不同浓度生肌玉红胶原对鸡胚尿囊膜血管新生的影响

目的:观察不同浓度生肌玉红膏提取液载入修饰后胶原(生肌玉红胶原)促鸡胚尿囊膜(CAM)血管新生的作用。方法:实验分空白组、对照组(无药胶原)、实验组1、2、3(分别将生肌玉红膏提取液以0.8、1.6、3.2mg/ml载入胶原),各组胶原植入7日龄CAM,孵化7天后取出,观察鸡胚成活、血管生长、胶原降解情况,测定植入胶原周围CAM内微血管数和胶原内血红蛋白浓度以及胶原内组织总DNA含量。结果:各实验组CAM内血管围绕胶原呈轮辐状生长,胶原包裹率和降解率均以实验组2最高,实验组2植入胶原周围CAM微血管数和血红蛋白含量以及胶原内总DNA量均高于对照组及其它实验组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:生肌玉红胶原可以促进CAM血管新生,最佳浓度为1.6mg/ml。     

鸡胚尿囊绒毛膜法研究细胞间黏附分子-1在血管生成中的作用

目的　探讨细胞间黏附分子 1(intercellularadhesionmolecule 1,ICAM 1)在血管生成中的作用。　方法采用鸡胚尿囊绒毛膜 (chorioallantoicmembrane ,CAM)法进行在体血管生成实验。　结果　 1 10d鸡胚的尿囊绒毛膜经ICAM 1作用 3d后 ,明胶海绵周围放射状走行的微血管非常明显 ,似车辐 ,显微镜下明胶海绵内有垂直长入的微血管 ,明胶海绵周边CAM间充质内微血管数目显著多于对照组 (P <0 0 1)。 2 6d鸡胚的尿囊绒毛膜经Anti ICAM 1作用 3d后 ,明胶海绵周围放射状走行的微血管极不明显 ,显微镜下明胶海绵内几乎没有新生的微血管 ,明胶海绵周边CAM间充质内微血管数目显著少于对照组 (P <0 0 1)。　结论　结果提示 1 ICAM 1有诱导微血管生成的作用 ;2 ICAM 1参与胚胎的血管生成。     

青蒿琥酯对人骨髓瘤细胞抗血管生成的作用

目的:研究青蒿琥酯对人RPMI-8226细胞诱导血管新生的抑制作用。方法:采用MTT法检测青蒿琥酯对RPMI-8226细胞增殖抑制作用;通过鸡胚绒毛尿囊膜体内血管生长实验,观察青蒿琥酯对RPMI-8226细胞诱导体内血管生成的影响;免疫蛋白印迹检测鸡胚绒毛尿囊膜内血管内皮生长因子(VEGF)和血管紧张素1(Ang-1)含量的表达变化。结果:青蒿琥酯以时间、剂量依赖方式抑制RPMI-8226细胞增殖;24h和48h后,其IC50值分别为(36.33±2.65)μmol/L和(14.31±3.28)μmol/L。在鸡胚绒毛尿囊膜体内血管生长实验中,经3、6、12μmol/L青蒿琥酯处理后,与单纯RPMI-8226细胞组比较,新生血管数目分别减少21.9%、38.2%和76.9%,差异有统计学意义;同时鸡胚绒毛尿囊膜内VEGF含量分别显著下降22.2%、34.2%和52.6%;Ang-1蛋白表达量分别显著下降15.6%、24.2%和39.6%。结论:青蒿琥酯具有抑制RPMI-8226细胞诱导血管新生的作用,其作用机制与下调RPMI-8226细胞的VEGF和Ang-1表达有关。     

