用可能与MXT抑制COC1细胞中的Mcl-1表达有关。     

槲皮素对人卵巢癌细胞-3增殖和凋亡的影响

目的:探讨槲皮素对人卵巢癌细胞-3(ovarian carcinoma cell,OVCAR-3)增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:将对数生长期的OVCAR-3细胞随机分为对照组和槲皮素组。对照组细胞给予培养基常规培养,而槲皮素组细胞加入槲皮素(160μmol·L~(-1))。各组细胞培养48 h后,利用噻唑蓝检测人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞增殖;流式细胞仪检测人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞凋亡,RT-PCR检测细胞受体型酪氨酸激酶2(JAK2),信号传导与转录激活因3(STAT3),B细胞淋巴因子2(Bcl-2),人Bcl-2相关X蛋白(Bax)信使mRNA表达水平。免疫蛋白印记法检测各组OVCAR-3细胞中STAT3,磷酸化受体型酪氨酸激酶2(p-JAK2),磷酸化信号传导与转录激活因3(p-STAT3),Bax,Bcl-2蛋白的变化,Caspase3活性试剂盒检测Caspase3活性。结果:MTT检测结果显示槲皮素组与对照组相比,人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞增殖率明显下降(P0.05)。流式细胞仪检测显示槲皮素组OVCAR-3细胞凋亡率较对照组明显升高(P0.05)。RT-PCR检测显示槲皮素组与对照组JAK2和STAT3信使mRNA表达水平无明显差异,而槲皮素组Bax信使mRNA水平比对照组明显增高,槲皮素组Bcl-2信使mRNA水平比显著低于对照组。Western blotting检测显示,槲皮素组的JAK2和STAT3蛋白表达与对照组比较,无明显差异(P0.05),而槲皮素组的p-STAT3,p-JAK2和Bcl-2蛋白表达水平显著低于对照组(P0.05),槲皮素组的Bax表达显著高于对照组(P0.05)。Caspase3活性试剂盒检测结果显示,槲皮素组Caspase3活性表达水平显著高于对照组。结论:槲皮素能明显抑制人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞增殖,促进人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞凋亡,其作用机制可能是通过激活JAK2/STAT3信号传导通路。     

E2F-1在胃腺癌细胞内质网应激反应中对Mcl-1的调控作用

目的 探讨Mcl-1在胃腺癌细胞对内质网应激诱导细胞凋亡耐受中的作用,以及内质网应激状态下E2F-1调控Mcl-1的机制.方法 采用PI单染法测定细胞凋亡率;Western blot检测GRP78、Mcl-1、Bcl-2、E2F-1蛋白变化;实时荧光定量PCR检测Mcl-1 mRNA水平变化;转染pcDNA -E2F-...     

阿霉素可通过MAPK信号转导通路促进成骨肉瘤细胞凋亡

目的: 探讨阿霉素在适宜的加药浓度、作用时间下诱导成骨肉瘤细胞凋亡的分子机制.方法: 首先通过FCM,MTT等方法探讨引起成骨肉瘤细胞凋亡的最佳药物作用浓度及时间;在此条件下应用不同信号转导通路的抑制剂观察导致细胞凋亡的可能通路;最后应用Western-Blotting来检测在成骨肉瘤细胞凋亡过程中相关信号分子的表达水平及磷酸化水平的变化.结果: 0.4 mg/L阿霉素作用成骨肉瘤细胞12 h即可引起细胞凋亡,并呈时间依赖性;用p38的抑制剂SB203580和MEK4/7的抑制剂U0126可明显抑制细胞的凋亡;Western Blotting检测发现阿霉素作用于细胞后,MAPK家族成员JNK、ERK和p38等各激酶的表达水平未发生明显变化,但JNK,p38的磷酸化水平提高了ERK的磷酸化水平有所下降;用Western Blotting检测到阿霉素作用后p53蛋白的表达水平有提高.结论: 阿霉素可导致成骨肉瘤细胞凋亡,而且此凋亡过程与MAPK通路有关.     

