ELISA一步法和二步法检测临界值范围HBsAg的性能比较

目的比较酶联免疫吸附试验（ELISA）一步法和二步法检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的性能。方法将二步法初检吸光度（A）值〉0．0735的标本均用一步法检测,并将初检临界值范围内的标本再用二步法复测,将所有复检范围内的标本用电化学发光法检测。结果HBsAg检测结果4值〉0．5250的标本两法符合率为96．8％,A值在0．0735～0．5250之间的标本两法符合率为65．1％,两法的检测性能差异有统计学意义（P〈0．05）。结论二步法测定HBsAg与一步法比较,敏感性高。一步法存在漏检,二步法在检测低水平和过高浓度的HBsAz标本中具有显著优势。     

溶血标本在ELISA一步法和二步法中对HBVM测定结果的影响

目的通过实验观察溶血标本在酶联免疫吸附试验（ELISA）一步法和二步法中对乙型肝炎两对半（HBVM）检测结果的影响。方法用80例健康人（HBVM均为阴性）的血液标本,人为造成不同程度溶血,用ELISA一步法和二步法同时检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒表面抗体（抗-HBs）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、乙型肝炎病毒e抗体（抗-HBe）、乙型肝炎病毒核心抗体（抗-HBe）,通过对检测结果的观察来分析溶血对检测结果的干扰程度。结果当溶血程度大于或等于10g／L时,ELISA一步法40％以上的标本0D值均大于临界值,差异有统计学意义（P〈0．01）;ELISA二步法仅为3％,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论当溶血程度大于或等于10g／L对ELISA一步法检测HBVM的结果有干扰,可造成临界假阳性;ELISA二步法干扰不明显,无统计学意义。     

ELISA定量测定AFP试剂盒的线性及标准问题

ＥＬＩＳＡ定量测定ＡＦＰ试剂盒的线性及标准问题毛爱珍许斌（江苏省肿瘤医院检验科，南京２１０００９）关键词线性标准酶联免疫吸附法甲胎蛋白我们对市场上７种国产、进口ＡＦＰ定量ＥＬＩＳＡ试剂盒进行了比较，发现各试剂盒的线性及所设标准存在差异。１试剂及来源７...     

ELISA定量试验数据处理模式选择

在设计ＥＬＩＳＡ定量试验时，人们往往只重视抗原及抗体的制备、反应条件的选择和操作标准化这三个技术要点，很少探讨制约实验结果准确性的另一重要因素即数据处理模式。我们选择两种常见数据处理模式，以检测ＣＡ１２５为例，阐述ＥＬＩＳＡ定量分析中选择数据处理模式的重要性和必要性。１材料与方法１．１标本３５例随机样本，５份ＣＡ１２５标准品（浓度为１５、５０、１００、２００、４００ Ｕ／Ｌ）１．２仪器 ＳＬＴ ＲＡＩＮＢＯＷ酶标仪（可提供７种数据处理模式类型）。１．３试剂ＣＡ１２５试剂盒为市售。１．４方法操作按试…     

探讨ELISA一步法检测HBsAg的HD-Hook效应

目的 初步探讨ELISA一步法检测标本中高浓度HBsAg的钩状效应。方法 采用ELISA一步法检测427份乙肝患者的5项指标，共检出HBsAg阳性标本411例，其中有16份检测结果为乙肝病毒标志物少见模式（HBsAg阴性而HBeAg呈阳性）。将16份标本作适当稀释后再次测定，同时采用RPHA法作对照检测。结果 同步稀释法以及RPHA法测定结果均为阳性。结论 ELISA一步法检测HBsAg存在着不同程度的HD-Hook效应。     

ELISA检测甲胎蛋白结果判定中应注意的问题及对策

目的：探讨甲胎蛋白（AFP）在ELISA检测结果判定中应注意的问题及对策，以提高报告结果的可靠性及准确性。方法：542例患者首先采用ELISA法进行AFP定性筛查，检出的阳性及临床怀疑与肝脏有关的阴性患者，采用电化学发光法进行定量测定。结果：542例患者中，ELISA法定性检测AFP阳性者为417例，电化学发光法定量测定阳性者370例；125例阴性患者中有48例定量为阳性。结论：对ELISA定性检测AFP阳性及高度怀疑肝脏病变的阴性患者，建议追加定量分析，以排除假阳性或假阴性结果。     

