黄芩愈伤组织培养及黄芩苷合成调控的研究

目的研究黄芩愈伤组织培养和黄芩苷合成调控的规律。方法采用植物细胞培养技术诱导愈伤组织;HPLC法测定黄芩苷的量。结果黄芩愈伤组织生长和黄芩苷积累的优势培养条件为在基本培养基MS中氮源浓度为60mmol/L(NH4 ∶NO3-为1∶1),KH2PO4浓度0.5~1.5mmol/L,附加80g/L蔗糖,0.3mg/LIAA,2mg/L6-BA和200mg/L蛋白胨,温度(25±1)℃,暗培养。培养40d后收获愈伤组织,生物量达28.7g/L,黄芩苷为167.4mg/g,明显高于野生黄芩的最高量。结论黄芩愈伤组织的生长和黄芩苷的积累并不同步,而是先生长后合成。蔗糖对黄芩苷的合成具有明显的调节作用,在蔗糖质量浓度小于3%时,能有效促进愈伤组织的生长,但对黄芩苷的合成没有刺激作用;当蔗糖质量浓度在3%~8%时,愈伤组织表现出明显的生长和次生代谢功能,黄芩愈伤组织的生长及黄芩苷合成明显增加;当蔗糖质量浓度在8%时,两者均达到最大值。     

黄芩不同器官及愈伤组织中3种黄酮类成分和总黄酮的含量比较

目的?比较黄芩植株不同器官（根、茎、叶、花）及黄芩药材（子芩、枯芩、绿芩）和黄芩愈伤组织中野黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩苷和总黄酮的含量。方法?采用SYMMETRY C₁₈（4.6?mm×250?mm,5?μm）柱,以乙腈（A）-0.22%乙酸水溶液（B）为流动相,柱温35?℃,波长335?nm,检测3种黄酮类成分的含量;采用紫外分光光度法,以芦丁为对照品,采用硝酸铝显色后于504?nm处测定其总黄酮含量。结果?野黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩苷在质量浓度为6.0~192.0、30.0~960.0、12.0~384.0?μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系（R2≤0.998?9）,平均加样回收率为97.8%~103.1%,RSD≤4.0%。总黄酮在质量浓度为40.00~240.00?μg/mL范围内线性关系良好（R2≥0.999?8）,平均加样回收率为98.8%,RSD为1.0%。结论?黄芩地上部分（花、茎、叶）的野黄芩苷含量高于地下部分（根）,以花中的含量为最高,达到0.53%;地下部分的黄芩苷、汉黄芩苷含量高于地上部分,愈伤组织中黄芩苷达到0.60%。总黄酮含量以愈伤组织中含量最高,达到30.42%。为利用黄芩废弃部位花提取野黄芩苷和利用愈伤组织生产黄酮提供了依据。      

黄芩愈伤组织中多酚氧化酶活性与黄芩苷合成的关系研究

目的 研究黄芩愈伤组织中多酚氧化酶活性变化规律及其与黄芩苷次生合成之间的关系。 方法 采用紫外分光光度法测定多酚氧化酶活性,采用高效液相色谱法测定黄芩苷的量。研究不同添加物(抗坏血酸、氯化钠、苯甲酸、聚乙烯吡咯烷酮、硫酸铜)对多酚氧化酶和黄芩苷量的影响。 结果 在黄芩愈伤组织生长周期的前20 ｄ,黄芩苷基本没有合成,多酚氧化酶的活性低水平表达;20～35 ｄ,黄芩苷大量合成,多酚氧化酶的活性有所降低,但降低趋势较小;35～50 ｄ,多酚氧化酶活性高水平表达,黄芩苷次生合成受到抑制。 结论 多酚氧化酶的高水平表达不利于黄芩苷的次生合成,抗坏血酸、氯化钠、苯甲酸等均可抑制多酚氧化酶的活性,促进黄芩苷次生合成,其中以添加0.02%的抗坏血酸效果最为明显,可使黄芩苷的量提高17.6%(82.3 ｍｇ／ｇ),而聚乙烯吡咯烷酮、硫酸铜对多酚氧化酶的活性有着明显的促进作用,抑制了黄芩苷的积累。     

