蛇床子素对TM3小鼠睾丸间质细胞增殖及雄激素合成与分泌的影响

目的:研究蛇床子素对体外培养的睾丸间质细胞雄激素合成与分泌的影响。方法:以TM3小鼠睾丸间质细胞为实验对象,采用1~320μmol/L蛇床子素干预TM3细胞24h、48h和72h,以MTT检测细胞增殖;采用5~80μmol/L蛇床子素干预TM3细胞24h和48h,RT-q PCR技术检测雄激素合成酶相关基因mRNA表达;采用80μmol/L蛇床子素干预TM3细胞15min~12h,RTq PCR技术检测即刻早期基因mRNA表达,并运用Western blot方法检测CYP17A1蛋白表达,ELISA方法检测细胞分泌液睾酮含量。结果:与对照组(Con)比较,160~320μmol/L蛇床子素作用48h和72 h均显著抑制TM3细胞增殖。不同浓度蛇床子素干预TM3细胞24h和48h后,与对照组比较,40μmol/L和80μmol/L蛇床子素显著促进类固醇急性调节蛋白(Star)基因表达;80μmol/L蛇床子素显著促进胆固醇侧链裂解酶(Cyp11a1)基因表达;大于20μmol/L蛇床子素显著增强细胞色素P45017α1羟化酶(Cyp17a1)基因表达、尤其是干预48h上调幅度更大,但是对CYP17A1蛋白表达无明显作用;也显著促进3β类固醇脱氢酶(Hsd3b2)基因表达;大于10μmol/L蛇床子素干预24h可显著促进黄体生成素受体(Lhr)基因表达。此外,80μmol/L蛇床子素干预12h可显著促进Star和Nr4a2基因表达,作用15min~1h即可显著增强Nr4a1基因表达。且蛇床子素可升高TM3细胞睾酮水平。结论:蛇床子素具有促进小鼠睾丸间质细胞雄激素合成与分泌的药理作用。     

熊去氧胆酸促进肝癌HepG2细胞凋亡研究

目的 探讨熊去氧胆酸(UDCA)对肝癌HepG2细胞凋亡的影响及作用机制。方法 取对数生长期的肝癌HepG2细胞分为0μmol/L组、5μmol/L组、10μmol/L组,各组分别加入0、5、10μmol/L UDCA药液干预24 h。24 h后采用MTT法检测HepG2细胞增殖抑制率,倒置光学显微镜观察HepG2细胞的数量、形态变化,流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡率和线粒体下降的膜电位,RT-PCR法检测Bcl-2 mRNA相对表达量,Western blot检测Bcl-2蛋白相对表达水平。结果 与0μmol/L组比较,5μmol/L组和10μmol/L组HepG2细胞增殖抑制率均升高(P均<0.05),且UDCA药物浓度越高抑制率越强;与0μmol/L组比较,5μmol/L组和10μmol/L组HepG2细胞数量减少,细胞脱落变圆,悬浮细胞相对增加;与0μmol/L组比较,5μmol/L组和10μmol/L组HepG2细胞凋亡率均增加(P均<0.05),线粒体下降的膜电位均增加(P均<0.05);与0μmol/L组比较,5μmol/L组和10μmol/L组Hep...     

野艾蒿提取物对肝癌细胞系HepG2增殖的影响

目的探讨野艾蒿提取物对肝癌细胞系Hep G2增殖的影响及对肝癌细胞系Hep G2细胞内Bcl-2、Bax及Caspase-3基因表达的影响。方法给予不同浓度的野艾蒿提取物(0,200,400,800μg/m L)处理肝癌细胞系Hep G2 24,48,72 h,采用MTT法检测不同浓度的野艾蒿提取物对肝癌Hep G2细胞增殖的影响;用RT-PCR法检测肝癌细胞Hep G2中Bax、Bcl-2以及Caspases-3基因的表达情况。结果给予野艾蒿提取物400,800μg/m L处理72h后,Bax表达水平明显低于0μg/m L浓度(P<0.05);给予野艾蒿提取物800μg/m L处理24,48,72 h后,Bcl-2、Caspases-3基因表达水平均明显低于0μg/m L浓度(P均<0.05)。结论野艾蒿提取物对肝癌细胞系Hep G2的增殖有一定的抑制作用,其机制是野艾蒿提取物可抑制Bcl-2基因表达,上调Bax、Caspases-3基因的表达。     