一步法检测梅毒抗体ELISA试剂的钩状效应分析

近年来,随着分子生物学技术的发展,以及对梅毒螺旋体表面脂蛋白抗原的核苷酸序列的了解,采用基因工程的方法,在体外表达得到了梅毒螺旋体的相应特异基因工程抗原,大大地提高了酶联免疫吸附试验（ELISA）测定的特异性。此外ELISA还具有简单、快速和高通量的优点,所以,ELISA成为了梅毒血清学诊断的首选方法。目前,国内检测梅毒抗体绝大多数采用ELISA中的双抗原夹心一步法。     

应重视ELISA检测HBsAg灰区范围内样品的复检

ＥＬＩＳＡ测定ＨＢｓＡｇ常以Ｃｕｔ Ｏｆｆ(简称ＣＯ)值作为阴阳性的界定标准。我们对初次检测Ａ值位于灰区 (本室定为ＣＯ± 30 % )的 398份样品进行了复检。现报道如下。一、材料和方法1.材料　本院临床标本 ,ＥＬＩＳＡ初次测定ＨＢｓＡｇ的Ａ值介于ＣＯ值± 30 %的血清样品共 398份 ,其中溶血标本17份 ,脂血 2 4份 ,其他标本 35 7份。复检时对溶血及脂血样品嘱患者重新采血分离血清后复检。试剂为上海科华公司ＨＢｓＡｇ一步法酶免试剂盒。Ｂｉｏ 12 8Ｃ酶标比色计 ,Ｂｉｏ ＲａｄⅡ型洗板机。2 .方法　复检血清每人测三孔 ,第一孔为…     

ELISA测定操作中的注意事项

酶联免疫吸附试验 (EL ISA)是 2 0世纪 70年代初在酶免疫组织化学的基础上发展起来的 ,是将抗原或抗体吸附于固相载体上 ,加入检样和酶结合物反应后 ,再利用酶催化其底物呈色的反应 ,来检测抗体或抗原的方法。因其操作简单、试剂保存期长、对环境污染小等优点现在广泛地用于各种生物化学物质的免疫测定。在多年的工作操作中我们总结出以下几点注意事项 ,供同道们参考。1　标本血清标本避免溶血 ,否则可能会增加非特异性显色 ;血清应避免细菌污染 ,否则会因菌体中的内源性 HRP而产生假阳性反应 ;血清如浑浊或沉淀应重新离心。2　试剂准备…     

真胰岛素ELISA检测法参考值的调查

胰岛素是调节糖代谢的主要激素 ,其分泌主要受血糖浓度的调节。经典的放射免疫法测定的是免疫反应性胰岛素(ＩＲＩ) ,包括前胰岛素原、胰岛素原和真胰岛素 (ＴＩ)及其中间代谢产物的总水平 ,而不是单纯的ＴＩ水平。ＴＩ是胰岛素中真正有生理活性的部分 ,测定ＴＩ可客观评价 β细胞功能。测定ＴＩ的ＥＬＩＳＡ法试剂盒说明书参考值为 10ｍＵ/Ｌ左右 ,无性别、年龄差异。国内暂没有参考值的报道 ,我们测定了 16 4例体检健康人以确定参考值。1　对象和方法1 1　调查对象　体检健康人 (ＢＭＩ <2 5 ;空腹血糖 3 9～ 6 5ｍｍｏｌ/Ｌ ;血脂正常 ;…     

用于国产一步法HBsAg ELISA试剂及确认试验试剂的改进方法

目的延长酶反应时间以提高国产一步法酶联免疫吸附试验（ELISA）乙型肝炎表面抗原（HBsAg）试剂的敏感性和精密度。方法将酶反应时间自30 min延长至120 min,观察检测结果的敏感性和特异性的变化,及其对相关确认试剂确认试验的影响,并与Murex确认试剂检测结果进行比对。结果酶反应时间延长至120 min,HBsAg ELISA试验检测的Cut-off值不变,在检测Murex HBsAg检测结果呈阴性反应的样本时,其结果均为阴性。延长酶反应时间至120 min可以提高检测结果的吸光度（A）值,位于灰区的弱阳性样本的A值可提高1倍左右。常规ELISA结果S/CO值在0.5-1.0区段的22例阴性灰区样本中,在酶反应时间延长至120 min的国产确认试剂检测中有4例样本确认为阳性,该4例样本在Murex确认试验中亦为阳性;S/CO值在1.0-2.0区段的79例阳性灰区样本中,120 min的国产确认试验与Murex确认试验均为50例阳性,2种确认试验结果一致（χ^2=0.078,P〉0.05）。结论延长国产一步法HBsAg ELISA试剂的酶反应时间可以提高检测的敏感性并适用于相关的确认试验。     

