Expression of P-MLC in the rat non-alcoholic fatty liver fibrosis

目的 探讨运用高脂饮食联合小剂量四氯化碳(CCl4)复制大鼠肝纤维化模型的特点,以及磷酸化肌球蛋白轻链[P-MLC(Thr18/Ser19)]在该纤维化模型中的作用.方法 70只SD大鼠随机分为正常对照组(N)、CCl4组(M1)和高脂饮食联合小剂量CCl4组(M2).N组皮下注射花生油3 ml/kg,2次/周;M1组采用400 ml/L CCl4花生油混合液,3 ml/kg,2次/周皮下注射;M2组采用高脂饮食联合小剂量CCl4造模,其CCl4用量2 ml/kg,浓度和频次同M1组.造模后8周末、10周末分批处死,检测肝功能、血脂、光镜观察大鼠肝脏脂肪变性及肝纤维化程度.免疫组化法检测肝脏P-MLC的表达.结果 与N组比较,8周和10周末,M1组血浆球蛋白(GLO)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平,P-MLC的表达及肝脂肪变性,纤维化程度均升高,但白球比(A/G)下降.与M1组比较,8周末,M2组ALT、AST下降,但脂肪变性增强;10周末,M2组白蛋白(ALB)、A/G下降,而ALT、AST 上升明显;8周和10周末M2组P-MLC 的表达及肝纤维化程度均强于M1组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 高脂饮食联合小剂量CCl4皮下注射复制大鼠肝纤维化模型,具有造模时间短,成功率高的优点.P-MLC的表达随着肝纤维化的进展而增加,P-MLC在非酒精性脂肪性肝纤维化中起着一定的作用.     

脂质过氧化对培养心肌细胞肌球蛋白轻链磷酸化系统的影响

应用氢过氧化枯烯（ＣＨＰＯ）作为机体产生自由基的引发剂，作用于培养的心肌细胞，激起和促使细胞遭受过氧化损伤，同时使用硒（Ｓｅ）、维生素Ｅ（ＶＥ）等抗自由基物质，观察细胞中肌球蛋白轻链磷酸化系统的变化。结果表明，ＣＨＰＯ引发的自由基以及脂质过氧化反应，造成肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）和ＡＴＰ酶活性显著下降，Ｓｅ、ＶＥ以及二者联合应用，可使心肌细胞抗自由基损伤的能力极大增强，ＭＬＣＫ和ＡＴＰ酶活性都有不同程度的提高。提示：ＣＨＰＯ引发的自由基已造成了对心肌细胞肌球蛋白磷酸化系统的损害，Ｓｅ和ＶＥ的应用，对保护肌球蛋白分子的完整结构和其生化功能起着重要作用。     

早期糖尿病大鼠肾脏肌球蛋白轻链激酶表达

目的观察早期糖尿病大鼠肾脏肌球蛋白轻链激酶（MLCK）表达及意义。方法腹腔注射链尿佐菌素（65mg／ks）诱发糖尿病模型,应用胰岛素控制血糖,心脏取血检测血糖及肾功能相关指标。通过免疫组化与Western-blot检测肾组织肌球蛋白轻链激酶表达。结果与正常对照组相比,模型组血糖及肾功能相关指标发生显著性变化。正常组肾小球、肾小管及肾脏血管均有MLCK的表达。模型组与正常对照组相比,肾小球表达MLCK有一定的减弱,治疗组与正常对照组相比无明显变化。结论早期糖尿病肾病形成可能是由于肌球蛋白轻链激酶表达降低所致。胰岛素治疗糖尿病肾病机制可能是增加肾脏肌球蛋白轻链激酶的表达。     

肌球蛋白轻链激酶和肌球蛋白轻链9基因在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的研究肌球蛋白轻链激酶（MYLK）及肌球蛋白轻链9（MYL9）在非小细胞肺癌（NSCLC）的表达情况及其与NSCLC临床特征的关系。方法采用荧光定量PCR方法检测60例NSCLC组织、癌旁组织和60例正常肺组织中MYLK mRNA和MYL9 mRNA的表达情况,并分析癌组织MYLK mRNA及MYL9 mRNA表达值与临床分期的相关性。结果 MYLK mRNA、MYL9 mRNA在癌组织中的表达量明显低于癌旁组织及正常肺组织（P均〈0.05）,癌旁组织和正常肺组织中MYLK mRNA、MYL9 mRNA表达量无统计学差异（P均〉0.05）。在癌症患者中,淋巴结转移组MYLK mRNA及MYL9 mRNA的相对表达量比无淋巴结转移组高（P〈0.05）。腺癌组织与鳞癌组织MYLK mRNA及MYL9 mRNA的相对表达量无统计学差异（P〈0.05）。MYLK mRNA与MYL9 mRNA的表达呈正相关（P〈0.001）,MYLK mRNA及MYL9 mRNA表达与肿瘤临床分期呈正相关（P〈0.05）。结论 NSCLC组织中MYLK mRNA和MYL9 mRNA表达均明显低于癌旁组织及正常组织,MYLK mRNA及MYL9 mRNA的表达与临床分期呈正相关。     