槲皮素对前列腺癌PC3细胞VEGF及COX－2表达水平的影响

目的：探讨槲皮素有效抑制前列腺癌PC3细胞的作用机理。方法：观察不同浓度（37．5、75、150μmol／L）槲皮素处理PC3细胞48h后对细胞增殖的影响,观察150μmol／L槲皮素处理24h后对PC3细胞基因血管内皮生长因子（VEGF）、环氧化酶－2（COX－2）表达的影响及细胞形态变化。结果：不同浓度槲皮素处理PC3细胞48h后,细胞生长出现了不同程度的抑制,且浓度越高,抑制作用越强。150μmol／L槲皮素处理PC3细胞24h后,细胞的VEGF及COX-2表达水平均有下调,与空白对照组、DMSO组比较,差异均有显著性意义（P〈0．05）,而空白对照组与DMSO组比较,差异均无显著性意义（P〉0．05）。空白对照组与DMSO组细胞形态相似,细胞呈梭形或多角形,活力强;槲皮素组细胞出现了不同程度的皱缩,较多细胞变圆,少量细胞漂浮,表现出细胞生长受到抑制。结论：槲皮素抑制前列腺癌PC3细胞生长可能与下调COX－2及VEGF基因的表达水平有关。     

小檗碱对兔血脂代谢及维生素D受体和胰岛素诱导基因2基因表达的影响

目的研究小檗碱对高脂模型兔血脂代谢的影响,并探讨其调血脂作用是否与维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)、胰岛素诱导基因2(insulin-induced gene 2,Insig-2)的表达变化有关。方法雄性新西兰大耳白兔40只随机分为对照组、模型组、阳性药非诺贝特(30 mg/kg)组和小檗碱低、高剂量(28、112 mg/kg)组。兔喂饲高脂饲料8周建立高脂模型,给药8周后测定各组兔血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)和脂蛋白a(LPa)等指标的水平。RT-PCR法检测脂肪组织中VDR和Insig-2基因表达的变化。结果与对照组比较,模型组兔血清TC、TG、LDL-C、ApoB及LPa水平明显升高(P<0.05),而ApoA1水平则明显降低(P<0.05);经小檗碱处理后,兔血清中TC、TG、LDL-C、ApoB及LPa的水平较模型组显著降低(P<0.05),同时ApoA1水平则明显升高(P<0.05);RT-PCR检测结果显示,小檗碱干预后兔脂肪组织中VDR、Insig-2 mRNA的表达较模型组显著升高(P<0.05),且低剂量小檗碱的效果更明显。结论小檗碱具有明显的调血脂作用,其机制可能是通过上调脂肪组织VDR和Insig-2 mRNA表达来实现的。     

构树总黄酮诱导HepG2细胞凋亡及其机理研究

目的:探讨构树总黄酮诱导HepG2细胞凋亡的机理。方法:采用流式细胞术观察构树总黄酮对HepG2细胞周期、细胞内活性氧(ROS)水平的影响,用qRT-PCR测定c-Myc,p53,bax,bcl-2和caspase-3基因mRNA表达水平的变化。结果:构树总黄酮剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖。62.5μg/ml的构树总黄酮作用24 h,显著抑制HepG2细胞增殖,增加凋亡细胞比例,并将HepG2细胞阻滞于G1期;100μg/ml的构树总黄酮作用24 h,显著上调HepG2细胞p53、bax、caspase-3的mRNA水平,显著下调cMyc、bcl-2的mRNA水平;200μg/ml的构树总黄酮作用HepG2细胞6 h,显著增加细胞内ROS含量。结论:构树总黄酮能调节HepG2细胞c-Myc、p53、bax、bcl-2和caspase-3基因表达,并通过氧化应激,诱导HepG2细胞进入线粒体凋亡途径。     

