谷氨酰胺对产生内质网应激反应的A549细胞JNK,pJNK,CHOP,GRP78表达水平的影响

[目的]探讨谷氨酰胺对产生内质网应激反应的A549细胞的保护作用.[方法]取A549细胞进行培养,分为5个组,其中空白对照组培养液中只有A549细胞,衣霉素组培养液中加入A549细胞和衣霉素1mg/L,GLN4组培养液中加入A549细胞、衣霉素1mg/L和4mmol/L谷氨酰胺,GLN8组培养液中加入A549细胞、衣霉素1mg/L和8mmol/L谷氨酰胺,GLN12组培养液中加入A549细胞、衣霉素1mg/L和12mmol/L谷氨酰胺.利用Western blot方法检测各组细胞培养12h后的JNK,pJNK,CHOP及GRP78表达水平.[结果]与空白对照组比较,衣霉素组pJNK,CHOP及GRP78表达水平均明显升高(P<0.001),而JNK表达水平未见明显改变(P>0.05),提示衣霉素诱导A549细胞产生了内质网应激.与衣霉素组比较,GLN4,GLN8及GLN12组pJNK,CHOP,GRP78表达水平均明显降低(P<0.05).[结论]谷氨酰胺对产生内质网应激的A549细胞具有保护作用.     

GRP78及CHOP在大鼠心肌缺血后处理中的表达变化

目的：观察内质网应激标志蛋白GRP78及其下游调控分子CHOP在大鼠心肌缺血后处理过程中的表达变化,探讨其可能的作用机制.方法：选取SD大鼠30只,随机分为假手术组、缺血-再灌注组和缺血后处理组,每组各10只.观察各组大鼠心肌梗死面积并测定各组大鼠血清中乳酸脱氢酶和磷酸肌酸激酶的含量;采用western blot检测心肌组织中GRP78、CHOP的表达变化.结果：与假手术组比较,缺血-再灌注组大鼠心肌梗死面积、血清中乳酸脱氢酶和磷酸肌酸激酶的含量均显著增高,而心肌组织中总Akt及p-Akt的表达则明显减少;与缺血-再灌注组比较,缺血后处理组大鼠心肌梗死面积、血清中乳酸脱氢酶和磷酸肌酸激酶的含量均有所降低,而心肌组织中GRP78及CHOP的表达显著高于缺血-再灌注组,差异具有显著性（P＜0.05）.结论：GRP78及CHOP的表达变化可能在大鼠心肌缺血后处理保护机制中发挥重要的作用.     

脑出血大鼠血肿周围脑组织GRP78及GADD153动态表达及神经功能缺损

目的：研究脑出血大鼠血肿周围脑组织GRP78及GADD153动态表达及神经功能缺损情况。方法50只 SD 大鼠被随机分为2组，A 组右侧苍白球注入自体非肝素抗凝动脉血制成脑出血模型，B 组进行同样的手术，但是定位进针后不注射自体不凝血，造模成功后，两组在术后24h、48h、72h、5d、7d 通过 Garcia 评分法评估大鼠神经功能缺损，然后处死大鼠，用 Western blot 测定各时间点血肿周围 GRP78和 GADD153表达情况。结果①脑出血后出现神经功能缺损，48h 症状达高峰，随后逐渐恢复，第7天基本恢复正常，与假手术组相比无统计学差异（P ﹥0.05）。②脑出血后GRP78和GADD153表达增加，呈现先升高后降低的趋势，72小时达高峰，组间各时间点比较具有统计学差异（P ﹤0.05）。结论GRP78与GADD153在血肿周围脑组织中表达活跃，推测内质网应激可能通过介导细胞凋亡参与并加重了脑出血后神经损伤的病理生理过程。     

糖脂清对糖尿病大鼠海马内质网应激相关因子GRP78、CHOP、Caspase-12表达的影响

目的 通过观察糖脂清对糖尿病大鼠海马组织的内质网应激相关因子GPR78、CHOP、Caspase-12的影响,探讨其在改善糖尿病大鼠认知功能的作用机制。方法 采用高糖高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射复制2型糖尿病大鼠模型,并给予糖脂清高、中、低剂量组干预8周后,采用ELISA法检测血清空腹葡萄糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）,计算稳态模型的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、胰岛素敏感指数（ISI）;qPCR和Western blot法检测海马组织内质网应激相关因子GPR78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达水平。结果 糖脂清各剂量组均能够显著降低FPG及HOMA-IR（ P <0.01）,除低剂量组外,糖脂清均可显著提高ISI（ P <0.01）,3组FINS水平无显著性差异（ P >0.05）。与模型组比较,糖脂清低、中、高3个剂量组GRP78 mRNA和蛋白相对表达均显著增加,CHOP、Caspase-12 mRNA表达均减少（ P <0.01）,中、高剂量组CHOP、Caspase-12蛋白表达显著减少（ P <0.01）。结论 糖脂清能够控制血糖,改善胰岛素抵抗,增加胰岛素敏感性,同时能够调节海马内质网应激相关因子GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA和蛋白的表达。      

