Study on oxidative stress promoting the expression ofapoptosis- associated factors in sciatic nerve of diabetic rat

目的 观察糖尿病早期大鼠坐骨神经组织中氧化应激损伤和凋亡相关因子表达情况及其相关性,进一步探讨糖尿病周围神经病变(DPN)的发病机制.方法 采用链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型.随机选取成模大鼠17只作为模型组(M组),另设正常对照组(N组)大鼠15只.8周后,取大鼠左侧坐骨神经,采用HE染色观察形态学改变,并采用免疫组化法检测8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)和Caspase-3表达,Western blot分析检测发动相关蛋白-1(Drp-1)和Bax的表达.结果 与N组相比,M组大鼠坐骨神经形态学改变明显,体重增加不明显,血糖明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05);Drp-1、Bax、8-OHdG及Caspase-3表达均增多,差异有统计学意义(P＜0.05).M组8-OHdG与Caspase-3表达呈明显正相关(r=0.798,P<0.05).结论 早期糖尿病大鼠坐骨神经组织中氧化应激损伤促进凋亡相关因子表达增多,最终促发细胞凋亡可能是DPN发病原因之一.     

益气通络法对糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经细胞凋亡和HO-1表达的影响

[目的]观察益气通络法对糖尿病大鼠周围神经病变(DPN)的疗效,并探讨其作用机制。[方法]Wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素复制糖尿病模型,对成模大鼠每日用益气通络法灌胃,8周后检测坐骨神经细胞凋亡数目,乳酸脱氢酶(LDH)活性,促凋亡因子Bax、Caspase-3和血红素氧合酶-1(HO-1)的表达水平。[结果]与模型组比较,益气通络法明显减少糖尿病大鼠坐骨神经凋亡细胞数目,降低LDH含量、抑制Bax、Caspase-3的表达,增加HO-1蛋白的表达。[结论]益气通络法能有效上调HO-1的表达,降低坐骨神经细胞的凋亡,预防和治疗糖尿病周围神经损伤。     

枸杞多糖对P38MAPK介导2型糖尿病大鼠背根神经节细胞凋亡的保护作用

目的探讨枸杞多糖对氧化应激激活P38MAPK信号转导通路诱导2型糖尿病大鼠背根神经元细胞凋亡的保护作用及其机制。方法取SD大鼠高脂高糖喂养8周后,腹腔小剂量注射STZ(35 mg/kg)诱导2型糖尿病大鼠模型后,分为模型组、枸杞多糖小剂量组、大剂量组及α-硫辛酸对照组,治疗10周后通过免疫组化方法检测大鼠背根神经节中pP38MAPK及其诱导的凋亡指标Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达。结果经图像分析处理,枸杞多糖大剂量组对糖尿病大鼠背根神经节中Bcl-2蛋白的表达有上调作用,对pP38MAPK、Bax和Caspase-3蛋白的表达有抑制作用,其平均光密度值与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论枸杞多糖可调节机体内的氧化应激状态,通过抑制P38MAPK途径,上调背根神经元细胞中Bcl-2表达,抑制Bax及Caspase-3的表达,从而保护神经细胞免受氧化应激损伤导致的凋亡,这可能是其保护DPN的作用机制之一。     

远志对DPN大鼠坐骨神经Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:探讨远志对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠坐骨神经Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.方法:Wistar大鼠随机分为正常组、DPN模型组和远志治疗组.DPN模型组和远志治疗组大鼠均建立DPN大鼠模型.DPN成模后,远志治疗组大鼠给予远志灌胃6周.采用HE染色法观察各组大鼠坐骨神经形态结构的变化,免疫组织化学染色法检测各组大鼠坐骨神经Bcl-2和Bax蛋白的表达情况.结果:与正常对照组大鼠比较,DPN模型组大鼠坐骨神经的形态结构发生明显病理变化;并且,Bcl-2蛋白的表达明显降低,Bax蛋白的表达明显升高(P＜0.05).与DPN模型组比较,远志治疗组大鼠坐骨神经的形态结构明显改善;并且,Bcl-2蛋白的表达明显升高,Bax蛋白的表达明显降低(P＜0.05).结论:远志可通过升高Bcl-2表达、降低Bax表达,抑制神经纤维变性,对DPN大鼠坐骨神经损伤具有保护作用.     