黄芪-脉络宁胶原促进体外胸主动脉内皮细胞血管新生的实验研究

目的:探讨黄芪-脉络宁胶原对血管新生的细胞学影响及其可能机制,为其应用于临床提供理论依据。方法:应用增殖、迁移、管腔形成实验观察黄芪-脉络宁胶原对大鼠胸主动脉内皮细胞在血管新生各阶段的作用,用Western Bloting实验检测大鼠胸主动脉血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达率。结果:黄芪-脉络宁胶原能明显促进大鼠胸主动脉内皮细胞的增殖率(与对照组比较,增加了90.22%,P<0.01)、迁移率(与对照组比较增加了211.43%,P<0.01)、管腔形成数(是对照组的2.46倍,P<0.01),同时刺激VEGF蛋白表达比对照组增加63.8%(P<0.01)。结论:黄芪-脉络宁胶原能明显促进内皮细胞增殖、迁移、管腔形成,具有显著促体外血管新生作用,其机制可能与增加VEGF蛋白的表达有关。     

不同鼻咽癌细胞株对鸡胚尿囊膜模型血管生成影响的比较研究

目的比较不同鼻咽癌细胞株在鸡胚尿囊膜模型上促进血管生成能力的差异。方法选用6日龄鸡胚,开窗后分别种植5-8F、6-10B及CNE-2三种鼻咽癌细胞株,三种细胞株细胞数为2×106/鸡胚者各一组,细胞数为5×105/鸡胚者各一组,另一组为对照组（PBS）,每组10个鸡胚。孵育6日后,统计分析新生血管数及血管面积/鸡胚面积比。结果种植细胞数为5×105/鸡胚时,5-8F、6-10B细胞部分鸡胚有移植瘤形成,CNE-2细胞鸡胚均未见成瘤。种植细胞数为2×106/鸡胚时,三种鼻咽癌细胞株均可100%成瘤,其新生血管数依次递减,分别为（38.7±2.50）、（33.5±4.43）、（29.7±2.71）,差异有统计学意义（P〈0.05）;血管面积/鸡胚面积比分别为（22.2±2.18）%、（18.7±2.45）%、（16.9±2.62）%,均高于对照组的（9.5±1.86）%,差异有统计学意义（P〈0.05）,且5-8F面积比高于其他两种细胞株（P〈0.05）。结论鼻咽癌5-8F、6-10B及CNE-2三种细胞株在鸡胚尿囊膜模型上血管生成能力依次减弱,实验研究可根据实际情况选用。     

鸡胚绒毛尿囊膜模型在微血管实验研究中的应用

鸡胚的绒毛尿囊膜薄膜(CAM),作为胚胎的呼吸器官,在第4天和第5天的胚胎发展期间由被膜尿囊内脏中胚层和绒毛膜中胚层融合而成[1]。CAM是鸡胚孵化至第19天的(总期间21天)气体交换的呼吸器官,是具有丰富血管的薄膜。CAM微循环具有连续的微血管分叉状扩张[1],在生理状态下,承担适应发育中的胚胎氧需求。鸡胚CAM血管系统的发育既复杂又高度程序化。CAM血管生长于正常的鸡胚发育期间,经观察大体上经过早、中和晚三期:早期(从第5天到第7天)通过毛细血管以“出芽”方式生长;中期(从第8天到第12天)是普遍的吸收式微血管的生长,毛细血管内壁内…     

数字图像分析技术在鸡胚卵黄囊膜血管形成模型中的应用

目的应用数字图像处理技术客观、准确和快速地对鸡胚卵黄囊膜(chick embryo yolk sac membrane,YSM)血管图像进行定量分析,为促血管和抗血管生成药物的评价和筛选提供有效可靠的技术支持。方法应用OPTPRO2007图像采集系统和Image-proplus6.0图像分析软件对鸡胚卵黄囊膜血管图像背景处理和血管面积及血管密度等参数进行客观、准确地测量。结果建立了有效的鸡胚卵黄囊膜数字图像血管自动分析方法和步骤并通过药物实验对鸡胚卵黄囊膜血管图像进行了参数检测和统计分析。结论应用OPTPRO2007图像采集系统和Image-proplus6.0图像处理分析软件对鸡胚卵黄囊膜图像血管进行自动分析的方法不仅操作简便而且可较准确、快速、客观地反映鸡胚血管新生情况,优于鸡胚尿囊膜血管发生模型的常规人工目测血管计数方法。     

