环磷酰胺对小鼠精子胞内钙离子浓度的影响

目的 观察腹腔注射环磷酰胺对小鼠精子胞内钙离子浓度的影响.方法 将20只雄性昆明小鼠随机分为对照组和模型组,按60mg/kg体重给对照组小鼠腹腔注射生理盐水(NS),另按60mg/kg体重给模型组小鼠腹腔注射环磷酰胺,每天1次,连续5d,常规饲养观察34d,然后对小鼠精子进行精液常规分析,对精子行FITC-AV/PI染色后用流式细胞仪检测精子凋亡率,用Ca2+荧光探针Fluo-3/AM处理精子后用流式细胞仪检测精子胞内Ca2+浓度.结果 对照组与模型组精子密度分别为(5.20±1.34)×106/ml和(1.73±0.03)×106/ml,精子活力分别为(14.49±0.30)%和(6.64±1.88)%,精子活率分别为(68.39±15.13)%和(39.96±4.89)%,精子凋亡率(AV/PI)分别为(8.38±0.45)和(14.84±1.22),胞内Ca2+浓度分别为(133.14+11.86)和(80.84±6.92),以上项目两组比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 腹腔注射环磷酰胺可使小鼠精子密度、活力、活率降低,精子凋亡增加,精子胞内Ca2+浓度降低.造成精子胞内Ca2+浓度降低的可能机理是环磷酰胺降低了精子特异性Ca2+通道蛋白功能.     

益精方对环磷酰胺小鼠精子胞内钙离子浓度的干预作用

目的 从精子胞内钙离子的角度阐述益精方治疗弱精子症的机制.方法 将40只雄性昆明小鼠随机分为对照组(CG)、模型组(MG)、小剂量中药治疗组(SG)和大剂量中药治疗组(LG),按60mg/kg体质量给CG小鼠腹腔注射生理盐水,60mg/kg体质量给MG、SG、LG小鼠腹腔注射环磷酰胺,qd,连续5d,第6d开始按体重分别给SG和LG小鼠灌服益精方,剂量分别为人类常规用量(以60kg为标准)的1倍和5倍,MG小鼠给予等体积的生理盐水灌胃,qd,连续34d,CG常规饲养,第40天对小鼠进行精液常规分析,对精子行FITC-AV/PI染色后用流式细胞仪检测精子凋亡率,用Ca2+荧光探针Fluo-3/AM处理精子后用流式细胞仪检测精子胞内Ca2+浓度.结果 CG、MG、SG和LG精子胞内Ca2+浓度分别为133.14±11.86、80.84±6.92、88.05±3.31、99.08±7.17,MG胞内Ca2+浓度显著低于CG(P＜0.05),治疗后LG胞内Ca2+浓度显著升高,与MG比较差异有统计学意义(P＜0.05);精子活力分别为(14.49±0.30)％、(6.64±1.88)％、(11.99±1.01)％和(19.40±3.13)％;精子活率分别为(68.39±15.13)％、(39.96±4.89)％、(62.28±4.43)％和(73.61±5.05)％;精子密度分别为(5.20±1.34)×106/ml、(1.73±0.03)×106/ml、(2.08±0.01)×106/m和(3.31±0.56)×106/ml,MG活力、活率、密度显著低于CG (P＜0.05),经治疗后LG活力、活率、密度明显增加,与MG比较差异有统计学意义(P＜0.05),而与CG在活力和活率上没有明显区别;精子凋亡率分别为8.38±0.45、14.84±1.22、13.25±1.83、8.35±2.1,MG凋亡率显著高于CG (P＜0.05),治疗后LG凋亡率显著降低,与MG比较差异有统计学意义(P＜0.05)而与CG没有明显区别.结论大剂量益精方可提高因腹腔注射环磷酰胺造成的小鼠精子活力、活率低下状态,其改善精子活力的作用可能与益精方增加精子胞内Ca2+浓度有关.     