运脾和络颗粒对糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经Drp-1和Caspase-3蛋白表达的影响

[目的]探讨运脾和络颗粒对糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy,DPN)大鼠坐骨神经组织发动相关蛋白-1(dynamin-related protein 1,Drp-1)和Caspase-3的干预作用。[方法]链脲佐菌素加高糖高脂造模成功大鼠随机分成模型组、运脾和络颗粒低、中、高剂量组、甲钴胺组,另设正常组;采用葡萄糖氧化酶法测血糖,免疫组化检测各组坐骨神经组织的Drp-1和Caspase-3蛋白的表达。[结果]对大鼠血糖而言,模型组给药前后血糖均高于正常组,差异有统计学意义(P0.01);与模型组比较,运脾和络颗粒高、中、低剂量组都有一定的降糖作用,差异有统计学意义((P0.01,P0.001),其中运脾和络颗粒高剂量组血糖降低最明显。模型组坐骨神经纤维中神经膜、轴突中Drp-1的阳性表达比正常组增加,差异有统计学意义(P0.01);运脾和络颗粒高、中、低剂量组,甲钴胺组Drp-1的蛋白表达均较模型组有所下降,其中高剂量组减少程度最多,差异有统计学意义(P0.01)。模型组Caspase-3蛋白表达比正常组增加,差异有统计学意义(P0.01);运脾和络颗粒高、中、低剂量组,甲钴胺组Caspase-3蛋白表达均较模型组有所下降,其中高剂量组减少程度最多,差异有统计学意义(P0.01)。运脾和络颗粒各组均能下调DPN模型大鼠坐骨神经组织Drp-1和Caspase-3蛋白表达,运脾和络颗粒高、中剂量组差异有统计学意义(P0.05,P0.01),其中以运脾和络颗粒高剂量组最为明显(P0.01),运脾和络颗粒低剂量组和甲钴胺组虽能下调Drp-1和Caspase-3蛋白表达,但差异无统计学意义(P0.05)。[结论]运脾和络颗粒可以通过下调DPN大鼠周围神经Drp-1和Caspase-3表达,防治DPN的发生发展,且与剂量有一定的量效关系,这可能是运脾和络颗粒防治DPN的保护作用机制之一。     

氧化应激介导的DNA损伤在大鼠心肌H9C2细胞缺氧/复氧损伤中的作用

目的 探讨氧化应激介导的DNA损伤在大鼠心肌H 9 C2细胞缺氧/复氧损伤中的作用.方法 采用大鼠心肌H9C2细胞制备缺氧/复氧损伤模型.实验分为对照组(Con组)、缺氧/复氧模型组(H/R组)、抗氧化剂NAC组(NAC组)、抗氧化剂+模型组(NAC+H/R组).Western blot检测细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)表达;细胞免疫荧光法检测活性氧(ROS)水平,DNA损伤相关蛋白(p-γH2ax、8-OHdG)、细胞损伤指标[细胞色素c(Cytochrome c)]表达.结果 与Con组比较,H/R组细胞内ROS水平升高,p-γH2ax、8-OHdG、Cytochrome c、Bax/Bcl-2表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);与H/R组比较,NAC+H/R组ROS水平降低,p-γH2ax、8-OHdG、Cytochrome c、Bax/Bcl-2表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 抑制心肌细胞氧化应激,可明显改善心肌细胞DNA损伤和凋亡.     