隐丹参酮对鸡胚尿囊膜血管生成的抑制作用

目的评价隐丹参酮对鸡胚尿囊膜（CAM）新生血管生成的抑制作用。方法在六日龄CAM上植入含隐丹参酮的甲基纤维素膜片并孵化48h。解剖显微镜下计数加药组和对照组局部血管数，用抑制率反映药物对CAM新生血管形成的影响。结果隐丹参酮0．1μg／egg和0．2μg／egg剂量相关性减少CAM局部的血管数，抑制率分别达到65％和72％；与对照组相比用药组局部血管明显变细受损。结论隐丹参酮对CAM血管生成有显著的抑制作用。     

加味保安方对鸡胚尿囊膜血管新生的影响

目的观察加味保安方对鸡胚尿囊膜血管(CAM)生成的影响。方法采用血清药理学方法制备含药血清。观察含药血清对培养5、6、7dCAM血管生成的影响,并与生理盐水及正常血清组对照。结果加味保安方含药血清可抑制鸡胚CAM血管生成。其中对培养5dCAM血管生成的抑制作用与生理盐水组比较差异具显著性(P<0.05);对培养6dCAM的作用,仅大剂量组与生理盐水组比较差异具显著性(P<0.05);对培养7dCAM的作用最为显著,与生理盐水组及正常血清组比较差异均具显著性(P<0.05)。结论加味保安方具有抑制鸡胚尿囊膜血管生成的作用。     

人内皮抑素基因改造、表达、纯化及活性检测

目的克隆诱变的人内皮抑素(human endostatin,hES)氨基端基因,并检测其活性。方法双酶切已诱变的人内皮抑素基因,电泳回收氨基端片段,与质粒pTYB-2重组,转化E．coli BL-21(DE3)。通过鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验,MTT实验,HE染色及流式细胞术检测重组小分子人内皮抑素对新生血管生成、细胞增殖和细胞凋亡的影响。结果基因重组小分子内皮抑素对鸡胚尿囊膜新生血管生成具有明显的抑制作用;对脐静脉内皮细胞和肝癌细胞增殖的抑制存在量效关系;作用24h后,观察到细胞凋亡现象;与对照组相比,细胞凋亡数增加。结论成功构建了人内皮抑素氨基端基因工程菌,得到了具有生物活性的氨基端小分子内皮抑素,为便利临床应用奠定了基础。     

bFGF单抗的抗血管新生作用

目的在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)以及鸡胚中来研究抗碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单抗对血管新生的作用。方法制备3种腹水型bFGF单抗MabF7,MabF10,MabF12。CCK-8法检测bFGF单抗对HUVECs细胞增殖的影响;Transwell小室研究bFGF单抗对HUVECs迁移的影响;ECM gel检测其对HUVEC体外成管的影响;并研究其体内对鸡胚尿囊膜(CAM)血管新生作用。结果 MabF7,MabF10,MabF12均可中和bFGF的活性;3株单抗均可抑制内皮细胞迁移过程,无抗体组,对照抗体组,MabF7,MabF10,MabF12组细胞迁移率分别为100%,106.25%±7.89%,69.50%±6.86%,74.00%±4.16%,67.75%±3.30%;3株单抗均可抑制内皮细胞成管过程,无抗体组,对照抗体组,MabF7,MabF10,MabF12组管状结构形成率分别为:100%,105.93%±3.85%,56.53%±4.35%,29.23%±6.45%,12.77%±2.67%;计数尿囊膜上加药滤纸周围呈放射状的血管条数,bFGF组,bFGF+MabF7组,bFGF+MabF10组,bFGF+MabF12呈放射状的血管条数分别为15±0.82,7.5±1.29,13.5±3.10,8.5±0.58。结论 bFGF单抗对HUVECs的增殖、迁移、成管以及鸡胚尿囊膜血管新生均有抑制作用,从而为具有抗肿瘤作用的抗体药物的研发奠定基础。     