阿托伐他汀干预对大鼠心肌缺血再灌注后GRP78和GADD153表达的影响

目的观察阿托伐他汀干预对大鼠心肌缺血再灌注损伤后内质网分子伴侣GRP78(endoplasmic reticulummolecular chaperon)和GADD153(growth arrest and DNA damage-inducible gene 153)表达变化的影响,探讨阿托伐他汀在心肌缺血再灌注损伤后抗凋亡的内质网应激机制。方法将54只SD大鼠随机分为阿托伐他汀干预组24只、模型对照组24只和假手术组6只,制作大鼠心肌再灌注损伤模型。阿托伐他汀干预组和模型对照组再灌注2 h6、h、24 h、48 h分别分为4个亚组,每个亚组动物6只。通过TUNEL检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学检测GRP78和GADD153表达变化。结果假手术组大鼠偶可见凋亡细胞,对照组和干预组大鼠缺血再灌注2 h缺血周围区可见少量凋亡细胞,再灌注6 h凋亡细胞有所增多,再灌注24 h凋亡细胞数量达高峰,再灌注48 h凋亡细胞有所减少(P<0.05或0.01)。相同各时间点比较,干预组大鼠心肌细胞凋亡显著少于对照组(P<0.05或0.01)。假手术组大鼠心尖部相应区域心肌细胞未见明显GRP78及GADD153阳性表达。对照组和干预组大鼠再灌注2 h后心尖部GRP78表达开始增加,6 h达高峰,24 h时表达水平明显下降(P<0.01)。在相应时间点,干预组的GRP78蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.01)。对照组和干预组大鼠缺血周围区GADD153从再灌注6 h开始在神经细胞内明显表达,并逐渐增强,于再灌注24~48 h达高峰(P<0.01)。在相应时间点,干预组的GADD153蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.01)。结论干预心肌缺血再灌注后心肌细胞内质网伴侣GRP78和GADD153的表达可能是阿托伐他汀抑制心肌缺血再灌注损伤后抗凋亡的内质网应激机制之一。     

黄芩苷对惊厥持续状态幼年大鼠海马IL-lβ、NF-κB表达的影响

目的观察幼年大鼠惊厥持续状态（SC）后海马CA1区神经细胞凋亡以及IL-1β和NF-κB蛋白、MicroRNA表达变化,并了解黄芩苷（BC）对其影响。方法将195只19d龄SD雄性大鼠随机分成生理盐水对照组（NS组）、惊厥持续状态组（SC组）和黄芩苷预处理组（BC组）,每组65只;各组按处死时间点随机分为4、12、24、48和72h组。采用氯化锂-匹鲁卡品化学点燃法制备幼年大鼠SC模型;采用免疫组化法检测大鼠海马中IL-lβ、NF-κB蛋白表达,RT-PCR法检测NF-κBMicroRNA表达,TUNEL法检测神经细胞凋亡数。结果IL-lβ：与NS组（12、24、48和72h分别为11.47±2.51、12.49±2.58、13.19±2.39和12.79±5.30）比较,SC组（12、24、48和72h分别为29.38±5.18、40.09±5.16、35.32±6.59和27.98±4.16）表达增强（均P＜0.01）;与SC组比较,BC组（12、24和48h组分别为21.19±4.54、29.78±4.39和25.91±5.64）表达降低（均P＜0.05）。NF-κB：与NS组（4、12、24、48和72h组分别为45.76±15.41、41.26±6.28、50.61±12.54、51.72±6.52和52.65±7.65）比较,SC组（4、12、24、48和72h组分别为64.06±6.18、71.16±6.49、79.34±11.76、67.07±6.58和65.12±9.66）表达增强（均P＜0.05）;与SC组比较,BC组（4、12和24h组分别为52.65±5.73、56.68±5.37和67.01±9.08）表达降低（均P＜0.05）。NF-κBMicroRNA表达与蛋白表达相似。SC组在惊厥后12h海马CA1区神经细胞凋亡数为（11.38±2.35）个,高于NS组的（6.19±1.48）个（P＜0.01）,48h达到高峰（28.28±5.17）个;BC组在12、24、48和72h时神经细胞凋亡数分别为（8.96±2.21）、（13.07±2.47）、（20.51±4.39）和（17.36±4.12）个,均低于SC组（均P＜0.05）,但高于NS组（6.19±1.48）、（6.59±1.66）、（6.79±1.15）和（6.31±1.47）个（均P＜0.05）。结论幼年大鼠SC后海马CA1区IL-1β和NF-κB表达增强,神经细胞凋亡增加;BC预处理能抑制早期IL-1β和NF-κB蛋白、MicroRNA表达,减少神经细胞凋亡,对幼年鼠SC后脑损伤具有一定的保护作用。     

