多发性骨髓瘤患者血脂与血清α1-酸性糖蛋白检测的意义

目的探讨血脂和α1-酸性糖蛋白检测在多发性骨髓瘤(MM)患者诊疗中的价值。方法对MM患者60例和对照组健康体检者30例采用酶法检测血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。采用速率散射比浊法测定α1-酸性糖蛋白。并进行统计学分析。结果MM组患者TC,LDL-C和HDL-C水平与对照组比较差异有统计学意义(t=4.964～6.851,均P<0.01),而TG水平与对照组比较差异无统计学意义(t=0.003,P>0.05)。MM组治疗前患者和治疗后有效者TC,HDL-C,LDL-C和α1-酸性糖蛋白水平差异有统计学意义(t=5.341～34.157,均P<0.01)。结论检测血脂和α1-酸性糖蛋白变化可作为预示MM患者治疗效果的重要手段。     

α干扰素联合化学治疗对多发性骨髓瘤的疗效

目的：探讨α干扰素联合化学治疗（治疗）对多发性骨髓瘤（MM）的疗效。方法：应用α干扰素联合VAD化疗方案（长春地辛、表阿霉素、地塞米松）或MP化疗方案（白消安、泌尼松）治疗MM（分别为30例和20例），比较两组的疗效，并对这些MM患者治疗前的骨髓活检切片进行对比观察，评价治疗对骨髓组织的影响。结果：治疗组完全缓解6例（20％），部分缓解9例（30％）,进步12例（40％），无效3例（10％），对照组部分缓解6例（30％），进步8例（40％），无效6例（30％），治疗组完全缓解率优于对照组，P＜0．05。治疗组治疗学分期和病理的骨髓纤维增生程度有所改善。结论：α干扰素联合化治疗MM疗效较好。     

趋化因子受体CCR1、CCR5在多发性骨髓瘤中的表达及对瘤细胞与基质细胞黏附的影响

目的:观察趋化因子受体CCR1、CCR5在多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞、骨髓基质细胞、人多发性骨髓瘤细胞系KM3、SKO007、XG-6中的表达及介导巨噬细胞炎症蛋白-1α对瘤细胞与基质细胞的黏附。方法:选择2004-08/2006-07在桂林医学院附属医院血液科住院的患者16例,男10例,女6例,中位年龄56岁,经国内统一标准确诊为多发性骨髓瘤患者。患者知情同意,并经医院伦理委员会批准。①实验方法:取样本进行骨髓单个核细胞与骨髓基质细胞的分离培养。人多发性骨髓瘤细胞系KM3、SKO007、XG-6从外室传代引进后,在含体积分数为0.10胎牛血清的RPMI1640培养液中培养,每3天更换1次培养液,本实验用的细胞均处于对数生长期。②实验评估:半定量RT-PCR及Western-blot技术检测骨髓瘤骨髓单个核细胞、骨髓基质细胞及骨髓瘤细胞系KM3、SKO007、XG-6中的CCR1、CCR5表达;MTT微量酶反应比色法定量检测瘤细胞与基质细胞的黏附。结果:①约43.8%的多发性骨髓瘤患者骨髓及2/3的多发性骨髓瘤细胞系均表达CCR1、CCR5两种受体,约6.25%的多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞仅表达CCR1受体,且大部分能在蛋白质水平上进一步得到鉴定。②加巨噬细胞炎症蛋白1α单抗、CCR1和/或CCR5单抗组,KM3、SKO007、XG-6细胞与基质细胞的黏附作用较对照组明显下降(P<0.05),而单抗组间无明显差异(P>0.05)。结论:大部分多发性骨髓瘤患者及多发性骨髓瘤细胞系表达CCR1、CCR5两种受体,巨噬细胞炎症蛋白1α可能是运用CCR1、CCR5两种受体来介导瘤细胞与基质细胞的黏附。     

Velcade诱导多发性骨髓瘤细胞株U266细胞凋亡研究

为了研究velcade诱导多发性骨髓瘤细胞株U266细胞凋亡效应及机制，采用台盼蓝拒染法检测2、10、50和100nmol／L velcade处理U266细胞活率，用流式细胞术分析Annexin—V、线粒体跨膜电位（△ψm）和氧自由基（ROS），用半定量RT—PCR法检测bcl-2 mRNA的表达。结果表明：velcade抑制U266细胞增殖；诱导U266细胞凋亡，24小时Annexin—V阳性细胞比例增高，△ψm降低；12小时时活性氧明显增高，荧光强度增强；抗凋亡基因bcl-2表达降低。结论：velcade对U266细胞具有增殖抑制和杀伤作用。其可通过内源性细胞凋亡信号通路诱导U266细胞凋亡。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589对多发性骨髓瘤细胞MM1R的抑制作用