黄芪预处理对缺血-再灌注心肌线粒体的保护作用

目的 观察黄芪预处理对兔心肌缺血-再灌注时心肌线粒体功能及结构的影响.方法 将家兔24只随机均分为心肌缺血-再灌注组(A组)、黄芪预处理组(B组)、假手术组(C组).检测线粒体Ca2+浓度([Ca2+])、丙二醛(MDA)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)活性及心肌三磷酸腺苷酸(ATP)含量,并观察线粒体超微结构的改变.结果 B组SOD、ATP含量、比表面(δ)明显高于A组(P<0.05或P<0.01),[Ca2+]、MDA、体密度(Vv)显著低于A组(P<0.05或P<0.01).结论 黄芪预处理对缺血-再灌注心肌线粒体有一定保护作用.     

家兔阴茎海绵体平滑肌细胞内游离钙检测方法的对比研究

目的　通过对家兔阴茎海绵体平滑肌细胞 (PCSMC)内游离Ca2 检测方法的对比 ,以选择更适宜的方法来研究阴茎海绵体平滑肌的舒张机制。方法　采用新型Ca2 荧光探针Fluo 3/AM标记家兔PCSMC胞浆内游离Ca2 ,应用显微分光光度计 (MSP)、流式细胞仪 (FCM)和激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)分别观察硝苯吡啶 (NIF)对高K 诱发家兔PCSMC内 [Ca2 ]i 变化的影响。结果　MSP和FCM检测发现 ,10 μmol/LNIF能明显减弱高K (4 0mmol/L)诱发细胞内荧光强度的升高 ,抑制率为 (6 5 .5± 4 .4 ) %和 (6 9.3± 5 .2 ) %。LSCM可见细胞胞浆内游离Ca2 分布 ,不同细胞胞浆内的基础荧光强度有差别 ,NIF能明显抑制高K 诱发的细胞内 [Ca2 ]i 升高 ,抑制率为 (71.5±6 .8) %。结论　LSCM能直观地看到单细胞内Ca2 的分布 ,并能动态观察胞浆内 [Ca2 ]i 的变化 ,为研究不同药物对PCSMC的影响提供了良好的实验方法。     

孕酮对正常生育和不明原因不育男性精子细胞内游离Ca~(2+)浓度的影响

目的:比较正常生育男性和不明原因不育男性患者精子细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)对孕酮(P)的反应性。方法:选择10例不明原因不育男性患者和9例正常生育男性,用上游法分离活力良好的精子并于体外获能2 h,将获能后精子与8.85μmol/L钙荧光探针Fluo-3/AM避光孵育40 min负载,将负载后的精子悬液与等量20%明胶混匀以制动精子,然后在激光扫描共聚焦显微镜下动态观察单个精子头部的[Ca2+]i基础水平以及10μmol/L P刺激对[Ca2+]i的影响。结果:不育组获能2 h后精子的[Ca2+]i基础水平显著低于生育组(P<0.01)。生育组精子经10μmol/L P刺激后,产生快速而短暂的[Ca2+]i升高,[Ca2+]i峰值水平显著高于其基础水平(P<0.05);而不育组精子经P刺激后,[Ca2+]i仅有微弱增加,其峰值水平与基础水平相比无统计学差异(P>0.05)。生育组由P激发的精子[Ca2+]i峰值水平以及[Ca2+]i升高幅度(峰值水平与基础水平之差)均显著高于不育组(P<0.01)。结论:不明原因不育男性患者精子[Ca2+]i对P的反应性降低,提示这些患者精子膜上负责Ca2+内流的非基因型孕激素受体可能存在功能障碍。     

益气助精颗粒治疗特发性少弱精子症的临床研究

目的:观察益气助精颗粒治疗特发性少弱精子症的疗效。方法:从2012年3月至2013年3月间,对78例男性不育患者中的特发性少弱精子症患者,随机分2组治疗,对照组(n=39)采用葡萄糖酸锌口服液,1支/次,2次/d,维生素E胶丸,100 mg/次,2次/d;治疗组(n=39)在对照组治疗药物的基础上加用益气助精颗粒,2次/d;疗程3个月。结果:经过治疗,对照组前向运动精子百分率和精子存活率较治疗前提高,差异具有统计学意义(P均<0.05);治疗组精子总数、精子浓度、前向运动精子百分率和精子存活率较治疗前提高,差异具有统计学意义(P均<0.05)。精子总数、精子浓度、前向运动精子百分率和精子存活率治疗前后的差值,治疗组较对照组改善明显,差异具有统计学意义(P均<0.05)。经过治疗,对照组和治疗组在精浆生化各指标上均有不同程度的改善,其中治疗组较对照组精浆锌、α-葡糖苷酶、酸性磷酸酶改善更为显著,差异具有统计学意义(P均<0.05);治疗组在精浆锌、精浆果糖和α-葡糖苷酶的改善上,与对照组提高的差值相比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗后精浆锌变化水平与精子浓度改善水平成正相关(r=0.201,P<0.05);精浆果糖变化水平与精子浓度改善水平呈负相关(r=-0.136,P<0.05);α-葡糖苷酶变化水平与精子存活率呈正相关(r=0.314,P<0.05)。结论:益气助精颗粒在提高精子总数、精子浓度、前向运动精子百分率、精子存活率,改善精浆锌、精浆果糖、α-葡糖苷酶、酸性磷酸酶上面有显著效果。     

