缺血预处理对鼠肝细胞缺血再灌注损伤的影响

目的探讨缺血预处理对肝组织的保护作用及肝组织耐受缺血的安全时限。方法将42只SD大鼠分为实验组、对照组和假手术组(SO组),实验组和对照组再依3个不同时限(40、50、60min)各分IR40、IR50、IR60及IPC+IR40、IPC+IR50、IPC+IR60亚组。检测各组大鼠超氧化物歧化酶(SOD)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、丙二醛、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的含量,并行肝组织光镜、电镜观察。结果对照组SOD水平低于SO组,TNF-α、ALT及MDA水平高于SO组,差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组ALT、MDA水平和IPC+IR60亚组TNF-α水平均高于SO组,差异均有统计学意义(P<0.05);除IPC+IR60亚组TNF-α、MDA水平与IR60亚组比较差异无统计学意义(P>0.05);IPC+IR组其余亚组SOD、TNF-α、ALT及MD水平与IR组各相应亚组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论缺血预处理可明显减轻肝组织缺血再灌注所致肝损伤;预处理后肝门阻断50min可能是SD大鼠肝组织能耐受缺血的较安全时限。     

缺血预处理对缺血-再灌注大鼠肾脏缝隙连接蛋白43表达的影响

目的 研究缺血预处理对缺血-再灌注大鼠肾脏缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响,探讨Cx43在缺血-再灌注中的作用及其意义.方法 SD大鼠30只分3组:假手术Sham组、缺血-再灌注(I-R)组、缺血预处理(IPC)组.于再灌注2 h后检测肾组织匀浆一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)水平;肾组织切片HE染色行中性粒细胞(PMN)计数及Paller评分,量化肾损害程度;Western blot定量分析Cx43蛋白在肾组织中的表达.结果 IPC组肾组织中NO、总NOS(TNOS)、诱导型NOS(INOS)水平明显高于IR组;IPC组PMN计数及Paller评分明显低于IR组;IPC组Cx43蛋白表达明显高于IR组,IR组Cx43蛋白表达明显低于Sham组.结论 缺血预处理可能通过提高Cx43在肾组织中的表达减轻肾缺血再灌注损伤.     

缺血预处理对大鼠心肌缺血再灌注心肌梗死面积的影响

目的探讨缺血预处理组对大鼠缺血再灌注心肌细胞梗死面积的影响。方法制备大鼠缺血预处理（IP），缺血再灌注损伤（I／R）模型。使用IBAS全自动处理系统计算梗死面积。结果IP组心肌梗死范围明显较I／R组减少。结论缺血预处理能明显减少心肌梗死的范围。     

瑞芬太尼预处理和缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注早期细胞凋亡的影响

目的观察瑞芬太尼预处理和缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤早期细胞凋亡的影响及其机制。方法SD大鼠72只,随机分为假手术组(S组),缺血再灌注组(IR组),瑞芬太尼预处理组(R组),缺血预处理组(IP组)。分别在再灌注1、3、5h处死6只大鼠,取左肝内叶组织免疫组织化学法分别测定各组Bcl-2和Bax的表达,原位细胞凋亡法测定肝细胞凋亡的情况,光镜、电镜观察肝脏组织病理变化。结果与S组相比,IR组细胞凋亡指数、Bax表达均增高(P<0.05),而瑞芬太尼预处理和缺血预处理组减弱了缺血再灌注上述指标的升高(P<0.05),二者没有区别;IR组Bcl-2表达减少(P<0.05),瑞芬太尼预处理和缺血再灌注组可增强其在肝组织的表达(P<0.05),二者没有区别。病理检查显示瑞芬太尼预处理和缺血预处理减轻肝缺血再灌注损伤。结论瑞芬太尼预处理及缺血预处理都有抑制大鼠肝脏缺血再灌注损伤早期细胞凋亡的作用,均与上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达有关,瑞芬太尼可模拟缺血预处理的抗细胞凋亡作用。     

缺血预处理和缺血后处理对肾缺血-再灌注大鼠一氧化氮系统的影响

目的 探讨肾缺血预处理和缺血后处理对肾缺血-再灌注(I-R)损伤的影响机制.方法 SD大鼠50只均分为假手术组(A组)、I-R(B组)、缺血预处理组(C组)、缺血后处理组(D组)和联合处理组(E组).缺血45 rin再灌注24 h后取肾,检测一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量;HE染色观察肾组织病理变化情况,并进行中性粒细胞(PMN)计数和Paller's评分;TUNEL法观察肾组织细胞凋亡情况.结果 与B组比较,C、D、E组的SCr、BUN显著降低、肾组织MDA含量显著减少、肾组织SOD活性和肾NOS、NO水平显著增加、肾小管上皮细胞阳性凋亡率显著降低(P＜0.01).结论 缺血预处理和缺血后处理均能够减轻肾I-R损伤,可能与其增加NOS在肾脏的表达有关.     

