大肠杆菌HX88108膜孔蛋白初步研究

为了解大肠杆菌ＨＸ８８１０８耐药机理中有无膜孔蛋白缺失骑车,用十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳检测了大肠杆菌ＨＸ８８１０８的膜蛋白,并与膜孔蛋白标准株进行比较分析。     

血小板生成素突变体融合蛋白表达及纯化研究

目的：用大肠杆菌融合蛋白表达载体ｐＭＡＬ－ｃ２构建人血小板生成素突变体融合蛋白表达质粒ｐＭＡＬ－ＴＯＰＭ，方法：采用基因重组和表达，ＳＤＳ－聚丙烯酰胺胶电泳和蛋白纯化技术。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明，ＩＰＴＧ诱导５ｈ后大肠杆菌ＪＭ１０９表达到最高水平，约占大肠杆菌菌体总体蛋白的３６．６％，除了大肠杆菌ＲＲ１不表达以外，大肠杆菌ＤＨ５αＨ１０１均有较高水平的表达，表达产物血小板生成素突变体融合蛋     

人促红细胞生成素在大肠杆菌中融合高表达：稀有密码子对…

本实验分别用两种融合表达载体（ｐＧＥＸ－２Ｔ及ｐＤＳ－６Ｈ）在大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ中表达人促红细胞生成素（ｈ－ＥＰＯ）。结果发现，虽然ｈ－ＥＰＯ基因中大肠杆菌使用频率为０％或１％的密码子占密码子总量的１４．３％，但实验中却取得了较高的蛋白表达量。ｐＧＥＸ－２Ｔ和ｐＤＳ－６Ｈ中表达的融合蛋白（分子量：４４４００和２３８００）分别占细菌总蛋白的２９．７％和１７．５％。从而提示，一个基因中的密码子使     

人促红细胞生成素在大肠杆菌中融合高表达：稀有密码子对外源蛋白翻译速率的影响

本实验分别用两种融合表达载体（ｐＧＥＸ－２Ｔ及ｐＤＳ－６Ｈ）在大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ中表达人促红细胞生成素（ｈ－ＥＰＯ）。结果发现，虽然ｈ－ＥＰＯ基因中大肠杆菌使用频率为０％或１％的密码子占密码子总量的１４．３％，但实验中却取得了较高的蛋白表达量。ｐＧＥＸ－２Ｔ和ｐＤＳ－６Ｈ中表达的融合蛋白（分子量：４４４００和２３８００）分别占细菌总蛋白的２９．７％和１７．５％。从而提示，一个基因中的密码子使用频率与翻译延长速率之间可能不是一种简单的对应关系。表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ中５＇融合基因长度达１３００ｂｐ，而ｐＤＳ－６Ｈ中仅为３６ｂｐ，而ｐＤＳ－６Ｈ但两者表达水平却无显著差异，因此作为翻译起始限制因素的翻译起始区的ＡＴＧ下游顺序仅需长约３６个核苷酸。     

Accumulation of ciprofloxacin and lomefloxacinin fluoroquinolone-resistant st rains of Escherichia coli

目的：研究膜孔蛋白OmpF缺失和主动外排在耐药大肠杆菌蓄积亲水性氟喹诺酮环丙沙星、洛美沙星中的作用和意义。方法：菌体内药物蓄积量和主动外排的作用采用荧光测定法;细菌膜孔蛋白以SDS-PAGE分析。研究的菌株包括大肠杆菌K-12膜孔蛋白缺失突变株JF701(OmpF^ )、JF703(OmpC^ );敏感株Ecs及其实验室诱变耐药株R2、R256,临床分离耐药株R5、R6。结果：Ecs中的药物蓄积稳态浓度与JF701一致,较JF703高1/3（环丙沙星）或1/2（洛美沙星）,但JF703仍对氟喹诺酮敏感;而耐药菌中的药物蓄积量除R2稍高于JF703外,较敏感菌低2-10倍。加入DNP后,两个药物的蓄积量均增高,尤其耐药株的升高显,表达这些菌株的主动外排（泵）系统功能明显增强。膜孔蛋白检查发现,Ecs株有OmpF和OmpC,R2、R256缺失OmpF,R5、R6缺失OmpC。结论：大肠杆菌减少对亲水性氟喹诺酮的蓄积量涉及OmpF缺失和主动外排（泵）,而后可能是一重要因素。     

