TGF-β对毛囊生长发育影响的研究进展

转化生长因子-β（TGF—β）属于TGF-β超家族,在毛囊发育过程中,TGF-β1、TGF—β2及其受体在毛囊中的表达具有部位和毛发生长周期的特异性,且有多种信号途径参与TGF-β对毛囊生长发育的调控,TGF—β转基因或基因敲除鼠的研究也证实TGF—β相关信号是毛囊发育所必需的。表明TGF-β在毛囊发生发育和周期性循环中起到十分重要的作用。本文就TGF-β在毛囊发育和生长周期中的作用进行综述。     

利用毛囊干细胞和成纤维细胞重建全层皮肤的研究

目的建立利用毛囊干细胞和成纤维细胞进行全层皮肤重建的实验方法.方法取美容手术切取的头皮组织,K19免疫荧光染色定位毛囊干细胞,消化、分离、体外培养,以胶原-成纤维细胞聚合物为基质,采用气-液界面对第2代毛囊干细胞立体培养14 d,建立全层皮肤培养模型,并行组织学及K1免疫荧光染色观察.结果K19免疫荧光染色定位毛囊干细胞存在于毛囊外根鞘处,与成纤维细胞联合体外气-液界面立体培养14 d,获得的皮肤类似物,可见真皮基底膜形成,表皮多层上皮有序、多角形排列,上层细胞出现角化,真皮部成纤维细胞均匀分布于胶原基质中,角质细胞形成分化特异标志物K1染色阳性.结论毛囊外根鞘处的毛囊干细胞具有高增殖能力并向表皮细胞分化,可成功利用毛囊干细胞和成纤维细胞进行皮肤重建,为临床应用奠定基础.     

增生性瘢痕组织中转化生长因子-β异构体与受体含量变化及对瘢痕形成的影响

目的　观察转化生长因子 - β三种异构体 (TGF- β1 、β2 和 β3)和其受体 - I[TGF- βR(I) ]在增生性瘢痕和正常皮肤组织中的表达特征及其对瘢痕形成的影响。方法　 16块被测标本中包括增生性瘢痕 8例 (块 ) ,其对应的正常皮肤组织 8块。用免疫组织化学方法和常规病理技术分析其在增生性瘢痕和正常皮肤组织中的定位和表达量的变化规律。结果　正常皮肤组织中 ,TGF-β1 、β2 和β3细胞因子的阳性信号主要见于表皮细胞、汗腺及毛囊细胞的胞浆和细胞外基质中 ,TGF-βR(I)蛋白则主要定位于表皮细胞和部分成纤维细胞的细胞膜上。增生性瘢痕组织中 ,TGF-β1 、β3细胞因子的阳性信号主要见于表皮基底层细胞内 ,TGF- β2 的阳性颗粒则分布于表皮细胞和部分成纤维细胞的胞浆和胞核内。与正常皮肤组织相比 ,增生性瘢痕组织内 TGF- β1 和 β3含量明显下降 ,TGF- β2 含量变化不显著 ,而 TGF- βR(I)阳性颗粒含量和分布无明显改变。结论　 TGF- β1 、β2 和 β3在增生性瘢痕组织中含量和分布的不同变化规律显示 ,这三种细胞因子可能参与增生性瘢痕的形成 ,而 TGF-βR(I)蛋白及其下游的信号分子是否与瘢痕的形成相关 ,还需深入地探讨。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞中转化生长因子 -βⅠ、Ⅱ型受体的表达及调控

目的：了解瘢痕疙瘩成纤维细胞中转化生长因子(Transforming growth factor,TGF)－βⅠ、Ⅱ型受体的表达及TGF－β1,β3对其的影响。方法；体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFB）和正常皮肤成纤维细胞（NFB），利用免疫组化及计算机图像分析系统测定TGF-βⅠ、Ⅱ型受体含量。结果：KFB胞浆内阳性信号明显强于NFB（P＜0．05）；经TGF－β1,β3处理组胞浆内阳性信号差别均不明显（P＞0．05）。结论：KFB存在高表达的TGF－βⅠ、Ⅱ型受体；TGF－β1,β3均能促进KFB TGF－βⅠ、Ⅱ型受体的表达。     