糖尿病大鼠肾皮质细胞过度凋亡

目的 研究糖尿病大鼠肾皮质细胞凋亡的可能机制及其对糖尿病肾病的影响.方法 20只雄性SD大鼠随机分为糖尿病组和对照组.糖尿病大鼠模型采用链脲佐菌素65 mg/kg腹腔注射诱导建立.12周后观察2组体质量、血糖以及血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白等肾功能指标;采用透射电镜和原位末端标记法（TUNEL法）检测大鼠肾皮质细胞凋亡,并用免疫组织化学的方法检测增殖细胞核抗原（PCNA）以及凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达.结果 建模12周的糖尿病组肾小球和肾小管细胞凋亡明显增多（P＜0.01）,肾小球和肾小管细胞PCNA表达无明显差别（P＞0.05）;与对照组比较,糖尿病组肾小管Bax和Caspase-3表达明显增加（P＜0.01）,Bcl-2表达明显减少（P＜0.05）;2组肾小球都不表达Bax和Bcl-2,糖尿病组肾小球有少量Caspase-3表达.结论 糖尿病大鼠肾皮质细胞过度凋亡.包括Bax、Bcl-2和Caspase-3在内的Caspase依赖的线粒体凋亡途径可能参与了糖尿病状态下肾小管细胞的凋亡;细胞凋亡的增多可能是糖尿病肾病发展的原因之一.     

马尾神经压迫损伤后细胞凋亡相关蛋白、氧化应激损伤相关蛋白的表达规律

目的:研究马尾神经压迫损伤后细胞凋亡相关蛋白、氧化应激损伤相关蛋白的表达规律。方法:选择雄性本地家犬作为实验动物并随机分为压迫组、假手术组,通过水囊压迫的方法建立马尾神经压迫损伤模型。压迫后24、48、72h,分离压迫损伤的马尾神经并测定细胞凋亡相关蛋白、氧化应激损伤相关蛋白的含量。结果:压迫后24、48、72h,压迫组家犬马尾神经中Bcl-2的蛋白表达量显著低于假手术组,Bax、Cyt-C、Caspase-3、Caspase-9、Beclin-1、LC3-II的蛋白表达量以及活性氮(RNS)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、晚期氧化蛋白产物(AOPP)、8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHdG)的含量均显著高于假手术组。结论:马尾神经压迫损伤会造成线粒体细胞凋亡、细胞自噬、氧化应激的过度激活。     

耐辐射奇球菌pprⅠ基因对MMC诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用

目的 探讨耐辐射奇球菌(DR)pprⅠ基因对丝裂霉素C(MMC)诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法 细胞分为空白对照组(不干预)、未转染组(MMC处理)、空质粒转染组(pCMV-C-Flag+MMC)与pprⅠ基因转染组(pCMV-C-Flag-pprⅠ+MMC)。CCK-8、抗氧化酶相关试剂盒、TUNEL、JC-1荧光探针和qRT-PCR测定细胞存活率、氧化应激、细胞凋亡率、线粒体损伤、凋亡途径相关基因mRNA的表达。结果 与空白对照组比较,未转染组细胞存活率、线粒体膜电位、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)mRNA表达下降;氧化应激反应、细胞凋亡率及Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、Caspase-3、多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)mRNA表达增加(P<0.05)。与未转染组比较,pprⅠ基因转染组细胞存活率、线粒体膜电位、Bcl-2 mRNA表达增加;氧化应激反应、细胞凋亡率及Bax、Caspase-9、Caspase-3、PARP mRNA表达下降(P<0.05)。结论 耐辐射奇球菌pprI基因对丝裂霉素C诱导的H...     

抑郁对心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响

目的:探讨抑郁对心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3的影响。方法:大鼠随机分为四组,各组8只,A组为假手术组,B组为抑郁大鼠假手术组,C组为心肌梗死组,D组为抑郁大鼠心肌梗死组。用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应方法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的基因表达。结果:各组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达的差异有统计学意义(P<0.01),C、D组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达均高于A组和B组,差异有统计学意义(P<0.01),D组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bax、Caspase-3 mRNA表达高于C组,而心肌细胞Bcl-2蛋白及mRNA表达低于C组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抑郁可以加重心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡,其机制可能与上调促凋亡基因Bax及Caspase3表达、下调抗凋亡基因Bcl-2的表达有关。     

