丙酮酸乙酯对类风湿性关节炎大鼠滑膜成纤维细胞增殖的影响

目的探讨丙酮酸乙酯对滑膜成纤维细胞增殖的影响。方法收集胶原诱导的关节炎大鼠(collagen induced arthritis,CIA)和正常大鼠滑膜组织,培养滑膜成纤维细胞。光镜及免疫荧光法检测Vimentin蛋白鉴定滑膜成纤维细胞;分别用1、2、5、10、20 mmol/L浓度的丙酮酸乙酯作用于滑膜成纤维细胞;流式细胞术及CCK8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果显微镜观察细胞形态特征符合滑膜成纤维细胞,且Vimentin蛋白表达阳性;5种剂量的丙酮酸乙酯均能抑制细胞增殖同时诱导细胞凋亡,但是未见明显剂量依赖效应,以5 mmol/L剂量组作用效果最为明显。结论丙酮酸乙酯能够抑制滑膜成纤维细胞增殖同时促进其凋亡,且以5 mmol/L剂量组作用最为明显。     

乌梢蛇蛋白对滑膜细胞增殖、凋亡及wt-p53／bcl-2mRNA表达的影响

目的研究乌梢蛇蛋白对体外培养的类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes,FLS）生长的抑制情况,探讨乌梢蛇蛋白影响FLS凋亡的可能分子机制。方法常规方法提取乌梢蛇总蛋白,组织贴块法培养FLS;采用不同剂量（高、中、低剂量）乌梢蛇蛋白作用FLS后,应用MTT法检测乌梢蛇蛋白对细胞增殖的影响,流式细胞仪技术检测细胞的凋亡情况．RT—PCR方法检测细胞wt-p53／bcl-2 mRNA的变化。结果乌梢蛇蛋白中高剂量组FLS增殖率与空白对照组比较明显减少,细胞凋亡率明显增加．差异均有统计学意义（P〈0．01）;乌梢蛇蛋白中高剂量组FLS的wt-p53 mRNA表达量增加,Bcl-2mRNA表达量降低,与空白对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论乌梢蛇蛋白可抑制FLS增殖和促进其凋亡。其作用机制可能是通过调节wt—p53／bcl-2基因表达来实现。     

lnc AL928768.3通过miR-92a-3p/ADAM10轴对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的:探讨lnc AL928768.3如何通过miR-92a-3p/解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)轴调控类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(SFs)增殖和凋亡。方法:qPCR检测RA患者滑膜组织lnc AL928768.3和miR-92a-3p表达。生物信息学手段和双荧光素酶报告基因实验分析lnc AL928768.3、miR-92a-3p与ADAM10的靶向关系,Western blot分析ADAM10表达。MTT检测MH7A细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。Western blot检测MH7A细胞增殖和凋亡相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)和活化的半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)表达。结果:lnc AL928768.3在RA患者滑膜组织中呈高表达,而miR-92a-3p呈低表达。生物信息学和双荧光素酶报告基因实验证实,lnc AL928768.3可靶向负调控miR-92a-3p表达,且ADAM10是miR-92a-3p的直接靶基因。抑制lnc AL928768.3表达或敲低ADAM10表达均可抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡;干扰miR-92a-3p能够逆转抑制lnc AL928768.3对MH7A细胞增殖抑制和凋亡的促进作用;过表达lnc AL928768.3或干扰miR-92a-3p表达能够逆转敲低ADAM10对MH7A细胞增殖抑制和凋亡的促进作用。结论:lnc AL928768.3在RA患者滑膜组织中表达上调,抑制lnc AL928768.3通过miR-92a-3p/ADAM10轴抑制MH7A细胞增殖并促进细胞凋亡。     

野菊花总黄酮诱导佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡

目的 研究野菊花有效成分总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞凋亡的影响,探讨其治疗作用的机理.方法 SD大鼠右后足跖皮内注射0.1ml弗氏完全佐剂复制AA模型;24d后组织块培养法分离培养大鼠膝关节滑膜细胞,用MTT法检测TFC对滑膜细胞增殖的影响;Hoechst 33258荧光染色,观察滑膜细胞核是否出现凋亡小体;琼脂糖凝胶电泳观察DNA碎片.结果 MTT法显示TFC抑制滑膜细胞增殖,并且呈剂量依赖性趋势,药物作用24h的IC50为112mg/L;TFC能诱导滑膜细胞凋亡,电镜观察到典型的凋亡细胞核,电泳呈现出阶梯状条带,Hoechst 33258染色观察到细胞核出现凋亡小体.结论 TFC可能会通过抑制AA大鼠滑膜细胞的增生,促进滑膜细胞的凋亡而达到治疗类风湿性关节炎的作用.     

