Jagged-1抑制小鼠胚胎干细胞分化为造血干/祖细胞

目的 探讨Notch信号通路在小鼠胚胎干细胞(ESC)分化为造血干/祖细胞(HSC/HPC)中的作用.方法1)体外培养小鼠拟胚体细胞(EBs),使用Jagged-1蛋白活化Notch信号通路及DAPT(γ-分泌酶抑制剂)抑制Notch信号通路.实验分为拟胚体细胞复苏组(EB组)、对照组、Jagged-1组、DAPT组和...     

脐血造血干/祖细胞移植SCID小鼠的实验研究

目的 :检测扩增后脐血造血干 祖细胞的体内移植能力和造血活性 ,建立脐血细胞体外扩增优化方案和体内移植的SCID小鼠模型。方法 :采用无基质接触的液体悬浮培养方法扩增脐血CD34 细胞 ,将扩增前后的细胞移植给预先经过亚致死量辐照的SCID小鼠 ,4w后通过免疫荧光标记、PCR等检测存活小鼠体内的人源细胞。结果 :连续培养一定时间后 ,FL TPO SCF IL 6组脐血细胞得到持续扩增 ,并能维持一定比例的CD34 细胞 ;SCF IL 3 IL 6 GM CSF EPO组在第 2周时集落形成数已降低 ,第 4周时集落形成的细胞、CD34 细胞已基本检测不到。移植至少 4w后 ,在存活小鼠体内检测到人CD4 5 细胞和Alu基因。结论 :因子组合FL TPO CSF IL 6可以有效扩增脐血CD34 细胞 ,而且扩增后的细胞具有较高的移植效率和造血活性     

小鼠脐血造血干/祖细胞含量与特性初步观察

目的: 探讨小鼠脐血(umbilicalcordblood, UCB)造血干/祖细胞含量与特性。方法: 采用体外集落培养和流式细胞术检测C57BL/6(H-2^b)小鼠脐血与骨髓(bonemarrow, BM)造血干/祖细胞。结果: 小鼠脐血培养7d粒单系祖细胞(CFU-GM)及早期红系祖细胞(BFU-E)集落产率与骨髓相近, 但14dCFU-GM、多向祖细胞(CFU-GEMM)明显高于后者(P<0.05), 且见含细胞多体积巨大的致密型集落。脐血CD₃₄⁺Sca-1⁺细胞亚群也明显高于骨髓(P<0.05)。结论: 小鼠F脐血富含造血干/祖细胞, 具有高增殖潜能。     

脐血造血干/祖细胞移植研究进展

人类脐血富含造血干/祖细胞,作为骨髓和外周血以外的一种重要造血干细胞来源日益受到重视.脐血造血干/祖细胞移植用于临床已有十余年历史,本文就脐血在采集、纯化、保存、体外扩增、临床应用的研究现状及进展作一介绍.     

脐血CD34+造血干/祖细胞基因表达图谱的研究

目的：通过脐血CD34^＋造血干／祖细胞的基因表达分析，理解造血干／祖细胞生物学特性。方法：利用MiniMACS免疫磁珠法从脐血细胞中分离CD34^＋造血干／祖细胞，提取总RNA，用SMART-PCR技术从微量RNA中扩增产生足够量的cDNA用于高密度点阵膜分析检测CD34^＋造血干／祖细胞表达的基因。结果：在所检测的588个基因中，发现63个基因具有显著的表达水平，其中18个基因强表达。这些基因主要涉及造血干细胞增殖、分化、应激响应、凋亡、转录调节以及细胞周期等。结论：对理解脐血干／祖细胞生物学性质以及指导造血干细胞体外培养提供了分子生物学基础。     

造血干/祖细胞与肿瘤的关系

新近研究发现，骨髓衍生的造血干/祖细胞（bone marrow-derived hematopoietic stem/ progenitor cells）可以不断植入肿瘤，参与肿瘤间质和血管生成;持续存在的炎症环境提供了潜在的致癌性条件，使骨髓衍生干细胞可能成为恶性肿瘤起源细胞。VEGFR1+造血祖细胞(vascular endothelial growth factor receptor 1 positive hematopoietic progenitor cell, VEGFR1+ HPC)在肿瘤转移中可能具有决定性作用，肿瘤细胞先突破原发病灶，进入血流，然后停留在另一个预转移场所，在这个场所中，肿瘤细胞先建立造血干祖细胞簇后生长成瘤。     