本研究探讨新一代组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589单药或者联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米,对多发性骨髓瘤(MM)细胞的抗瘤效应。采用MTT法检测LBH589(10、20、50 nmol/L)及50 nmol/L分别联合硼替佐米(10、20 nmol/L)作用于人多发性骨髓瘤MM1R细胞24,48 h后的细胞增殖抑制作用;采用流式细胞术检测LBH589对MM1R细胞周期和细胞凋亡的影响;采用Western blot分析LBH589(10、20、50 nmol/L)作用MM1R细胞24 h后组蛋白H4乙酰化的程度。结果表明,LBH589单药及与硼替佐米联合均能够抑制MM1R细胞增殖,并与药物浓度和作用时间呈正相关。MM1R细胞经药物作用48 h后,G0/G1期细胞逐渐增多,G2/M期及S期细胞逐渐减少,细胞阻滞在G0/G1期,同时可见MM1R细胞的凋亡率增加,作用呈浓度依赖性,且LBH589与硼替佐米联合作用均较单药作用更加明显(均P<0.001);Western blot分析显示,不同浓度LBH589作用MM1R细胞24 h后组蛋白H4乙酰化的程度上调,呈浓度依赖性。结论:LBH589能够抑制MM1R细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,且与硼替佐米联合对骨髓瘤细胞有协同作用。     

多发性骨髓瘤骨髓中MIP-1α的表达及其临床意义

目的探讨多发性骨髓瘤骨髓中巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)的表达,并阐明其与骨髓瘤发病和疾病进展程度的相关性。方法以酶联免疫吸附法(ELISA)检测17例不同类型和不同病程分期的多发性骨髓瘤患者骨髓液和外周血中MIP-1α的表达情况,并检测非骨髓瘤患者22例的MIP-1α作为对照。结果骨髓瘤患者中骨髓液MIP-1α的表达与非骨髓瘤组比较,明显增高,而且MIP-1α的表达随疾病的进展而逐渐增高;但是外周血的MIP-1α含量与对照组相比没有差别,而且与疾病的分期也无关。结论骨髓液中MIP-1a的表达与骨髓瘤的发病和分期密切相关,值得进一步研究分析。     

多发性骨髓瘤骨髓中MIP-1α的表达及其临床意义

目的 探讨多发性骨髓瘤骨髓中巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)的表达,并阐明其与骨髓瘤发病和疾病进展程度的相关性.方法 以酶联免疫吸附法(ELISA)检测17例不同类型和不同病程分期的多发性骨髓瘤患者骨髓液和外周血中MIP-1α的表达情况,并检测非骨髓瘤患者22例的MIP-1α作为对照.结果 骨髓瘤患者中骨髓液MIP-1α的表达与非骨髓瘤组比较,明显增高α而且MIP-1α的表达随疾病的进展而逐渐增高;但是外周血的MIP-1α含量与对照组相比没有差别,而且与疾病的分期也无关.结论 骨髓液中MIP-1α的表达与骨髓瘤的发病和分期密切相关,值得进一步研究分析.     

人多发性骨髓瘤细胞syndecan-1的表达、分泌及调节

目的 研究蛋白聚糖家族成员ｓｙｎ ｄｅｃａｎ－１分子在人多发性骨髓瘤（ＭＭ）细胞表面的表达和可溶型ｓｙｎｄｅｃａｎ－１分子的分泌及其调节,以期探讨ｓｙｎｄｅｃａｎ－１-与人ＭＭ发生、发展的相关性。方法 用免疫荧光标记流式细胞仪分析人ＭＭ肿瘤细胞表面ｓｙｎｄｅｃａｎ－１的表达;采用ＥＬＩＳＡ法检测人ＭＭ细胞培养上清可溶型ｓｙｎｄｅｃａｎ－１的分泌水平。结果 ①人ＭＭ细胞表面表达高水平的ｓｙｎｄｅｃａ     