微量元素对黄芩有效成分积累的影响

目的研究微量元素锌、镁对黄芩组织生长情况和有效成分积累的影响。方法改变MS培养基中微量元素锌和镁的含量对黄芩愈伤组织进行继代培养;用UV-Vis法和HPLC法分别测定了继代培养所得愈伤组织中提取的总黄酮和黄芩苷的含量。结果 Zn2+浓度0.045 mmol/L、Mg2+浓度2.25 mmol/L情况下有利于黄芩愈伤组织生长;增大Zn2+浓度(0.045 mmol/L)并降低Mg2+浓度有利于黄芩愈伤组织中黄酮类物质的合成;低浓度的Mg2+有利于黄芩愈伤组织中黄芩苷的生物合成。结论通过调控微量元素锌和镁的量可以有效提高黄芩愈伤组织生长率并显著提高其有效成分的含量。     

盐生肉苁蓉愈伤组织培养与苯乙醇苷类化合物合成的研究

目的 利用肉苁蓉组织培养技术生产苯乙醇苷类活性成分。方法 研究碳源、生长素和培养条件对细胞中松果菊苷、洋丁香酚苷(类叶升麻苷)和2′—乙酰基洋丁香酚苷3种苯乙醇苷类化合物合成的影响。结果 葡萄糖有利于上述3种成分的合成，6—BA 1mg/L与IAA 1mg/L或6—BA 1mg／L与2，4—D 2mg／L的激素配比有利于松果菊苷和洋丁香酚苷(类叶升麻苷)的积累。15℃黑暗和25℃光照处理可以促进松果菊苷和洋丁香酚苷(类叶升麻苷)的积累。其中IAA 2mg／L与6—BA 1mg／L、25℃黑暗条件下培养时3种苯乙醇苷类的总产量达到1937.7mg／L。盐生肉苁蓉愈伤组织中的主要成分与天然肉苁蓉基本相同，而且愈伤组织中的松果菊苷、洋丁香酚苷(类叶升麻苷)和2′—乙酰基洋丁香酚苷含量高于天然肉苁蓉。结论 盐生肉苁蓉的愈伤组织或细胞可以代替肉苁蓉生产苯乙醇苷类活性成分。     

不同浓度外源激素对黄芩愈伤组织诱导影响

目的：运用植物组织培养技术选择适合黄芩愈伤组织诱导的生长素与细胞分裂素的配比及浓度。方法：以黄芩幼根、叶片和带节茎段为外植体,用不同浓度生长素和细胞分裂素对黄芩进行愈伤组织诱导试验。结果：6-BA1.0mg·L-1诱导形成的愈伤组织疏松,诱导率高。诱导黄芩愈伤组织最佳生长素与细胞分裂素的浓度配比为NAA0.5mg·L-1＋6-BA1.0mg·L-1。结论：生长素与细胞分裂素配合使用时,愈伤组织的诱导率明显高于单个激素的处理,诱导结果也有差异。     

前体和诱导子饲喂黄芩愈伤组织强化黄芩苷生产研究

黄芩Scutellaria baicalensis Georgi为唇形科植物的干燥根,性寒、味苦,具有清热燥湿、泻火解毒等功效[1],含数种黄酮苷。黄芩苷(baicalin)是其主要有效成分,药理作用最强,具有抑菌抗炎[2]、抗HIV-1活性[3,4]、抗氧化[5]、抗变态反应[6]和清除自由基[7]等药理作用。因此近年来,     

激素和外植体对黄芩短枝生根和愈伤诱导的影响

目的研究不同激素组合和外植体对黄芩短枝生根和愈伤诱导的影响,筛选出最佳的短枝生根和愈伤诱导及继代培养基。方法以1/2MS为基本培养基,添加不同浓度的萘乙酸(NAA),配制成5种短枝生根培养基;以MS为基本培养基,添加不同浓度BA和NAA或2,4-D,配制成5种培养基。将剪下的枝条用清水冲洗2~3 h,再用2%次氯酸钠溶液浸泡15 min,最后用无菌水冲洗4~5次,将带1个腋芽或不带腋芽的茎段和叶片接种到培养基中。结果1/2MS培养基是最佳的1年生和2年生短枝生长和生根培养基,生根率达100%,腋芽的增殖倍数高达3.1和3.4;诱导愈伤组织的最适培养基及愈伤最佳的继代培养基均为MS+BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L。结论高浓度的生长素对黄芩短枝生长势和生根有抑制作用,高浓度BA配比较低浓度NAA适于愈伤诱导,1年生和2年生短枝生根时对生长素的反应有一定差异。     