SCID小鼠在脐血造血干/祖细胞移植研究中的应用

严重联合免疫缺陷 (SCID)小鼠是研究人造血干细胞增殖分化的一个理想的体内试验模型 ,近年来脐血造血干 /祖细胞体外扩增的研究成为干细胞移植领域备受关注的课题 ,通过采用有效的体内试验模型来进一步深入了解扩增后脐血造血细胞的移植潜能和造血活性。本文就SCID小鼠在脐血造血干 /祖细胞体外扩增和移植中应用作一综述     

造血干/祖细胞在基因治疗中的应用

基因治疗进入临床试验后,为了使带有目的基因的细胞在病人体内长期或永久地表达,必须选一种能在体内自我更新和自我维持的永不消亡的细胞,作为目的基因的宿主细胞。本文综述了造血干/祖细胞的特性、体外扩增、定向分化、诱导和造血细胞作为基因导入靶细胞的基因治疗及其临床应用,以及存在的问题、改进措施和应用前景。     

造血干/祖细胞的体外扩增培养研究

利用旋转壁式生物反应器(Rotating wall vessel,RWV)体外培养脐带血干细胞,使其大量扩增,以满足临床应用对造血干/祖细胞的数量与质量要求。从脐带血分离得到的单个核细胞(Mononuclear cells,MNC)在T-flask中培养24h,之后接种到RWV反应器中,培养200h。每24h细胞计数,测量培养基的pH和渗透压变化;在144h和197h测CD34 细胞含量并做CFU-GM半固体培养。有核细胞(Nucleated cells,NC)与CD34 细胞在第197h,分别扩增了435.5±87.6倍和32.7±15.6倍,CFU-GM(Colony-forming unit-granulocyte/macrophage)细胞扩增了21.7±4.9倍。整个培养过程中,RWV反应器中的pH和渗透压都保持在造血细胞最佳的扩增条件内,pH基本保持在7.2~7.4之间,渗透压基本保持在290~310mmol/kg之间。由于旋转壁式生物反应器(RWV)结构上的特殊性,可以保证细胞在悬浮流动的状态下生长,很好地模拟了脐带中的造血微环境,使脐带血造血干细胞在该反应器中短期内得到大量扩增。     

014 SCID小鼠在脐血造血干/祖细胞移植研究中的应用

严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠是研究人造血干细胞增殖分化的一个理想的体内试验模型,近年来脐血造血干/祖细胞体外扩增的研究成为干细胞移植领域备受关注的课题,通过采用有效的体内试验模型来进一步深入了解扩增后脐血造血细胞的移植潜能和造血活性.本文就SCID小鼠在脐血造血干/祖细胞体外扩增和移植中应用作一综述.     

骨髓CD34+造血干/祖细胞的分离、纯化及鉴定

造血干细胞(HSC)工程是利用HSC的生物学特征．通过细胞工程的技术,在体外模拟或部分模拟体内的造血过程,对分离纯化的造血干/祖细胞(HSC/HPC)进行体外扩增、定向诱导分化、功能激活与调控、目的基因转染等,最终将造血细胞治疗更广泛有效地应用于干细胞移植、生物免疫治疗、造血支持治疗和基因治     

运动促进青春期小鼠造血干细胞造血重建功能

目的：探讨运动对青春期（4周龄）和成年（9周龄）小鼠骨髓造血干细胞造血重建功能的作用。方法：使用跑步机分别对青春期和成年C57BL/6J雄性小鼠进行跑步运动（运动14 d,前2 d运动速度为10 m/min,后12 d运动速度为12 m/min）。实验分为对照（安静）组和运动组（n=6）;使用流式细胞仪分析运动后小鼠骨髓中造血干/祖细胞比例;采用全血分析仪分析运动后小鼠外周血中白细胞、红细胞及血小板的数目;体外集落形成实验检测造血干/祖细胞的集落形成能力;体内竞争性移植实验检测造血干细胞重建造血能力;BrdU实验分析造血干/祖细胞的增殖水平;ELISA检测外周血中瘦素水平;流式细胞仪检测骨髓和骨内膜中间充质干细胞的数目;体外集落形成实验检测间充质干细胞骨髓集落形成能力。结果：（1）运动导致青春期小鼠外周血中血小板数目显著升高（P<0.05）;(2)运动处理后,青春期小鼠骨髓造血干/祖细胞的比例及体外短期集落形成能力无显著差异（P>0.05）,然而运动促进青春期小鼠骨髓造血干细胞体内长期造血重建能力显著增强（P<0.05）;(3)成年小鼠运动后骨髓中造血干细胞比例显著降...     

