西罗莫司对肝癌肝移植术后肿瘤复发的抑制作用

目的探讨联合西罗莫司的联合免疫抑制方案对肝癌肝移植术后肿瘤复发的抑制作用。方法选用Wistar大鼠40只,建立大鼠肝癌肝移植术后肿瘤复发模型,实验组予(SRL MP CSA),对照组(MP CSA),观察60 d,死后剖腹探查取病理检查。对比结果。结果实验组荷瘤大鼠荷瘤肝重为(12.5±0.2)g,较对照组(14.4±0.3)g轻,差异有统计学意义(P<0.05);实验组荷瘤大鼠荷瘤肝重比为(0.0613±0.0006),较对照组(0.0708±0.0013)小,差异有统计学意义(P<0.05);实验组复发率为90%,对照组为95%,差异无统计学意义(P>0.05);实验组生存时间为(25.0±1.9)d,对照组为(14.8±2.3)d,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组大鼠PCNA指数为(64.1±2.1)%,较对照组(80.8±1.0)%低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用联合西罗莫司的联合免疫抑制方案虽然对肿瘤复发率改善不明显,但能够有效抑制肿瘤的生长速度、延长带瘤生存时间。     

免疫抑制剂对肾移植受者外周血单个核细胞Foxp3 mRNA表达的影响

目的 探讨免疫抑制剂对肾移植受者外周血单个核细胞中叉状头螺旋转录因子Foxp3 mRNA表达的影响.方法 采用实时荧光定量PCR法检测钙调磷酸蛋白酶抑制剂(CNI)组、雷帕霉素组、终末期肾病组以及正常对照组新鲜外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA的表达水平,苦味酸法检测同期血肌酐浓度,比较各组间Foxp3 mRNA表达水平和肌酐浓度的差异.结果 CNI组(0.1089±0.0967)的外周血Foxp3 mRNA表达水平低于雷帕霉素组(1.1264±0.6565)、正常对照组(0.9380±0.3614)和终末期肾病组(1.1200±0.5703),差异均有统计学意义(均P<0.01).雷帕霉素组[(173.58±44.65) μmol/L]与CNI组[(150.45±46.21)μmol/L]血肌酐浓度差异无统计学意义(P>0.05).结论 CNI类免疫抑制剂抑制了肾移植后免疫耐受的诱导,而雷帕霉素可能参与了免疫耐受的诱导和维持.     

雷帕霉素对肝移植大鼠皮下移植瘤生长的影响

目的探讨雷帕霉素对肝移植大鼠皮下移植瘤生长的影响。方法建立大鼠肝移植模型后实验分为五组,Ⅰ组:以Wistar大鼠作为供体,SD大鼠作为受体,术后不接受任何治疗作为急性排斥对照组。Ⅱ组:以SD大鼠作为供体及受体,术后3 d在左肩胛区皮下接种腹水瘤Wlaker- 256细胞,生理盐水灌胃作为皮下肿瘤生长的对照组。Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组:均以Wistar大鼠作为供体,SD大鼠作为受体,术后分别服用环孢素(每日20mg,/kg体重,灌胃)、他克莫司(每日1 mg/kg体重,灌胃)和雷帕霉素(每日1 mg/kg体重,灌胃),术后3 d在左肩胛区皮下接种腹水瘤Wlaker-256细胞。每周3次记录Ⅱ-Ⅴ组受体大鼠皮下肿瘤生长情况,绘制成瘤曲线;并于皮下接种肿瘤后14 d处死大鼠,检测受体大鼠的肝功能、移植肝病理及皮下肿瘤大小。结果与急性排斥大鼠(Ⅰ组)比较,接受免疫抑制剂治疗的各组受体大鼠(Ⅲ～Ⅴ组)均未出现严重的急性排斥反应;同时,与生理盐水灌胃的同基因肝移植术后皮下荷瘤大鼠(Ⅱ组)比较,雷帕霉素明显抑制了大鼠皮下肿瘤的生长[(1.41±0.87)与(3.65±0.87)cm3,P<0.05],环孢素及他克莫司则促进了皮下肿瘤的生长[(9.56±2.81)与(3.65±0.87)cm3,P<0.01;(8.11±1.69)与(3.65±0.87)cm3,P<0.01]。结论雷帕霉素在有效保护移植物的同时抑制了移植受体体内肿瘤的生长;环孢素和他克莫司抑制了机体的排斥反应,但也同时促进了受体体内肿瘤的生长。     