α干扰素联合GM-CSF体外培养多发性骨髓瘤患者外周血树突状细胞

树突状细胞 (ＤＣ)是目前公认的体内功能最强的抗原提呈细胞 (ＡＰＣ) ,它能显著地刺激初始Ｔ细胞 (ｎａｉｖｅＴｃｅｌｌｓ)的增殖 ,启动机体免疫反应 ,在激发以抗原特异性细胞毒性Ｔ细胞过继性免疫治疗肿瘤中起着重要的作用。ＤＣ经典的培养方法是用ＧＭ ＣＳＦ ＩＬ 4从外周血ＣＤ1 4+细胞或用ＧＭ ＣＳＦ和ＴＮＦα从ＣＤ3 4 +造血干细胞中制备生成[1 3 ] 。 1998年Ｐａｑｕｅ ｔｔｅ等[4] 发现ＩＦＮα能诱导正常人外周血单核细胞向ＤＣ分化。但ＩＦＮα是否也能诱导多发性骨瘤 (ＭＭ)患者ＤＣ的生成尚不清楚。我们在体外应用ＩＦＮα…     

多发性骨髓瘤细胞粘附分子的表达及意义

多发性骨髓瘤(MM)的恶性浆细胞表达一系列细胞粘附分子,使恶性浆细胞或浆细胞的前体细胞选择性地粘附并归巢于骨髓基质,并产生一系列细胞因子。这些骨髓基质细胞及细胞因子,促进恶性浆细胞增殖,并使恶性浆细胞具有不朽性,在MM的发生及发展中起重要作用。     

膜联蛋白A2基因对多发性骨髓瘤细胞的诱导凋亡作用及相关机制研究

本研究探讨膜联蛋白A2（AnxA2）基因诱导骨髓瘤U266、RPMl8226细胞凋亡的作用及相关机制。采用AnxA2siRNA转染人骨髓瘤U266、RPMl8226细胞,应用实时PCR和Westernblot检测AnxA2基因和蛋白的表达。应用流式细胞术检测细胞凋亡,应用实时PCR检测凋亡相关基因的表达水平。结果表明,AnxA2siRNA转染U266和RPMl8226后,AnxA2基因和蛋白表达水平均明显下调;细胞凋亡率增高（P〈0．05）,同时降低凋亡相关基因p65NF-κB、儿_2、IL-6的表达（P〈0．05）,增强P53基因的表达（P〈0．05）。结论：AnxA2基因沉默在骨髓瘤细胞U266和RPMl8226凋亡中起促进作用。     

Longikaurin A诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的初步研究

本研究冬凌草甲素结构类似物longikaurin A对多发性骨髓瘤细胞H929的作用和机制。采用CCK-8法检测longikaurin A和冬凌草甲素对H929细胞的增殖抑制效应。在相差显微镜下观察longikaurin A处理12 h对H929细胞形态的影响;AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡的比例;Western blot检测caspase-9、caspase-3的活化水平及PARP的剪切情况;应用DCFDA探针检测2μmol/L longikaurin A处理不同时间H929细胞中活性氧的水平。结果显示,与冬凌草甲素(IC50为10.66μmol/L)相比,longikaurin A(IC50为0.85μmol/L)能够更有效地抑制H929细胞增殖;longikaurin A作用24 h,AnnexinⅤ阳性细胞比例显著升高,caspase-3、caspase-9活化,caspase-3的底物PARP发生剪切,提示longikaurin A能诱导H929细胞发生凋亡;活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸能够显著抑制longikaurinA诱导的细胞凋亡,然而longikaurin A本身并不升高活性氧水平。结论:与冬凌草甲素相比,longikaurin A在较低浓度下能够诱导多发性骨髓瘤细胞H929发生细胞凋亡。     

伊马替尼诱导c-kit阳性多发性骨髓瘤细胞凋亡

目的 探讨伊马替尼在体外对c-kit表达阳性多发性骨髓瘤细胞的作用及机制.方法 不同浓度伊马替尼处理KM3细胞后,采用二甲氧唑黄比色法(XTT法)检测药物的细胞毒性作用,流式细胞术检测细胞周期,Annexin V/PI双标流式细胞术和DNA片段分析法检测细胞凋亡,Westernblot法检测蛋白质水平变化.结果 伊马替尼浓度在0.25 μmol/L或以上时,可明显抑制KM3细胞增殖,呈量效关系,48 h IC50为0.33μmol/L(P＜0.01);阻滞细胞周期于G0/G1期;Annexin V和DNA凝胶电泳检测提示随着伊马替尼浓度的增大,KM3细胞凋亡率增加,且可以促使caspase-3和聚ADP核糖聚合酶(PARP)发生裂解;处理后c-kit表达降低,且阻断外源性IL-6对c-kit的促磷酸化作用.结论 伊马替尼可以通过抑制c-kit受体相关信号传导途径抑制KM3细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