莱菔硫烷诱导HepG-2细胞G2/M期阻滞及其对Cdk1和CyclinB1蛋白表达的影响

目的：研究莱菔硫烷（SFN）在体外对人肝癌HepG-2细胞G2/M期的阻滞作用,并探讨其分子作用机制。方法：10、20、40μmol·L-1的SFN处理体外培养的HepG-2细胞株48h后,采用流式细胞仪检测SFN对HepG2细胞周期的影响;WesternBlot法检测SFN对HepG2细胞内Cdk1、p-Cdk1（Thr14）和CyclinB1蛋白表达的影响。结果：SFN作用于HepG-2细胞48h后,随着SFN浓度的增大,G2/M期细胞比例逐渐升高,当SFN浓度达到40μmol·L-1时,G2/M期细胞比例达到31.95%,且出现凋亡峰;随SFN浓度的增大,细胞内Cdk1和CyclinB1蛋白的表达量显著降低（P〈0.01或P〈0.05）,同时p-Cdk1（Thr14）的表达显著升高（P〈0.01或P〈0.05）。结论：SFN可诱导人肝癌HepG-2细胞发生G2/M期阻滞;SFN可通过下调HepG-2细胞内Cdk1和CyclinB1蛋白的表达、上调p-Cdk1（Thr14）的蛋白表达水平,进而抑制Cdk1-CyclinB1复合物的形成和活化使人肝癌HepG-2细胞阻滞在G2/M期。     

齐墩果酸对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的：采用高浓度胰岛素体外诱导培养HepG2细胞,建立胰岛素抵抗的细胞模型,观察齐墩果酸对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响。方法：用CCK-8法筛选齐墩果酸作用于HepG2细胞的实验浓度,然后用高浓度胰岛素诱导HepG2细胞胰岛素抵抗,给予不同浓度的齐墩果酸（0.1、1、10、100μmol·L-1）、吡格列酮（10μmol·L-1）干预,以葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖消耗量。结果：1不同浓度齐墩果酸对HepG2细胞增殖无明显影响。2与对照组比较,高浓度胰岛素作用24 h后,模型组葡萄糖消耗量明显降低（P〈0.01）;与模型组比较,齐墩果酸组HepG2细胞葡萄糖消耗量随浓度增加而增加,成一定的量效关系,浓度为10μmol·L-1和100μmol·L-1时葡萄糖消耗量显著增加（P〈0.01或P〈0.05）。结论：齐墩果酸能改善高浓度胰岛素诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗。     

迷迭香酸抑制自噬诱导HepG2细胞凋亡的作用研究

目的:观察迷迭香酸(RA)对HepG2细胞凋亡和自噬的作用,探讨自噬与凋亡之间的相互作用。方法:用不同浓度迷迭香酸作用于HepG2细胞24h、48h、72h。MTT法检测细胞存活率,观察迷迭香酸对HepG2细胞核形态的影响,流式细胞术检测细胞凋亡变化,台盼蓝染色法观察细胞自噬泡情况,透射电镜观察HepG2细胞的自噬变化,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Bcl-2和自噬相关蛋白(LC3)、p62的表达水平。采用迷迭香酸+3-甲基腺嘌呤(3-MA,自噬抑制剂)或迷迭香酸+雷帕霉素(RAP,自噬诱导剂)分别培养处理HepG2细胞,观察细胞增殖、细胞凋亡情况及相关蛋白表达变化。结果:与对照组相比,迷迭香酸(6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L)均能降低HepG2细胞的存活率,诱导HepG2细胞发生凋亡,具有量效和时效关系,减少细胞内自噬泡和自噬小体,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值,减少Bcl-2的表达,增加Cleaved Caspase-3、p62蛋白的表达。与迷迭香酸25μmol/L处理组相比,迷迭香酸25μmol/L+3-MA 1.0μM/mL应用可诱导HepG2细胞凋亡增加,可进一步减少细胞内自噬泡和自噬小体数目,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,进一步抑制HepG2细胞的自噬水平,减少Bcl-2的表达,增加Cleaved Caspase-3和p62表达;迷迭香酸25μmol/L+RAP 1.0μM/mL处理HepG2细胞,增加细胞内自噬泡和自噬小体数目,升高LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,可以抑制和逆转迷迭香酸诱导的细胞自噬水平下降,增加Bcl-2的表达,减少Cleaved Caspase-3和p62表达,细胞凋亡水平下降,这说明抑制或增强自噬时,迷迭香酸能改变对HepG2细胞的凋亡影响作用。结论:迷迭香酸可通过抑制自噬促进HepG2细胞的凋亡。     

