检测不同组织基底膜IV型胶原α链确定Alport综合征遗传型

目的 探讨中国人不同遗传型Ａｌｐｏｒｔ综合征（ＡＳ）患者基底膜α链的表达及其在判断遗传型方面的应用。方法 应用间接免疫荧光学方法,对确诊为ＡＳ的７例Ｘ连锁显性遗传型男性先证者、１例无家族史的ＡＳ女童及其部分农系成员不同组织基底膜中Ⅳ型胶原α链［α（Ⅳ）］的表达进行了检测并与正常组对照。结果 Ｘ连锁显性遗传型男性患者,皮肤基底膜（ＥＢＭ）α５（Ⅳ）链、明小球基底膜（ＧＢＭ）、肾小球基底膜（ＴＢＭ）及     

Alport综合征与Ⅳ型胶原

为探讨Ａｌｐｏｒｔ综合征时Ⅳ型胶原α链的分布改变，应用间接免疫荧光和免疫电镜的方法，观察了Ⅳ型胶原α１～α６（Ⅳ）和Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ和Ⅵ型胶原在肾（１０３例）和皮肤（４０例）组织中的分布。结果：６３％的病例存在α３～α６（Ⅳ）的分布异常；两种异常类型直接与遗传方式有关：在Ｘ染色体连锁显性遗传时，男性肾和皮肤组织中α３～α６（Ⅳ）均消失，女性则呈不连续的节段性分布；在常染色体隐性遗传时，肾小球基底膜（ＧＢＭ）中α３～α５（Ⅳ）均消失，而ＧＢＭ外肾组织基膜中α３～α４（Ⅳ）消失，α５～α６（Ⅳ）的分布完全正常。提示，Ⅳ型胶原α链分布异常是Ａｌｐｏｒｔ综合征的一个诊断标志；皮肤活检观察α５～α６（Ⅳ）的分布有助于Ｘ染色体连锁显性遗传患者及携带者的诊断。     

皮肤及肾组织Ⅳ型胶原α链测定在早期诊断遗传性肾病的意义

目的　探讨皮肤及肾组织基底膜Ⅳ型胶原α链在薄基底膜肾病 (TBMN)患儿中早期诊断Alport′s综合征 (AS)中的作用。方法　对 2 1例有肾脏病家族史且诊断为TBMN患儿采用间接免疫荧光法检测皮肤基底膜 (EBM)及肾小球基底膜 (GBM )Ⅳ型胶原α链分布情况。结果　 2 1例中 18例EBMα1α5( )连续 ,GBMα1α3 α5( )连续。另 3例中 1例男童肾炎性肾病 :EBMα1( )连续、α5(- ) ,GBMα1( )连续、α3 α5(- ) ;2例女童孤立性血尿 :EBMα1( )连续、α5( )不连续 ,GBMα1( )连续、α3 α5( )不连续。此 3例最后确诊为AS。结论　对TBMN患儿行皮肤及肾活检检测基底膜α1、α3 、α5链 ,可早期发现AS患儿     

Alport综合征与IV型胶原

为探讨Ａｌｐｏｒｔ综合征时Ⅳ型胶原α链的分布改变，应用间接免疫荧荧光和免疫电镜的方法，观察了Ⅳ型胶原α１￣α６（Ⅳ）和Ｉ、Ⅲ、Ⅴ和Ⅵ型胶原在肾（１０３例）和皮肤（４０例）组织中的分布。结果：６３％的病例存在α３￣α６（Ⅳ）的分布异常；两种异常类型直接与遗传方式有关：在Ｘ染色体连锁显性遗传时，男性肾和皮肤组织中α３￣α６（Ⅳ）均消失，女性则呈不连续的节段性分布；在常染色体隐性遗传时，肾小球基底膜（Ｇ     