不同心功能患者氧自由基变化的研究

测定５０例正常人和１２５例不同心功能心脏病患者红细胞ＳＯＤ、血浆ＬＰＯ及全血ＧＳＨ－ＰＸ，并计算ＧＳＨ－ＰＸ／ＬＰＯ比值。结果表明：Ｉ～Ⅳ级心功能患者ＳＯＤ活性及ＧＳＨ－ＰＸ／ＬＰＯ比值均明显低于正常对照组（Ｐ＜０．００１），但与心功能分级无明显相关关系，ＧＳＨ－ＰＸ在不同心功能组间变化也无规律性，提示ＳＯＤ活性变化只是心脏病损的表现之一，与心衰程度关系不大，ＬＰＯ可作为心脏病损和心衰程度重要指标之一。在分析脂质过氧化程度时，ＧＳＨ－ＰＸ／ＬＰＯ比值较单用ＧＳＨ－ＰＸ敏感，但ＧＳＨ－ＰＸ／ＬＰＯ比值是否较单用ＬＰＯ敏感还有待更多的研究来证实。     

冠心病患者体内脂质过氧化损伤的临床研究

本文测定了３０例ＣＨＤ患者及２０例健康者血脂、ＬＰＯ、ＯＸ－ＬＤＬ、ＳＯＤ、ＧＳＨ－ＰＸ水平，发现ＣＨＤ患者血浆ＨＤＬ－Ｃ、ＬＤＬ－Ｃ／ＨＤＬ－Ｃ、ＡｐｏＢ、ＬＰＯ、ＯＸ－ＬＤＬ水平明显超过健康对照者，而其血浆ＬＤＬ－Ｃ、ＡｐｏＡ、ＡｐｏＡ１／ＡｐｏＢ、ＳＯＤ、ＧＳＨ－ＰＸ水平无明显低于健康对照者，并发现ＣＨＤ患者血浆ＬＰＯ水平与ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ－Ｃ、ＬＤＬ－Ｃ／ＨＤＬ－Ｃ、ＯＸ－ＬＤＬ、Ａｐｏ     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌外膜蛋白与耐药机制的研究进展

细菌的膜孔蛋白及其形成的孔道是细菌与外界交流的主要途径,也是抗生素透过细菌细胞膜的重要通道。细菌膜孔蛋白合成降低或膜孔蛋白缺失可阻碍抗生素进入细菌,从而引起细菌对抗生素耐药。在细菌的耐药机制研究方面,膜孔蛋白的作用日益受到关注,文章从大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌入手,对其膜孔蛋白的特点、构成、合成调控机制及其与细菌耐药的关系进行综述。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌外膜蛋白与耐药机制的研究进展

细菌的膜孔蛋白及其形成的孔道是细菌与外界交流的主要途径,也是抗生素透过细菌细胞膜的重要通道。细菌膜孔蛋白合成降低或膜孔蛋白缺失可阻碍抗生素进入细菌,从而引起细菌对抗生素耐药。在细菌的耐药机制研究方面,膜孔蛋白的作用日益受到关注,文章从大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌入手,对其膜孔蛋白的特点、构成、合成调控机制及其与细菌耐药的关系进行综述。     

慢性肾炎病人血浆LPO，GSH－PX和VitE的测定

检测了４０例慢性肾炎患者血浆ＬＰＯ水平，ＧＳＨ－ＰＸ活性及ＶｉｔＥ含量。结果表明，患者血浆ＬＰＯ水平高于对照组，ＧＳＨ－ＰＸ活性及ＶｉｔＥ含量均低于对照组。ＬＰＯ水平与ＧＳＨ－ＰＸ及ｖｉｔＥ呈负相关；ＬＰＯ、ＧＳＨ－ＰＸ及ＶｉｔＥ均与肾功能指标存在显著相关关系。提示患者抗氧化能力降低与ＬＰＯ水平升高有关，且与肾功能损害程度有关。     

