丹参对大鼠移植肝血红素氧合酶1表达的影响

背景：器官移植前使用丹参预处理能够保护组织缺血-再灌注损伤,改善移植器官存活率。 目的：观察含丹参的冷灌注液对同种异体大鼠移植肝脏中血红素氧合酶1表达的影响,以及对供体肝脏缺血-再灌注损伤的保护作用。 方法：将SD雄性大鼠随机分成UW液组(术中使用UW液灌注保存)、丹参+UW液组(术中使用丹参+UW液灌注保存)、ZnPP预处理组(移植前24 h腹腔内注射ZnPP,术中使用丹参+UW液灌注保存),建立稳定的大鼠同种异体肝移植模型。同时取10只正常大鼠作为正常对照。 结果与结论：丹参+UW液组和UW液组血清总胆红素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平明显低于ZnPP预处理组(P < 0.01)。血红素氧合酶1mRNA及其蛋白在丹参+UW液组中较UW组表达更明显,在ZnPP预处理组中表达明显受到抑制(P< 0.05)。丹参+UW液组肝脏Suzuki标准评分明显低于ZnPP预处理组及UW液组(P < 0.05)。表明丹参能上调同种异体的大鼠移植肝脏中血红素氧合酶1 mRNA及其蛋白的表达,减轻供肝缺血-再灌注损伤,保护移植大鼠肝脏。     

迟发缺血预处理低温保存肾移植供体中血红素加氧酶1的表达

背景：缺血预适应延迟反应通过诱导保护性蛋白增强组织对缺血再灌注损伤的耐受能力;血红素加氧酶1参与缺血预适应延迟保护作用。迟发缺血预处理对低温保存肾脏的作用及血红素加氧酶1是否参与其中尚不清楚。 目的：观察缺血预处理诱导血红素加氧酶1的迟发缺血预处理反应对低温保存肾脏移植供体的作用。 方法：雄性SD大鼠随机分入5组：空白对照组、低温保存组、缺血预处理组、缺血+低温组(n=12);缺血+给药+低温组。各组大鼠均行右肾切除,预处理或假手术操作处理后24 h采用大鼠肾脏非循环离体灌注模型获取肾脏,分别于保存24,48,72 h取样。缺血+给药+低温组除上述处理外,还于原位低温灌注术前1 h接受1次血红素加氧化酶1抑制剂锡原卟啉腹腔注射。低温保存肾脏于各保存终点留取保存液,测定pH值和乳酸脱氢酶含量;切取1/2肾脏按照光镜要求制备标本送检;剩余1/2肾脏用于免疫印迹法测定血红素加氧酶1表达,比色法测定皮质Na-K-ATP酶活性、丙二醛和还原型谷胱甘肽含量;未保存肾脏仅通过免疫印迹法测定血红素加氧酶1的基础表达情况。 结果与结论：迟发缺血预处理诱导了肾组织血红素加氧酶1的表达,与单纯低温保存组相比保存24,48 h后,缺血+低温组保存液pH值、乳酸脱氢酶活性降低;肾脏组织Na-K-ATP酶活性、谷胱甘肽含量增加,丙二醛含量降低;同时点预处理组肾组织光镜形态学改变稍好于单纯低温保存组。给予血红素加氧酶1抑制剂后,这种保护作用消失。提示,迟发缺血预处理延长了肾脏低温保存时限,这可能与诱导血红素加氧酶1,增加组织抗氧化能力,减轻低温保存氧应激有关。     

自制移植肝低温保存液对氧自由基的影响

背景：在肝脏移植过程中,低温保存和缺血可导致肝脏产生氧自由基而损伤肝组织。 目的：研究自制器官保存液对低温保存大鼠肝脏氧自由基的影响,并与器官保存液的“金标准”UW液进行对比。 方法：16只9周龄SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组8只。建立SD大鼠肝脏灌注模型,分别用自制器官保存液组和UW液组灌洗肝脏,取出肝脏置于4 ℃保存液中,于保存24,48,72 h后分别检测肝脏超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶、总抗氧化能力和活性丙二醛水平。 结果与结论：自制器官保存液对大鼠肝脏低温保存各时点超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶、总抗氧化能力活性及丙二醛含量与UW液组比较差异均无显著性意义(P > 0.05),表明自制器官保存液能够减轻缺血再灌注后氧自由基对大鼠肝脏的损伤。自制器官保存液对低温保存大鼠肝脏在减轻氧自由基损伤方面有较好的效果,与UW液相当。     