枫杨提取物对MH7A 细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:观察枫杨不同提取物对人类风湿关节炎成纤维滑膜细胞MH7A增殖和凋亡的影响,初步探讨其诱导MH7A细胞凋亡的可能机制。方法:制备枫杨乙醇、石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇提取物后分别作用于MH7A细胞,检测其增殖情况。取增殖抑制作用最好的提取物作用于MH7A细胞,检测其凋亡情况,Caspase-3和Caspase-9的酶活性; Cyt-C、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bcl-2和BAX的蛋白表达,P53、BAX、BAK、Bcl-2和Bcl-xL的mRNA表达。结果:与枫杨石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇提取物相比,枫杨乙醇提取物可明显抑制MH7A细胞增殖,诱导其凋亡,使细胞内Caspase-3和Caspase-9的酶活性升高,Cyt-C、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和BAX的蛋白表达升高,Bcl-2的蛋白表达下降; P53、BAX、BAK的mRNA表达升高,Bcl-2、Bcl-xL的mRNA表达降低。结论:枫杨乙醇提取物可明显抑制MH7A细胞增殖,诱导其凋亡,并调控Cyt-C、P53、Caspase家族、Bcl-2家族相关蛋白的表达。因此推测该提取物可能通过影响线粒体凋亡途径诱导人类风湿关节炎成纤维滑膜细胞MH7A的凋亡,抑制其增殖。     

甘草素调控WIG-1 基因对肺癌细胞增殖、细胞凋亡以及放疗敏感性影响的研究

目的:探讨甘草素(LQ)对肺癌细胞增殖、凋亡及放疗敏感性的影响及其作用机制。方法:体外培养肺癌细胞株H1299,采用MTT细胞实验检测不同浓度LQ对H1299细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测H1299细胞凋亡率变化情况。Western blot检测各组H1299细胞中WIG-1蛋白表达情况,克隆形成实验检测不同剂量照射的H1299细胞存活分数。结果:不同浓度LQ处理后可抑制H1299细胞增殖并诱导细胞凋亡;LQ作用H1299细胞后经X线照射可降低H1299细胞存活分数并促进细胞凋亡;LQ可抑制H1299细胞中WIG-1蛋白表达;沉默WIG-1后经X线照射H1299细胞存活分数明显降低并可诱导细胞凋亡;WIG-1过表达可逆转LQ对H1299细胞凋亡及放疗敏感性的作用。结论:LQ通过调控WIG-1基因表达进而抑制肺癌细胞增殖、促进细胞凋亡及增强放疗敏感性。     

Anti-DR5 mAb诱导佐剂型关节炎大鼠滑膜细胞凋亡及机理初探

目的:探讨Anti-DR5 mAb诱导佐剂型关节炎(Adjuvant Arthritis,AA)大鼠滑膜细胞凋亡作用及其可能机理.方法:注射弗氏完全佐剂建立AA大鼠模型,分离并体外培养大鼠滑膜细胞.MTT检测、DNA倍体分析及流式细胞术分析Anti-DR5 mAb 对大鼠滑膜细胞的凋亡作用,Western blot检测大鼠滑膜细胞Caspase-3、Bcl-2蛋白的表达,Caspase抑制剂实验分析Anti-DR5 mAb 对大鼠滑膜细胞凋亡作用的机制.结果:MTT实验表明Anti-DR5 mAb能抑制大鼠滑膜细胞的增殖,流式细胞术分析这种作用模式为细胞凋亡.Anti-DR5 mAb处理后的大鼠滑膜细胞中Caspase-3蛋白水平上升,Bcl-2蛋白水平下调.Caspase抑制剂实验证明Anti-DR5 mAb 诱导大鼠滑膜细胞的凋亡是通过Caspase途径实现的.结论:Anti-DR5 mAb诱导大鼠滑膜细胞的凋亡,这种作用与滑膜细胞表面Caspase-3、Bcl-2蛋白表达相关.     