幼年大鼠惊厥持续状态后海马CA1区Caspase-3和IL-1β的表达

目的：观察幼年大鼠惊厥持续状态（Status convulsion，SC）后海马Caspase-3和白细胞介素-1β（IL—1β）表达的变化及神经元损伤情况，探讨幼年大鼠惊厥性脑损伤的可能机制。方法：出生后21dSD雄性大鼠，随机分成A组（正常对照组）20只、B组（SC组）26只。两组又随机分为两亚组（即B1、B2，A1、A2组）。采用氯化锂-匹罗卡品法制作SC模型，并选择合格致痫模型。B组分别于惊厥后24h、72h处死；A组也于相应时间点处死。采用免疫组化法检测海马组织Caspase-3、IL-1β的表达变化；电镜观察大脑海马区组织超微结构改变。结果：大鼠SC后Caspase-3表达的IOD值随时间的延长显著升高，IL-1β于SC后24h迅速升高，72h下降。SC后24h大鼠海马CA1 IL-1β和Caspase-3的IOD值之间呈正相关（r=0．54，P〈0．01，n=8）。电镜观察结果显示SC后24h海马CA1区出现早期细胞凋亡改变，72h部分神经元出现特征性的凋亡改变。结论：SC后Caspase-3参与了幼年大鼠惊厥性脑损伤的发生发展过程，IL-1β可能参与了惊厥性脑损伤的启动过程。     

GRP78和CHOP蛋白表达增加与脓毒性休克大鼠肺血管通透性改变的关系

目的研究脓毒性休克大鼠内质网应激模型中葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78,GRP78)和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)蛋白表达的变化及其与血管通透性改变的关系。方法 42只成年SD大鼠,雌雄各半,体质量200～220 g,随机分为3组:①假手术组;②盲肠造瘘组,按照术后时间长短盲肠造瘘组又分为术后1、2、4、6、8 h等5个亚组;③盲肠造瘘+牛磺酸组(n=6)。用异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白注入肺组织,在术后1、2、4、6、8 h时分别取各组相应大鼠肺脏,牛磺酸干预组于术后6 h取出,生理盐水进行肺灌洗,观察其荧光物质渗透率的变化测量肺毛细血管通透性;Western blot方法测量肺血管内皮细胞GRP78和CHOP蛋白的表达并对各组进行比较。结果①大鼠盲肠造瘘术后1、2、4、6、8 h后GRP78和CHOP蛋白表达均呈递增趋势[(P(GRP78)<0.05;P(CHOP)<0.05],肺血管荧光物质渗透率也随着时间的延长呈直线递增的趋势(P=0.006<0.05),盲肠造瘘组各组GRP78和CHOP蛋白的表达与肺血管荧光物质渗透率的改变呈正相关(R2=0.785,P<0.05;R2=0.881,P<0.05);②牛磺酸处理后,6 h点肺血管荧光物质渗透率显著低于单纯盲肠造瘘术后(P=0.007<0.05),GRP78和CHOP蛋白的表达也较盲肠造瘘组低(P=0.004<0.05)。结论脓毒性休克内质网应激参与了血管通透性增高的发生,GRP78和CHOP蛋白为重要的参与分子。     