角蛋白在头皮中的分布及其在干细胞研究中的意义

目的：研究不同类型角蛋白（Cytokeratin，CK）在头皮及毛囊结构中表达分布情况。方法：将头皮病理切片和游离培养的毛囊使用不同类型角蛋白抗体进行免疫组化染色，检测角蛋白的分布情况。结果：CK15主要分布在毛囊隆突部，部分毛囊外根鞘最外层也有一定的表达；CK19主要分布在汗腺、毛囊外根鞘最外层和皮肤的基底层；CK16在表皮层和毛囊外根鞘均有阳性表达；CK10主要分布在头皮表皮的基底上层和皮脂腺腺泡的最外层。结论：不同类型角蛋白在头皮和毛囊结构中具有明显差异性，CK19和CK15阳性表达细胞可能具有干细胞特性。     

皮肤干细胞在胎皮中分布的免疫组织化学研究

目的 采用免疫组织化学方法研究不同时期胚胎皮肤中的干细胞，分析皮肤干细胞的形态、分布特点及发育过程中在胎儿皮肤中的迁徙、增殖分化特征，探讨皮肤干细胞与皮肤发生发育的关系。方法 不同发育时期胎儿皮肤，取材、固定、制成石蜡切片，SP法检测整合素-β1、角蛋白19（K19）、K14、K10和PCNA的表达。结果 胚胎发育期可见整合素-β1阳性的细胞在基底层散在分布。随胎龄增加，整合素-β1表达减弱，表达范围减小。同时，胚胎发育的不同阶段K19均在表皮基底层强烈表达。表皮分层期后，K14阳性细胞从基底层向上延伸至亚基底层。而K10作为表皮终末分化细胞的标志，主要分布在表皮的中层和外层。此外，在毛囊发育过程中，胎皮表皮嵴的细胞相互聚集成团，形成毛囊初级原基，表达整合素-β1、K19、K14及PCNA为阳性。随着毛囊的形成、成熟，皮肤干细胞主要聚集在与表皮相延续的外根鞘、毛囊隆突部及毛母质，表达整合素-β1、K19、K14和PCNA为阳性。结论 （1）皮肤的发生、发育与角蛋白的程序性改变密切相关；（2）毛囊的发生、发育受到毛乳头的诱导作用。毛囊成熟期后，皮肤干细胞主要迁移至与表皮相延续的外根鞘、毛囊隆突部及毛母质等处。此外，还发现毛乳头及其周围组织内分布着单核样细胞表达整合素-β1、K19和K14为阳性。     

乳酸对肌腱细胞转化生长因子-β表达的调节作用

目的探讨乳酸对免屈趾肌腱腱鞘、腱外膜和腱内膜细胞转化生长因子（TGF）-β及其受体产生的影响。方法从兔屈趾肌腱分离腱鞘、腱外膜和腱内膜细胞并分别进行培养,在使用25mmol／L的乳酸培养后,酶联免疫吸附试验定量检测TGF-β及其受体的表达,同时应用原位杂交和免疫组织化学技术测量TGF-β的表达。结果乳酸能显著增加3种细胞所有TGF-β及其受体的表达（P〈0．05）,其中腱鞘细胞的TGF-β1和TGF-β增加值最大,腱外膜细胞的TGF-β1和TGF-β的受体增加值最大,腱内膜细胞则为TGF-β增加值最大;乳酸还显著增加3种细胞的TGF-β表达。结论乳酸能显著增加肌腱细胞的TGF-β、TGF-β受体和TGF-β mRNA的表达,因此为肌腱愈合过程中调节TGF-β水平提供新的途径。     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β在溃疡与增生性瘢痕组织中的表达及其对创面修复的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与转化生长因子-β(TGF-β)在溃疡和增生性瘢痕组织中的表达特征以及与修复结果的关系.方法 21例标本包括体表慢性溃疡8例、增生性瘢痕8例和正常皮肤5例.用免疫组织化学法和常规病理技术确定两种生长因子在溃疡和增生性瘢痕的定位与表达量.结果 bFGF和TGF-β在正常皮肤中有少量表达,主要位于表皮基底细胞胞浆和细胞外基质.此外,bFGF还见于真皮毛细血管内皮细胞等.在溃疡组织bFGF与 TGF -β表达量明显增加,其中bFGF的阳性信号主要见于成纤维细胞和毛细血管内皮细胞,而TG F-β则仅见于炎性细胞.在增生性瘢痕TGF-β的表达为阴性,而bFGF则仍呈现出较高的表达量.结论在高浓度生长因子环境下创面修复延迟可能和生长因子与其受体结合障碍有关.研究结果还提示bFGF参与了瘢痕发生的全过程,TGF-β则主要作用于瘢痕形成早期.     