哮喘模型大鼠支气管平滑肌肌球蛋白轻链激酶的表达

目的探讨哮喘模型大鼠支气管平滑肌肌球蛋白轻链激酶（MLCK）表达的变化。方法SD大鼠24只,随机分为正常对照组（A组）、哮喘模型激发1周组（B组）和哮喘模型激发2周组（C组）。以卵蛋白（OVA）致敏和激发建立大鼠支气管哮喘模型,用免疫组织化学和免疫印迹法分析三组大鼠支气管平滑肌中MLCK表达。结果哮喘模型激发1周组大鼠支气管平滑肌MLCK表达较正常对照组明显增加,2周组增加更明显,差异均有显著性（P〈0．05）。结论支气管平滑肌MLCK表达增加可能与哮喘发病有关。     

严重烧伤后肠黏膜肌球蛋白轻链磷酸化表达改变及其意义

目的探讨肌球蛋白轻链（myosin light chain,MLC）磷酸化在严重烧伤早期对肠黏膜屏障功能及细胞紧密连接相关蛋白变化的作用。方法健康成年SD大鼠48只,采用随机数字表法分为正常对照组及烧伤后1、2、6、12、24h组,用异硫氰酸荧光素．葡聚糖（FITC-Dextran）检测大鼠肠黏膜通透性,免疫荧光法检测肠黏膜细胞紧密连接相关蛋白ZO-1、F-肌动蛋白（F．actin）及磷酸化型MLC（phosphorylated MLC,p-MLC）的变化。结果烧伤后大鼠肠黏膜通透性明显增加,伤后6h达高峰,为对照组的3倍（P〈0．01）;烧伤后肠上皮通透性的增加伴随有紧密连接相关蛋白ZO-1的明显重分布、细胞紧密连接损害以及肠上皮细胞p-MLC表达的增加。结论MLC磷酸化可能在严重烧伤后肠黏膜屏障功能紊乱及通透性增加的发生机制中起着重要的调控作用。     

大鼠酒精性肝纤维化模型的构建

目的：探索简便、经济的大鼠酒精性肝纤维化造模方法。方法：33只大鼠随机分为2组。模型组予酒精灌胃，于实验的第4、12、24周末分批采血，以测定生化指标，后行放血法处死。将取出的肝脏进行常规切片、HE染色及Masson三色胶原染色后行病理学观察。正常对照组以等量饮用水代替酒精灌胃，于实验第24周末处死，处理同模型组。结果：于实验第24周时观察到了除酒精性肝硬化外酒精性肝病的各种病理表现，并且随着酒精刺激时间的延长肝纤维化程度逐渐加重。结论：应用酒精灌胃法可成功复制大鼠酒精性肝纤维化模型，该方法简便、经济。     

四氯化碳皮下注射构建大鼠肝纤维化模型的研究

目的 构建大鼠肝纤维化模型，观察纤维化的病理进程。方法轮替给大鼠四肢内侧皮下注射四氯化碳植物油混合液．按0．3ml／100g体重的剂量，每周注射两次。分别于初次注射后1、4、8周解剖大鼠，观察肝脏外观．肝组织切片行Van-Gieson(V-G)染色观察纤维增生情况。结果 随注射时间的增加肝脏外观先后出现了出血、坏死、增生、纤维化的特征。V-G染色证实肝脏纤维增生逐渐增多，8周时肝纤维化已形成。结论 四氯化碳皮下注射构建肝纤维化模型具有以下优点：(1)造模易于成功，大鼠死亡率小；(2)肝纤维化程度比较理想；(3)肝纤维化的进展与注射的时间长度直接相关，易于控制纤维化的程度，有利于进一步的研究。     