雷帕霉素和紫杉醇对激素非依赖性前列腺癌细胞株影响的体外实验研究

目的 通过前列腺癌细胞株的体外实验对照研究初步探讨雷帕霉素、紫杉醇及两者联合应用对激素非依赖性前列腺癌细胞株的影响.方法 分别采用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞技术观察雷帕霉素、紫杉醇、雷帕霉素+紫杉醇对不同前列腺癌细胞株(LNCaP-C4、LNCaP-C4-2、PC-3)细胞增生及细胞凋亡的影响.结果 对于LNCaP-C4细胞株,同对照组相比,当雷帕霉素浓度为0.01 μmol/L时,其抑制肿瘤细胞的作用开始出现显著性差异;而对于LNCaP-C4-2、PC-3细胞株,雷帕霉素浓度为0.001 μmol/L时,其抑制肿瘤细胞的作用同对照组相比具有显著性差异.当紫杉醇浓度为0.2 ng/mL时,同对照组相比,紫杉醇表现对3种前列腺癌细胞株有显著的抑制作用(P<0.05),随着紫杉醇浓度的提高,其抑制肿瘤细胞的作用也越强.10 nmol/L的雷帕霉素、1 ng/mL的紫杉醇对前列腺癌细胞株的抑制作用同对照组相比已经有了显著性差异(P<0.05),而5 nmol/L的雷帕霉素+0.5 ng/mL的紫杉醇组对所有3种前列腺癌细胞株的抑制作用均显著高于10 nmol/L的雷帕霉素组和1 ng/mL的紫杉醇组.结论 雷帕霉素和紫杉醇对3种前列腺癌细胞株(LNCaP-C4、LNCaP-C4-2、PC-3)均有一定抑制作用,且表现为剂量依赖关系.小剂量的雷帕霉素和紫杉醇联合应用可以起到更好的抑制肿瘤细胞的作用.     

雷帕霉素及去铁敏对缺血缺氧创面愈合的影响

目的探讨雷帕霉素及去铁敏对缺血缺氧创面愈合的影响及其作用机制。方法 SPF级雄性成年SD大鼠40只,体质量(300±20)g,于背部制备缺血缺氧创面模型;将其随机分为4组(n=10),分别为空白对照组(A组)、去铁敏干预组(B组)、雷帕霉素干预组(C组)、去铁敏+雷帕霉素共同干预组(D组)。模型制备后3、6、9 d,A、B、C、D组分别腹腔注射生理盐水、去铁敏(10 mg/kg)、雷帕霉素(3 mg/kg)、去铁敏(10 mg/kg)+雷帕霉素(3 mg/kg)。模型制备后观察创面愈合情况并记录愈合时间;于创面完全愈合后第2天切取创面愈合组织,采用实时荧光定量PCR及Western blot检测创面组织中雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)、缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)、VEGF m RNA及蛋白的表达。结果各组大鼠均成活至实验完成,创面均愈合;其中A、B、D组创面愈合时间均较C组明显缩短(P0.05);A、B、D组间比较差异无统计学意义(P0.05)。实时荧光定量PCR检测示,C、D组m TOR m RNA表达较A、B组明显下调(P0.05),A、B组间比较差异有统计学意义(P0.05),C、D组间比较差异无统计学意义(P0.05)。B、D组HIF-1α、VEGF m RNA表达较A、C组明显上调,A组较C组表达上调,比较差异有统计学意义(P0.05);B、D组间比较差异无统计学意义(P0.05)。Western blot检测示,C、D组m TOR蛋白相对表达量较A、B组明显下调(P0.05),C、D组间比较差异无统计学意义(P0.05)。A、B、C组HIF-1α蛋白相对表达量明显高于D组(P0.05),A、B、C组间比较差异无统计学意义(P0.05)。B、C、D组VEGF蛋白相对表达量较A组明显下调,D组低于B、C组,C组低于B组,比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论去铁敏可促进大鼠缺血缺氧创面愈合,而雷帕霉素作用相反;可能与慢性缺血缺氧创面中存在m TOR与HIF-1信号调节通路有关。     