芪术抗癌方对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨芪术抗癌方对肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的调控作用。方法：体外培养HepG2细胞，加入不同浓度芪术抗癌方（0,250,500,1 000 mg/L）处理48 h。采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测细胞活力，采用免疫印记法检测凋亡相关蛋白c-Caspase-3和c-Caspase-9表达变化。结果：CCK-8结果显示芪术抗癌方可呈浓度依赖性抑制HepG2细胞增殖，与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05),1 000 mg/L组抑制效果最好，芪术抗癌方刺激HepG2细胞后，凋亡相关蛋白c-Caspase3及c-Caspase9表达增加，呈浓度依赖性，在1 000 mg/L组达到最高且差异有统计学意义（c-Caspase3增加1.83倍，P<0.05；c-Caspase9增加1.06倍，P<0.05）。结论：芪术抗癌方可抑制肝癌HepG2细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

氨基葡萄糖与铜钴镍三种金属离子的配位性能研究

目的 研究氨基葡萄糖的质子化和与Cu2 ,Co2 ,Ni2 的配位性能.方法 用pH电位滴定法测定(298±0.1)K,I=0.10 mol/LKNO3条件下氨基葡萄糖的质子化常数及与Cu2 ,Co2 ,Ni2 的二元配合物的生成常数.结果 氨基葡萄糖pKa为7.78,配合物生成常数的对数分别为Cu2 ,5.22(110),9.38(120);Co2 ,3.19(110),5.99(120);Ni2 ,3.40(110),6.31(120).结论 氨基葡萄糖与Cu2 ,Co2 ,Ni2 配位时不解离出醇羟基质子,不同金属离子配合物生成常数的大小符合Irving-William序列.     

关于PD2、PA2、PD2＇计算方法的探讨

目的：叙述近年来关于PD2、PA2、PD2’各自含义、计算方法，以阐明其研究意义。方法：通过对药理实验方法学中有关内容的阐述，以及对近10年来相关文章的对比分析和总结，得到一些对今后的药物研究有帮助的参考性知识。结论：PD2、PA2、PD2’的测定基本上是首先通过某一药物的动物或计算机虚拟实验，然后用图解法、计算方法（包括软件计算）或者二者联用的方法三种思路求得各自具体数值。     

Pim-2减轻H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞损伤及三七皂苷R1的干预研究

目的:研究Pim-2基因在过氧化氢(H_2O_2)诱导乳鼠心肌细胞损伤中的作用及三七皂苷R1的干预效应。方法:H_2O_2干预原代培养的乳鼠心肌细胞造成细胞损伤模型,分别以三七皂苷R1和Pim-2 RNAi干预细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术测细胞凋亡,实时定量PCR法测细胞内Pim-2 mRNA水平,Western blotting法测Pim-2、Bax及Bcl-2蛋白表达。结果:H_2O_2上调Pim-2 mRNA及蛋白水平,抑制细胞增殖与促进凋亡,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.001)。Pim-2基因沉默后,细胞活性降低,凋亡增加,LDH与MDA浓度增加,SOD活性降低,Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白水平降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.001)。三七皂苷R1预处理能显著增加细胞活力,抑制细胞凋亡,上调Pim-2蛋白水平,与H_2O_2组相比差异有统计学意义(P<0.001)。结论:Pim-2能减轻H_2O_2致心肌细胞损伤,可能与抗凋亡,抗氧化,调控凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2表达有关;三七皂苷R1抗心肌细胞损伤与Pim-2有关。     

Neuroprotective 2-(2-phenylethyl)chromones of Imperata cylindrica

Bioactivity-guided fractionation of the methanolic extract of the rhizomes of Imperata cylindrica afforded a new compound, 5-hydroxy-2-(2-phenylethyl)chromone (1), together with three known compounds, 5-hydroxy-2-[2-(2-hydroxyphenyl)ethyl]chromone (2), flidersiachromone (3), and 5-hydroxy-2-styrylchromone (4). Among these four compounds, 1 and 2 showed significant neuroprotective activity against glutamate-induced neurotoxicity in primary cultures of rat cortical cells.     