钙离子超载对低温保存人肝细胞的损伤作用

目的　研究分离培养的成人肝细胞在低温保存状态下 (0～ 4℃ )的钙离子代谢特点和钙离子超载的损伤作用机理。方法　成人肝脏细胞分离和培养 ,用钙离子荧光探针检测保存液的钙离子浓度。结果　低温保存下 ,细胞内游离钙离子迅速升高 ,逐渐达到稳态水平 ,随细胞内钙离子的升高 ,细胞的存活率也逐渐下降 ,但在含0 .5 m MCa Cl2 的保存液组 ,保存效果明显好于其它两组 ;在含 1.5 m MCa Cl2 的保存液组 ,继发的钙离子超载峰值出现早而且要高于原发的钙超载峰。结论　低温保存可以引起成人肝细胞的钙超载 ,细胞外钙是细胞钙超载的主要来源 ,继发超载是缺血再灌注损伤的主要原因     

丹参对内毒素性肝损伤及肝脏微循环障碍大鼠的防护机制研究

目的:探讨丹参对内毒素性肝损伤及肝脏微循环障碍大鼠的防护机制。方法:将70只大鼠随机分为正常对照组,内毒素注射后6h、12h、24h组和相同时相的丹参防护组,共7组。丹参防护组于制模前3天经大鼠腹腔注射丹参注射液,剂量为40mg/kg,连续3天,除正常对照组0h处死,肝组织取材外,其它各组均于内毒素注射后6h、12h、24h分别处死,取肝脏组织匀浆,制备肝细胞线粒体悬液,检测肝细胞线粒体超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、三磷酸腺苷(ATP),肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及内皮素-1(ET-1)。结果:丹参防护组与相应时相内毒素组比较,SOD、ATP活性显著升高(P<0.01),MDA、TNF-α、ET-1活性显著降低(P<0.01)。结论:丹参能明显抑制肝细胞脂质过氧化反应,从而使肝细胞变性坏死减轻,改善生物转化功能,保护肝细胞,改善肝脏局部血液循环。     

肝动脉/门静脉早期复流对肝移植大鼠小肠缺血再灌注损伤的影响

背景:当肝动脉与门静脉早期复流时序不同时,是否会加重对肝移植大鼠小肠缺血/再灌注的损伤尚未见大量报道。目的:探讨肝动脉与门静脉早期复流对肝移植大鼠小肠缺血/再灌注损伤的影响。方法:采用门静脉灌注的大鼠自体肝移植模型,78只SD大鼠以简单随机化法分为3组:肝动脉组(n=36):行自体肝移植手术,以40C乳酸林格液由门静脉灌肝40min,开放肝动脉及下腔静脉,10min后开放门静脉;门静脉组(n=36):行自体肝移植手术,门静脉开放恢复肝脏血流后10min再开放肝动脉血流;假手术组(n=6):打开腹腔,游离肝脏后关腹。观察各组小肠显微及超微结构变化并测定一氧化氮水平。结果与结论:术后各实验组不同时段先后出现小肠绒毛排列不整或紊乱,小肠黏膜细胞线粒体大小不一,明显肿胀,呈类圆形,内有空泡变性,严重者可见嵴减少、断裂或消失。小肠组织一氧化氮水平均升高。上述变化在术后12h达高峰。术后肝动脉先复流组小肠显微及超微结构损伤及小肠组织一氧化氮水平明显高于门静脉先复流组。提示,肝动脉早期复流可以通过早期肝脏供氧以减少移植肝脏的损害,但门静脉的延迟开放则加重了肝移植大鼠小肠的缺血/再灌注损伤。     