缺血预处理对肝脏缺血——再灌注损伤的保护作用机制及应用

随着肝脏外科的发展，在临床上肝移植术越来越多地应用于多种肝脏疾病。肝门阻断、选择性半肝血流阻断、全肝血流阻断等一系列外科技术的应用，以及肝移植、休克等过程中，均遇到肝脏缺血再灌注(Ischemia／reperfusion，I／R)损伤问题。如何提高肝脏的自我保护能力，调动其内源性的保护机制，目前已成为肝脏外科发展的方向和热点。本文就近年来国内、     

缺血预处理和缺血后处理联合应用对肝脏缺血-再灌注损伤的保护作用

目的 探讨缺血预处理和缺血后处理联合应用对肝脏缺血-再灌注(I-R)损伤的保护作用.方法 采用大鼠部分肝缺血模型,将SPF级雄性SD大鼠40只随机分为5组,每组8只:假手术(S)组,缺血-再灌注(I-R)组.缺血预处理(IPre)组,缺血后处理(IPost)组,缺血预处理+后处理(IPre+IPost)组.全面复流120 min后收集肝脏组织和血液标本,检测血清ALT,肝组织ATP、MDA和RCR,做肝组织病理检查.结果 IPre+IPost组血清ALT、肝组织MDA显著低于其余各组(P<0.05);IPre+IPost组肝组织ATP、RCR高于其余各组(P<0.05);病理结果:IPre+IPost组肝组织损伤轻于其余各组.结论 IPre和IPost联合应用能更好的保护线粒体,维持组织的能量代谢稳定,从而在再灌注早期更好的减轻肝脏的损伤.     

孕酮对缺血再灌注视网膜caspase-3、bax表达的影响

目的研究孕酮(Progesterone PROG.)预治疗对网膜缺血-再灌注损伤caspase-3、bax表达的影响,探讨其神经保护机制。方法通过升高兔眼内压制作视网膜缺血模型,将大白兔随机分为PROG组,对照组。造模前24 h,PROG组耳缘静脉注射孕酮4mg/kg,对照组注射等量BBS。观察造模后不同时间点两组视网膜组织学变化及caspase-3、bax表达。结果造模后各时间点HE染色对照组视网膜内层厚度均比PROG组薄,内核层细胞数较少(P<0.05);对照组和PROG组造模后24 h均检测出caspase-3、bax表达,PROG组较少(P<0.05)。结论 PROG预治疗可减少凋亡,下调caspase-3、bax表达可能参与神经保护。     

大鼠双后肢缺血预处理对肝脏缺血再灌注后能量代谢和脂质代谢的影响

为了观察动物双后肢缺血预处理 ( IPC)对肝脏缺血再灌注 ( I/ R)损伤的保护作用 ,探讨 IPC器官保护作用的普遍性及其机制 ,将实验动物分为正常对照 ( S)组、肝脏 I/ R组、肝脏 IPC组及双后肢 IPC组 ,比较各组动物肝组织中能量物质 ATP、ADP、AMP、腺苷 ( ADO)及脂质过氧化物丙二醛 ( MDA)含量的变化。结果显示 ,双后肢 IPC组及肝脏 IPC组肝组织中 ATP、ADP、AMP、ADO含量明显高于 I/ R组 ,P<0 .0 1;而 MDA含量则明显低于 I/ R组 ,P<0 .0 1     

双后肢缺血预处理对肝脏缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

在兔肝脏缺血再灌注 ( I/R)模型基础上建立动物双后肢缺血预处理 ( IPC)及肝脏 IPC模型 ,观察其对肝脏保护作用。结果发现 ,双后肢 IPC组及肝脏 IPC组与单纯肝脏 I/R组比较 ,代表肝脏功能的血清肝酶 ( AL T、AST、ALP、γ-GT)均降低 ,P<0 .0 5 ;而双后肢 IPC与肝脏 IPC组比较无统计学意义 ,P>0 .0 5     