角质形成细胞源TGF-β1对成纤维细胞的作用

目的研究正常角质形成细胞分泌的TGF-β1对正常成纤维细胞生物学行为的影响。方法采用免疫组化方法检测角质形成细胞分泌TGF-β1，以不同浓度TGF-β1抗体阻断角质形成细胞条件培养液中的TGF-β1，观察阻断前后角质形成细胞条件培养液对正常成纤维细胞增殖，胶原分泌的影响。结果细胞玻片可见大量染色阳性角质形成细胞，经TGF-β1抗体阻断后的角质形成细胞条件培养液，对成纤维细胞的促增殖作用明显减弱，胶原分泌减少。结论正常角质形成细胞分泌大量TGF-β1，可促进成纤维细胞增殖，促进胶原分泌。     

角质形成细胞源TGF-β_1对成纤维细胞的作用

目的研究正常角质形成细胞分泌的TGF-β1对正常成纤维细胞生物学行为的影响。方法采用免疫组化方法检测角质形成细胞分泌TGF-β1,以不同浓度TGF-β1抗体阻断角质形成细胞条件培养液中的TGF-β1,观察阻断前后角质形成细胞条件培养液对正常成纤维细胞增殖,胶原分泌的影响。结果细胞玻片可见大量染色阳性角质形成细胞,经TGF-β1抗体阻断后的角质形成细胞条件培养液,对成纤维细胞的促增殖作用明显减弱,胶原分泌减少。结论正常角质形成细胞分泌大量TGF-β1,可促进成纤维细胞增殖,促进胶原分泌。     

转化生长因子β受体工及Smad4蛋白在肾癌中的表达及意义

目的：探讨转化生长因子β受体I（TGF-βRI）及Smad4在肾透明细胞癌（RCCC）及癌旁组织中的蛋白表达情况及临床意义。方法：采用免疫组织化学P—V法分别检测58例RCCC组织、36例癌旁组织中TGF—βRI和Smad4蛋白表达情况,并分析其表达水平与RCCC临床病理特征的关系。结果：①TGF—βRI蛋白在RC—CC、癌旁组织的阳性表达率分别为51．7％、80．6％,差异有统计学意义（P〈0．05）;Smad4蛋白在RCCC、癌旁组织的阳性表达率分别为56．9％、86．1％,差异有统计学意义（P〈0．05）。②TGF-βRI和Smad4蛋白在RCCC组织中的表达均与性别、年龄无关（P〉0．05）,而与肿瘤病理分级及临床分期相关（P〈0．05）。③TGF-βRI和Smad4蛋白表达呈正相关。结论：①TGF-βRI、Smad4在RCCC中的表达降低,提示TGF-βRI、Smad4的表达缺失可能参与了RCCC的发生、发展。②TGF—βRI与Smad4之间存在正相关,说明这两种因子在TGF—β信号通路中相互作用,共同参与了RCCC的发生、发展及转移。     

腺病毒介导hIL-24基因对瘢痕疙瘩表达Bcl-2等细胞因子的影响

目的：研究重组腺病毒介导hIL-24基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞表达Bcl—2、IL-6和TGF—β1的影响,探讨IL-24基因对瘢痕疙瘩的生物学作用。方法：体外培养人正常皮肤及瘢痕疙瘩成纤维细胞,用含有hIL-24基因的腺病毒载体感染瘢痕疙瘩成纤维细胞,应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ABC—ELISa）检测人正常皮肤及瘢痕疙瘩成纤维细胞中的Bcl-2、IL-6和TGF—β1的表达水平。结果：瘢痕疙瘩组的Bcl-2、IL-6和TGF-β1表达水平明显高于正常皮肤组;瘢痕疙瘩感染Ad．IL-24组的Bcl-2、IL-6和TGF-β1表达水平都低于腺病毒空载体组和瘢痕疙瘩组。结论：IL-24基因可抑制瘢痕疙瘩戍纤维细胞表达Bcl-2、IL-6和TGF—β1。     

截短型转化生长因子-βⅡ型受体在皮肤成纤维细胞的过度表达

目的　研究截短型转化生长因子 -β(TGF-β) 型受体在皮肤成纤维细胞的过度表达对 TGF-β1 自分泌的抑制作用。　方法　组织块法体外培养正常皮肤成纤维细胞 ,加入重组人 (rh) TGF- β1 (5ng/ ml)或含截短型 TGF- β 型受体基因的重组腺病毒 (50 pfu/ cell) ,并用 Northern印迹观察其对 TGF-β1 的基因调控。　结果　 rh TGF-β1 能上调TGF-β1 和 I型前胶原的基因表达。截短型 TGF-β 型受体的过度表达能减少细胞 TGF-β1 的基因表达。　结论　截短型TGF- β 型受体的过度表达可以通过阻断 TGF- β1 的信号转导来抑制皮肤成纤维细胞 TGF- β1 的自分泌。为研究瘢痕的基因治疗提供了新的策略     