他克莫司和雷帕霉素对肝癌肝移植患者Foxp3+ Treg的影响及防治排斥反应的研究

目的 探讨免疫抑制剂他克莫司和雷帕霉素对肝癌肝移植受者Foxp3+ Treg产生的影响及其防治排斥反应的疗效.方法 自移植后第2个月到第12个月,每月采血,采用实时荧光定量PCR法检测他克莫司组和雷帕霉素组肝癌肝移植受者新鲜外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA的表达水平,通过同期术后观察和实验室检查,比较两组受者间Foxp3 mRNA表达水平和急性排斥反应发生率的差异.结果 他克莫司组受者的外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA表达水平(0.1032±0.0943)明显低于雷帕霉素组受者(1.2136±0.6738),差异有统计学意义(t=5.1610,P＜0.01);雷帕霉素组患者比同期他克莫司组受者术后急性排斥反应发生率明显减低,差异有统计学意义(x2=2.2222,P＜0.05).结论 他克莫司抑制了肝癌肝移植术后免疫耐受的诱导,而雷帕霉素可能参与了免疫耐受的诱导和维持;雷帕霉素对肝癌肝移植受者防治排斥反应的效果更好.     

霉酚酸、雷帕霉素及FTY720在体外对成人胰岛功能的影响

目的探讨霉酚酸、雷帕霉素及FTY720对体外培养的成人胰岛功能的影响。方法将分离、纯化后获得的成人胰岛细胞分别与不同浓度的霉酚酸、雷帕霉素和FTY720混合培养24h,然后测定经各药物作用后的胰岛细胞在低糖(2.8mmol/L)和高糖(16.7mmol/L)刺激下胰岛素的释放量,并计算刺激指数。结果对照组(未添加药物)的胰岛细胞在低糖和高糖刺激下胰岛素的释放量分别为(7.37±1.74)ng/ml和(15.15±5.39)ng/ml,刺激指数为2.06±0.46。与对照组相比,添加霉酚酸的胰岛细胞在低糖和高糖刺激下胰岛素的释放量均明显下降(P<0.01),刺激指数亦明显下降(P<0.05);添加雷帕霉素组,低糖和高糖刺激时胰岛素的释放量均有下降(P<0.05),但刺激指数仅在雷帕霉素浓度为1.0ng/ml时明显下降(P<0.05);添加FTY720组,低糖刺激时胰岛素的释放量明显低于对照组(P<0.05),高糖刺激时,胰岛素释放量仅在FTY720高浓度组有明显下降(P<0.05),刺激指数也有明显下降。结论相对来说,在体外雷帕霉素和FTY720对成人胰岛细胞的毒性作用较小;胰岛移植后,选择免疫抑制方案应遵循低剂量原则。     

血管外雷帕霉素缓释涂层抑制移植静脉再狭窄

目的观察血管周围局部应用雷帕霉素对兔自体移植静脉段内膜过度增殖的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法大耳白兔30只,采用自身对照设计建立模型。任取一侧静脉旁路为干预组,外涂含0.3 mg雷帕霉素的Pluronic凝胶;另一侧为对照组,外涂空凝胶。4周后测旁路静脉内膜厚度、细胞的增殖指数及PCNA、P27~(kipl)免疫组化阳性细胞数。并于术后1、2、4、8周检测血管壁中雷帕霉素的含量。结果干预组旁路静脉内膜厚度(63.72±14.00)μm与对照组(77.76±14.90)μm相比,增生明显减少(P<0.05)。增殖指数对照组(29.30±7.15)明显高于干预组(20.10±9.48)(P<0.05)。在干预组和对照组均有阳性PCNA免疫组化染色表达细胞,正常静脉未见阳性表达,对照组较干预组细胞的阳性表达更强(P<0.05)。P27~(kipl)免疫组化染色干预组见阳性表达细胞,对照组表达阴性(P<0.05)。干预组血管壁术后1～8周均可测到雷帕霉素,含量呈逐步递减趋势。结论血管周围局部应用雷帕霉素具有抑制兔移植静脉内膜过度增殖的作用;这种作用和P27~(kipl)的上调表达有关。     