实时定量PCR检测氯化镉对人肝癌细胞SMMC-7721中CHOP和GRP78 mRNA表达的影响

目的：观察氯化镉（CdCl2）处理人肝癌SMMC-7721细胞系中CHOP和GRP78 mRNA表达的改变,在mRNA水平探讨氯化镉对肝癌细胞内质网应激的影响。方法：以人肝癌细胞株SMMC-7721细胞为研究模型,细胞暴露于氯化镉浓度为0、5、10、20、30及40 μmol?L-1的培养液中24 h,0 μmol/L组为对照组。采用SYBR荧光实时定量PCR法检测CHOP和GRP78 mRNA表达,相对定量采用比较CT值法。结果：随着氯化镉剂量的增加,CHOP mRNA表达水平有逐渐增多的趋势,各组mRNA表达均高于对照组,其中10、20和40 μmol/L组与对照组比较差异有显著性（P<0.05）;GRP78 mRNA表达有逐渐增多的趋势,各组mRNA表达均高于对照组,其中5、20和40 μmol/L组与对照组比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）。结论：氯化镉可诱导人肝癌SMMC-7721细胞中CHOP和GRP78 mRNA表达增多。     

子痫前期内质网应激相关蛋白CHOP/GADDl53的表达及其意义

目的:研究内质网应激相关蛋白CHOP/GADD153在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其意义.方法:选择2009年6月～2010年6月在南京医科大学第一附属医院产科住院分娩的子痫前期患者30例(子痫前期组),以同期正常孕妇35例为对照组.采用RT-PCR技术、蛋向印迹(western-blot)法和免疫组化检测两组孕妇胎...     

CHOP/Gadd153在强噪声诱导下豚鼠耳蜗细胞凋亡中的表达和作用

目的:探讨强噪声对豚鼠耳蜗细胞死亡的机制及CHOP/Gadd153在强噪声诱导耳蜗细胞凋亡中的作用.方法:选用健康雄性白色豚鼠32只,将实验组豚鼠暴露在4 kHz窄带噪声120 dB SPL噪声环境中4 h,噪声刺激停止后1,4,14 d组(实验组)及对照组(每组各8只)在处死前测听性脑干反应(ABR).取每组4只豚鼠...     

金纳多对大鼠急性脊髓损伤内质网应激蛋白GADD153/CHOP表达的影响

目的 探讨金纳多(Ginaton)对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)后脊髓组织内质网应激相关蛋白GADD 153/CHOP表达的影响.方法 选取健康SD大鼠64只,随机分为治疗组和对照组各32只.所有大鼠均以改良Allen's法制备脊髓损伤模型,治疗组在模型制备的基础上给予金纳多注射治疗,对照组给予同等剂量的生理盐水.分别于致伤后3h、1d、3d、7d时各取8只,以改良Tarlov评分法评价其神经功能;评分后处死,取受损节段脊髓行HE染色及免疫组化染色,观察形态学改变和CHOP表达的特点;并应用TUNEL方法检测神经细胞凋亡情况.其量的评定借助于麦克奥迪数码医学图像分析系统A (Modc.med 6.0)软件,结果分别用累积光密度(IOD)及细胞凋亡指数(AI)来表示.结果 所有实验大鼠脊髓组织均有不同程度出血、水肿、细胞凋亡及坏死.治疗组Tarlov评分除3h时间点外,其他各时间点Tarlov评分明显高于对照组,且差异有统计学意义(P＜0.05).治疗组与对照组不同时间点CHOP表达、细胞凋亡,除3h时间点外,其他各个时间点治疗组CHOP表达及细胞凋亡均明显低于对照组,且差异有统计学意义(P＜0.05).结论 金纳多对急性脊髓损伤有保护作用,能改善损伤脊髓的神经功能,这可能与其能够抑制CHOP表达及脊髓细胞凋亡有关.     

Wnt信号通路调控肠癌细胞GRP78表达与细胞膜转位

 目的 本研究旨在探讨Wnt/β catenin信号通路和葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)两者在肠癌细胞中的调控关系。方法 本研究采用氯化锂(LiCl)处理肠癌HT 29和DLD1细胞,激活其Wnt/β catenin信号通路。通过Western blot和荧光定量PCR,检测Wnt信号活化对GRP78表达的影响;通过对细胞组分的分离和免疫荧光染色技术分析Wnt信号活化对GRP78细胞膜转运的影响。结果 LiCl处理能够显著激活HT 29和DLD1细胞中的Wnt/β catenin信号通路,GRP78蛋白在HT 29细胞膜表面呈独特的“簇状”分布,LiCl处理明显提高了细胞中GRP78的转录和翻译水平,且GRP78在细胞表面的分布水平也有明显增加。结论 肠癌细胞中GRP78的表达和细胞膜转位受Wnt/β catenin信号通路活性的调控。     