精液常规参数初检合格后不同时间点再分析结果及其与精子DNA损伤的关系

目的:探讨完全液化且常规参数初检合格的精液标本,于不同时间再分析的结果差异,及精子DNA碎片化指数(DFI)与精子活动力改变的相关性。方法:选取127份符合纳入标准的精液标本,分别于取样后15、30、60 min时采用计算机辅助精液分析(CASA)系统进行分析。精子形态分析采用Shorr染色法,吖啶橙试验(AOT)检测DFI。结果:3个时间点精子浓度、a级和b级精子百分率均无统计学差异(P>0.05)。取样15 min时a+b和a+b+c级精子百分率显著高于30和60 min时的结果(P<0.05),后两者间无统计学差异(P>0.05)。不同时间精子活动力各项指标中,至少有1项由"正常组"变为"异常组"的发生率为25.2%,两组间DFI和形态学无统计学差异(P>0.05)。取样后15到60 min变化的精子活动力指标中,a、a+b、a+b+c级下降值与DFI存在正相关性(P<0.05)。结论:取样后15 min内完全液化并初查参数合格的精液标本,30～60 min内复查时,a级和b级精子百分率波动并无显著差异,而a+b级及a+b+c级精子则可能显著下降,精子活动力指标可能出现异常。故应至少进行2次精液分析,综合评估生育力。如2次结果差异较大,尤其是a级精子百分率下降幅度较大,则可能与精子DNA损伤有关,需进一步行精子DNA损伤检测。     

芬吗通在PCOS患者促排卵周期中的应用

目的观察在多囊卵巢综合征(PCOS)患者促排卵周期中应用补佳乐配伍黄体酮胶囊和单独应用芬吗通对子宫内膜及妊娠情况的影响。方法回顾性分析2013年1月至2016年6月126例PCOS患者应用来曲唑促排卵178个周期的临床资料,根据内膜准备和黄体支持方案分为芬吗通组67例(92个周期)和补佳乐+黄体酮组59例(86个周期),比较两组患者的一般情况、基础激素水平、促排卵用药情况、HCG日子宫内膜的厚度和分型,并观察两组患者妊娠情况的差异。结果两组患者的一般情况、基础激素水平和促排卵药物用量均无统计学差异(P>0.05)。两组患者用药前子宫内膜的厚度分别为(4.6±1.2)mm、(4.4±1.2)mm,差异无统计学意义(P>0.05);用药后芬吗通组HCG日子宫内膜厚度[(9.6±2.0)mm]显著厚于补佳乐+黄体酮组[(7.4±1.8)mm](P<0.05),HCG日两组子宫内膜类型比较无统计学差异(P>0.05)。芬吗通组周期妊娠率(28.3%)与补佳乐+黄体酮组(26.7%)相比无统计学差异(P>0.05),但芬吗通组早期胚胎丢失率(15.4%)显著低于补佳乐+黄体酮组(34.8%)(P<0.05)。在促排卵周期应用中,芬吗通组用于内膜生长的雌激素用量为(12.4±4.2)mg,显著低于补佳乐+黄体酮组[(18.5±2.3)mg](P<0.05);芬吗通组用于黄体支持的孕激素用量为(227.5±13.6)mg,显著低于补佳乐+黄体酮组[(2 365.6±240.8)mg](P<0.05)。芬吗通组服药后不良反应发生率(0%)显著低于补佳乐+黄体酮组(6.5%)(P<0.05)。结论与补佳乐配伍黄体酮胶囊相比,芬吗通应用于PCOS患者的促排卵周期,其在改善子宫内膜厚度和获得良好妊娠结局方面具有更好的疗效,且使用方便、剂量小、不良反应少。     