小鼠胎肝Sca-1+细胞分化为骨骼肌细胞

探讨小鼠胚胎肝组织中干细胞抗原-1阳性的细胞(Sca-1+细胞)向骨骼肌细胞分化的潜能.取14.5d的小鼠胎肝,制作细胞悬液;用单克隆免疫磁珠细胞分离技术分离Sca-1+细胞;用PCR鉴别Y染色体性别决定区域(SRY)基因序列;将2×103个雄性小鼠Sca-1+细胞输注给经致死剂量(10Gy)60钴全身照射的雌性小鼠体内;于移植后2个月,处死受体小鼠,取骨骼肌组织固定、制片;用免疫组织化学染色和荧光原位杂交检测雌性受体小鼠骨骼肌组织内供体小鼠胎肝Sca-1+细胞向骨骼肌细胞分化情况.结果在骨骼肌组织内发现存在Y染色体阳性的供体来源的细胞,同时呈现骨骼肌组织的部分特征,表型为Dystrophin+/Flt-1-/CD45-F4/80-.提示小鼠胎肝Sca-1+细胞(其中绝大部分是造血干细胞)具有向骨骼肌组织细胞分化的潜能.     

促进胚胎干细胞来源造血干/祖细胞移植后细胞免疫功能恢复

目的:体外诱导胚胎干细胞分化为造血干/祖细胞过程中, 增加成熟T淋巴细胞的含量, 以促进其重建致死量照射小鼠的造血功能后免疫功能的早期重建。方法:胚胎干细胞在含甲基纤维素的培养基中自由分化形成胚胎体, 分化第6d添加造血生长因子, 同时添加胸腺肽, 流式细胞仪检测分化细胞中CD₃₄⁺的造血干/祖细胞和CD⁺₃的成熟T淋巴细胞含量, 最后将分化细胞注射入致死量照射小鼠体内, 观察60d, 以移植物抗宿主病(GVHD)发病率作为T淋巴细胞免疫功能的指标, 用PCR检测Sry反映移植细胞在宿主体内的存活。结果:分化第13d, 未加胸腺肽, CD⁺₃的成熟T淋巴细胞含量仅10.52%, 重建造血后无GVHD发生;添加胸腺肽, CD⁺₃的成熟T淋巴细胞含量升高达22.93%, 重建造血后GVHD发病率100%。结论:胚胎干细胞体外分化为造血干/祖细胞过程中, 添加胸腺肽, 能增加CD⁺₃的成熟T淋巴细胞含量, 体内重建造血后细胞免疫功能恢复较快。     

造血干/祖细胞的受训后免疫机制研究进展

天然免疫细胞(如单核/巨噬细胞)能够针对相同或无关病原体再刺激产生增强或减弱的免疫反应,这种现象被定义为受训后免疫(trained immunity,TI)。TI虽不像适应性免疫那样具有长期的记忆性,但可持续数周或数月。鉴于天然免疫细胞的短寿性,如何维持TI的长期性记忆是当前免疫学研究的前沿。由于造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cells,HSPC)能向髓系祖细胞分化并不断产生天然免疫细胞,故认为HSPC可能也存在受训现象。目前,对这一新观点的机制研究还较少,但深入探究该科学问题将为免疫调控机制及人类疾病发病机理研究提供新的见解。最新证据表明,类似单核/巨噬细胞,HSPC也存在TI现象,其机制涉及表观遗传学和代谢重编程等,本文就此进行综述。     

骨髓间充质干细胞对致敏小鼠造血干/祖细胞移植植入的影响

目的: 前期的研究已经证实致敏小鼠造血干/祖细胞移植植入失败率高。本研究拟通过骨髓间充质干细胞(MSCs)进行干预,观察能否提高造血干、祖细胞移植的植入率。方法: 应用贴壁培养法体外培养正常小鼠骨髓MSCs,并分为6个实验组,包括实验组1:d11 MSCs干预的致敏组;实验组2: d0 MSCs干预的致敏组;实验组3:d11和d0 2次MSCs干预的致敏组;实验组4: 无MSCs干预的致敏小鼠对照组;实验组5:无MSCs干预的正常小鼠(非致敏小鼠)移植对照组;实验组6:无MSCs干预的正常小鼠不移植对照组。观察指标包括生存分析、移植效果分析(血象改变、骨髓细胞恢复及嵌合分析等)和移植物抗宿主病(GVHD)检测,最终评估MSCs干预对各实验组异基因造血干/祖细胞移植植入率的影响效果。结果: 与对照组(实验组4、5、6)比较,MSCs干预(实验组1、2、3)在2次异基因脾细胞注射法致敏的动物模型进行异基因造血干/祖细胞移植时,未能促进骨髓造血干/祖细胞移植的植入,也未能延长致敏动物移植后的生存时间。结论: 体内应用1×10⁶ MSCs干预,未能促进2次异基因1×10⁶ C57BL/6小鼠脾细胞输注法建立的重度致敏模型异基因造血干/祖细胞移植的植入。     