超微病理检查结合免疫荧光学方法诊断遗传性肾炎

目的探讨诊断遗传性肾炎（Ａｌｐｏｒｔ综合征）的新指标。方法应用超微病理检查结合免疫荧光方法,对４例电镜显示肾小球基底膜（ＧＢＭ）变薄或厚薄不均的患儿进行研究。结果２例Ａｌｐｏｒｔ综合征患儿的肾活检组织标本电镜下ＧＢＭ弥漫性厚薄不均,广泛变厚和分层,并与变薄的ＧＢＭ并存。间接免疫荧光检查ＧＢＭ中抗Ⅳ型胶原α３链、α５链抗体完全阴性,抗Ⅳ型胶原α１链抗体明显增强。而２例薄基底膜肾病患儿肾活检组织尽管电镜下ＧＢＭ也有变薄、断裂和分层现象,且其中１例有节段性增厚,但间接免疫荧光检查ＧＢＭ中抗Ⅳ型胶原成分均无改变。结论超微病理结合间接免疫荧光学检查,有助于诊断Ａｌｐｏｒｔ综合征,并能将其与薄基底膜肾病相鉴别     

肾组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色法诊断Alport综合征

目的 探讨肾组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色方法 在Alport综合征(AS)患者诊断中的应用,从而为AS的诊断提供新的技术手段.方法 将对照组及已确诊的X连锁型、常染色体隐性遗传型AS及血尿息儿各2例肾组织分别进行石蜡切片Ⅳ型胶原α3和α5链免疫组织化学染色和冰冻切片的间接免疫荧光染色,比较分析染色结果 .具体方法 根据PV-9000试剂盒提供的实验方法 ,进行染色.采用高压锅加热、胃蛋白酶消化和蛋白酶消化3种抗原修复方法 分别对正常肾组织切片进行抗原修复,并比较其修复效果.免疫荧光染色采用间接免疫荧光染色法.结果 肾小球基底膜Ⅳ型胶原α3、α5链免疫组织化学染色在对照和血尿组为连续的线状阳性;在x连锁显性遗传型女性患儿为间断线状阳性,在男性患儿为阴性;在常染色体隐性遗传患者均为阴性,在肾小囊及部分肾小管基底膜上Ⅳ型胶原α5链为阳性.结果 均与免疫荧光染色法结果 一致.结论 肾脏组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色法可用于诊断As,为诊断As提供了新的手段.     

基底膜α(Ⅳ)链染色正常的Alport综合征基因突变特点

目的　检测、分析编码基底膜Ⅳ型胶原α5链基因COL4A5突变及其特点 ,正确理解α5 (Ⅳ )链免疫荧光学检查结果及意义。方法　报告 1例 7岁男性患儿 ,血尿半年 ,肾功能、听力及眼部检查均正常 ;肾脏病理电镜示基底膜大部分均匀变薄 ;有血尿、肾功能不全家族史。应用间接免疫荧光学方法检测该患儿肾脏基底膜α3(Ⅳ )、α4 (Ⅳ )和α5 (Ⅳ )链以及皮肤基底膜α5 (Ⅳ )链。应用逆转录 聚合酶链反应和直接测序的方法分析α5 (Ⅳ )链mR NA ,应用PCR和直接测序方法分析COL4A5基因。结果　患儿肾小球基底膜α3(Ⅳ )、α4 (Ⅳ )和α5 (Ⅳ )链以及皮肤基底膜α5 (Ⅳ )链染色均正常。mRNA和基因组DNA分析均证实碱基替代突变 (917G >A) ,导致α5链第 2 39位甘氨酸被精氨酸取代 ,为新发现的突变。结论　首次报道了皮肤和肾小球基底膜α5 (Ⅳ )链染色正常 (阳性 )的我国X连锁型Alport综合征男性患者COL4A5基因突变及特点。提示应正确应用和理解基底膜α5 (Ⅳ )链免疫荧光学检查结果 ,X连锁型Alport综合征男性患者皮肤和肾小球基底膜α5 (Ⅳ )链染色即便正常 (阳性 ) ,当家族史及其它临床资料仍怀疑Alport综合征时 ,应进行COL4A5基因的检测和分析。     