基于VEGFR2/Src/FAK通路探讨葫芦素D抗血管新生机制

目的探讨葫芦素D对VEGF诱导的血管新生的作用及其机制。方法鸡胚绒毛尿囊膜血管新生实验、大鼠胸主动脉血管内皮迁出与人血管内皮细胞划痕实验检测葫芦素D对VEGF诱导的血管新生和内皮细胞迁移的作用,Western blot技术检测葫芦素D对VEGF诱导的VEGFR2及其下游的Src、FAK磷酸化水平的影响。结果葫芦素D对VEGF诱导的鸡绒毛尿囊膜血管新生具有明显的抑制作用,并能抑制VEGF诱导的大鼠胸主动脉环模型和划痕实验中血管内皮迁移。葫芦素D能够抑制VEGF刺激的VEGFR2、Src、FAK磷酸化。结论葫芦素D具有抑制VEGF诱导的血管新生作用,其机制可能与抑制VEGFR2及其下游的细胞信号通路蛋白活化有关。     

黄芪多糖胶原干预周围组织中核因子κB与血管内皮细胞生长因子表达而 促进毛细血管新生**

背景：补气生血类中药具有与生长因子促血管生成作用相近的功效。 目的：观察黄芪多糖胶原促血管新生的疗效,及其对血管内皮细胞生长因子基因表达的核因子κB通路的影响。 方法：采用大鼠背部皮下植入模型,分别将黄芪多糖胶原和空白胶原植入大鼠背部两侧,于植入后3,7,14,21 d处死大鼠,取胶原周围肉芽组织进行检测。 结果与结论：造模后3 d时,大鼠肉芽组织中微血管数开始增加,7~14 d时达到峰值,之后下降。在造模后3,7,14 d,植入黄芪多糖胶原的大鼠周围肉芽组织中毛细血管数、血管内皮细胞生长因子mRNA及核因子κB蛋白的表达均显著高于植入空白胶原的大鼠(P < 0.01),且核因子κB蛋白的表达早于毛细血管新生与血管内皮细胞生长因子mRNA的表达。说明黄芪多糖胶原促血管新生作用有可能是通过活化核因子κB信号通路而上调血管内皮细胞生长因子mRNA表达实现的。     

直流电场对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成作用的研究

目的：探讨直流电场（electric fields．EF）对血管生成的影响及作用机制。方法：于发育第8天的鸡胚绒毛尿囊膜（chick embryo chorioallantoic membrane，CAM）上植入明胶海绵载体，其中加载不同强度EF，计数长入载体的血管和载体内的微血管密度（microvascular densily．MVD）。结果：150mV／mm、200mV／mm组在CAM上长入载体边缘的血管数和MVD与对照组间的有显著差别（p〈0．01）。结论：强度为150mV／mm、200mV／mm的直流电场能促进CAM的血管生成。     

Rous肉瘤病毒引起鸡胚内脏病变的组织化学观察

一、序言 Rous和Murphy等曾将Rous肉瘤组织及上清液接种至鸡胚胚膜及胚内,引起肝,心,胃及胸腔壁长瘤及肝脏出血。以后Keogh报导Rous肉瘤活细胞于接种至鸡胚尿囊绒毛膜(CAM)后引起肝及肺产生大小瘤块;Okar-Blom及Karnofsky等分别将病毒注入胚膜均能引起胚胎肝脏出血;Duran-Reynals指出Rous病毒引起的鸡的出血病变率较成鸡为高,并认为引起出血的原因是血管内皮细胞遭受破坏和在以后出现血     