川芎嗪对家兔阴茎海绵体平滑肌细胞游离钙浓度的影响

目的 :研究中药川芎嗪 (TMP)对体外培养家兔阴茎海绵体平滑肌细胞 (PCSMC)胞质内游离钙浓度([Ca2 + ] i)的影响。　方法 :用新型Ca2 + 荧光染色剂Fluo 3/AM负载家兔PCSMC ,细胞分为氯化钾 (KCl)作用组和去甲肾上腺素 (NE)作用组 ,应用激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)实时测定胞质内 [Ca2 + ] i的变化 ,分别观察不同浓度的TMP对高钾和NE诱导胞质内 [Ca2 + ] i升高的影响 ,并与经典钙拮抗剂维拉帕米 (Ver)的作用相对比。　结果 :静息状态下 ,TMP对家兔PCSMC胞质内 [Ca2 + ] i无明显影响。 1、1 0、1 0 0 μmol/LTMP能显著抑制高钾诱发的细胞内 [Ca2 + ] i升高 ,抑制率分别为 (38.6± 3 .0 ) %、(44.1± 2 .4) %和 (53 .7± 4 .1 ) % ;也能抑制 1 μmol/LNE诱发钙库释放所致的细胞内 [Ca2 + ] i升高 ,抑制率分别为 (1 3 .9± 2 .7) %、(2 1 .2± 1 .9) %和 (2 9.5± 3 .6) %。　结论 :TMP通过对家兔PCSMC电压依赖性钙通道和细胞内钙库释放的双重抑制作用 ,降低PCSMC胞质内 [Ca2 + ] i水平 ,其作用效果与Ver相似 ,这是TMP治疗阴茎勃起功能障碍的重要机制。     

七氟醚对豚鼠耳蜗外毛细胞Ca2+跨膜内流和内质网钙释放功能的影响

目的 观察七氟醚对豚鼠耳蜗外毛细胞Ca2+跨膜内流和内质网钙释放功能的影响,探讨其对听觉外周感受器(耳蜗)作用的可能机制.方法 第一部分成年豚鼠,雌雄不拘,迅速断头,取耳蜗,酶孵育后,机械分离法分离外毛细胞,30个活力良好的外毛细胞随机分为3组(n=10):对照组(C组),低浓度七氟醚组(S1组)和高浓度七氟醚组(S2组),用Fluo-3AM钙荧光指示剂染色后,分别给予纯氧、1.7%七氟醚、3.4%七氟醚处理20min,然后加入40mmol/L氯化钾,测定细胞内游离钙离子浓度([Ca2+];).第二部分以20 mmol/L 咖啡因代替氯化钾其余处理及分组同第一部分.结果 第一部分与基础值比较,各组给予七氟醚后[Ca2+];差异无统计学意义(P＞0.05),加入氯化钾后[Ca2+];升高(P＜0.01);S1组和S2组加入氯化钾后[Ca2+];低于C组,且S2组低于S1组(P＜0.05).第二部分与基础值比较,各组给予七氟醚后[Ca2+];差异无统计学意义(P＞0.05),加入咖啡因后[Ca2+];升高(P＜0.0);加入咖啡因后各组[Ca2+];差异无统计学意义(P＞0.05).结论 七氟醚可浓度依赖性地抑制豚鼠耳蜗外毛细胞电压依赖型Ca2+通道开放,而对内质网Ryanodine敏感性钙释放功能无影响.     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。     

膝关节后交叉韧带断裂治疗临床分析

目的 对35例膝关节后交叉韧带断裂治疗进行临床分析,重点探讨了有关交叉韧带断裂的治疗问题。方法 经明确诊断后,分析采用胫骨附着处撕脱骨折复位固定手术治疗26例、早期髌韧带中1／3移植重建3例、单纯长腿石膏固定6例。结果 本组病例全部进行随访,随访时间13个月－5年,胫骨附着处撕脱骨折复位固定及髋韧带中1／3移植重建29例为优良、单纯长腿石膏固定6例为差。结论 后交叉韧带断裂后应该及时给予手术修复;膝后外侧手术入路,操作简单,暴露充分;少于3个月的陈旧性病例仍适应手术治疗。