氟达拉滨诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡及其基因表达分析

目的 探讨氟达拉滨诱导多发性骨髓瘤(MM)细胞凋亡及其分子机制.方法 用MTT法检测氟达拉滨对MM细胞的生长抑制作用;用流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法分析凋亡蛋白表达;采用细胞凋亡基因芯片技术检测并分析对照组与氟达拉滨处理组间的基因表达差异.结果 氟达拉滨显著抑制RPMI8226和KM3细胞生长,呈时间和剂量依赖性.24 h半数生长抑制值(IC50)分别为2.13μg/ml和0.36 μg/ml.流式细胞术分析显示,氟达拉滨作用24 h后MM细胞凋亡呈剂量依赖性,同时伴有caspase-3和PRAP激活,具有典型的细胞凋亡生物学特征.在97个凋亡相关基因中,筛选出25个差异表达基因.氟达拉滨处理组与对照组比较,表达上调的基因有13个,主要涉及Bcl-2家族促凋亡基因、肿瘤坏死因子及其受体超家族基因,以及胱天蛋白酶募集结构域家族.表达下调的基因有12个,主要涉及Bcl-2家族抗凋亡基因、肿瘤坏死因子超家族及其受体相关因子基因,以及凋亡抑制蛋白家族.结论 氟达拉滨显著抑制MM细胞生长,诱导细胞凋亡;其作用机制涉及多个凋亡相关基因表达改变.     

Xbp-1基因沉默对硼替佐米诱导人多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响

本研究旨在探讨xbp-1基因沉默对硼替佐米诱导骨髓瘤细胞株NCI-H929(H929)凋亡的影响。通过小发夹RNA(shRNA)干扰xbp-1基因表达,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测靶细胞凋亡率,采用Wes-ternblot检测XBP-1蛋白水平。结果表明:通过慢病毒载体PLL3.7介导的xbp-1 shRNA表达,能有效抑制H929细胞XBP-1蛋白表达,xbp-1 shRNA表达细胞的凋亡率显著高于对照组[(10.13±0.61)%vs(2.5±0.2)%,p0.05];经硼替佐米处理后,xbp-1基因功能缺陷的H929细胞的凋亡率显著高于空载体组[(45.07±1)%vs(2.73±0.25)%,p0.05]。结论:xbp-1基因沉默能够显著增强硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞的促凋亡活性。     

骨髓微环境对多发性骨髓瘤瘤细胞AP-1家族成员基因表达的调节作用

本研究旨在探讨骨髓微环境对多发性骨髓瘤(MM)细胞AP-1家族成员基因的调节作用。采用免疫磁珠方法分选8例多发性骨髓瘤患者CD138+的瘤细胞并与破骨细胞共培养,用实时定量PCR方法检测与破骨细胞共培养的瘤细胞和与破骨细胞共培养的瘤细胞AP-1家族成员c-jun、junD、fos和fosB的表达量。结果显示,多发性骨髓瘤患者的外周血单个核细胞经破骨细胞培养液培养后10-14天形成破骨细胞,瘤细胞与破骨细胞共培养后与未与破骨细胞共培养相比较,细胞活力明显增高,c-jun、junD、fos和fosB表达量均降低。结论:骨髓微环境可抑制AP-1家族成员的表达,促进MM瘤细胞存活,抑制瘤细胞凋亡。     