海藻糖对生物人工肝用人永生化肝细胞系C3A细胞低温的保存

背景：随着生物人工肝在临床上的应用,需要有一种方便、有效、实用的保护生物反应器装载细胞活力及功能的方法,设计有自主知识产权的生物人工肝用肝细胞的低温保护液迫在眉梢。 目的：验证海藻糖作为低温保护剂在4 ℃低温保存肝细胞的作用。 方法：采用C3A人永生化肝细胞系在不同低温保存液(DMEM培养液,乳酸钠林格氏液,加有不同浓度海藻糖的乳酸钠林格氏液,UW液)4 ℃保存24,48,72 h。复苏后行细胞活力、细胞损伤指标、氧自由基代谢相关指标等检测,并通过荧光双染法观察细胞凋亡情况。 结果与结论：不同低温保存液保存不同时间C3A细胞的活力、细胞损伤及细胞凋亡表现均有所不同,其中同时间点不同浓度海藻糖组均优于单用乳酸钠林格氏液组,但不如UW液组(P < 0.01)。而保存24 h的不同浓度海藻糖组及UW液组与乳酸钠林格氏液组相比差异无显著性意义(P > 0.05),提示海藻糖能有效减轻低温对肝细胞凋亡及缺血再灌注损伤的程度,可成为低温保存液中有效及重要的保护剂组分。     

血红素加氧酶-1过表达延长肝脏低温保存时间的研究

目的 研究血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)过表达延长肝脏低温保存的时间及其机制.方法 利用大鼠肝脏离体再灌注模型,用钴-原卟啉(cobalt protoporphyrin,CoPP)和锌-原卟啉(zincprotoporphyrin,ZnPP)特异地诱导和抑制HO-1,观察肝脏保存0、6、24h,灌注2h后的胆汁生成量,灌流液AST、LDH、TNF-α和IL-6的活性,肝脏MDA的含量,肝组织HO-1蛋白表达的Western印迹,细胞凋亡情况等.结果 CoPP诱导了肝组织HO-1的表达,与未诱导24h保存组相比,CoPP诱导组的肝脏灌流液AST、LDH、TNF-α和IL-6的活性以及肝脏MDA含量显著降低,胆汁生成量明显增加,凋亡细胞数量减少(P<0.05),并与未诱导6h保存组接近.给予ZnPP后,这些保护作用消失.结论 HO-1过表达延长了肝脏低温保存时间,原因可能与抗氧化应激、抑制炎性因子的表达和细胞凋亡有关.     

高氧液对大鼠肝移植的保护作用

背景:目前可供移植的器官日益短缺,但因灌注冷保存所至的原发性移植物无功能仍然有一定的发生率,减少灌注保存所至的器官损伤有较大的临床意义。目的:观察高氧液对大鼠肝移植的保护作用。方法:选用Wistar大鼠40只,按随机数字表法分成2组,即高氧乳酸林格液组(高氧液组)和乳酸林格液(普通灌注液组),每组20只,各组供、受体各半,制备肝、肾、胰器官簇移植模型。高氧液组使用高氧液灌注,普通灌注液组使用普通林格液灌注,比较两组灌注末、肝移植后第1,3天透明质酸质量浓度、谷丙转氨酶活性、CD8+CD28-T细胞含量,以及移植后肝组织病理急性排斥评分。结果与结论:移植前两组透明质酸质量浓度、谷丙转氨酶活性、CD8+CD28-T细胞含量差异无显著性意义(P0.05)。移植后高氧液组透明质酸质量浓度、谷丙转氨酶活性均低于普通灌注液组(P0.05),CD8+CD28-T细胞含量高于普通灌注液组(P0.05),高氧液组Banff评分低于普通灌注液组(P0.05)。提示高氧液可减轻缺血再灌注损伤,对大鼠肝移植有一定的保护作用。     