碱性成纤维细胞生长因子在大鼠肝组织中的表达及其与肝纤维化的关系

目的 研究四氯化碳(CCI4)损伤大鼠肝组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达及其与肝纤维化的关系。方法 用CCI4诱导大鼠肝纤维化模型，分别检测其血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)的含量。肝组织中bFGF表达采用免疫组化ABC法标记。结果 bFGF表达的强度及范围与肝内炎症及血清纤维化指标密切相关。结论 bFGF在肝纤维化的发展过程中起着重要的作用。     

抗纤饮对肝纤维化大鼠模型的治疗作用

目的观察抗纤饮（KXY）治疗四氯化碳纤维化大鼠模型的疗效。方法80只大鼠被随机分为4组，每组20只，A、B、C组为肝纤维化模型组，其中A组在模型制成后立即处死，B组采用抗纤饮治疗3mo，C组为自然转归组，不作任何治疗，D组为正常对照组。分别比较模型组、自然转归组、治疗组和正常对照组大鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、透明质酸（HA）的含量，并观察其组织学改变的差别．结果治疗组血清ALT、AST、PCⅢ、HA均显著低于模型组（P〈0．05）及自然转归组。病理学提示，治疗组肝细胞损伤、肝脏脂肪变性与纤维组织形成较少。结论抗纤饮在抗纤维化治疗中有确切疗效。     

姜黄素联合维生素E预防大鼠肝纤维化的形态学研究

目的观察研究姜黄素（Cur）和维生素E（VE）联用预防大鼠肝纤维化的疗效。方法建立四氯化碳（CCl4）大鼠肝纤维化模型,Cur和VE及两药联用预防后观察肝左叶HE染色和Masson染色下形态学变化。结果 HE染色与Masson染色结果与模型组比较,预防组较模型组肝纤维化有明显改善,以药物联用组尤为显著。结论 Cur和VE对CCl4诱导的肝纤维化均有预防作用,两者合用预防肝纤维化效果更佳,具有协同作用。     

实验性家兔非酒精性肝纤维化形成过程中肝窦内皮细胞的变化

目的研究实验性家兔非酒精性肝纤维化形成过程中肝窦内皮细胞的变化。方法用高脂饲料诱发脂肪肝的方法建立家兔非酒精性肝病动物模型，并于高脂饲料喂养2、4、8周末，以及停止高脂饲料喂养（用平衡饲料继续喂养）12、16周末分别处死实验组及对照组家兔，经心脏灌流后取肝脏组织行HE染色、VG苦味酸染色及透射电镜观察肝窦内皮细胞（LSEC）窗孔的动态变化。结果正常的LSEC扁平，远侧胞质呈薄片状，有许多窗孔，内皮下缺乏基底膜（BM）；高脂饲料喂养2周末，部分肝窦内皮细胞远侧胞质窗孔数减少，内皮下尚未见基底膜形成；4周末，窗孔数减少或消失，内皮下已开始有不完全的基底膜形成，同时有功能活跃的纤维母细胞形成；8周末进一步加重，内皮下已有完整的BM形成。停止高脂饲料喂养12周末，肝组织内胶原纤维仍大量沉积，失窗孔及内皮下BM形成有所减轻，内皮下基底膜成不连续状。16周末，仍可见胶原柬，失窗孔及内皮下BM形成明显减轻。结论随着高脂饲料的喂养LSEC的失窗孔及内皮下BM形成逐渐发生，严重时可形成肝窦毛细血管化和肝纤维化；去除病因后这种肝纤维化是可逆的。     

E-钙黏附素在大鼠肝纤维化模型中的表达及意义

目的探讨大鼠实验性肝纤维化形成过程中E-钙黏附素的表达及其变化,为临床肝纤维化及肝硬化的诊断和治疗提供借鉴。方法取SD大鼠60只,其中40只按皮下注射四氯化碳每周2次,每次2 ml/kg的方法造成肝纤维化模型,另外20只皮下注射相同容量生理盐水作为正常对照组。根据造模的不同时间及肝组织的病理改变,20只造模7周后的SD大鼠设为肝纤维化组,20只造模12周后的SD大鼠设为肝硬化组。最后收集所有标本按肝纤维化0~Ⅳ期分为5组。采用免疫组织化学方法以及RT-PCR法检测肝组织中E-钙黏附素的表达及分布。结果肝纤维化0期标本仅见少量E-钙黏附素表达。与0期相比,Ⅲ期及Ⅳ期E-钙黏附素表达均增强,尤以Ⅳ期最为显著（P＆lt;0.05或P＆lt;0.01）。结论肝纤维化肝组织中E-钙黏附素的表达增强。表达量与肝纤维化程度一致。E-钙黏附素与肝纤维化的发生发展密切相关。     