亚砷酸化疗对肝移植大鼠肝癌复发的抑制作用

目的 探讨亚砷酸全身化疗对大鼠肝移植术后肝癌复发的影响.方法 采用联合免疫抑制与循环肿瘤细胞攻击大鼠肝脏建立肝移植术后肝癌复发模型,40只Sprague-Dawley大鼠经门静脉注射肝癌Walker-256细胞株并随机分成对照组和化疗组.两组术后均给予免疫抑制剂,化疗组术后同时给予亚砷酸(1 mg/kg)全身化疗,观察大鼠存活和肿瘤复发情况,免疫组织化学染色法检测肝癌组织内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.比较两组生存时间和肿瘤肝内复发情况、荷瘤肝质量、荷瘤肝体质量比、肿瘤肝外转移及肿瘤组织中PCNA表达的差异.结果 对照组和化疗组大鼠存活时间分别为(17.2±7.3)d和(28.3±5.3)d,long-rank法显示差异有统计学意义(χ2=13.06,P<0.01),肝内复发率分别为100%(20/20)和95%(19/20, χ2=1.026, P>0.05), 荷瘤肝质量分别为(14.6±0.3)g和(12.7±0.3)g (t=2.205, P<0.05), 荷瘤肝体质量比分别为(7.21±0.12)%和(6.24±0.09)% (t=2.440, P<0.05),肿瘤肝外转移率分别为40%(8/20)和10%(2/20, χ2=4.80, P<0.05), PCNA指数分别为(80.8±2.1)%和(61.3±1.0)%(t=3.209,P<0.05).结论 静脉使用亚砷酸对肝移植术后肝癌复发大鼠肿瘤的恶性生长及肝外转移有一定的抑制作用.     

雷帕霉素对大鼠胆管缺血术后肝功能及生存的影响

目的 探讨雷帕霉素对大鼠肝内胆管缺血术后肝功能、营养状态及生存率的影响.方法 120只雄性SD大鼠随机分为4组,A组为对照组(假手术组)28只;B组为假手术+雷帕霉素组28只;C组为缺血组32只,D组为缺血+雷帕霉素组32只.雷帕霉素按每天2.0 mg/kg胃内注入.术前、术后7d及术后14 d分别测量实验大鼠体质量.各实验组于术后第1、3、7天分别处死6只大鼠,术后14天处死全部大鼠.处死前下腔静脉抽血2～3ml,分别检测血清总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(ALP)、γ－谷氨酰胺转移酶(GGT)及谷丙转氨酶(ALT).多个独立样本比较采用Kruskal-Wallis H检验,两独立样本间的比较经秩转换后行One Way Anova检验.Kaplan-Meier方法分析各实验组动物生存率.结果 缺血组与缺血+雷帕霉素组术后血清TBIL升高,其中缺血+雷帕霉素组术后TBIL水平升高更为显著,术后14 d达(46.99±2.68) mmol/L明显高于缺血组(P＜0.01).术后1～7d,缺血组ALP明显升高,随后趋于平稳;缺血+雷帕霉素组术后血清ALP水平持续上升,术后14 d达(588.74±14.95) U/L,明显高于缺血组(P＜0.05);术后14 d缺血+雷帕霉素组血清GGT为(10.78 ±0.97)U/L,明显高于缺血组(P＜0.01).缺血组术后体质量下降明显,给予雷帕霉素后,术后7、14d体质量下降幅度增加(P＜0.01).Kaplan-Meier生存分析结果显示:缺血组术后14d累积生存率为68.3％,与照组差异无统计学意义,缺血+雷帕霉素组累积生存率下降明显(55.5％,P＜0.05).结论 雷帕霉素加重胆管缺血后肝内胆汁淤积及胆管损伤,影响肝功能恢复,并对大鼠术后营养状态及生存率造成影响.     

EGCG对肾癌细胞786-O增殖及血管化的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肾癌细胞增殖以及血管生成的作用.方法 将不同浓度(0、10、30、60 μmol/L)的EGCG与肾癌786-O细胞作用后,采用MTT法检测EGCG对肾癌细胞增殖能力以及通过ELISA法检测EGCG对肾癌细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)能力的影响;通过建立裸鼠肾癌动物模型,以不同剂量(0、30、100 mg/kg)经口途径喂服EGCG,测量肾癌肿瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线,使用RT-PCR检测肿瘤组织中VEGF mRNA表达,使用免疫组织化学方法测定肾癌组织中微血管的生成.结果 EGCG能够抑制786-O细胞的增殖能力,其抑制能力随其浓度的升高和作用时间的延长而增强,呈现浓度和时间依赖性(P<0.05).同时EGCG还能以浓度依赖的方式抑制786-O细胞分泌VEGF的能力(P<0.05).进一步研究发现EGCG能够抑制786-O细胞体内的生长,同时降低786-O肿瘤组织中VEGF mRNA的表达水平以及新生微血管的面积(P<0.05).结论 EGCG具有抗肾癌的作用,能够抑制肾癌的生长以及血管的生成.     