硫化氢增加肝脏缺血再灌注损伤模型大鼠胰岛素样生长因子Ⅰ、 核转录因子κB、肿瘤坏死因子α的表达

背景：硫化氢气体是一种新型气体信号分子,在生理浓度下具有抑制Ca2+内流、开放KATP通道功能,氧化还原等明确特定的作用。 目的：观察硫化氢对大鼠肝脏缺血再灌注损伤胰岛素样生长因子Ⅰ、核转录因子κB及肿瘤坏死因子α表达水平的影响 方法：70只SD大鼠随机等分为假手术组、缺血20 min组,缺血20 min+灌注2,4 h组、硫氢化钠+缺血20 min组、硫氢化钠+缺血20 min再灌注2,4 h组。除假手术组外,其余各组大鼠通过Pringle法建立大鼠全肝缺血再灌注模型,在术前5 d中每天及术中向硫氢化钠+缺血20 min组、硫氢化钠+缺血20 min再灌注2,4 h组,大鼠腹腔注射56 μmol/kg 硫氢化钠。 结果与结论：肝脏缺血大鼠肝组织中胰岛素样生长因子Ⅰ 、核转录因子κB和肿瘤坏死因子α表达明显下降(P < 0.05),与缺血组比较,大鼠再灌注和腹腔注射硫化氢均能增加大鼠肝组织中胰岛素样生长因子Ⅰ 、硫化氢、核转录因子κB和肿瘤坏死因子α的表达(P < 0.05)。提示全肝缺血再灌注后可造成肝脏损伤,硫化氢增加肝脏缺血再灌注损伤模型大鼠胰岛素样生长因子Ⅰ、核转录因子κB、肿瘤坏死因子α的表达,肝脏损伤具有保护作用。     

自制PV液与大鼠肝脏低温保存:与UW液的对比

背景:目前许多学者对UW液成分进行改进,其目的主要在于进一步探索器官保存的原理,提高保存的技术和延长保存的时限;简化UW液的成分,以进一步满足临床运输、储存和使用的方便;寻找合适的替代品,降低UW液的成本以满足市场需要。目的:观察自制PV液对大鼠肝脏低温保存的效果,并与UW液进行对比。方法:将90只Wistar大鼠按随机数字表法分成3组,即UW液组、PV液组和生理盐水组,制作大鼠肝脏非循环离体灌注模型,分别使用相应灌洗保存液。每组再根据不同的保存时间分为保存0,6,12,18,24h5个亚组,每个亚组6只大鼠。测定保存不同时间后肝脏谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶活性变化,以及灌注流出液中氧自由基代谢产物丙二醛浓度与超氧化物歧化酶活性;观察胆汁分泌量及镜下肝脏形态学变化。结果与结论:PV液组与UW液组比较,灌注流出液中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、超氧化物歧化酶活性相近,差异无显著性意义(P0.05)。保存6h后,PV液组肿瘤坏死因子α质量浓度显著高于UW液组(P0.05);保存12h后,UW液组丙二醛浓度显著高于PV液组(P0.05);保存18h后,PV液组胆汁分泌量低于UW液组(P0.05);两组光镜、电镜下组织形态改变相似。提示PV液与UW液对Wistar大鼠肝脏功能均具有保护作用,两者短时间保存效果相似,在抗氧化及清除氧自由基方面,PV液略优于UW液。     

酸性成纤维细胞生长因子复方保存液对大鼠肝脏低温保存的作用

目的: 探讨人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对离体大鼠肝脏低温保存的效果。方法: 24只Wistar大鼠随机分为高渗枸橼酸盐腺嘌呤(HCA)液对照组和aFGF复方保存液(HCA液中含aFGF_14-154 40 μg/L)实验组,分别用HCA液和aFGF复方保存液进行肝脏离体灌注,并低温保存肝脏。12和24 h后,测定肝脏保存前后的重量、肝组织丙二醛(MDA)含量及肝保存液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性的变化,并检查肝组织病理学改变。结果: 离体肝脏低温保存24 h后,aFGF复方保存液组肝脏重量差、ALT、AST和MDA水平均明显低于HCA对照组 (P<0.05);肝脏病理学检查结果显示,aFGF复方保存液组肝组织损伤明显减轻。结论: aFGF复方保存液对肝脏的低温保存效果较单纯HCA液更明显,其机制可能与aFGF参与抑制细胞肿胀和抗氧化损伤作用有关。     