杜仲愈伤组织培养及其超低温保存

采用单因子比较、正交设计和均匀设计法，分别考察影响杜仲（ＥｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｓＯｌｉｖ．）愈伤组织诱导、生长及其超低温保存的因素。研究结果表明：愈伤组织诱导的最适培养基为Ｂ５＋６－ＢＡ１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ；愈伤组织生长较佳的培养基是ＭＳ＋６－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋２．４－Ｄ３ｍｇ／Ｌ。超低温保存的最佳材料是２周龄的愈伤组织；较好的冷冻保护剂是１２．５％Ｇｌｙ＋７．５％ＰＥＧ＋２．５ｇ／ＬＬＨ。     

南方红豆杉组织培养研究Ⅰ.愈伤组织诱导和培养条件优化

介绍了南方红豆杉植物愈伤组织诱导和继代培养条件,在ＭＳ－培养基上,附加不同种类和浓度配比的激素,在光照条件下对植物愈伤组织的诱导率和生长量等进行了比较,其中当２,４－Ｄ１．２ ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ ２． ８ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ３ ｍｇ／Ｌ或 ４ ｍｇ／Ｌ时,愈伤组织诱导率和生长量最高,结果表明,不同激素组合对愈伤组织诱导率、生长量和发生的性状有明显的影响。为南方红豆杉植物细胞悬浮培养建立了基础,为解决红豆杉的资源贫乏提供了新途径。     

诱导八角莲愈伤组织的研究

目的:探讨八角莲诱导愈伤组织的过程,为快速繁殖幼苗奠定基础。方法:以八角莲的根茎、叶片为外植体,采用MS培养基,附加不同的植物激素进行实验。结果:以八角莲的叶片为外植体,在培养基MS NAA1.0mg/L 2,4-D2.0mg/L 6-BA0.5mg/L,愈伤组织诱导率可达55.0%。结论:通过合理配制培养基和激素,可以诱导八角莲的愈伤组织。     

叶下珠愈伤组织的诱导与培养

目的建立叶下珠愈伤组织培养方法。方法采用组织培养方法,比较不同外植体、蔗糖、植物生长物质及其配比对叶下珠愈伤组织诱导的影响。结果茎段的诱导率最高,为55.56%,叶片诱导不出愈伤组织。6-BA是叶下珠愈伤组织形成的主要影响因素,2,4-D、NAA、蔗糖次之。结论叶下珠愈伤组织诱导及继代的适宜培养基为MS 2,4-D0.5mg/L 6-BA1.0mg/L NAA0.1mg/L 蔗糖10g/L。     

正交设计法对黄芩提取工艺的研究

目的：由于黄芩中的主要有效成分易被自身含有的酶分解成黄芩苷,从而降低疗效,因此本法以黄芩苷和总黄酮为多指标对传统的煎煮方法进行优化和规范。方法：采用多指标综合评分方式,通过平行对比实验和正交设计法对煎煮工艺进行评价和优化。结果：确定最佳水提工艺为A3B2C1,即取黄芩适量,直接加12倍量沸水中,提取一次,每次1 h。结论：该提取方法稳定,可行,为黄芩的提取工艺提供可靠依据。     

南方红豆杉愈伤组织培养的研究

对南方红豆杉叶愈伤组织诱导条件及最适培养基级成成分进行了探讨。结果表明,２,４－Ｄ比ＮＡＡ更有利于愈伤组织的形成。培养基中添加适度浓度的ＣＡ、Ｐｈｅ和乙酸钠能促进南方红用愈伤组织的生长和紫杉醇的积累。     

珍稀植物跳舞草愈伤组织的诱导

①目的筛选出跳舞草外植体的最佳消毒方案及愈伤组织诱导的最佳条件。②方法以跳舞草的叶片为实验材料,利用离体培养技术,分析了不同消毒时间和培养条件对跳舞草愈伤组织诱导的影响。③结果外植体最佳的消毒方案为：75％的酒精消毒30 s;愈伤组织诱导的最佳条件为：MS,NAA：0．02 mg/L,BA：2 mg/L,糖：30 g/L,琼脂：6 g/L。④结论为进一步建立跳舞草组培快速繁殖体系奠定了基础。     