银杏内酯B对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化应激损伤的影响

目的研究银杏内酯B(Ginkgolide B,GB)对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化应激损伤的影响。方法将对数生长期的H9c2心肌细胞随机分为5组:空白对照组、H_2O_2干预组、GB(50、100和200μmol/L)干预组。检测细胞存活率、培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)含量、细胞中氧自由基(ROS)含量和抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量;检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,检测NF-k B蛋白表达并进行半定量分析。结果与H_2O_2干预组比较,GB(100、200μmol/L)干预组细胞存活率显著升高;培养液中AST、CPK、LDH含量和细胞中ROS、MDA含量显著降低,SOD、CAT活性显著升高,细胞凋亡状况明显改善、凋亡率显著降低,NF-k B蛋白表达显著下调;其中GB(200μmol/L)干预组GSH-Px活性显著降低。结论 GB能够有效提高细胞存活率,改善抗氧化酶活性、降低ROS含量、降低氧化应激损伤,下调NF-k B蛋白表达、降低细胞凋亡率,提示GB对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化应激具有抑制作用。     

姜黄素对HepG2细胞固醇调控元件结合蛋白-2表达的影响

目的研究姜黄素对人肝癌细胞株(Human hepatocellular liver carcinoma cell line,HepG2)固醇调控元件结合蛋白-2(sterol regulatory element-binding protein-2,SREBP-2)基因表达的影响,从信号调控通路水平进一步探讨姜黄素的降胆固醇作用机理。方法分别利用蛋白免疫印迹和实时荧光定量聚合酶链反应(Polymerase Chain Reactionm,PCR)技术研究姜黄素对HepG2细胞SREBP-2核片段碱性螺旋-环-螺旋蛋白(basic helix-loop-helix protein,bHLH)表达及SREBP-2 mRNA的影响。结果20 mol/L姜黄素可以促进HepG2细胞SREBP-2核片段bHLH增多,而对SREBP-2mRNA表达无影响。结论姜黄素可以通过促进HepG2细胞SREBP-2核片段bHLH的增多,上调低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDL-R)的表达,起到降低血清胆固醇的作用。     

冠心平对H2O2致血管内皮细胞损伤的影响

目的：观察冠心平对H2O2致血管内皮细胞损伤过程中NOS与ET的影响。探讨冠心平治疗冠心病的可能机制。方法：体外培养内皮细胞ECV304,用100umol/L H2O2损伤细胞,随机分成正常对照组、模型对照组、阳性药对照组、冠心平大、中、小剂量组。用血清药理学方法给药,继续培养后显微镜下观察细胞生长情况,检测NOS与ET。结果：100umol/L H2O2对ECV304有损伤作用。冠心平能显著提高NOS的活性;显著减少H202诱导ECV304ET的产生。结论：冠心平可降低H2O2对ECV304的损伤程度,其机理可能与其提高NOS活性,增加NO合成,并且减少ET的合成,从而调节血管舒缩功能有关。     

油茶皂苷对LO2和HK-2细胞的毒性作用研究

目的:观察油茶皂苷(SQS)对人正常肝细胞(LO2)和肾小管上皮细胞(HK-2)的细胞毒性作用,并初步探讨其毒性作用机制。方法:体外培养LO2和HK-2细胞,采用MTT法评价SQS对LO2和HK-2细胞的增殖抑制作用,观察不同浓度药物对乳酸脱氢酶(LDH)释放率的影响,并检测细胞裂解上清液超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。结果:与阴性对照组比较,各浓度的SQS均可明显抑制LO2和HK-2细胞增殖(P<0.01),且呈浓度依赖性。在50.0~200.0 mg/L范围内,SQS能明显提高LO2和HK-2细胞培养上清液中LDH活力(P<0.05或P<0.01),显著降低SOD的活力和增加MDA的含量(P<0.01)。结论:SQS对LO2和HK-2细胞有一定的细胞毒性作用,其作用机制可能是通过增加对细胞膜通透性的影响及氧化损伤而实现。     

虾青素改善H2O2对成骨细胞损伤的影响

虾青素是一种非维生素A原的羟酮式类胡萝卜素。其中文习惯命名为虾青素，英文习惯命名为Astaxanthin。中文系统命名为3，3’-二羟基-4，4’-二酮基-β，β-胡萝卜素。虾青素广泛存在于自然界的海洋动物体、藻体及少数陆生植物体内，并具有多种生物学功能，其中尤以抗氧化、防止心血管疾病、提高免疫力和抗癌作用突出。而虾青素对成骨细胞抗氧化损伤的相关研究国内尚未报道，