8-氯腺苷酸诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡的实验研究

本研究探究8-氯腺苷酸对多发性骨髓瘤细胞的可能作用。以多发性骨髓瘤细胞株RPMl8226细胞为体外模型,在观察8-氯腺苷酸对细胞生长、活力及形态学影响的基础上,应用流式细胞术检测细胞DNA含量分布和细胞表面Annexin—V的含量,以DNA凝胶电泳技术评判细胞凋亡与否,并应用Westernblot检测药物处理前后细胞内细胞周期调控蛋白cylinE和CDK2的变化。结果表明：低浓度8-氯腺苷酸（1—30μmol／L）能够明显地抑制RPMl8226细胞的生长,显著降低其细胞活力,且呈时间和浓度依赖性。进一步细胞形态学观察、流式细胞术及DNA凝胶电泳分析显示,这些浓度的8-氯腺苷酸诱导RPMl8226细胞凋亡。Western blot检测表明,8-氯腺苷酸可通过影响细胞周期调控蛋白cylin E和CDK2的表达而干扰细胞增殖。结论：8-氯腺苷酸能够有效地抑制多发性骨髓瘤细胞生长并诱导其凋亡。     

Ang-1在多发性骨髓瘤患者中的表达及临床意义

目的 研究血管生成素-1(angiopoietin-1,Ang-1)及其受体Tie-2在多发性骨髓瘤(MM)患者和骨髓瘤细胞株RPMI8226的表达情况,探讨其意义.方法 采用RT-PCR和Western blot方法检测112例MM患者、24例非肿瘤患者(对照组)以及RPMI8226细胞株中Ang-1及其受体Tie-2的表达水平,分析阳性率及表达水平在MM患者与对照组、MM不同分期间的差异,探讨Ang-1表达与MM患者骨髓微血管密度、临床分期及预后的关系.结果 MM组Ang-1表达阳性率、表达水平均显著高于对照组(P＜0.05);Ang-1表达阳性率在初治组和复发/难治MM组的差异无统计学意义(P＞0.05),但复发/难治MM组的Ang-1表达水平高于初治组(P＜0.05);Tie-2 mRNA仅在12例MM患者中检出,对照组未检出.MM患者骨髓微血管密度(25.21±0.80)明显高于对照组(5.23±0.20)(P＜0.01);Ang-1阳性患者的骨髓微血管密度(32.98±1.70)高于Ang-1阴性患者(16.55±1.30)(P＜0.05);Ang-1表达阳性率在Ⅱ期和Ⅲ期MM患者中差异无统计学意义(52.1%对60.9%,P＞0.05),但Ⅲ期MM患者Ang-1蛋白的表达水平(0.40±0.07)明显高于Ⅱ期患者(0.22±0.04)(P＜0.05);初治患者中,治疗无效组Ang-1表达阳性率(70.0%)明显高于有效组(19.1%)(P＜0.01).结论 Ang-1在MM患者中高表达;Ang-1表达与MM临床分期、预后判断及靶向治疗有关.     

多发性骨髓瘤中BAFF-R表达及其对细胞存活影响的研究

目的 研究多发性骨髓瘤（MM）中B淋巴细胞刺激因子受体（BAFF-R）基因、蛋白表达水平;并进一步研究BAFFR对MM细胞生长存活的影响.方法 应用RT-PCR,ELISA,Western Blot等技术检测BAFF-R在MM细胞中的表达;WST-1,TUNEL凋亡实验,Western Blot检测BAFF-R对MM细胞增殖、凋亡的影响.结果 BAFF-R mRNA和蛋白表达于MM细胞中;与对照组相比,BAFF-R阻断性抗体（1,5,15 μg/ml）可抑制KM3细胞增殖,t值分别为79.78,72.21,76.88;P值均为0.000,即BAFF-R促进KM3细胞增殖;同时,BAFF-R阻断性抗体组（15 μg/ml）细胞凋亡明显高于对照IgG组;BAFF-R阻断性抗体组抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低18％,促凋亡蛋白Bax表达增加43％,说明BAFF-R能够抑制MM细胞凋亡.结论 BAFF-R对MM细胞生长存活有一定影响,BAFF-R对多发性骨髓瘤的发生发展发挥一定作用.     

多发性骨髓瘤患者巨噬细胞感染蛋白1α表达的研究

溶骨性骨质破坏为多发性骨髓瘤（MM）的突出临床表现，然而MM及其骨病的发病机制仍不清楚。巨噬细胞感染蛋白1α（MIP-1α）为肿瘤细胞、淋巴细胞等分泌的一种可溶性因子。近年来的研究表明它与MM的发病有关。我们检测了30例MM患者骨髓单个核细胞（MNC）培养上清液的MIP-1α水平和24例MM患者骨髓基质细胞（BMSC）培养上清液的IL-6水平，以探讨MIP-1α与MM和MM骨病发病的关系。