艾塞那肽减轻阿霉素引起的心肌细胞凋亡

目的:探讨艾塞那肽是否对阿霉素引起的心肌细胞凋亡具有保护作用。方法:将体外培养的H9c2细胞分为空白组(单纯DMEM培养基)、阿霉素组(加入10μM阿霉素)、艾塞那肽组(阿霉素刺激前0.5h给予30nM艾塞那肽预处理)后继续培养24h。TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用MTT法检测各组细胞的活性、酶标仪检测活性氧(ROS)水平、Caspase3、Caspase 9活性及线粒体膜电位(△Ψm),实时荧光定量PCR检测Bcl-2/Bax mRNA水平比值。结果:与空白组相比,阿霉素组细胞凋亡程度显著增加(流式细胞检测法:P<0.01;TUNEL法:P<0.01),H9c2心肌细胞活性(P<0.01),△Ψm(P<0.01)及Bcl-2/Bax比值(P<0.01)均显著降低,而细胞内ROS水平(P<0.01)及Caspase3、Caspase9活性(均为P<0.01)均显著增加。给予艾塞那肽预处理后能逆转上述变化,细胞凋亡程度显著下降(流式细胞检测法:P<0.01;TUNEL法:P<0.05),H9c2心肌细胞活性(P<0.05),△Ψm(P<0.01)及Bcl-2/Bax比值(P<0.01)均显著增加,细胞内ROS水平(P<0.05)及Caspase3、Caspase9(均为P<0.05)活性均显著降低。结论:艾塞那肽可能通过降低细胞内ROS水平,增加△Ψm,增加Bcl-2/Bax比值来改善阿霉素诱导的心肌细胞凋亡,发挥抗凋亡效应。     

高表达Mcl-1对衣霉素诱导胃腺癌细胞凋亡的影响

目的 探讨Bcl-2蛋白家族中Mcl-1在衣霉素诱导胃腺癌细胞内质网应激性凋亡中的作用.方法 采用流式细胞仪PI单染法检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2、Mcl-1、Bcl-XL在衣霉素诱导胃腺癌细胞内质网应激状态下的表达;脂质体LipofectamineTM2000转染pcDNA3.0/Mcl-1质粒;Western blot分别检测转染前后Mcl-1蛋白的表达水平变化.结果 衣霉素诱导胃腺癌细胞凋亡具有剂量和时间依赖性,但两株细胞对衣霉素诱导的凋亡都不敏感,其中SGC-7901较BGC-823对衣霉素的耐受表现更明显.由于衣霉素诱导SGC-7901和BGC-823的凋亡与线粒体凋亡途径有关,检测Bcl-2蛋白家族Mcl-1在SGC-7901中有明显上调.通过转染质粒高表达Mcl-1蛋白,衣霉素诱导的凋亡有明显下降.结论 Mcl-1在衣霉素诱导胃腺癌细胞凋亡中发挥重要的抑制作用.     

雷公藤甲素通过调节microRNA21的表达干预K562/A02细胞的化疗敏感性

目的: 研究雷公藤甲素对K562/A02细胞多药耐药性的逆转作用,并探讨其机制。方法: 四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测雷公藤甲素细胞毒性;采用非毒性浓度雷公藤甲素作用于K562/A02细胞,AnnexinV/PI双标法检测细胞凋亡;荧光定量PCR检测microRNA21表达水平;蛋白印迹法检测Bcl-2蛋白表达水平。microRNA21反义寡核苷酸转染K562/A02细胞,观察细胞增长率,凋亡率和Bcl-2表达的变化。结果: 非毒性浓度（5 nmol/L）雷公藤甲素明显增强K562/A02细胞对多柔比星的敏感性,并能增强多柔比星诱导细胞凋亡的作用,使K562/A02细胞平均凋亡率由4.3%明显上升到18.5%（P< 0.05）;雷公藤甲素作用后,microRNA21和Bcl-2蛋白水平降低;microRNA21反义寡核苷酸转染K562/A02细胞后,降低了Bcl-2表达,提高多柔比星敏感性和多柔比星诱导的细胞凋亡。 结论: 雷公藤甲素增强K562/A02细胞对多柔比星的敏感性,并诱导其凋亡,可能与下调microRNA21水平有关。     