耐头孢酮的的E.coliHX88108株的β—内酰胺酶研究

近年国外报道许多对第三代头孢菌素耐药的细菌是由于产生新的β－内酰胺酶所致，为探讨耐头孢哌酮的Ｅ．ｃｏｌｉＨＸ８８１０８及其４株转化菌ＰＦＣ，ＰＦＴ１ＰＦＴ２ＰＦＴ３的β－内酰胺酶性质，进行了β－内酰胺酶底物轮廓测定，酶抑制剂棒酸和舒巴坦敏感性研究以及薄层分析性等电聚焦电泳。     

大肠杆菌头孢哌酮抗性基因亚克隆及序裂初步分析

为了确定耐药质粒所编码β－内酰胺酶衍化类型,用人介入临床分离出一大肠杆菌耐药质粒ｐＦＣ包哌酮抗性基因,经分段亚克隆,构建重组质粒ｐＦＢ１、ｐＦＢ２、ｐＦＢ３,对上述３个重要闰分别测序获得的抗生基因序列经Ｉｎｔｅｒｎｅｔ互联网同源性检索,表明该抗性基因部分序列,与肺炎克雷伯氏菌编码超广谱β－内酰胺酶ＴＥＭ－５２的抗性基因序列存在高度同源性（９７％）,提示ｐＦＣ头孢哌酮抗性基因所编码的β－内酰胺酶可能     

Characterization of cefoperazone resistance gene on plasmid pFC in E. coli HX88108]

OBJECTIVE: To investigate the characterization of cefoperazone resistance gene (CPZr) on plasmid pFC in E. coli HX88108 and inquire into the mechanism of resistance to CPZ at the molecular level. METHODS: E. coli HX88108 strain which demonstrated high-level resistance to cefoperazone (MIC, > 512 micrograms/ml) was isolated from a severely infected patient in 1988. Five plasmids coexisting in the strain were designated pFC, pFT1; pFT2, pFT3 and pFX, respectively. Four plasmids except pFX conferred CPZ resistance. Cefoperazone resistance gene (CPZr) has been cloned from plasmid pFC. beta-lactamase assays with Nitrocefin were performed. RESULTS: The expression product of CPZr was beta-lactamase. The high level beta-lactamase enzymatic activities against cephaloridine of CPZr transformants which were detected spectrophotometrically at 260 nm wave length demonstrated high level similarities to that of pFC. MICs of 18 antibiotics were determined according to a guideline of NCCLS by broth dilution method. CPZr transformants showed moderate level resistance to ampicillin, cefazolin, cefazolin, cefamandole and CPZ (MIC, 64 micrograms/ml). Meanwhile, susceptibility testing results demonstrated that the level of resistance to CPZ of pFC transformant in this study (MIC, 64 micrograms/ml) was much lower than that in 1988 (MIC, > 512 micrograms/ml) and resistance to nofloxacin and aminoglycosides was not observed. Induction experiment and temperature-sensitive mutation of CPZ resistance were performed. CPZr colonal strains revealed the higher-level of resistance to CPZ (MIC, 512 micrograms/ml) due to antibiotic CPZ induction rather than temperature sensitive mutation. CONCLUSION: This observation suggests that resistance to antibiotics encoded by plasmid might have been lower or lost under no antibiotic stress in a certain period, but higher under heavy stress.     

大肠杆菌耐药质粒头孢哌酮抗性基因的研究

目的　通过对头孢哌酮抗性基因 ( CPZΓ)的性质研究 ,进一步探讨 E.coli HX8810 8多质粒共存并介导第三代头孢菌素耐药的分子机理。方法　采用 Nitrocefin法检测 CPZΓ表达产物 ,用紫外线分光光度计测定β-内酰胺酶活性 ,采用试管二倍液体稀释法进行 CPZΓ克隆菌株对 18种抗生素的敏感性测定 ,同时还进行头孢哌酮( CPZ)对 CPZΓ克隆菌株耐药性诱导试验和温度敏感突变试验。结果　 CPZΓ 表达产物为 β-内酰胺酶 ,其酶活性强且与耐药质粒 p FC表达产物的活性基本一致。CPZΓ 只编码对氨苄青霉素、第一、第二代头孢菌素和第三代头孢菌素中 CPZ的耐药性 ,而对其他抗生素敏感。实验结果还显示了质粒 p FC经多次传代后介导 CPZ的耐药性显著下降 ,诺氟沙星、氨基糖甙类耐药性消失。CPZΓ 克隆菌株 CPZ耐药性增加为药物诱导所致 ,而非温度敏感突变。结论　耐药基因 CPZΓ 是通过编码 β-内酰胺酶介导产生 CPZ耐药性的 ,在抗生素压力下 ,CPZΓ 克隆菌株对 CPZ的耐药可以显著增加     