灵芪蠲肝液抗四氯化碳实验性大鼠肝纤维化的研究

目的研究灵芪蠲肝液对大鼠肝纤维化的防治作用。方法选用雄性Wistar大鼠，随机分为，正常对照、模型组、灵芪蠲肝液3个剂量组，肝苏颗粒阳性对照组。肝纤维化模型用40％的四氯化碳油液3mL／kg皮下注射，每周2次，连续10周。实验开始时，正常对照组除外，其余各组大鼠均皮下注射40％的四氯化碳油液3mL／kg，4周后各用药组开始给药，10周后麻醉大鼠，心脏取血，测定肝功能、血清一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和肝纤维化指标透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（CⅣ）；取肝制备10％肝匀浆，测定其中的丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和羟脯氨酸（HYP）水平，并取肝组织做病理检查。结果大鼠肝纤维化损伤时，ALT、AST活性及血清NO、HA、LN、PCⅢ、CⅣ和MDA含量及肝匀浆MDA、HYP明显增加。而ALB、SOD明显降低，与正常对照组比较差异有显著性（P〈0．05），与模型组比较灵芪蠲肝液可降低ALT、AST活性及血清NO、HA、LN、PCⅢ、CIV和MDA含量及肝匀浆MDA、HYP水平。而提高ALB、SOD含量，差异均有显著性（P〈0．05）。病理检查发现灵芪蠲肝液能减轻肝脂肪变性，减少纤维组织的增生。结论灵芪蠲肝液对四氯化碳实验性大鼠肝纤维化具有防治作用。     

FATP4在大鼠非酒精性脂肪肝中的表达及相关性

目的 探讨FATP4(fatty acid transport protein4)基因在大鼠非酒精性脂肪肝形成中的作用.方法 Wistar大鼠64只,随机分为正常对照组(C组)和高脂饮食组(F组),又各分2、4、8和12周组(其中每组各8只):HE染色光镜观察肝脏组织病理改变;硫代巴比妥酸法测定肝脏组织丙二醛(MDA)的含量变化:免疫组织化学和Western blot方法研究高脂饲料诱导的大鼠脂肪肝形成中FATP4表达变化.结果 高脂饲料组大鼠肝脏内MDA含量明显高于对照组,随时间延长,逐渐增加:随着脂肪肝程度的加重,MDA含量逐渐增强,肝细胞FATP4蛋白表达亦明显增强.结论 非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞FATP4表达变化与脂肪肝引起的脂质过氧化损伤程度密切相关.     

人血白蛋白及四氯化碳诱导的大肠肝纤维化模型对比分析

目的研究时比人血白蛋白及四氯化碳(CCl4)两种制备大鼠肝纤维化模型的差别,为临床实验研究提供参考.方法健康SD大鼠分别用CCl4皮下注射法和人血白蛋白免疫法诱导肝纤维化模型,观察大鼠生存率、体重、肝功能、血清PCⅢ、CⅣ、HA水平和肝组织病理学变化情况.结果白蛋白造模大鼠平均体重较CCl4模型大鼠高,但动物死亡率高,肝纤维化形成率低,平均纤维化积分较低,与CCl4模型比较差异显著(P＜0.05).结论CCl4皮下注射法造模简便易行、价格低廉、动物死亡率低、模型成功率高、病变典型,可作为肝纤维化实验研究的首选模型.     

非酒精性脂肪肝病研究进展

非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪肝炎(NASH)的发生与肥胖、2型糖尿病、胰岛素抵抗(IR)、脂代谢异常等有关。肝脏脂联素活性降低、脂联素受体-Ⅱ表达减少以及瘦素抵抗导致NAFLD。肝脏IR、反应氧族(ROS)产生增多以及抗氧化防御机制受损是NASH发生的中心环节。TNF-α、IL-6水平升高诱导IR和肝纤维化发生。减轻体重是预防肥胖者发生NAFLD的基本措施,细胞保护剂、抗氧化剂和降脂药物对NASH有一定治疗作用,噻唑脘二酮类(如罗格列酮)的临床治疗研究已取得可喜的疗效。今后有待进一步研制肝毒性小的能减轻肝脏脂肪蓄积和纤维化的药物。