Chelation of GRP78 with lead and its localization changes in the astroglia of rats exposed to lead

To observe the chelation of GRP78 with lead （Pb） and its localization changes, astroglial ceils from Wistar rat brain were primarily cultured in medium witb acetate Pb. The processes were terminated at different time points. The immunoprecipitation （IP） and Western blotting were used for GRP78 purification and expression and the Pb concentration was determined by employing atomic absorption spectrophotometry （AAS）. The localization change of GRP78 was observed with colloid gold immunoelectron microscopy. The results showed that the expression of GRP78 was increased significantly in the cells treated with 1.0 μmol/L acetate Pb for 24 h and peaked at 96-192 h （P〈0.01）, and at the 12th day, the expression of GRP78 began to decrease but was still higher than normal （P〈0.05）. Pb content started to increase when cells were treated by acetate Pb for 24 h, and the peak appeared at 8 day （P〈0.01）, and then Pb content decreased gradually, but was still higher than normal （P〈0.05）. GRP78 protein expression began to remarkably increase when it transferred from ER to the cytosol around the nuclei 24 h after treatment with Pb. It is concluded that GRP78 in astroglia could strongly chelate with Pb ions and it might be a target protein of Pb.     

高脂饮食喂养大鼠脂肪组织GRP78mRNA的表达及意义

目的 通过观察高脂喂养的胰岛素抵抗大鼠内脏脂肪组织中GRP78mRNA的表达,探讨其在胰岛素抵抗发病机制中的意义.方法 30只雄性Wistar大鼠随机分为正常饮食组（NC组）和高脂饮食组（HF组）,每组15只.喂养10周后,应用高胰岛素-正常血糖钳夹实验技术评估胰岛素抵抗模型的建立.采用实时荧光定量PCR（Real time PCR）法检测脂肪组织GRP78mRNA的表达.同时检测血清胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、测定血糖（BG）、胰岛素（INS）,测定各组大鼠内脏脂肪的重量与体重的比值.结果 （1）喂养10周后HF组的葡萄搪输注率（GIR）明显低于NC组（P〈0.01）,HF组胰岛素明显高于NC组（P〈0.05）;（2）HF组大鼠内脏脂肪组织中GRP78mRNA的表达明显增高,与NC组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;（3）10周末,HF组大鼠甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、及内脏脂肪相对含量均明显升高（P〈0.01）.结论 高脂喂养10周大鼠胰岛素抵抗模型建立成功,高脂饮食可诱导内脏脂肪组织GRP78mRNA表达增强.     

胃癌组织中GRP78的表达与临床病理特征的相关性分析

目的探讨胃癌组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达与临床病理特征的相关性及其与胃癌发生、发展的关系。方法收集临床资料完整的胃癌组织蜡块76例、胃正常组织蜡块(含正常胃黏膜组织及癌旁正常胃组织)20例制成组织芯片,免疫组化SP法检测其GRP78蛋白的表达。结果胃癌组织、胃正常组织中均有GRP78蛋白的表达,胃癌组织表达指数为(5.80±3.45),胃正常组织表达指数为(3.20±1.70),两组比较差异有统计学意义(P=0.002)。胃癌组织中GRP78蛋白的表达随肿瘤分化程度的降低而增强(P=0.001),但与患者的年龄、性别、肿瘤大小、有无淋巴结转移、浸润深度等无关。结论胃癌组织中GRP78蛋白的表达增高,并与胃癌的分化程度密切相关。     

非小细胞肺癌体外化疗药物敏感性与GRP94表达的相关性

[目的]探讨非小细胞肺癌(NSCLC)对8种化疗药物的体外敏感性与GRP94表达的相关性。[方法]用四噻唑蓝(MTT)法检测52例手术切除新鲜NSCLC组织8种化疗药物体外敏感性;免疫组织化学方法检测肺癌组织GRP94表达。采用Spearman法进行相关性分析。[结果]NSCLC52例对紫杉醇(PTX)、阿霉素(ADM)、卡铂(CBP)、拓扑替康(TPT)、长春瑞滨(NVB)、长春新碱(VCR)、顺铂(DDP)和鬼臼乙叉苷(VP-16)8种化疗药物的耐药率分别为42.31%、57.69%、63.46%、65.38%、67.31%、73.08%、78.85%和90.38%。其中,14例表现为完全耐药;且其高表达与肺癌细胞对VP-16的耐药明显相关(P<0.05)。[结论]检测GRP94表达对推测NSCLC对VP-16的耐药性具有参考意义。