Cx43沉默抑制机械应力诱导的小鼠软骨细胞凋亡

目的：探讨缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)沉默对机械应力诱导的软骨细胞凋亡的影响。方法：将小鼠软骨细胞ATDC5分为空白组、机械应力组、Cx43 siRNA转染组、scramble siRNA转染组、机械应力+scramble组、机械应力+siCx43组。用Flexcell FX-5000系统对体外培养的ATDC5细胞加载机械应力;用定量RT-PCR(quantitative RT-PCR,RT-qPCR)和Western印迹分别检测细胞Cx43 mRNA和蛋白表达水平;用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞活性;用流式细胞术检测细胞凋亡情况;用比色法检测caspase-3活性;用Western印迹检测Bcl-2,Bax,p-JNK和JNK的蛋白表达。结果：经机械应力诱导后,ATDC5细胞Cx43 mRNA和蛋白的表达显著升高(均P<0.05)。转染Cx43 siRNA显著降低细胞Cx43 mRNA和蛋白水平(均P<0.05)。在机械应力刺激下,ATDC5细胞活性显著降低,凋亡增多,caspase-3活性和Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax降低(均P<0.05)。而Cx43沉默显著增加机械应力下ATDC5细胞活性,减少凋亡,降低caspase-3活性和Bax蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax(均P<0.05)。此外,Cx43 siRNA显著抑制机械应力诱导的p-JNK蛋白的表达(P<0.05)。结论：Cx43沉默可能通过调节JNK信号通路,抑制机械应力作用下小鼠软骨细胞凋亡。     

骨肉瘤中survivin、Caspase-8的表达及其与凋亡的相关性研究

目的探讨survivin mRNA、Caspase-8蛋白在骨肉瘤中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法分别采用RT-PCR和免疫组化技术检测40例骨肉瘤及正常组织中survivin mRNA和Caspase-8蛋白的表达,运用TUNEL方法检测细胞凋亡。结果77.5%的骨肉瘤组织survivin mRNA呈阳性表达,显著高于正常组织;Caspase-8蛋白在骨肉瘤和正常组织中的阳性表达率分别为27.5%和85%(P<0.05);在骨肉瘤组织中,survivin mRNA和Caspase-8蛋白表达呈负相关;survivin mRNA阳性的骨肉瘤中细胞凋亡指数明显低于survivin mRNA阴性组(P<0.05);Caspase-8蛋白阳性的骨肉瘤中细胞凋亡指数明显高于Caspase-8蛋白阴性组(P<0.05)。结论survivin、Caspase-8均参与骨肉瘤的发生、发展变化,survivin是通过抑制Caspase-8的活性而发挥其抑制细胞凋亡作用的。     

内毒素对过氧化氢引起的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响

目的：观察内毒素(LPS)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响,探讨其相关机制。方法：C6细胞按处理方法不同分为空白对照组、100 μmol•L^-1 LPS组、1 000 μmol•L^-1 H₂O₂组及1 000 μmol•L^-1 H₂O₂与100μmol•L^-1 LPS联合应用组。药物作用C6细胞6 h,取培养液上清与细胞沉淀,利用LDH检测试剂盒,采用紫外分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;原位末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡率;应用RT-PCR检测相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达;Western blotting检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、细胞色素C(Cyt-C)及CLIC4蛋白水平。结果：与空白对照组比较, 100 μmol•L^-1 LPS组C6细胞凋亡率及LDH释放率增加(P<0.05),在mRNA水平上Bcl-2、Bax表达率未见明显改变(P>0.05),而Caspase-3表达率升高(P<0.05);在蛋白水平上,与空白对照组比较,Bcl-2、Bax、CLIC4及胞浆Cyt-C蛋白水平未见明显变化(P>0.05) ,而Caspase-3蛋白水平高于空白对照组(P<0.05)。与空白对照组比较,1 000 μmol•L^-1 H₂O₂组C6细胞凋亡率及LDH释放率增加(P<0.05);在mRNA水平上Bcl-2表达率低于空白对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3表达率高于空白对照组(P<0.05);在蛋白水平上,Bcl-2蛋白表达低于空白对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3、CLIC4及胞浆Cyt-C蛋白水平明显高于空白对照组(P<0.05)。与H₂O₂组和LPS组比较,LPS与H₂O₂联合作用组细胞凋亡率及LDH释放率明显增加(P<0.05),在mRNA水平上Bcl-2表达率下降(P<0.05),Bax、Caspase-3表达率升高(P<0.05);在蛋白水平上,Bcl-2蛋白表达低于对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3及胞浆Cyt-C蛋白水平明显高于对照组(P<0.05),而CLIC4蛋白水平变化不明显(P>0.05)。结论：单独应用LPS能够激活Caspase-3信号通路,引起C6细胞早期凋亡,同时LPS能促进H₂O₂引起的C6细胞损伤,其机制可能与凋亡相关的Bcl-2/Bax及Caspase-3途径过度激活有关。线粒体氯通道蛋白CLIC4在此过程中作用不明显。     