大肠杆菌耐药质粒的头孢哌酮抗性基因克隆和定位

用鸟枪法从耐药质粒ＰＦＣ上克隆到头孢哌酮抗性基因，快速小规模制备质粒ＤＮＡ进行限制性酶切分析鉴定含重组质粒的克隆株，经多次传代，克隆株抗性表达稳定。多种限制性内切酶谱分析并构建重组质粒的物理图谱与质粒ｐＥＣ物理图谱比较，定位出头孢哌酮抗性基因在ｐＥＣ物理图谱上３．２ｋｂ至４．８ｋｂ区间内，其分隔量约１．６ｋｂ。     

大肠杆菌sRNA sdsR表达水平与其耐药性的相关性分析

目的 旨在探究临床分离的大肠埃希菌株中sRNA sdsR的表达水平与环丙沙星以及头孢噻肟耐药性之间的关系.方法 采用实时荧光定量PCR方法 测定医院2018年1月—2018年12月从临床标本非重复分离得到的50株大肠埃希菌的sRNA sdsR的表达水平,并通过pearson相关分析确定环丙沙星及头孢噻肟耐药性与sRNA...     

多重PCR检测临床产ESBLs大肠埃希菌的耐药基因型研究

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药性、产ESBLs的阳性率及耐药基因之间的关系。方法采用Kirby-Bauer(K-B)琼脂扩散法检测120株临床分离的大肠埃希菌对18种抗生素的耐药性,用酶抑制剂增强实验纸片法检测产ESBLs菌株,运用多重PCR技术检测相关耐药基因,用DNA序列分析确认基因亚型。结果120株大肠埃希菌产ESBLs的有51株,阳性率为42.5%。120株大肠埃希菌对亚胺培南全部敏感,产ESBLs的大肠埃希菌对头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶等头孢类抗菌药物的耐药率高达100%;51株产ESBLs菌株其中46株扩增到CTX-M型耐药基因,44株扩增到TEM型基因,2株扩增到SHV基因,1株OXA型基因,未检出PER和VEB型。结论大肠埃希菌产ESBLs较高,耐药显著,碳青酶烯类抗生素是目前治疗产ESBLs大肠埃希菌最有效的药物;产ESBLs大肠埃希菌的主要基因型别为CTX-M型和TEM型。     

食品中大肠埃希菌耐药性与整合子的关系研究

目的研究食品中大肠埃希菌的整合子携带情况及其与耐药性之间的关系。方法PCR检测细菌总DNA中1、2、3类整合酶基因，确定细菌携带整合子的情况。阳性菌株进一步检测整合子的可变区，分析插入基因盒的序列。结果50株大肠埃希菌中19株携带1类整合子，2株携带2类整合子，集中分布在对4种以上抗生素耐药的菌株中。插入基因盒主要是dfr和aadA类基因盒，各种基因盒组合中最常见的是dfr17-aadA5。结论细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致，但是单个菌株的耐药谱与整合子的耐药基因盒缺乏对应关系。     

非靶位基因突变及外膜通透性的改变对大肠杆菌喹诺酮耐药和多重耐药的影响

目的：探讨非靶位基因突变及外膜通透性改变对大肠杆菌喹诺酮类耐药和多重耐药的影响。方法：PCR扩增大肠杆菌marOR区并进行DNA测序分析，提取外膜蛋白进行组成型分析。结果：在R410菌株中，存在两处新位点的突变：1870(T→C，Val→Ala)和1879(A→C，terminator→Ser)。3株对喹诺酮类药物高耐且同时多耐的菌株均存在OmpF缺失。结论：多重耐药基因marOR区内的突变可能导致MarA表达增加和外膜蛋白组成型改变(OmpF缺失)，此在大肠杆菌对喹诺酮类药物的耐药和多重耐药中起一定作用。