人参皂苷CK对色素沉着绒毛结节性滑膜炎成纤维样滑膜细胞（PVNS-FLS）体外活性的影响

目的 探讨人参皂苷CK对色素沉着绒毛结节性滑膜炎成纤维样滑膜细胞（PVNS-FLS）体外活性的影响。方法 将细胞分为阴性对照组（Control组）和实验组（CK药物组）,MTT与CCK-8方法检测不同浓度药物处理对细胞增殖能力的影响;倒置显微镜下观察各组细胞形态学变化;Hoechst 33342及TUNEL凋亡染色试剂盒检测不同浓度药物处理对PVNS-FLS的诱导凋亡作用。结果 不同浓度药物作用细胞后,PVNS-FLS的体外生存率及体外增殖能力显著下降,并呈明显的浓度依赖性及时间依赖性（P<0.05）;Hoechst 33342及TUNEL凋亡染色检测结果证实,CK能诱导PVNS-FLS凋亡（P<0.05）。结论 人参皂苷CK能抑制PVNS-FLS的体外活性及增殖能力,并诱导凋亡。     

沉默PGRN基因对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的：探讨沉默颗粒蛋白前体（PGRN）基因对类风湿关节炎（RA）滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法：按照脂质体法将siRNA PGRN、siRNA NC转染至RA滑膜成纤维细胞MH7A，记为siRNA NC组、siRNA PGRN组，对照组（Control）未进行转染处理；将siRNA PGRN转染RA滑膜成纤维细胞MH7A后，加入丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路激活剂Anisomycin，记为siRNA PGRN+Anisomycin组。采用qRT-PCR检测各组细胞PGRN mRNA表达水平；噻唑蓝（MTT）、克隆形成实验检测各组细胞增殖能力；流式细胞术检测各组细胞凋亡变化；Western blot检测各组细胞PGRN、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原（PCNA）、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)蛋白、MAPK通路蛋白表达。结果：与Control组、siRNA NC组相比，siRNA PGRN组内PGRN mRNA及蛋白表达、克隆形成率、存活率明显降低，凋亡率明显升高，Cyclin D1、PCNA、Bcl-...     

蜂胶抑制白血病K562细胞增殖机制的初步研究

目的: 探讨蜂胶对K562细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法: 体外培养K562细胞,将不同浓度的蜂胶掺入细胞,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,RT-PCR检测细胞中Nup98 mRNA表达水平。Western blotting检测细胞中Nup98蛋白表达水平。结果: 2 mg/L、20 mg/L和200 mg/L组蜂胶K562细胞的增殖抑制率和凋亡率明显高于对照组,并具有一定的时间和剂量依赖性。高浓度蜂胶作用后,Nup98 mRNA及蛋白表达均明显低于对照组。结论: 蜂胶可抑制K562细胞的增殖,诱导其凋亡,其机制可能与下调Nup98的表达有关。     

芹菜素对小鼠T淋巴细胞体外增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的:研究芹菜素(AP)对小鼠T 细胞体外增殖、细胞周期和凋亡的影响.方法:无菌分离小鼠淋巴结和胸腺细胞,MTT 法检测不同浓度(25、50、100、150、200 μmol/L)的AP 对多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)诱导的T 细胞增殖的影响,PI 染色结合流式细胞术(FCM)分析细胞周期的分布,Annexin V-FITC/PI 双染色结合FCM 检测AP 对T细胞凋亡的影响,以及AP与地塞米松(DEX)共同作用下T 细胞凋亡的变化,并用MTT 法检测该药物浓度对T细胞的毒性作用.结果:25～200 μmol/L AP对T细胞无药物毒性作用,并明显抑制ConA诱导的T 细胞增殖(P<0.01),使细胞周期停滞在G0/G1期,且呈剂量依赖关系;各浓度AP对T细胞凋亡均具有抑制作用,并明显抑制DEX诱导的T细胞凋亡(P<0.01),且呈剂量依赖关系.结论:在一定浓度范围内,AP 明显抑制ConA诱导的小鼠T细胞体外增殖,使细胞周期停滞G0/G1期,并明显抑制T 细胞凋亡.     