MG132诱导人血管内皮细胞凋亡及对caspase-3表达的影响

目的　观察蛋白酶体抑制剂MG132对人血管脐静脉内皮细胞(ECV -304)的致凋亡作用及其对凋亡相关的天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3表达的影响。方法　采用两个浓度(2, 5μmol·L-1 )的蛋白酶体抑制剂MG132处理ECV -304细胞;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;RT -PCR检测细胞内凋亡相关基因caspase -3的转录水平;免疫细胞化学检测细胞caspase 3蛋白表达。结果　对照组ECV -304细胞凋亡率低于5%,在2μmol·L-1MG132作用下,凋亡率为11. 3%,MG132浓度升至5μmol·L-1,细胞凋亡率增致44 .5%,MG132诱导ECV 304细胞凋亡具有量-效关系;RT -PCR检测发现细胞内凋亡相关基因caspase 3mRNA表达上调;免疫细胞化学检测细胞caspase- 3蛋白表达水平升高。结论:蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导血管内皮细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制UPP活性,促进caspase- 3基因转录,使细胞内caspase -3增加而促进细胞凋亡。     

木犀草素对K562细胞caspase-3活化的影响

目的:探讨木犀草素对K562细胞增殖和凋亡的影响.方法:采用MTT法检测K562细胞的增殖,流式细胞术和Hoechst33258/PI荧光染色分析K562细胞的凋亡,比色法测定caspase-3的相对活性,半定量RT-PCR检测caspase-3 mRNA水平的改变,Western-blot分析caspase-3酶原的变化.结果:木犀草素处理细胞24 h后的IC50值为(104.6±13.5)μmol·L-1.浓度为10,20,40μmol·L-1木犀草素处理细胞24 h后均可诱导K562细胞发生凋亡,各处理组的细胞凋亡率均明显高于对照组(P＜0.01).随着浓度及时间的增加,各个木犀草素处理组K562细胞的caspase-3活性升高(P＜0.01),其作用具浓度及时间依赖性.而随着木犀草素浓度的增加,K562细胞中caspase-3的mRNA水平逐渐增加,caspase-3酶原的蛋白水平逐渐减少.结论:木犀草素可通过诱导K562细胞凋亡而抑制其增殖,其诱导K562细胞凋亡可能与激活caspase-3有关.     

Caspase-3在不对称良性前列腺增生中的表达及意义

目的:通过观察caspase-3在良性前列腺增生(BPH)中不对称叶的表达情况,探讨凋亡机制在BPH发生的意义。方法:采用自身对照设计,应用免疫组织化学的方法,对caspase-3蛋白在25例不对称BPH中增生明显叶与不明显叶组织中表达水平进行检测。结果:caspase-3蛋白在前列腺明显叶组及不明显叶组表达的程度不同,增生不明显叶组阳性率为84.0%,显著高于明显叶组(56.0%)。结论:caspase-3在前列腺中不均-表达所致腺体的凋亡状态不同,表现为前列腺的增生状态不同,提示凋亡机制在BPH的发生与发展中发挥重要作用。     

复方白花前胡液对大脑中动脉缺血再灌注大鼠 Caspase-3蛋白表达的影响

目的 :探索复方白花前胡液对大脑中动脉缺血再灌注大鼠Caspase 3蛋白表达的影响。方法 :线栓法制备大脑中动脉缺血再灌注大鼠模型 ,术后2 4、4 8、72h分别检测大鼠的神经功能缺损 ;并采用免疫组织化学法检测凋亡相关基因Caspase 3蛋白表达。结果 :MCAO R 2 4、4 8、72h后 ,所有动物都出现程度不同的运动障碍 ,且大鼠脑组织中Caspase 3蛋白表达显著升高 ,复方白花前胡液可明显改善大脑中动脉缺血再灌注大鼠的神经功能缺损症状 ,抑制大鼠Caspase 3蛋白表达水平。结论 :复方白花前胡液能有效抑制凋亡相关基因Caspase 3蛋白的表达 ,减轻或消除缺血级联反应中迟发性神经元死亡 ,复方白花前胡液是其治疗缺血性中风病的机理之一。     

冬凌草甲素通过改变Bax/Bcl-xL表达激活caspase-3诱导A375-S2细胞凋亡

目的　研究冬凌草甲素诱导人黑色素瘤A375 S2细胞凋亡的作用原理。方法　形态学观察 ,DNA凝胶电泳法及WesternBlot法。结果　冬凌草甲素能明显诱导A375 S2细胞发生凋亡 ,其作用呈明显的量效关系和时间依赖性。形态学观察可见凋亡小体的形成 ,琼脂糖凝胶电泳可见凋亡典型的DNA梯带 ;caspase 3的抑制剂能阻止caspase 3的活力升高 ;免疫印迹结果显示冬凌草甲素作用A375 S2细胞 12h改变Bax与Bcl xL蛋白的表达 ;且发现caspase 3的底物PARP蛋白在 12h时被降解。结论　冬凌草甲素 (34 3μmol·L-1)诱导A375 S2细胞凋亡 ,这种作用是通过改变了Bax/Bcl xL的表达比率 ,激活caspase 3而实现的。     