芪归糖痛宁颗粒对大鼠糖尿病周围神经病变的影响

目的观察芪归糖痛宁颗粒对大鼠糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy,DPN)的疗效,并探讨其作用机制。方法以链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)一次性腹腔注射复制DPN大鼠模型。于模型复制第3天起,各治疗组分别灌胃给予相应的受试药物,正常组和模型组灌胃给予等容量溶媒,疗程8周。实验结束后,测定大鼠热痛阈值、血液流变学指标、血清神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、髓磷脂碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)的含量,同时取固定部位坐骨神经,用苏木精-伊红染色观察坐骨神经组织病理学变化。结果与模型组比较,芪归糖痛宁颗粒组能明显改善DPN大鼠坐骨神经病理组织学损伤程度,同时降低大鼠热痛阈(P<0.05),降低大鼠全血黏度低切、中切、高切,血浆黏度,红细胞聚集指数及MBP含量(P<0.05,或P<0.01),升高血清NGF含量(P<0.05)。结论芪归糖痛宁颗粒对大鼠DPN具有一定的治疗作用。     

通络糖泰防治糖尿病性周围神经病变的实验研究

目的：研究临床治疗糖尿病性周围神经病谱（ＤＰＮ）的有效复方通络糖泰对实验性ＤＰＮ大鼠坐骨神经电生理及糖醇代谢的影响。方法：ＳＤ大鼠随机分为模型组（ＭＧ）,通络糖泰高剂量组（ＨＧ,相当于成人公斤体重用药量的１０倍）及低剂量组（ＬＧ,相当于成人公斤体重用药量的５倍）,正常对照组（ＮＧ）。动物模型用四氧嘧啶塑造。     

DPN大鼠坐骨神经NGF的动态表达及胰岛素和人NGF的干预作用

目的观察糖尿病多发性神经病(DPN)大鼠坐骨神经NGF的动态表达以及胰岛素和人神经生长因子(hNGF)的干预作用。方法以链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型,通过RT-PCR和免疫组化技术,观察造模后4和8周大鼠坐骨神经NGF mRNA和蛋白的表达,并观察DPN4周时用胰岛素或hNGF干预4周后坐骨神经NGF mRNA和蛋白的表达。结果NGF mRNA表达在DPN4周无明显改变,8周时明显减少;NGF蛋白表达在DPN4周和8周均减少。hNGF干预能增加DPN大鼠坐骨神经NGF mRNA和蛋白表达,胰岛素则无明显调节作用。结论DPN大鼠坐骨神经NGF表达减少,外源性NGF可弥补这种缺陷。     

环境因素对大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响

目的:探讨光照、黑暗、行为限制对心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响。方法:Wistar大鼠随机分为假手术组(A组)、心肌梗死组(B组)、黑暗组(C组)、光照组(D组)及行为限制组(E组),用TUNEL法检测心肌凋亡细胞,免疫组织化学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法分别检测Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白及基因表达。结果:(1)与A组比较,B、C、D、E组的凋亡指数增加(P<0.01);与B组比较,D、E组的凋亡指数增加(P<0.05);与C组比较,D、E组的凋亡指数增加(P<0.05)。(2)与A组比较,B、C、D、E组的Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达增加(P<0.01);与B组比较,D、E组的Bax、Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05);与C组比较,D、E组的Bax、Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05)。(3)与A组比较,B、C、D、E组的Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达增加(P<0.01);与B组比较,D、E组的Bax、Caspase-3 mRNA表达增加(P<0.01);与C组比较,D、E组的Bax、Caspase-3 mRNA表达增加(P<0.01)。结论:光照环境、行为限制可增加大鼠缺血心肌细胞凋亡,其机制可能与上调Bax、Caspase-3的表达有关。     