Ⅳ型胶原间接免疫荧光检测在诊断不同遗传型Alport综合征中的应用

目的探讨Ⅳ型胶原间接免疫荧光检测在诊断不同遗传型Alport综合征中（AS）的应用。方法通过间接免疫荧光检测皮肤、肾脏基底膜Ⅳ型胶原α3、α5链表达,协助诊断2例AS患儿,并明确其遗传型。结果例1,男童,肉眼血尿,阳性家族史（其母4岁时出现血尿、蛋白尿持续至今）,皮肤基底膜α5链染色阴性,其母皮肤基底膜α5链染色间断阳性,确诊X连锁显性遗传型AS。例2,女童,肉眼血尿,家族史阴性,肾活检病理电镜下基底膜厚薄不均,致密层分层、网状改变。皮肤基底膜α5链染色阳性,肾脏基底膜上α3链呈阴性,α5链在肾小球基底膜呈阴性,包氏囊和肾小管基底膜阳性,确诊常染色体隐性遗传型AS。结论Ⅳ型胶原间接免疫荧光检测对于诊断AS及确定遗传型具有重要价值,但对染色结果要正确理解。     

肾组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色法诊断Alport综合征

Alport综合征(Alport syndrome,As)的诊断问题日益受到关注.采用抗不同α(Ⅳ)的单克隆抗体,对肾及皮肤活检组织进行冰冻切片免疫荧光染色对Alport综合征的诊断具有重要价值[1],但冰冻切片难以长期保存,异地标本难以运送,相对于此石蜡切片有其优势.     

用PCT—SSCP方法检测中国人Alport综合征COL4A5基因突变

目的 检测中国人Ａｌｐｏｒｔ综合征（ＡＳ）患者编码Ⅳ型胶原α链的ＣＯＬ４Ａ５基因突变。方法 提取１８例中国Ｘ连锁显性遗传型ＡＳ患者基因组ＤＮＡ,据ＣＯＬ４Ａ５基因中与外显子相邻的内含子序列设计引物,分别作ＤＮＡ聚合酶链式反应（ＰＣＲ）,扩增了该基因第２０～５１外显子。以琼脂糖凝胶电泳鉴定产物,作单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析检测ＰＣＲ产物,对迁多率异常者进行ＤＮＡ测序。结果 ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析发     

儿童Alport综合征30例肾脏和皮肤Ⅳ胶原分布特点

目的通过分析30例Alport综合征（AS）患儿肾脏和皮肤Ⅳ胶原分布特点,探讨Ⅳ胶原分布与临床表型的关系。方法对30例Alport综合征患儿资料进行总结,并分析。肾组织穿刺和皮肤活检中肾脏和皮肤Ⅳ胶原分布特点,总结不同的Ⅳ型胶原仪链分布方式与临床表型的相关关系：结果30例患儿中29例表现为肾脏和（或）皮肤Ⅳ胶原Ⅸ链分布异常,1例正常。其中24例（占80．0％）为X连锁显性遗传性AS（XDAS）,男20例,女4例;5例（占16．7％）为常染色体隐性遗传性AS（ARAS）。XDAS组患儿1例临床表现为孤立性血尿型（4．2％）,6例为血尿合并蛋白尿型（25．0％）,16例为肾痫综合征型（66．7％）,1例为肾功能不全型（4．1％）;平均尿蛋白定量男1．74g／24h,女0,83g／24h;3例发现高频听力减退均为男性,男性患儿病情明显重于女性。ARAS组患儿5例均表现为血尿合并蛋白尿型;平均尿蛋白定量0．62g／24h;未发现眼耳损害。结论XDAS患儿病情重,病程进展快,不同性别在病情严重程度上行住明显的差异;ARAS患儿病情相对较轻。Alport综合征的Ⅳ型胶原α链分布与临床表型密切相关。肾脏和皮肤Ⅳ胶原免疫荧光检测是目前诊断Alport综合征的有效手段,对判断疾病严重程度和远期预后鄯奄重要意义。     