大麻受体激动剂WIN-55,212-2对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的:探讨激活大麻受体对肝癌细胞增殖和凋亡的作用,并对其机制进行初步探讨。方法:将细胞分成对照组、不同剂量大麻受体激动剂WIN-55,212-2(WIN)处理组。MTT法测定WIN对HepG2细胞增殖的影响;DNA梯度电泳法检测HepG2细胞凋亡DNA片段,流式细胞术检测分析各组细胞凋亡率变化,Western blot分析各组细胞caspase-3和c-myc的蛋白表达,分光光度法检测caspase-3、8、9的活性。结果:大麻受体激动剂WIN能抑制肝癌细胞生长和c-myc的蛋白表达,诱导肝癌细胞凋亡,上述效应具有剂量依赖性。而且WIN可能通过诱导细胞caspase-3的蛋白表达和激活caspase-3、8、9活性进而诱导肝癌细胞凋亡。结论:大麻受体激动剂WIN能抑制肝癌细胞生长,诱导肝癌细胞凋亡,并与caspases和c-myc的蛋白表达相关。     

Bcl-2硫代反义寡核苷酸对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究bcl-2硫代反义寡核苷酸(bcl-2ASODN)对人恶性黑色素瘤细胞A375增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法、激光共聚焦显微镜、TUNEL法和AnnevinV/PI双染法检测bcl-2ASODN对A375细胞增殖和凋亡的影响。应用RT-PCR方法,观察bcl-2ASODN处理前后bcl-2mRNA在A375细胞表达水平的变化。结果:MTT法检测显示bcl-2ASODN抑制A375细胞增殖,并呈时间和剂量依赖性;经30μmol/LASODN作用48h,激光共聚焦显微镜观察细胞呈现典型凋亡特征;TUNEL染色可见ASODN组多数A375细胞核被标记呈棕褐色,而SODN组和对照组细胞核未被明显标记;AnnexinV/PI检测ASODN组凋亡细胞比例升高,与SODN组和对照组均有显著性差异(P<0.001);RT-PCR结果显示bcl-2mRNA表达水平下降。结论:bcl-2ASODN可抑制A375细胞增殖和诱导A375细胞凋亡,其诱导凋亡的机制是下调bcl-2mRNA的表达。     

和厚朴酚对肝癌HepG2细胞生长抑制及凋亡的作用

目的:研究和厚朴酚(honokiol)对人肝癌HepG2细胞增殖的影响及诱导凋亡作用.方法:用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度和厚朴酚对HepG2细胞的增殖活性的效应,通过显微镜、荧光染色观察细胞形态学变化;DNA片段化检测细胞凋亡;流式细胞术检测和厚朴酚诱导细胞凋亡的凋亡指数(AI),caspase-3、8、9活性的变化.结果:和厚朴酚浓度为40～160 μmol/L时对HepG2细胞增殖有明显的抑制效应,且呈剂量依赖性;细胞加入和厚朴酚诱导24 h后AI明显高于未加入组(P<0.05),caspase-3、8、9活性增高.结论:和厚朴酚在一定浓度范围内能明显抑制HepG2细胞的增殖并能诱导其凋亡,其作用呈浓度依赖性.它可能通过激活caspase途径诱导HepG2细胞凋亡.     

雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖和IL-6分泌的影响

目的:观察雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖和IL-6分泌的影响,探讨其治疗类风湿性关节炎的作用机理.方法:培养大鼠滑膜细胞株RSC-364,运用CCK-8法检测不同剂量的雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖的影响,酶联免疫吸附实验检测细胞株培养上清中的IL-6的含量.结果:经过IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364,在不同浓度的雷公藤多甙的作用48h后,其增殖明显受到抑制,并呈剂量依赖性.同时各剂量组均可抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌炎性因子IL-6的分泌.结论: 雷公藤多甙抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364的过度增殖和IL-6的分泌,这可能是其治疗类风湿性关节炎的作用机理之一.     

顺铂增强食管癌相关基因2蛋白对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

 摘要：目的:探讨食管癌相关基因2（esophageal cancer-related gene 2,ECRG2）蛋白联合顺铂（cisplatin, DDP）化疗对人食管癌EC9706细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT法分别检测单用ECRG2蛋白和ECRG2蛋白联合顺铂对EC9706细胞增殖的影响;采用Hoechst 33258染色法检测二者对EC9706细胞凋亡的影响;Western blotting检测二者对EC9706细胞中p53蛋白表达的影响。结果:MTT结果显示,ECRG2蛋白可抑制EC9706细胞增殖,ECRG2蛋白和DDP联用后抑制细胞增殖作用增强,且在一定浓度范围内呈时间、剂量依赖关系。Hoechst 33258染色显示,ECRG2蛋白和DDP联合作用24 h后EC9706细胞凋亡数目多于单用ECRG2蛋白。Western blotting结果提示ECRG2蛋白和DDP联合用药较单用ECRG2蛋白明显上调p53蛋白的表达。结论: DDP 可增强ECRG2蛋白对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,其增强诱导EC9706细胞凋亡的机制可能与上调p53蛋白的表达有关。     