ELISA定量检测抗dsDNA抗体试剂盒性能验证方法的探讨

目的探讨ELISA定量检测抗双链DNA抗体(下简称抗ds DNA抗体)试剂盒的性能验证方法。方法依据美国临床和实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)批准的EP15-A2文件方法验证精密度。通过检测过往室间质量评价(external quality assessment,EQA)质评物、与比较试剂进行比较、回收试验等3种方法验证准确度。通过检测空白样本验证检测低限(lower limit of detection,LLD)。通过《CNAS-CL39:医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学检验领域的应用说明》、CLSI C28-A3C文件提供的方法验证临界值。通过改良的Doumas法验证线性范围。结果实测批内、批间变异系数均小于厂家声称的变异系数或按EP15-A2公式计算的验证值。检测EQA质评物阴性符合率为98.4%(63/64),阳性符合率为100%(20/20),总符合率为98.8%(83/84)。与比较试剂的阴性符合率为91.2%(52/57),阳性符合率为87.0%(40/46),总符合率为89.3%(92/103),Kappa值为0.783(P=0.062),两种试剂具有优秀的一致性。平均回收率为99.65%。3种方法验证准确性均通过。实测LLD为0.5 IU/m L,低于厂家声称的1 IU/m L。按CNAS-CL39方法,实测的临界值为18.51IU/m L,与说明书建议的20 IU/m L接近。按C28-A3C方法,临界值验证也通过。线性回归方程为Y=0.978 8X-3.125 4,r~2为0.996 1,截距项-3.125 4与0差异无统计学意义(t=-0.772,P=0.483)。线性范围是1.6~212.5 IU/m L,与厂家声明一致,线性验证通过。结论候选抗ds-DNA抗体试剂盒的精密度、准确度、LLD、临界值、线性范围与厂家的声明一致,能满足临床诊断与治疗的需要。本研究采用的一系列验证方法为ELISA定量检测试剂的性能验证提供了新思路。     

ELISA法对乙肝六项检测结果的影响及处理对策

酶联免疫吸附试验(简称ELISA法)检测乙型肝炎(下称乙肝)免疫学标志物问世以来,由于测定灵敏、特异和操作简便等诸多优点,具有实用性和可操作性,广泛应用于各类医院实验室,作为检测乙肝血清标志物的首选,但通过对临床乙肝六项检测的观察,存在不同血清物质变化及各种影响因素,直接或间接的影响检验结果的正确表达,本文综合资料     

用于国产一步法HBsAg ELISA试剂及确认试验试剂的改进方法

目的延长酶反应时间以提高国产一步法酶联免疫吸附试验(ELISA)乙型肝炎表面抗原(HBsAg)试剂的敏感性和精密度。方法将酶反应时间自30 min延长至120 min,观察检测结果的敏感性和特异性的变化,及其对相关确认试剂确认试验的影响,并与Murex确认试剂检测结果进行比对。结果酶反应时间延长至120 min,HBsAg ELISA试验检测的Cut-off值不变,在检测Murex HBsAg检测结果呈阴性反应的样本时,其结果均为阴性。延长酶反应时间至120 min可以提高检测结果的吸光度(A)值,位于灰区的弱阳性样本的A值可提高1倍左右。常规ELISA结果S/CO值在0.5~1.0区段的22例阴性灰区样本中,在酶反应时间延长至120 min的国产确认试剂检测中有4例样本确认为阳性,该4例样本在Murex确认试验中亦为阳性;S/CO值在1.0~2.0区段的79例阳性灰区样本中,120 min的国产确认试验与Murex确认试验均为50例阳性,2种确认试验结果一致(χ2=0.078,P>0.05)。结论延长国产一步法HBsAg ELISA试剂的酶反应时间可以提高检测的敏感性并适用于相关的确认试验。     

ELISA结合MEIA能有效检测低水平HBsAg

对于乙型肝炎病毒表面抗原 (ＨＢｓＡｇ)浓度介于 0 5ｎｇ/ｍｌ～ 5ｎｇ/ｍｌ的血清标本 ,ＥＬＩＳＡ显色较弱 ,不易判断 ;小于0 5ｎｇ/ｍｌ者 ,ＥＬＩＳＡ更会漏检。我们对ＨＢｓＡｇ浓度在 5ｎｇ/ｍｌ以下的血清标本用ＥＬＩＳＡ结合微粒子酶免疫试验(ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｅｎｚｙｍｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ,ＭＥＩＡ)进行检测 ,现对其应用情况作初步报告 ,并对ＨＢｓＡｇ浓度在 5ｎｇ/ｍｌ以下的病例存在情况进行初步分析。1　材料与方法1 1　标本来源　 1998年 6月～ 2 0 0 1年 5月期间本院门诊体检及非因乙型肝炎住院病人 1…     

应重视ELISA检测HBsAg灰区范围内样品的复检

ELISA测定HBsAg常以Cut-Off(简称CO)值作为阴阳性的界定标准.我们对初次检测A值位于灰区(本室定为CO±30%)的398份样品进行了复检.现报道如下.     