生长激素干预肝癌细胞及共培养脐静脉内皮细胞生长

目的 观察重组人生长激素(rhGH)对人肝癌细胞株SMMC-7721和Bel-7402,共培养脐静脉内皮细胞株ECV304增殖的影响.方法 ECV304及其与Bel-7402、SMMC-7721共培养三组分别行rhGH 50及250μg/L、贝伐单抗50 mg/L及其联合rhGH 250 μg/L的干预.Bel-7402和SMMC-7721分别接受两浓度rhGH干预.流式细胞术测细胞周期比.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)/酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定肝癌细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA/蛋白表达.结果 Bel-7402表达生长激素受体(GHR),SMMC-7721不表达GHR;两剂量rhGH干预后Bel-7402的PI指数(42.69.4±0.40和44.10±0.19)较空白组(39.40±0.48)明显升高,同环境ECV304的PI指数显著升高[(45.62±O.87)%和(47.64 ±1.28)%,呈浓度依赖(P<0.05);贝伐单抗干预后,Bel-7402共培养ECV304的PI指数显著下降[(42.69 ±1.05)%和(42.84±0.77)%,P<0.05).与对照组[mRNA/蛋白:(14.179±3.110)ns/L/0.171±0.064]比较,两rhGH浓度干预,Bel-7402表达VEGF mRNA/蛋白水平也显著增加[(125.499 4-2.680)和(131.312 4-2.560)ng/L/0.296 ±0.024和0.460 ±0.037,P<0.05];SMMC-7721各组均未出现类似情况.结论 rhGH明显促GHR阳性表达人肝癌细胞株Bel-7402增殖,促其过量分泌VEGF致共培养内皮细胞ECV304增殖.     

血红素加氧酶1对白蛋白诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨血红素加氧酶1（HO-1）对白蛋白诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响及其可能机制。 方法 体外培养大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）为正常对照。白蛋白对照组加去脂的小牛血清白蛋白（BSA）30 g/L共同培养。干预组先加钴卟啉（Cobalt protoporphyrin IX,CoPP,血红素加氧酶1诱导剂）5 μmol/L,0.5 h后再加入BSA 30 g/L,作用24 h。四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测CoPP对BSA抑制NRK-52E细胞增殖的影响。细胞免疫荧光染色检测细胞凋亡率。RT-PCR法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax mRNA表达情况。 结果 与正常对照组比较,BSA对细胞增殖具有抑制作用并诱导细胞凋亡,差异有统计学意义（P < 0.05）,而CoPP对BSA引起的细胞毒性作用具有保护作用（P < 0.05）;BSA对照组HO-1 mRNA表达增加（0.44±0.06比0.39±0.05,P < 0.05),差异有统计学意义（P < 0.05）。CoPP预处理后,HO-1 mRNA表达（0.50±0.06）较BSA对照组增加（P < 0.05）。BSA可上调Bax mRNA表达(0.87±0.04比0.67±0.03,P < 0.05）及下调Bcl-2 mRNA的表达（0.25±0.04比0.42±0.02,P < 0.05),当加入CoPP预处理后可抑制上述改变（Bax mRNA：0.75±0.07,Bcl-2 mRNA：0.36±0.03,均P < 0.05）。 结论 BSA可显著增加细胞的凋亡率并直接调控凋亡相关蛋白mRNA的表达,CoPP可抑制上述BSA的作用。HO-1对BSA所致肾小管上皮细胞凋亡具有保护作用,可以抑制细胞凋亡。     