熊果酸诱导甲状腺乳头状癌细胞TPC-1凋亡的实验

目的 研究熊果酸 (ursolic acid UA) 在体外对人甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1增殖的抑制作用.方法采用不同浓度的UA干预细胞 (对照组0μM, 实验组3μM、6μM、12μM) ;MTT法观察同一时间不同浓度的UA和不同时间同一浓度的UA对TPC-1细胞生长情况的影响;流式细胞术 (FCM) 检测应用UA后TPC-1细胞凋亡情况及细胞周期分布情况;QRT-PCR检测UA干预后TPC-1细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-9 m RNA的表达情况;Western blot检测UA干预后TPC-1细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-9蛋白的表达情况.结果 MTT实验结果显示UA对TPC-1细胞增殖的抑制呈现出浓度和时间的依赖性, 24 h、48 h、72 h的IC50分别为14.21μM、10.56μM、10.39μM;流式Annexin V-FITC/PI双染检测显示UA呈浓度依赖性诱导TPC-1细胞凋亡, 且将TPC-1细胞的生长阻滞在S期;QRT-PCR实验发现, 对照组与实验组均有Bcl-2、Bax、Caspase-9 m RNA的表达, UA呈浓度依赖性下调Bcl-2 m RNA的表达, 上调Bax和Caspase-9 m RNA的表达;Western blot结果显示, 对照组与实验组均有Bcl-2、Bax、Caspase-9蛋白的表达, UA呈浓度依赖性下调Bcl-2的表达, 上调Bax和Caspase-9的表达.结论 熊果酸可显著抑制人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的增殖并诱导其凋亡, 为甲状腺癌治疗提供一定思路.     

蜕皮甾酮对同型半胱氨酸诱导人血管内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨蜕皮甾酮对同型半胱氨酸(Hcy)诱导人脐静脉内皮细胞株CRL-1730凋亡的影响.方法 体外常规培养人血管内皮细胞CRL-1730,细胞计数试剂盒法检测蜕皮甾酮对CRL-1730细胞增殖活力的影响;Hcy处理人血管内皮细胞CRL-1730建立损伤模型,分组为空白对照组、蜕皮甾酮高剂量组(Hcy+1.5μmol/L蜕皮甾酮)、蜕皮甾酮中剂量组(Hcy+1.0μmol/L蜕皮甾酮)、蜕皮甾酮低剂量组(Hcy+0.5μmol/L蜕皮甾酮)、Hcy组;流式细胞术检测CRL-1730细胞凋亡率,并利用荧光染色进行细胞凋亡形态学观察;RT-PCR法检测CRL-1730细胞内Bax、Bcl-2及Caspase-3基因的表达;采用Western blot法检测CRL-1730细胞内Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3蛋白表达.结果 所选浓度蜕皮甾酮对CRL-1730细胞增殖活性无明显影响;流式细胞术结果显示经Hcy处理后的CRL-1730细胞凋亡率明显增高,但经过不同浓度的蜕皮甾酮处理后,Hcy诱导的CRL-1730细胞凋亡率明显下降;与空白对照组比较,Hcy组CRL-1730细胞Bax和cleaved-Caspase-3的表达明显增高,Bcl-2的表达明显降低,差异有统计学意义.与Hcy组比较,经过低、中、高剂量蜕皮甾酮处理后,Hcy诱导的CRL-1730细胞Bcl-2表达上调,Bax和cleaved-Caspase-3表达下调;与空白对照组比较,Hcy组CRL-1730细胞Bax mRNA和Caspase-3 mRNA的表达明显增高,Bcl-2 mRNA的表达明显降低,差异有统计学意义.与Hcy比较,经过低、中、高剂量蜕皮甾酮处理后,CRL-1730细胞Bcl-2 mRNA表达上调,Bax mRNA和Caspase-3 mRNA表达下调.结论 蜕皮甾酮对Hcy诱导人脐静脉内皮细胞CRL-1730凋亡具有保护作用,这为其治疗心血管疾病提供了依据.     