不宜采用混合血清以ELISA检测HBsAg

有少数检验部门为了减轻工作量、节省成本 ,采取将 5人份或 10人份血清等体积混合后再测ＨＢｓＡｇ(以下简称混合法 ) ,有关文献[1] 也指出其方法不妥 ,但该文献[1] 对结果的解释尚欠完整。为此我们对采用混合法检测ＨＢｓＡｇ的影响原因进行了实验探讨。1　材料与方法1 1　试剂　ＨＢＶ血清标志物 (ＨＢｓＡｇ、抗 ＨＢｓ)检测试剂为科华公司 (批号 :ＨＢｓＡｇ2 0 0 0 0 5 0 5 ;抗 ＨＢｓ 2 0 0 0 5 2 5 )。1 2　仪器　Ｅｌｘ80 0酶标仪 (ＢＩＯ ＴＥＫ)。1 3　方法1 3 1　ＨＢｓＡｇ强阳性和抗 ＨＢｓ强阳性混合血清标本的制备　将每次…     

用基因工程抗原建立ELISA检测莱病特异IgM抗体

目的 利用伯氏疏螺旋体基因工程抗原外膜蛋白C（OspC)建立间接ELISA，检测莱姆病特异性抗体IgM。方法 基因工程抗原OspC的包被浓度和酶标抗μ链单抗所用浓度及血清稀释倍数，均由方阵滴定法确定，并进行精密度、特异性试验、阻断试验和干扰试验。结果 OspC最佳浓度为150μg/L，批内平均变异系数4．6％，批间平均变异系数14．2％，用ELISA测定临床已确诊莱姆病33例，57例正常体检者，同时与进口ELISA试剂盒比较，两方法符合率97．8％。结论 该方法特异性强、敏感性高、实验结果可靠,是莱姆病早期诊断的好方法。     

用不同厂家ELISA试剂检测抗HCV结果的差异性分析

目的探讨不同厂家酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂检测丙型肝炎病毒抗体（抗HCV）结果的差异性。方法用4种不同厂家生产的第3代ELISA抗HCV试剂检测经上海科华公司生产的ELISA抗HCV试剂检测为阳性的出入境体检人员的血清标本62例,结果不一致的标本再用MP HCV BLOT3.0检测确认。结果A、B、C、D 4种试剂阳性反应数分别为59、50、43和53份,其中试剂B和C、B和D比较差异无统计学意义（P〉0.05）;试剂C和D比较差异有统计学意义（P〈0.05）。4种试剂反应都阳性标本37份,结果不一致的标本25份,经确认有9份标本阳性。结论不同厂家抗HCV试剂检测结果的阳性率有较大差异,提示选择灵敏度较高的试剂进行初筛,并且要有另一种灵敏度和特异性高的试剂作为复检方法,当2种试剂检测都为阳性,且标本吸光度值与阳性判定值（cut off）的比值（S/CO）≥3.8时,则可判定为抗HCV阳性;当检测结果为阳性但其S/CO值≤3.8或其中1种检测方法结果为阴性,建议用免疫重组印迹（RIBA）试验确认。     

用不同厂家ELISA试剂检测抗HCV结果的差异性分析

目的探讨不同厂家酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂检测丙型肝炎病毒抗体(抗HCV)结果的差异性。方法用4种不同厂家生产的第3代ELISA抗HCV试剂检测经上海科华公司生产的ELISA抗HCV试剂检测为阳性的出入境体检人员的血清标本62例,结果不一致的标本再用MP HCV BLOT3.0检测确认。结果A、B、C、D 4种试剂阳性反应数分别为59、50、43和53份,其中试剂B和C、B和D比较差异无统计学意义(P>0.05);试剂C和D比较差异有统计学意义(P<0.05)。4种试剂反应都阳性标本37份,结果不一致的标本25份,经确认有9份标本阳性。结论不同厂家抗HCV试剂检测结果的阳性率有较大差异,提示选择灵敏度较高的试剂进行初筛,并且要有另一种灵敏度和特异性高的试剂作为复检方法,当2种试剂检测都为阳性,且标本吸光度值与阳性判定值(cut off)的比值(S/CO)≥3.8时,则可判定为抗HCV阳性;当检测结果为阳性但其S/CO值≤3.8或其中1种检测方法结果为阴性,建议用免疫重组印迹(RIBA)试验确认。