肾小球疾病患者尿中Ⅳ型胶原的测定及临床意义

目的探讨尿中Ⅳ型胶原在肾小球疾病诊断中的应用价值。方法应用竞争抑制性酶联免疫吸附实验，检测了２０例健康人及３８例肾小球疾病患者尿中Ⅳ型胶原的水平，并与肾活检的组织病理进行了比较。结果病理改变较为严重的患者以及肾活检为系膜增生性肾小球肾炎并伴有局灶性硬化、粘连和（或）新月体形成的患者，尿中Ⅳ型胶原的含量明显高于正常对照；但肾活检仅显示系膜增生性肾小球肾炎的患者，尿中Ⅳ型胶原水平同正常对照。结论尿中Ⅳ型胶原水平的测定，可以作为一个无创性的临床检测指标，有助于肾小球疾病的病理变化及其程度的诊断。     

X连锁型Alport综合征女性COL4A5基因型及表型分析

目的 认识Alport综合征（AS）女性临床表型以及基因型特征。方法 AS女性共9例,年龄2－62岁;临床表现以血尿为主,伴蛋白尿（＋）－（＋＋）,除1例血BUN和肌酐升高,其余患者在进入本研究时肾功能均正常。未发现典型的眼部病变及感音神经性耳聋。AS男性共11例,年龄2－28岁;临床表现为血尿、蛋白尿（＋）－（＋＋＋＋）,2例进入本研究时（分别为17岁和28岁）已出现尿毒症或因尿毒症已行肾移植;7例伴有感音神经性耳聋,2例伴有眼部病变。以正常皮肤组织对照4例、正常肾组织对照2例及健康成人6例基因组DNA为对照。应用间接免疫荧光学方法,检测8／9例AS女性和9／11例AS男性皮肤基底膜、3／9例AS女性和6／11例AS男性肾脏基底膜Ⅳ型胶原α5链。应用PCR－SSCP 方法分析全部研究对象的COL4A5基因全部51个外显子,出现多态性的外显子直接测序分析。结果 AS女性与AS男性相比,临床症状相对轻,少有出现肾功能减退,多不伴有肾外症状。（1）AS女性皮肤和肾脏基底膜α5（Ⅳ）链均为间断阳性,而正常对照为连续阳性、男性AS表现为完全阴性。（2）PCR－SSCP分析显示5／9例女性AS患者分别在第4、9、20、39和第46外显子扩增产物的DNA条带出现特殊的迁移类型：DNA单链既有与正常对照的DNA迁移率相同的条带,同时还有不同于正常对照的DNA单链条带。（3）其中1例AS女性第4外显子DNA序列分析显示两种序列,一种与正常序列相同,另一种DNA序列出现C→A碱基替代突变。结论 X连锁型女性AS基因异常的特点为“杂合”,这种“杂合”状态可能成为女性AS临床表型相对较轻的分子基础。     