结肠癌VEGF、TGF-β1、bcl-2表达与细胞增殖和血管形成的关系

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）、转化生长因子β1（TGF—β1）和bcl-2在结肠癌组织中的表达及其与细胞增殖和肿瘤血管形成的关系。方法采用免疫组化方法检测42例结肠癌患者手术切除后石蜡包埋标本中VEGF、TGF—β1、bcl-2的表达,并根据血管内皮计数判定微血管密度（MVD）。结果结肠癌组织中VEGF、TGF—β1与bcl-2表达主要见于细胞胞浆内,较正常结肠组织表达明显增高。VEGF,bcl-2阳性的结肠癌组织MVD值明显高于VEGF,bcl-2阴性组织中MVD值（P〈0．01）;TGF—β1阳性癌组织与TGF—β1阴性癌组织MVD值无明显差异性。结论结肠癌组织中VEGF、TGF-β1促进肿瘤细胞增殖和血管的形成,bcl-2抑制肿瘤细胞凋亡,VEGF和TGF—β1与bcl-2无明显相关性。     

胎鼠表皮干细胞的分离培养及毛囊再生研究

目的：分离培养胎鼠的表皮干细胞及毛囊乳头层细胞，通过动物模型观察两者复合移植后，上皮形成及毛囊的再生情况。方法：采用IV型胶原分离培养胎鼠表皮干细胞，检测β1整合素及角蛋白15的表达水平，测定其细胞周期及克隆形成率（以角质细胞为对照）；分离培养毛囊乳头层细胞，并接种在纤维蛋白胶中，与表皮干细胞膜片复合形成全层皮肤等同物，移植在裸鼠全层皮肤缺损创面作为实验组，同时将胎鼠成纤维细胞替代乳头层细胞作为对照组，8－10周后观察创面及囊的组织学变化。结果：胎鼠表皮干细胞表达高水平的β1整合素及角蛋白15；细胞周期分析显示，G1期细胞百分率为94．9％，S期为3．5％，提示为慢循环细胞周期；角质细胞的G1期细胞有百分率为74．1％，S期为17．5％；表皮干细胞的克隆形成率为15．3％，明显高于对照组的6．7％；裸鼠创面愈合后8－10周，实验组可见新生毛囊形成，对照组未见到此现象。结论：能初步实现对胎鼠表皮干细胞的体外分离培养；在毛囊乳头层细胞的诱导下，胎鼠表皮干细胞可参与形成新的毛囊结构。     

尿液TGF-β1对人尿道狭窄瘢痕成纤维细胞CXCR3表达的影响研究

目的：探索尿道狭窄复发患着尿液中转化生长因子β1（TGF—β1）水平的变化以及其与尿道疤痕组织细胞中CXC趋化因子受体3（CXCR3）表达水平变化的相关性。方法：选取尿道狭窄复发患者、尿道狭窄复发同时合行膀胱造瘘患者和健康者各50例,采用ELISA法定量分析三组患者尿液中TGF-β1的浓度．并通过Transwell小率实验研究不同浓度TGF-β1对成纤维细胞辽徙能力的影响。采用QPCR和流式细胞仪检测不同患者组成纤维细胞CXCR3受休的表达情况,并进一步探究高浓度TGF-β1对不同患者组成纤维细胞CXCR3受体表达的影响。采用重组pLVX-shRNA2-SiTβRⅡ真核载体与成纤维细胞进行转染。通过Q-PCR和流式细胞学方法评估转染后细胞TGF-β1受体与CXCR3受体的相互变化情况。结果：尿道狭窄复发组和狭窄复发并造瘘组患者尿液TGF-β1浓度明显高于正常组（P〈0．05）,相成各组成纤维细胞丧面CXCR3受体明显低于正常组。Transwell实验证实随着TGF-β1浓度的逐步升高,成纤维细胞的迁移能力得以相应增强,同时高浓度TGF-β1溶液环境町以显著降低各组成纤维细胞CXCR3的表达（P〈0．05）。真核载体转染细胞后,相关Q—PCR和流式细胞学方法也提示TβRⅡ表达的下调可以伴随CXCR3表达显著增强。结论：在尿道狭窄复发的进程中,尿液中TGF-β1浓度的变化可能起到非常重要的作用。相关成纤维细胞表面CXCR3受体表达水平可能受其影响而可能现显著的下调性变化,最终导致尿道周同组织瘢痕增生。     