糖络宁对DPN中IRE1-TRAF2-XBP-1途径的影响

目的 探讨糖络宁对糖尿病周围神经病变（DPN）大鼠内质网应激IRE1-TRAF2-XBP-1途径的影响。方法 以高脂饲料联合链脲佐菌素诱导SD大鼠致DPN模型,经糖络宁干预12周后,采用苏木精-伊红（HE）染色法观察大鼠坐骨神经形态的变化,采用免疫荧光法检测DPN大鼠坐骨神经EDEM、PDI和TRAF2 蛋白表达,采用Western blot法检测DPN大鼠坐骨神经细胞凋亡途径P-JNK和caspase-3的蛋白表达。选用RSC96细胞株,采用高糖环境培养的施万细胞模型,用糖络宁含药血清分别干预24h和48h,采用高内涵分析方法分别测定糖络宁含药血清对施万细胞中EDEM、PDI、TRAF2和P-JNK蛋白表达的影响。结果 HE染色结果显示,模型组大鼠坐骨神经髓神经脱髓鞘严重;糖络宁低、高剂量组坐骨神经脱髓鞘现象得到改善,坐骨神经髓鞘积分吸光度显示,模型组比空白组明显降低（P<0.05）,糖络宁高剂量组得到明显改善（P<0.05）;免疫荧光结果显示,糖络宁高低剂量组能使EDEM和PDI表达增加（P<0.01,P<0.05）,TRAF2表达降低（P<0.01,P<0.05）;Western blot法检测结果显示,糖络宁高低剂量均显示P-JNK和caspase-3的表达降低。细胞实验中,24h和48h干预后的150mmol/L葡萄糖组EDEM与PDI显著性降低（P<0.01）,TRAF2与P-JNK显著性升高（P<0.01）;高糖高剂量组的EDEM在24h干预后的表达显著升高（P<0.01）,而P-JNK表达显著降低（P<0.05）;PDI在48h干预后的表达显著升高（P<0.01）;高糖高、低剂量组的TRAF2在24h和48h干预后均显著降低（P<0.01）。结论 糖络宁能够改善受损的坐骨神经结构,与糖络宁影响内质网应激相关IRE1-TRAF2-JNK途径相关,通过促进EDEM和PDI的表达,抑制TRAF2、P-JNK和caspase-3的表达,从而抑制神经细胞凋亡,改善DPN。     

低强度脉冲超声对大鼠糖尿病周围神经病坐骨神经p53表达的影响

目的：探讨低强度脉冲超声（LIPUS）对大鼠糖尿病周围神经病（DPN）模型中坐骨神经中转录因子p53表达的影响。方法：大鼠随机分为正常组、模型组和LIPUS组。链脲佐菌素腹腔注射制备实验DPN大鼠模型,LIPUS组以低强度脉冲超声进行体外治疗,造模后4周检测各组血糖及坐骨神经传导速度,实时荧光定量PCR检测坐骨神经P53 mRNA表达。结果：与正常组比较,模型组和LIPUS组血糖显著增高,神经传导速度显著降低,坐骨神经p53 mRNA表达增加（ P＜0．05）。与模型组比较,LIPUS组神经传导速度显著增高,坐骨神经P53 mRNA表达显著下降（ P＜0．05）。结论：低强度脉冲超声可通过抑制受损神经中轴突抑制因子P53表达,促进糖尿病周围神经病坐骨神经功能恢复。     

消渴灵浓缩液对糖尿病大鼠坐骨神经IGF-1 mRNA表达的影响

目的：探讨消渴灵浓缩液对糖尿病大鼠坐骨神经IGF-1 mRNA表达的影响。方法：将30只链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型随机分为模型组、西药对照组、中药治疗组,每组10只。另选10只鼠龄、体重相匹配的大鼠作为正常组。采用相对定量逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测病程8周后各组大鼠坐骨神经IGF-1 mRNA表达的水平。结果：中药组、西药组、正常大鼠组坐骨神经IGF-1 mRNA相对表达量均增加,差异无统计学意义（P=0.213,P=0.822,P=0.304）;模型组坐骨神经IGF-1 mRNA相对表达量下降,与中药组、西药组、正常大鼠组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。IGF-1 mRNA表达水平与血糖呈负相关（P<0.05）。结论：糖尿病大鼠坐骨神经组织IGF-1 mRNA的表达下降,消渴灵浓缩液可上调糖尿病大鼠坐骨神经IGF-1 mRNA的表达水平,可能是消渴灵浓缩液防治糖尿病周围神经病变的作用机制之一。