肾上腺髓质素基因注入大鼠骨骼肌对肢体缺血再灌注肝脏的影响

背景:以往研究直接采用肾上腺髓质素药物来研究多种器官缺血再灌注损伤后肾上腺髓质素的保护作用,但转肾上腺髓质素基因对肢体缺血再灌注后引起的肝脏损伤是否有保护作用却少见报道。目的:探讨大鼠肾上腺髓质素真核表达载体对大鼠肢体缺血再灌注后肝脏的作用。方法:成年雄性SD大鼠32只,随机分成4组,假手术组、缺血再灌注模型组、转肾上腺髓质素基因组和空载体组,每组8只,除假手术组其余各组大鼠制成缺血再灌注模型。转肾上腺髓质素基因组和空载体组采用直接注射法于腓肠肌分别注射肾上腺髓质素真核表达载体和肾上腺髓质素(700μg/kg)盐水溶液1mL;假手术组和缺血再灌注模型组注射生理盐水1mL心脏采血测定血浆谷丙转氨酶、谷草转氨酶和乳酸脱氢酶的活性,测定肝组织总超氧化物歧化酶、丙二醛的含量;免疫组化检测术侧腓肠肌中肾上腺髓质素的表达情况;显微镜观察肝组织的形态学变化。结果与结论:与假手术组比较:缺血再灌注模型组血浆谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶水平及肝组织丙二醛含量均明显升高(P0.01),肝组织超氧化物歧化酶活性明显降低(P0.01),显微镜下可见肝细胞水肿、结构紊乱等组织损伤明显;与缺血再灌注模型组比较:转肾上腺髓质素基因组血浆谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶及肝组织丙二醛含量明显降低(P0.01),肝组织超氧化物歧化酶活性明显升高(P0.01),显微镜下可见肝细胞水肿等组织损伤有所改善。免疫组化结果显示转肾上腺髓质素基因组腓肠肌中肾上腺髓质素表达上调。结果表明,转肾上腺髓质素基因对大鼠肢体缺血再灌注后肝脏具有保护作用,其机制可能与提高抗氧化能力、降低肝酶渗出相关。     

自制多脏器保存液对大鼠睾丸一氧化氮合酶的影响

背景：在睾丸移植过程中,低温保存和缺血可导致睾丸产生氧自由基而损伤睾丸组织。 目的：观察自制多脏器保存液对低温保存大鼠睾丸一氧化氮合酶的影响。 方法：采用自制多脏器保存液和UW液低温保存大鼠睾丸,分别于保存24,48,72 h时切取睾丸,测定睾丸组织内的总抗氧化能力和一氧化氮合酶活性。 结果与结论：自制多器官保存液低温保存各时点大鼠睾丸一氧化氮合酶活性和总抗氧化能力与UW液组比较差异均无显著性意义(P > 0.05)。表明自制多脏器保存液能明显减轻低温保存大鼠睾丸氧自由基损伤,其作用与经典的美国威斯康星大学UW保存液基本相当。     

肢体缺血-再灌注大鼠应用氨基胍后脑、肝脏及肾脏HO-1表达的变化

目的探讨大鼠肢体缺血-再灌注(I-R)时,脑、肝脏及肾脏组织内高表达的iNOS-NO是否对诱导型血红素氧合酶(HO-1)表达具有诱导作用.方法对肢体I-R大鼠应用氨基胍(AG)抑制iNOS后,用RT-PCR及免疫组化染色法观测其脑、肝及肾组织HO-1mRNA及蛋白表达的变化.SD大鼠随机分为I-R6h+AG、I-R12h+AG两个实验组及I-R6h、I-R12h两个对照组.通过夹闭大鼠双侧股动脉根部4h、开放6h或12h,制备肢体I-R6h、I-R12h组模型,I-R6h+AG、I-R12h+AG组于去夹再灌注前20min经腹腔注射AG(10mg/kg).结果(1)I-R6h组脑组织HO-1mRNA的相对表达量为0.645±0.049,I-R6h+AG组较前者显著下降(P＜0.01),为0.143±0.008;I-R12h组为0.808±0.016,I-R12h+AG组为0.329±0.014,I-R+AG组较前者显著下降(P＜0.01),为0.412±0.025.I-R12h组为1.116±0.085,I-R12h+AG组为0.870±0.040,两者比较,P＜0.01.(2)I-R6h组肝组织HO-1mRNA的相对表达量为0.605±0.014,两者相比,P＜0.01.(3)I-R6h组肾组织HO-1mRNA的相对表达量为0.706±0.042,I-R6h+AG组为0.286±0.052,两者相比,P＜0.01;I-R12h组为1.668±0.065,I-R12h+AG组较前者显著升高(P＜0.01),为3.176±0.109.(4)免疫组化染色显示,脑、肝及肾组织内HO-1蛋白生成的变化与mRNA表达的变化一致.讨论与结论在肢体I-R的情况下,脑等远隔多器官的iNOS及HO-1均表达上调,抑制iNOS活性使这些器官的HO-1表达水平显著下降,提示,在肢体I-R的状态下,远隔多器官高表达的iNOS-NO对HO-1基因表达具有上调性诱导作用.肾有别于脑与肝脏,应用AG12h后,肾血管内堆积大量破坏的红细胞,而血红素是HO-1表达的强效诱导剂,I-R12h+AG组肾HO-1表达上调可能是血红素的上调性诱导作用逆转了AG对HO-1的下调作用.     