VCAM-1修饰人脐血基质细胞对造血干/祖细胞扩增作用的实验研究

目的： 初步研究VCAM-1修饰的hUCBSCs促进造血干/祖细胞体外扩增的作用。方法： 在成功构建VCAM-1－pcDNA3.1(+)真核表达载体的基础上，转染原代培养的人脐血基质细胞，采用半定量RT-PCR法和免疫细胞化学技术检测转染前后hUCBSCs VCAM-1的表达情况；以VCAM-1修饰的人脐血基质细胞为滋养层，体外扩增脐血CD34+细胞，并对扩增后的脐血CD34+细胞进行CFU-GM、CFU-E、CFU-Mg半固体培养。结果： 脂质体介导VCAM-1－pcDNA3.1(+)真核表达载体成功转染人脐血基质细胞；RT-PCR和免疫细胞化学从mRNA水平和蛋白质水平均证明转染后VCAM-1表达明显高于转染前（P<0.05）；VCAM-1修饰的人脐血基质细胞能够有效支持脐血CD34+细胞的体外扩增(P<0.01)，其中对CFU-Mg的扩增作用强于未转染组(S组，P<0.05)。结论： VCAM-1修饰的人脐血基质细胞能够有效地支持造血干/祖细胞的体外扩增，显示其在造血重建方面潜在的应用价值。     

脐带血造血干祖细胞移植的基础

1 什么是造血干祖细胞最佳的移植物造血干祖细胞移植(HSPCT)用于治疗造血干祖细胞缺陷性血液病、先天性免疫缺损、先天性贫血、各类自身免疫病等,也用于实体瘤的治疗,是一种重要的生物治疗或细胞治疗。实际上,不论来自骨髓、脐带血或动员的外周血,移植物中含的不仅是造血干细胞,还包括更多的早期造血祖细胞,所谓“造血干细胞移植(HSCT)”实际上是造血干祖细胞移植(HSPCT)。这是当前对“造血干细胞移植”含义崭新的理解。CD34 细胞中90%以上是早期和晚期祖细胞,干细胞只是很小一部分。永久重建造血所需要的造血干细胞为数很少…     

造血干祖细胞移植的生物学基础

一、什么是造血干祖细胞最佳的移植物造血干祖细胞移植 (ＨＳＰＣＴ)用于治疗造血干祖细胞缺陷性血液病、先天性免疫缺损、先天性贫血、各类自身免疫病等 ,也用于实体瘤的治疗 ,是一种重要的生物治疗或细胞治疗。实际上 ,不论来自骨髓、脐带血或动员的外周血 ,移植物中含的不仅是造血干细胞 ,还包括更多的早期造血祖细胞 ,所谓“造血干细胞移植 (ＨＳＣＴ)”实际上是造血干祖细胞移植 (ＨＳＰＣＴ)。这是当前对“造血干细胞移植”含义崭新的理解。ＣＤ34 细胞中 90 %以上是早期和晚期祖细胞 ,干细胞只是很小一部分。ＣＤ 34 细胞移植更应该…     

胚胎小鼠肝脏Sca-1+细胞横向分化的研究

目的:研究和探索胚胎小鼠肝脏细胞的横向分化潜能。方法:将2×10³ C57BL/6j雄性胚胎小鼠的肝脏Sca-1⁺细胞从尾静脉注射到受致死性γ射线(10 Gy, ⁶⁰Co)全身照射的同种成年雌性小鼠体内;于移植后2个月, 用荧光原位杂交和免疫组织化学技术, 检测雄性胚胎小鼠肝脏Sca-1⁺细胞在雌性受体小鼠肾脏和脑组织内的分化情况。结果:在雌性受体小鼠的肾脏和脑组织内, 分别检测到Y染色体阳性的供体来源的肾小管上皮组织细胞样和神经组织细胞样的细胞, 其细胞表型分别为RCA⁺/CD^-₄₅F^-_4/80和NueN⁺/CD^-₄₅F^-_4/80。结论:胚胎小鼠肝脏Sca-1⁺细胞具有向肾脏和脑组织细胞横向分化的能力。