TGF-β1对UVA照射皮肤成纤维细胞Ⅰ型，Ⅲ型胶原合成和表达的影响

目的：探讨转化生长因子-β1（tansforming gowth factor—beta 1,TGF—β1）对长波紫外线（ultraviolet A,UVA）照射皮肤成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原合成和表达的影响。方法：通过MTT法检测TGF-β1干预后成纤维细胞增殖活性,选择UVA照射剂量为15J／cm^2,联免疫法（ELISA）测定不同剂量即TGF—β1小剂量组（UVA＋TGF—β1 0．1ng／ml）、中剂量组（UVA＋TGF—β1 1ng／ml）、大剂量组（UVA＋TGF—β1 10ng／ml）处理后成纤维细胞清夜中Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量,半定量RT—PCR检测成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达。结果：UVA照射体外培养的皮肤成纤维细胞,导致成纤维细胞增殖活性下降,给予不同剂量TGF-β1干预后,成纤维细胞增殖活性与UVA照射组比较,明显提高;成纤维细胞上清液中Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量增加,成纤维细胞内Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达增强。结论：TGF-β1可提高UVA照射体外培养成纤维细胞增殖活性;增加UVA照射体外培养的皮肤成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量,增强成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达,对皮肤成纤维细胞起保护作用。     

肾上腺素对增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1、bFGF及Ⅰ型前胶原表达的影响

目的实验研究肾上腺素对体外培养人皮肤成纤维细胞中Ⅰ型前胶原、TGF—β1及bFGF表达的影响。方法实验采用RT-PCR检测。肾上腺素作用24h后bFGF、TGF-β1、人Ⅰ型前胶原的mRNA表达差异，并以ELISA检测bFGF、TGF-β1在肾上腺素作用24h后的蛋白表达差异。结果与对照组比较，肾上腺素上调bFGF mRNA及蛋白的表达和下调TGFβ1 mRNA及蛋白的表达；但在增生性瘢痕成纤维细胞中，0．20μmol／L的。肾卜腺素可显著下调人Ⅰ型前胶原mRNA水平的表达，而在正常皮肤成纤维细胞中，0．05、0．1和0．2μmol／L的。肾上腺索均可下调人Ⅰ型前胶原mRNA水平的表达，且其差异有统计学意义。结论在增生性瘢痕成纤维细胞生长融合后早期（24h），肾上腺素可促进成纤维细胞bFGF的mRNA和蛋白的合成，降低TGF—β1的mRNA和蛋白的生成，降低Ⅰ型前胶原mRNA的表达。     

粘着斑激酶在增生性瘢痕成纤维细胞中的表达和意义

目的探讨粘着斑激酶（FAK）在增生性瘢痕成纤维细胞（HSFB）中的表达和意义。方法运用细胞免疫组化技术，测定HSFB和正常皮肤成纤维细胞（NSFB）中的FAK、整合素α1、转化生长因子受体1（TGF-βR1）及α肌动蛋白（α—SMA）的表达；同时将HSFB分别用抗FAK、整合素α1、TGF-βR1及α—SMA抗体进行阻断培养，并测定培养前后整合素α1、TGF—βR1、α—SMA及FAK的表达。结果与NSFB相比，HSFB中的FAK、整合素α1、TGF—βR1、α—SMA的表达增高，差异具有显著意义（P〈0．05）。分别用抗整合素α1、TGF-βR1、α—SMA抗体进行阻断培养后，HSFB中的FAK表达下降（P〈0．01）；阻断FAK表达也可分别导致了整合素α1、TGF-βR1、α—SMA的表达降低（P〈0．01）。结论FAK对整合素α1、TGF-βR1及α—SMA的蛋白合成具有重要的调控作用，与增生性瘢痕的发生、发展关系密切。减少FAK在成纤维细胞中的过度表达，可能是抑制瘢痕增生、软化瘢痕的新途径。     

瘢痕成纤维细胞中TGF-β受体与整合素相互作用的实验研究

目的:了解TGF-β受体和整合素在瘢痕增生和挛缩过程中的作用.方法:通过荧光定量PCR法(FQ-PCR)测定经TGF-β受体、整合素和粘着斑激酶(FAK)抗体阻断后培养的瘢痕成纤维细胞TGF-β受体以及整合素表达量的变化.结果:经不同抗体阻断后培养的瘢痕成纤维细胞其TGF-β RI和整合素β 1的基因拷贝数均较阴性对照组有不同程度的下降(P＜0.05).结论:TGF-β受体和整合素介导的信号传导途径间可能存在着正反馈的效应,共同促进瘢痕的增生和挛缩.FAK是两条信号传导途径的交汇点和作用的中心环节.