海藻糖对低温保存胸骨中bcl-2和bax基因表达的影响

背景:研究已经证实海藻糖对低温保存中的胸骨具有保护作用,但作用途径尚不清楚。 目的：观察海藻糖对低温保存胸骨bcl-2和bax基因表达的影响。 方法：新鲜配置4组保存液：低钾右旋糖酐组、低钾右旋糖酐+二甲基亚砜组、低钾右旋糖酐＋海藻糖组、低钾右旋糖酐＋二甲基亚砜组＋海藻糖组。切取SD大鼠胸骨后立即分别放入含上述4 种溶液的冻存管中低温保存。抽取新鲜大鼠胸骨组织和低温保存120 d的4组标本,采用RT-PCR方法检测不同保存液保存的胸骨及新鲜胸骨bcl-2和bax基因mRNA表达量。 结果与结论：低钾右旋糖酐+海藻糖组bcl-2表达量高于低钾右旋糖酐组、低钾右旋糖酐+二甲基亚砜组(P < 0.01),但bax表达量低于低钾右旋糖酐组、低钾右旋糖酐+二甲基亚砜组(P < 0.01);低钾右旋糖酐+二甲基亚砜组+海藻糖组bcl-2表达量最高,bax表达量最低,基本接近新鲜骨组织(P > 0.05)。结果提示海藻糖可能通过增强bcl-2基因、抑制bax基因的表达保护低温保存中的胸骨细胞活性,其与二甲基亚砜合用保护作用更好。     

苦参碱通过调节Bcl-2/Bax的平衡抑制大鼠缺血再灌注引起的肝细胞凋亡

目的肝脏缺血再灌注损伤是肝脏切除手术中最常见的并发症,由于激发细胞异常凋亡,常导致肝功能不全甚至引起死亡。本研究旨在揭示肝脏缺血再灌注损伤发生过程中苦参碱参与调节凋亡蛋白Bcl-2/Bax平衡的分子机制。方法健康成年SD大鼠45只,随机分为3组:一组作为空白对照组(SO组,n=15),不阻断肝脏血流;另外2组大鼠行夹闭门静脉和肝动脉缺血70 min后进行再灌注方法建立HIRI模型(缺血再灌注损伤模型),以缺血/再灌注+生理盐水组为对照组(NS组),缺血/再灌注+苦参碱组为实验组(MT组)。MT组在夹闭门静脉和肝动脉前经门静脉主干注入苦参碱。NS组注入生理盐水,阻断供血1h后恢复灌注,在恢复灌注2 h后采集标本行mRNA及Western blot检测。结果 qRT-PCR结果显示,正常对照SO组Bcl-2 mRNA表达水平显著高于Bax,在肝脏缺血再灌注模型组NS组中,高Bcl-2表达水平受到抑制,Bax表达水平显著高于Bcl-2。当行苦参碱干预后,Bax mRNA水平显著下降(MT组),基本接近SO组Bax水平。Western blot验证结果与mRNA水平结果相似。结论苦参碱显著抑制大鼠缺血再灌注引起的肝细胞凋亡,该途径可能由于苦参碱参与调节Bcl-2/Bax的平衡所致。     

参附注射液对肝脏缺血再灌注大鼠iNOS和NO水平的影响

目的探讨参附注射液(SF)对大鼠肝脏缺血再灌注损伤肝组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和血清一氧化氮(NO)的影响。方法32只Wistar大鼠随机分为参附实验组(SF组)和肝缺血再灌注组(IR组)。SF组腹腔注射参附注射液(10ml·kg-1),IR组大鼠给予相同剂量的生理盐水。两组均采用Pringle's法阻断肝门缺血15min再灌注1h、3h,测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)以及NO水平,并应用免疫组织化学法测定肝组织中iNOS表达。结果大鼠肝脏缺血15min再灌注1h和3h,SF组血清ALT、AST以及NO水平低于IR组(P<0.05),SF组肝组织iNOS阳性产物平均吸光度值、阳性面积百分率(%)明显低于IR组(P<0.05)。结论参附注射液抑制iNOS的表达,减少过量NO的生成,可能是其对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用机制之一。     