Lunasin对实验性类风湿关节炎大鼠滑膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨大豆多肽Lunasin对实验性类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大鼠滑膜成纤维细胞(synovialfibroblasts,SFs)增殖与凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用弗氏完全佐剂(freund’s complete adjuvant,FCA)注入大鼠足跖皮内建立大鼠RA模型,造模成功后从大鼠关节滑膜组织中分离纯化出SFs,然后与不同浓度的Lunasin(0、50、100、200μmol/L)分别孵育24、48和72 h,MTT法检测SFs增殖;RT-PCR、Western blot检测Caspase3、Bax、Bcl-2基因及蛋白的表达。结果Lunasin可显著抑制体外培养的滑膜成纤维细胞增殖,增加Caspase3、Bax的表达,抑制Bcl-2基因和蛋白的表达,并呈现一定的时间和剂量依赖关系。结论 Lunasin对RA的治疗作用可能与其抑制SFs增殖和促进凋亡有关。     

抗HER-2嵌合抗体chA21对SKOV3细胞增殖的抑制及诱导其凋亡的作用

目的：探讨抗HER-2嵌合抗体chA21在体外抑制高表达HER-2的人卵巢癌SKOV3细胞增殖并诱导其凋亡的作用。方法：采用MTT比色法、HE染色、透射电镜、流式细胞术及TUNEL染色法等观察和检测chA21对人卵巢癌细胞SKOV3增殖抑制和凋亡的诱导作用：结果：chA21（0．2mg／L～5．4mg／L）可显著抑制SKOV3细胞增殖并诱导其凋亡．其作用呈剂量和时间依赖性：结论：chA21在体外可显著抑制SKOV3细胞的增殖，诱导凋亡可能是其主要的作用途径，     

二甲双胍对成纤维样滑膜细胞增殖及炎性细胞因子分泌的影响

目的:探讨二甲双胍对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖及分泌炎性细胞因子的影响。方法:取我院行关节镜手术治疗的RA患者关节滑膜组织,采用改良组织块法培养原代FLS,用不同浓度二甲双胍(10、20、30μmol/L)干预FLS细胞,分别记为小剂量、中剂量、高剂量组,以常规养的FLS细胞为对照组。采用CCK-8法检测各组细胞处理24h、48h、72h后细胞增殖情况,采用ELISA检测各组细胞处理72h后上清液中促炎细胞因子:肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-6(IL-6)和抗炎细胞因子:白细胞介素-10(IL-10)水平,比较组间各指标水平的差异。结果:与对照组相比,72h后,中剂量组、高剂量组FLS增殖水平均降低(P<0.05);高剂量组上清液中TNF-α、IL-6、IL-17水平降低,IL-10水平升高(P<0.05)。结论:高剂量二甲双胍具有抑制FLS增殖和促炎细胞因子分泌、促进抗炎细胞因子分泌的作用,对治疗RA具有一定的应用价值。     

槲皮素抑制人胃癌MGC-803细胞增殖并诱导其凋亡的研究

目的:研究槲皮素抑制人胃癌MGC803细胞增殖和诱导凋亡的作用。方法:采用MTT比色法检测不同终浓度的槲皮素对MGC803细胞增殖的影响及其细胞毒活性。应用TUNEL(TdTmediateddUTPnickendlabeling)染色法检测槲皮素诱导MGC803细胞凋亡的作用。用免疫组化法测定P16、P53和Cmyc的表达率。结果:在40～100μmol/L范围内,槲皮素可显著抑制MGC803细胞增殖(P<0.01),且呈剂量、时间依赖性。TUNEL染色显示,槲皮素诱导48h后,MGC803细胞的凋亡率明显高于对照组(P<0.01)。免疫组化检测表明,用药组P53及Cmyc蛋白的表达下降,P16蛋白的表达率增强,与对照组相比较均有显著性差异(P<0.01)。结论:槲皮素可抑制人胃癌MGC803细胞增殖,并能诱导其凋亡,其作用机制可能与下调P53及Cmyc蛋白的表达、上调P16蛋白的表达有关。