47例Alport综合征临床与病理分析

目的 分析不同年龄组Alport综合征患儿的临床与病理特点.方法 回顾性分析我院1990年1月-2007年1月47例住院并且明确诊断为Alport综合征患儿的临床及病理资料.结果 男32例,女15例,男女比例2.1:1,年龄15个月～13岁,平均9.0岁.47例患儿中39例有明确家族史,其中X连锁显性遗传37例;常染色体隐性遗传2例.28例(59.3%)患儿首发症状为肉眼血尿或镜下血尿,14例(29.8%)患儿为蛋白尿、水肿.Alport综合征临床表现为孤立性血尿11例(23.4%)、血尿合并蛋白尿17例(36.2%)、肾病综合征14例(29.8%)、肾功能不全5例(10.6%);孤立性血尿型、血尿合并蛋白尿型见于研究病例中的所有年龄组儿童,而肾病综合征型、肾功能不全型仅见于7～13岁年龄组儿童.肾组织病理显示,33例(70.2%)光镜改变为系膜增生性病变(MsPGN),13例(27.6%)表现为局灶节段性肾小球硬化(FSGS),1例(2.1%)表现为膜增生性肾小球肾炎(MPGN).免疫荧光多以IgM沉积为主19例(40.4%),以IgA沉积为主9例(19.1%),以IgG沉积为主9例(19.1%),免疫荧光阴性10例(21.4%).电镜下39例出现典型的肾小球基底膜病变,8例显示基底膜变薄.47例患儿中46例肾脏和(或)皮肤Ⅳ胶原a链分布异常.结论 Alport综合征男性患儿发病率高于女性.不同年龄组Alport综合征肾脏表现有明显差异,血尿伴随疾病始终,但随着病程延长,尿蛋白量逐渐增加.Alport综合征肾脏病理光镜下无特征表现,主要以系膜增生为主,小年龄组患儿电镜下GBM病变不典型,需结合Ⅳ胶原a链免疫荧光检测明确诊断.     

儿童Alport综合征30例肾脏和皮肤IV胶原分布特点

目的 通过分析30例Alport综合征(AS)患儿肾脏和皮肤Ⅳ胶原分布特点,探讨Ⅳ胶原分布与临床表型的关系.方法 对30例Alport综合征患儿资料进行总结,并分析肾组织穿刺和皮肤活检中肾脏和皮肤Ⅳ胶原分布特点,总结不同的Ⅳ型胶原α链分布方式与临床表型的相关关系.结果 30例患儿中29例表现为肾脏和(或)皮肤Ⅳ胶原α链分布异常,1例正常.其中24例(占80.0%)为X连锁显性遗传性AS(XDAS).男20例,女4例;5例(占16.7%)为常染色体隐件遗传性AS(ARAS).XDAS组患儿1例临床表现为孤立性血尿型(4.2%),6例为血尿合并蛋白尿型(25.0%),16例为肾病综合征型(66.7%),1例为肾功能不全型(4.1%);平均尿蛋白定量男1.74 g/24h,女0.83g/24 h;3例发现高频听力减退均为男性,男性患儿病情明显重于女性.ARAS组患儿5例均表现为血尿合并蛋白尿型;平均尿蛋白定量0.62 g/24 h;未发现眼耳损害.结论 XDAS患儿病情重,病程进展快,不同性别在病情严重程度上存在明显的差异;ARAS患儿病情相对较轻.Alport综合征的Ⅳ型胶原α链分布与临床表型密切相关.肾脏和皮肤Ⅳ胶原免疫荧光检测是目前诊断Alport综合征的有效手段,对判断疾病严重程度和远期预后都有重要意义.     

早期诊断Alport′s综合征5例及文献复习

目的探讨早期诊断Alport′s综合征(AS)的方法及文献复习。方法临床表现为孤立性血尿和肾病综合征(NS)5例,均行肾组织光镜、免疫荧光电镜检查和皮肤基底膜(EBM)Ⅳ型胶原α链免疫测定,2例行肾小球基底膜(GBM)Ⅳ型胶原α链免疫测定。结果患儿光镜均表现肾小球轻微病变或局灶节段增生,电镜表现肾小球基底膜弥漫性变薄,无诊断意义。患儿EBM和GBMα1均( )连续,但3例男童EBMα5链(-)、GBMα3、α5(-);2例女童EBMα5( )但不连续,GBMα3、α5( )但不连续,达到早期诊断目的。结论对于孤立性血尿、NS(激素治疗耐药),肾活检电镜表现基底膜变薄患儿,有条件应常规进行皮肤和GBMⅣ型胶原α链检测,为诊断和鉴别诊断提供依据。