川芎嗪改善肾脏低温保存效果的实验研究

目的研究川芎嗪在肾脏保存中的作用及可能的作用机制。方法将草犬分为两组 ,对照组用4℃高渗枸橼酸盐嘌呤溶液 (HC-A液 )对供肾进行灌注和保存 ,实验组用4℃含川芎嗪 (4mg/L)的HC -A液对供肾进行灌注和保存 ,分别于24、48h后观察肾脏生物化学指标的改变。结果实验组肾脏线粒体呼吸控制率 (RCR)、细胞内Ca2 +含量和皮质ATP含量等指标明显优于对照组 (P<0.05)。结论川芎嗪可提高肾脏保存效果 ,其作用机理可能与改善低温保存肾脏的能量代谢有关。     

大鼠肝脏冷缺血再灌注损伤时姜黄素后处理对肝细胞凋亡的影响

背景:姜黄素预处理可减轻肢体缺血再灌注对肝脏的损伤,但姜黄素后处理对肝脏冷缺血再灌注损伤是否有保护作用及其机制目前研究甚少。目的:探讨大鼠肝脏冷缺血再灌注损伤时姜黄素后处理对肝细胞凋亡的影响。方法:选取成年雄性SD大鼠80只,采用随机数字表法将其分成4组(n=20):假手术组、冷缺血再灌注组、姜黄素后处理组、地塞米松组。使肝脏血流处于完全阻断状态,随后以脾静脉作为流入道和右肾上腺静脉作为流出道注入0℃复方乳酸林格液,冷灌注30min;停止冷灌注后,结扎近端脾静脉和右肾上腺静脉,切除脾脏,随即恢复肝脏血流,完成制作冷缺血再灌注模型。在大鼠冷缺血30min后,姜黄素后处理组经尾静脉注射姜黄素60 mg/kg,地塞米松组尾静脉注射地塞米松0.5 mg/kg,其他组以等量的生理盐水替代。再灌注6 h时经下腔静脉取血,检测血清天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸转移酶水平,随后处死大鼠,取肝组织检测丙二醛水平;采用苏木精-伊红染色观察肝脏病理变化;Hoechst33258染色法检测肝细胞凋亡指数;Westernblot检测肝组织Bcl-2和Bax蛋白表达;RT-PCR检测肝组织促细胞凋亡基因Caspase-9m RNA表达;ELISA检测肝组织肿瘤坏死因子α及白细胞介素1β水平。结果与结论:①与假手术组比较,冷缺血再灌注组天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸转移酶、丙二醛和凋亡指数明显升高(P<0.05);苏木精-伊红染色切片可见肝血窦内有大量炎性细胞浸润,肝细胞嗜酸性变,胞浆内疏松化,肝细胞呈气球样变,偶可见斑片状坏死,散在点状坏死灶;Bcl-2表达下降,Bax表达明显升高(P<0.05);Caspase-9 mRNA表达、肿瘤坏死因子α及白细胞介素1β水平明显升高(P<0.05);②与冷缺血再灌注组比较,姜黄素后处理组天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸转移酶、丙二醛和凋亡指数明显下降(P<0.05);苏木精-伊红染色可见肝血窦内炎性浸润明显减轻,胞浆嗜酸性变和气球样变的肝细胞明显减少,但偶可见少量散在的点状坏死;Bcl-2表达升高,Bax表达明显下降(P<0.05);Caspase-9 mRNA表达、肿瘤坏死因子α及白细胞介素1β水平明显下降(P<0.05);③姜黄素后处理组上述各指标与地塞米松组比较差异无显著性意义(P>0.05);④综上所述,姜黄素后处理可减轻大鼠肝脏冷缺血再灌注损伤,其作用机制可能通过上调Bcl-2/Bax比值,抑制凋亡启动子Caspase-9mRNA的表达,减少炎性因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的释放,发挥抗凋亡的肝保护作用。