三氧化二砷对人肝癌细胞凋亡及Bcl-2、caspase-3蛋白表达的影响

目的研究三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）诱导HepG2细胞凋亡及其机制。方法采用MTT法、形态学观察及流式细胞术方法检测As2O3对HepG2细胞的生长抑制、凋亡作用的影响,用Western blot检测As2O3处理后HepG2细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3的表达。结果As2O3对HepG2细胞有明显的抑制增殖作用,且呈浓度和时间依赖性,细胞呈典型的凋亡形态学改变,As2O3呈时间依赖性诱导HepG2细胞凋亡。As2O3处理不同时间后,Bcl-2蛋白表达水平下调,caspase-3蛋白表达水平升高。结论As2O3具有诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的作用,其机制可能与其下调Bcl-2蛋白的表达,促进caspase-3活化有关。     

造影剂诱导肾小球内皮细胞凋亡的caspase-3机制

目的研究半胱氨酸蛋白水解酶caspase-3在非离子型低渗造影剂诱导肾小球内皮细胞凋亡中的作用,探讨非离子型低渗造影剂诱导肾小球内皮细胞凋亡的可能机制。方法DNA凝胶电泳分析不同浓度的非离子型低渗造影剂碘佛醇(ioversol)诱导肾小球内皮细胞凋亡情况,Westernblot分析caspase-3活化片段蛋白的表达变化,AnnexinV荧光染色和流式细胞检测caspase-3特异性阻断剂对细胞凋亡的抑制作用。结果高浓度的碘佛醇作用24h后,DNA凝胶电泳呈现典型的凋亡梯状条带,肾小球内皮细胞caspase-3活化片段蛋白表达明显升高,其升高幅度与碘佛醇浓度密切相关;AnnexinV荧光标记染色发现,caspase-3特异性阻断剂可以明显减轻碘佛醇诱导的肾小球内皮细胞凋亡。结论非离子型低渗造影剂诱导肾小球内皮细胞凋亡与caspase-3的活化有关,肾小球内皮细胞凋亡可能参与了造影剂肾病的发生。     

志苓胶囊通过激活caspase-3抑制K562细胞增殖和诱导细胞凋亡

目的研究志苓胶囊(ZLJN,抗癌复方Ⅱ号)对人慢性髓系白血病K562细胞株增殖及凋亡的影响。方法将志苓胶囊按其不同中西药成分比例配制成中药、西药和复方组,与K562细胞共培养后,采用MTT法、集落形成实验分别检测细胞存活率和集落形成率;Annexin V-FITC/PI标记法、DNA倍体分析及DNA片段化分析检测细胞凋亡;流式细胞仪检测caspase-3活性;Western blot法检测caspase-3酶原(pro-caspase-3)表达。结果不同药物组与K562细胞共培养后,细胞生长受抑制,集落形成率降低。Annexin V-FITC/PI法检测到早期凋亡细胞;DNA倍体分析可见亚二倍体峰(凋亡峰);琼脂糖电泳见典型的DNA梯状带。流式细胞检测caspase-3活性增强,Western blot检测pro-caspase-3表达减弱。结论志苓胶囊可有效抑制K562细胞增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与caspase-3活性增强有关。     

人肾透明细胞癌中细胞凋亡相关因子Caspase-3和Caspase-9的表达

目的研究人肾透明细胞癌组织中细胞凋亡相关重要因子Caspase-3、Caspase-9表达的变化与肾癌的关系。方法标本离体后分成肾透明细胞癌组、癌旁组织组、正常肾组织组,均用10%的甲醛溶液固定48h,常规石蜡包埋、切片5μm,应用免疫组织化学方法进行观察研究。结果 Caspase-3与Caspase-9均在正常肾组织中可见少量弱阳性反应,癌旁组织阳性表达增加,肾癌组织表达明显减少,两两比较结果显示,3组之间差异均有统计学意义（P〈0.01）。肾癌4个期之间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。Caspase-3与Caspase-9蛋白表达呈正相关（r=0.988,P〈0.05）。结论癌组织中Caspase-3和Caspase-9表达下降,说明细胞凋亡减少,癌组织细胞增殖旺盛,是肿瘤形成的重要机制。