肉苁蓉愈伤组织培养及所含有效成分量的研究

目的为扩大和提高肉苁蓉Cistanchedeserticola资源的利用效率。方法以肉苁蓉肉质茎的不同组织部位作为外植体,采用正交实验方法,筛选诱导愈伤组织产生的不同培养基和培养条件,并继代培养。应用HPLC方法对愈伤组织培养物中松果菊苷和洋丁香苷(毛蕊花糖苷)的量进行测定。结果肉苁蓉肉质茎的维管组织部分是诱导愈伤组织的最适外植体,鳞片叶次之,髓组织部分诱导效果较差。在暗培养、25~27℃条件下以B5为基本培养基附加6-BA(0.5~2mg/L)与IAA(0.5~1.5mg/L)诱导愈伤组织效果最佳;在半光照(光培养10h/d,暗培养14h/d)条件下,愈伤组织生长正常,最佳继代时间为25~30d。愈伤组织培养物中松果菊苷和洋丁香苷(毛蕊花糖苷)达4.37%。结论筛选出了适宜的肉苁蓉愈伤组织培养方法,且培养物中主要药用有效成分松果菊苷和洋丁香苷(毛蕊花糖苷)的量达到并超过了《中国药典》要求(0.3%)的标准。     

中国粗榧愈伤组织的诱导

目的:应用现代生物技术研究中国粗榧的组织培养技术.方法:观察不同消毒时间(5 min,10 min,15min),不同激素(6-苄基嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、6-呋喃氨基嘌呤(KT)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D))组合及不同激素浓度的MS培养基对中国粗榧不同的外植体材料(茎尖、当年生幼茎、当年生幼叶)愈伤组织诱导的影响.结果与结论:选用茎尖、幼茎为外植体,消毒时间为10 min,培养基以MS 6-BA NAA 2,4-D(6-BA、NAA质量浓度均为20 mg/L,2,4-D为1.0 mg/L)可较好地诱导中国粗榧愈伤组织的形成.     

黄花石蒜愈伤组织培养研究

目的探讨黄花石蒜愈伤组织的最佳诱导条件,并确定培养物中是否含有生物碱活性成分。方法以黄花石蒜的鳞茎为外植体,接种于不同激素组合的培养基上,开展愈伤组织诱导研究;以诱导出的愈伤组织为材料,采用紫外分光光度法测定总生物碱含量。结果双鳞片在MS＋2,4-D2 mg/L培养基上诱导愈伤组织效果最佳;经UV法测定其总生物碱含量为13.33 mg/g。结论黄花石蒜离体培养能够产生愈伤组织,且愈伤组织能够产生生物碱成分。     

南方红豆杉愈伤组织培养条件的优化及紫杉醇积累的基因表达效应分析

目的 优化南方红豆杉愈伤组织诱导与继代培养条件,获得含紫杉醇量高的红豆杉愈伤组织,明确紫杉醇合成相关基因的表达模式与紫杉醇量的关系。方法 探讨了适合南方红豆杉的愈伤组织诱导及继代培养的激素组成及浓度。比较了南方红豆杉 (种胚、幼茎、幼芽)、曼地亚红豆杉 (种胚) 和太平洋红豆杉 (种胚) 不同外植体来源的愈伤组织的生长特点和紫杉醇的量,分析了不同愈伤组织紫杉醇合成相关基因的表达差异。结果 添加 3.0 mg/L 2,4-D 的 Murashige & Skoog (MS) 培养基有利于南方红豆杉的诱导,诱导率高于 92%。添加 2.0 mg/L 2,4-D 与 1.0 mg/L 6-苄基腺嘌呤 (6-BA) 的继代培养基有利于南方红豆杉的紫杉醇积累。同一培养条件下,南方红豆杉种胚来源的愈伤组织紫杉醇量最高,达到干质量的 0.027%。含紫杉醇量高的愈伤组织,其紫杉醇合成途径中的牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶 (GGPPS)、紫杉二烯合成酶 (TASY)、紫杉烷-10β-羟化酶 (T10βH)、10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-β-O-乙酰转移酶 (DBAT)、苯丙氨酸氨基变位酶基因 (PAM)、去苯甲酰紫杉-N-苯甲酰转移酶 (DBTNBT) 等酶基因的表达水平高。结论 从南方红豆杉的种胚为外植体源获得了含紫杉醇量高的愈伤组织,提高 GGPPS、TASY、T10βH、DBAT、PAM、DBTNBT 的表达水平将促进紫杉醇的合成。