脉络宁对随意皮瓣血循环重建的影响

目的:研究脉络宁对大鼠随意皮瓣血循环重建的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组、脉络宁小剂量组、脉络宁大剂量组。在鼠背部制作15mm×70mm的单蒂型随意皮瓣,原位缝合。术后脉络宁小剂量组和大剂量组立即腹腔内注射脉络宁注射液10g/kg和20g/kg;术后24h取各组皮瓣组织检测一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量;术后7d测量各组皮瓣存活长度,观察墨汁灌注切片的微血管密度(MVD)和电镜切片中的血管内皮细胞及成纤维细胞的变化。结果:脉络宁组SOD含量高于对照组,而NOS和MDA含量低于对照组;脉络宁组皮瓣成活率和MVD高于对照组;电镜显示脉络宁组毛细血管和成纤维细胞的结构都比对照组完整。结论:脉络宁能提高随意皮瓣的存活率。     

青蒿琥酯对新生血管生长与成型影响的实验研究

目的通过观察新生血管生长发育与成型过程的形态学变化，研究青蒿琥酯对新生血管形成的影响。方法采用鸡胚绒毛尿囊膜模型、大鼠主动脉环无血清培养及人脐静脉内皮细胞体外培养，检测青蒿琥酯在新生血管形态发育过程中的作用。结果青蒿琥酯可影响血管内皮生长与实心条索形成，使血管生长期明显滞后，抑制血管生长。结论青蒿琥酯能通过干扰血管生长发育与成型而抑制血管生成。     

骨髓液促进鸡胚绒毛尿囊膜血管的生成

背景:生长因子能促进侧支血管的发育,且多种因子协同效果更为明显,骨髓液中富含多种生长因子.目的:观察血管内膜损伤后的骨髓液对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的作用.方法:受精蛋70枚在(37.5±0.5) ℃条件下孵育,第7天开窗,第8天将存活鸡胚随机分为生理盐水组、正常血清组、正常骨髓液组、损伤血清组、损伤骨髓液组以及血管内皮...     

骨肉瘤血管生成与肿瘤治疗的实验研究

目的：研究人骨肉瘤OS－732细胞系促进血管生成作用及血管内皮生长因子（VEGF）抗体对其血管生成的抑制作用。方法：应用鸡胚绒毛尿囊膜模型。通过解剖显微镜、光镜及免疫组化方法观察人骨肉瘤OS－732细胞系血管生成活性，并探讨VEGF抗体的血管生成抑制作用。结果：OS－732细胞系具有较强的促血管生成能力，鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤组织中VEGF、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、转化生长因子β1（TGF-β1）均呈阳性表达，且VEGF呈持续高表达。给予VEGF抗体后VEGF抗体组血管数目、瘤细胞数低于PBS对照组。结论：VEGF、bFGF、TGF-β1可能共同参与骨肉瘤OS－732细胞系诱导的血管生成，其中VEGF可能起着主要作用。VEGF抗体能抑制本细胞系的血管生成，提示VEGF抗体对骨肉瘤治疗具有良好的应用前景。     

携带肝细胞生长因子基因的减毒沙门菌促血管形成的实验研究

目的探讨携带肝细胞生长因子(HGF)基因的减毒沙门菌体外促血管形成的效应。方法构建携带HGF基因真核表达载体的减毒沙门菌菌株(TPH),体外转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后观察目的基因表达及其增殖活性;评价TPH的细胞表达上清对鸡胚绒膜尿囊膜血管生成效应的刺激效应。结果构建的TPH菌株在体外可有效转染HUVEC并表达有活性的HGF蛋白,6×10~5个HUVEC细胞可表达160~190 ng的HGF蛋白,和对照组相比,TPH转染组细胞表达上清可明显促进HUVEC增殖,而且具有剂量-效应关系;TPH转染组细胞表达上清也刺激鸡胚绒膜尿囊膜小血管生成,其血管数量(133.0±11.5)/cm~2明显大于转染TP的HUVEC细胞上清组(83.3±5.5)/cm~2和对照组(62.7±7.1)/cm~2(P0.05)。结论携带HGF基因的减毒沙门菌可有效转染HUVEC并促进细胞增殖,刺激小血管新生,可能在组织创面愈合中起重要作用,在胃溃疡治疗中有潜在的应用价值。