血管内皮生长因子反义RNA对EC9706人食管癌细胞抑制的作用

目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)反义RNA对EC9706人食管癌细胞的抑制作用.方法 用脂质体法将反义VEGFcDNA质粒转染至EC9706人食管癌细胞,用噻唑蓝还原法(MTT法)检测EC9706细胞增殖,免疫组化SABC和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测VEGF蛋白和VEGF mRNA表达水平.流式细胞术检测细胞凋亡和周期分布.并将转基因EC9706细胞接种于BALB/C裸鼠后肢皮下,4周后观察皮下成瘤情况.结果 被反义VEGFcDNA质粒转染的EC9706食管癌细胞有外源性VEGF反义基因的整合及表达,该细胞VEGF mRNA及蛋白的表达水平降低,但细胞生长增殖能力和增殖周期无明显改变,未发生明显凋亡现象;接种裸鼠28 d后,EC9706-wt组、EC9706-A组及EC9706-E组皮下移植瘤的潜伏期分别为(5.8±2.4)、(12.4±3.6)、(5.3±2.2)d,瘤体重量分别为(2.83 ±0.32)、(0.87±0.14)、(2.62 ±0.68)g,EC9706-A组与其他两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 VEGF反义RNA可抑制EC9706食管癌细胞VEGF表达和裸鼠体内肿瘤生长.     

线粒体融合素-2对裸鼠成瘤性及增殖、转移的影响

目的 观察线粒体融合素(mfn)-2对裸鼠成瘸性及增殖瘤的增殖、转移的影响.方法 裸鼠共分为3组:实验组、空载体对照组、空白对照组,分别将3组MCF-7细胞异种移植到无胸腺小鼠体内.建立裸鼠人乳腺癌移植瘤模型,比较3组裸鼠之间肿瘤的大小和重量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测3组肿瘤组织mfn2的表达,免疫组织化学半定量检测核增殖抗原(Ki-67)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果 实验组、空载体对照组、空白对照组3组肿瘤瘤体质量(单位:g)分别为1.78±0.13、2.84±0.16、2.77±0.12,实验组裸鼠肿瘤重量明显低于对照组(P<0.05),实验组瘤体的体积与两对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),实验组mfn2基因高表达(P<0.05),两对照组低表达,两对照组之间差异无统计学意义(P>0.05),实验组与两对照组比较,实验组Ki-67的表达升高,而VEGF的表达明显降低(P<0.05).结论 mfn2基因可明显抑制人乳腺癌成瘤,对人乳腺癌裸鼠移植成瘤后的增殖和转移能力有影响.     

米非司酮对药物流产患者外周血中差异基因表达研究

目的研究米非司酮对药物流产患者外周血中Th1/Th2型细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、IL-2、IL-5、IL-6、IL-10以及细胞因子EDN1、EDNRA、EDNRB、NOS1、NOS2、NOS3、VEGF在药物流产过程中的表达变化。方法收集2014年4~7月就诊于天津医科大学总医院妇产科月经延迟7d以内要求药物流产的孕妇,随机分为两组。A组(5例):第1天口服米非司酮100mg,于2d后口服600μg米索前列醇;B组(6例):第1天口服米非司酮200mg,于2d后口服200μg米索前列醇。两组均分别在服米非司酮前和服米非司酮48h后收集受试者的外周血,采用qRT-PCR方法检测各基因在全血中的mRNA表达水平。结果与同组服用米非司酮前相比较,A组服用米非司酮后EDN1水平显著上调(P0.05),上调至服药前的(2.19±1.20)倍,而B组服用米非司酮后EDN1水平显著下调(P0.05),下调至服药前的(0.49±0.15);A组服用米非司酮后VEGF水平显著上调至服药前的(1.22±0.43)倍(P0.05),而B组服用米非司酮后VEGF水平显著下调(P0.05),下调至服药前的(0.72±0.14);A组和B组中,服用米非司酮前后IFN-γ水平差异无统计学意义(P0.05)。结论在药物流产过程中不同剂量的米非司酮可能存在不同的作用机制;EDN1基因和VEGF基因可能在米非司酮药物流产过程中起着重要的作用。     