尼古丁对A549 化学治疗敏感性的影响

目的 探讨尼古丁（Nicotine）诱导的肺癌A549 细胞对顺铂的敏感性,以及对凋亡相关蛋白表达水 平的影响。方法 将A549 细胞随机分为对照组、顺铂（CDDP）组和CDDP+Nicotine 组,培养48 h,MTT 法检 测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting 检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bak 和Mcl-1 的表达 水平。结果 与CDDP 组比较,CDDP+Nicotine 组的细胞活力更高,细胞凋亡率更低,促凋亡蛋白Bak 的表 达无变化,抗凋亡蛋白Bcl-2 和Mcl-1 的表达上调,且Mcl-1 磷酸化水平上调。结论 尼古丁可能通过上调 Bcl-2 和Mcl-1 的表达,以及Mcl-1 的磷酸化水平降低肺癌细胞A549 对CDDP 的敏感性。     

薤白总皂苷对人宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡作用的影响

目的观察薤白总皂苷对宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡作用的影响,并探讨其可能的作用机制。方法用不同浓度的薤白总皂苷(25、50、100、250、500、1000μg/ml)于不同作用时间(24、48、72 h)处理宫颈癌HeLa细胞后,采用MTT法检测不同浓度的薤白总皂苷在不同作用时间下对HeLa细胞增殖率的影响;用100和200μg/ml的薤白总皂苷处理宫颈癌HeLa细胞48 h后,Annexin V-FITC/PI染色测定细胞凋亡率,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,Caspase试剂盒检测HeLa细胞中Caspase-9和Caspase-3的活性,荧光定量PCR测定Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值。结果薤白总皂苷对HeLa细胞的生长抑制作用呈明显的时间一剂量依赖性;薤白总皂苷(100和200μ/ml)处理能显著降低HeLa细胞线粒体膜电位,抑制HeILa细胞增殖,促进其凋亡(P<0.05,P<0.01);上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性(P<0.05,P<0.01)。结论薤白总皂苷有显著的抑制HeLa细胞增殖和诱导凋亡作用,其作用机制可能与其降低HeLa细胞线粒体膜电位,上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性有关。     

Beta-微管蛋白ⅢASODN对Ec9706/P-1细胞凋亡的影响

目的:观察β-微管蛋白Ⅲ(β-TubulinⅢ,TUBB3)反义寡核苷酸(Antisense oligonucleotide,ASODN)对Ec9706/P-1细胞凋亡的影响。方法:以体外诱导的人食管癌紫杉醇耐药细胞株Ec9706/P-1为模型,设ASODN组和无关序列寡核苷酸(Nonsense oligonucleotide,NSODN)组,应用免疫细胞化学方法检测NF-κBppabp65、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达;采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测NF-κBppabp65、bcl-2和caspase-3 mRNA的表达;采用DNA凝胶电泳和吖啶橙荧光染色法检测细胞凋亡变化。结果:免疫细胞化学方法显示ASODN组NF-κBppabp65蛋白表达率与NSODN组比较差异无统计学意义(P>0.05),ASODN组Bcl-2蛋白表达率与NSODN组比较差异有统计学意义(P<0.05),ASODN组Caspase-3蛋白表达率与NSODN组比较,差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR法显示ASODN组caspase-3 mRNA条带亮度强于NSODN组,bcl-2 mRNA条带亮度低于NSODN组,ASODN组NF-κBppab mRNA条带亮度与NSODN组相近;DNA凝胶电泳显示紫杉醇作用后ASODN组有凋亡特征的DNA改变,而NSODN组细胞却未出现;吖啶橙荧光染色法表明ASODN组凋亡率与NSODN组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TUBB3反义寡核苷酸增加了紫杉醇对Ec9706/P-1细胞的诱导凋亡能力,证明了Bcl-2和Caspase-3的表达变化很可能是产生紫杉醇耐药的主要机制之一。