合用阿伐斯汀增强索拉非尼对肝癌生长转移的抑制作用

目的 观察合用阿伐斯汀(avastin)与索拉非尼(sorafenib)对人肝癌裸鼠模型的抑制效果.方法 采用人肝癌裸鼠原位模型LCI-D20,分为对照组、serafenib单用组(30mg/kg灌胃,1 d1次)、sorafenib与avastin合用组、avastin单用组(5 mg/kg腹腔注射,1周2次),治疗4周后观察肿瘤体积、肺转移、血浆血管内皮生长因子(VEGF),定量比较肿瘤微血管密度(MVD)和肿瘤血管内皮细胞凋亡指数,观察各组荷瘤鼠生存期.结果 对照组、sorafenib治疗组、mrafemb与avastin合用组、avastin治疗组肿瘤体积分别为(5.70±0.17)、(1.10±0.18)、(0.60±0.12)和(2.10±0.28)mm~3;肺转移灶数目分别为(191±23)、(98±18)、(31±19)和(98±20)个;血浆VEGF分别为(1689±612)、(3762±1195)、(1844±746)和(420±161)ng/L;中位生存期分别为70、87、112、80 d.4组肿瘤微血管密度分别为(3.77±0.44)%、(1.28±0.15)%、(0.56±0.08)%、(1.32±0.18)%;肿瘤血管内皮细胞凋亡指数分别为(12.6±1.8)%、(32.6±8.7)%、(54.3±11.9)%、(26.8±6.5)%;与sorafenib治疗组比较,avastin与sorafenib合用明显抑制血浆VEGF(P<0.05)、降低肿瘤体积(P<0.05)、抑制肺转移灶数目(P<0.01),延长荷瘤鼠生存期(P<0.05),降低肿瘤微血管密度(P<0.05)和促进肿瘤血管内皮细胞凋亡(P<0.05).结论 sorafenib在肝癌裸鼠模型中上调血浆VEGF导致耐药,avastin下调VEGF,通过促进肿瘤血管内皮细胞凋亡和降低肿瘤微血管密度,进一步增强sorafenib对肝癌生长和转移的抑制作用,并延长荷瘤鼠生存期.     

表没食子儿茶素没食子酸酯抑制胃癌生长和血管生成及其分子机制的研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）抑制胃癌生长和血管生成的分子机制。方法建立裸鼠异位胃癌肿瘤模型．检测肿瘤生长及肿瘤组织微血管密度（MVD）。培养SGC-7901胃癌细胞．Western印迹方法检测肿瘤细胞及其组织血管内皮生长因子（VEGF）、总信号转导、转录活化因子（Star3）和磷酸化形式Stat3的表达,同时采用ELISA方法检测肿瘤细胞培养液中VEGF蛋白水平．RT-PCR方法检测胃癌细胞VEGFmRNA的表达水平。结果EGCG组肿瘤组织平均质量（0．32±0．08）g,显著低于对照组（0．81±0．12）g,t=7．24,P〈0．01。EGCG组平均肿瘤抑制率为（60．4±6．1）％：其肿瘤生长曲线也显著低于对照组、EGCG组的肿瘤组织MVD（15．2±4．3）也显著低于对照组（24．6±6．6）（t=3．41,P〈0．01）。EGCG组胃癌组织的VEGF表达也减少78．6％．并呈剂量依赖性地下降：其肿瘤组织中Stat3磷酸化活化也减少了53．5％,也呈剂量依赖性地下降：但并未影响总的Stat3表达。结论EGCG通过抑制Stat3活化减少胃癌细胞VEGF表达．从而抑制胃癌生长和血管生成。     

RNA干扰技术抑制人肺腺癌细胞系A549血管内皮生长因子-165蛋白的表达

目的 观察RNA干扰技术能否有效抑制人肺腺癌细胞系A549血管内皮生长因子(VEGF)-165蛋白的表达.方法 体外合成3条VEGF-165序列特异性双链小RNA(shRNA)及1条阴性对照RNA,应用RNAiFectTMTransfection试剂盒转染细胞.Western blot法检测VEGF-165蛋白的表达,MTT及细胞计数法检测siRNA转染对细胞活性的影响.结果 随时间延长,目的siRNA对VEGF165蛋白表达有不同程度的影响,干扰时间越长,效果越明显.自干扰后24 h起,各组VEGF165蛋白的表达差异有统计学意义(对照组相对灰度为0.96±0.27;干扰组24 h相对灰度为0.81±0.10;48 h:0.52±0.12;72 h:0.36±0.10,P<0.05).噻唑蓝(MTT)比色法检测表明不同浓度siRNA及RNAiFect Reagent对细胞生长均无明显的抑制作用,与对照组之间差异无统计学意义(对照组:0.329±0.013;干扰组为0.329±0.017～0.357±0.042,P>0.05).细胞计数法检测表明不同浓度siRNA及RNAiFect Reagent对细胞生长增殖无明显影响.细胞与对照组之间差异无统计学意义(24 h:对照组1.56±0.11;干扰组1.47±0.12.72 h:对照组4.38±0.38;干扰组4.61±0.41,P>0.05).结论 siRNA可以有效抑制人肺腺癌细胞系A549 VEGF165蛋白的表达.