胶质细胞源性神经营养因子促进脊髓损伤修复的研究进展

脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的治疗是医学界的一个难题,目前还没有很好的治疗方法。大量的动物实验证实,胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)有促进SCI修复的作用,为治疗SCI带来了新的希望。本文就GDNF对SCI修复的作用有关研究进展进行综述。     

大鼠坐骨神经损伤对背根节GDNF的表达的影响

目的 应用免疫组化技术观察大鼠坐骨神经条件性损伤对相应背根节及坐骨神经胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响，以探讨GDNF对损伤神经元的作用。方法 45只成年雌性Wistar大鼠随机分为3组：A组（N＝5）正常对照组，B组（N＝20）坐骨神经压榨伤组，C组（N＝20）坐骨神经切断／结扎组；B、C两组按存活期不同再各分为4个亚组，每组5例。大鼠分别于伤后3天、2周、1个月、2个月处死，取材L5节段损伤侧背根节及损伤坐骨神经的远近节段，免疫组化染色观测GDNF表达。结果 （1）正常背根节细胞GDNF表达主要分布于小神经元，少数为大神经元。（2）坐骨神经损伤促使同侧背根节神经元GDNF表达显著增强，伤后2周达到高峰；B组背根节细胞GDNF表达在伤后1个月时轻度下调，伤后2个月恢复为对照组水平。C组背根节细胞GDNF表达保持高水平，并至观察后期2个月。（3）坐骨神经损伤同时诱导背根节卫生细胞及坐骨神经雪旺氏细胞，GNDF表达显著增强，其中远端坐骨神经GDNF表达强于近端。B组这些细胞的阳性表达持续至伤后2周，C组伤后1个月时其表达仍显著。结论 GDNF是参与损伤初级感觉神经元反应的重要因子，并可能对正常及受损背根节细胞发挥营养作用。     

大鼠坐骨神经损伤对背根节GDNF表达的影响

目的应用免疫组化技术观察大鼠坐骨神经条件性损伤对相应背根节及坐骨神经胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响,以探讨GDNF对损伤神经元的作用.方法 45只成年雌性Wistar大鼠随机分为3组:A组(N=5)正常对照组,B组(N=20)坐骨神经压榨伤组,C组(N=20)坐骨神经切断/结扎组;B、C两组按存活期不同再各分为4个亚组,每组5例.大鼠分别于伤后3天、2周、1个月、2个月处死,取材L5节段损伤侧背根节及损伤坐骨神经的远近节段,免疫组化染色观测GDNF表达.结果 (1)正常背根节细胞GDNF表达主要分布于小神经元,少数为大神经元.(2)坐骨神经损伤促使同侧背根节神经元GDNF表达显著增强,伤后2周达到高峰;B组背根节细胞GDNF表达在伤后1个月时轻度下调,伤后2个月恢复为对照组水平.C组背根节细胞GDNF表达保持高水平,并至观察后期2个月.(3)坐骨神经损伤同时诱导背根节卫星细胞及坐骨神经雪旺氏细胞GDNF表达显著增强,其中远端坐骨神经GDNF表达强于近端.B组这些细胞的阳性表达持续至伤后2周,C组伤后1个月时其表达仍显著.结论 GDNF是参与损伤初级感觉神经元反应的重要因子,并可能对正常及受损背根节细胞发挥营养作用.     

五子衍宗丸对帕金森病小鼠脑组织中神经营养因子及凋亡相关基因表达的影响

目的 观察五子衍宗丸对帕金森病(PD)小鼠脑内黑质纹状体神经营养因子分泌和脑组织中细胞凋亡相关基因表达的影响。方法 建立神经毒素MPTP诱导的PD小鼠模型，通过行为步态实验、爬杆实验及脑黑质纹状体区酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元的病理学检测，观察五子衍宗丸的治疗效果；采用免疫荧光、RT-qPCR和Western blotting法检测小鼠黑质纹状体中脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)及细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9表达水平的变化。结果 与PD模型组比较，五子衍宗丸治疗可明显减少PD小鼠四肢向前运动的平均摆动时间(P<0.05)和爬杆时间(P<0.001)，增高TH阳性细胞数和TH蛋白表达水平(P<0.05)；五子衍宗丸治疗后，PD小鼠黑质纹状体中BDNF、GDNF蛋白和CNTF及Bcl-2 mRNA表达水平明显增高(P<0.05)，而Bax、caspase-3和caspase-9表达水平明显降低(P<0.05)。结论 五子衍宗丸具有治疗PD的潜力，其...     

胶质细胞源性神经营养因子在大鼠生后腰段脊髓中分布的实验研究

为探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对大鼠脊髓运动神经元的作用,采用免疫组织化学方法,观察GDNF在大鼠生后1、3、7、10、14和28天腰段脊髓中的分布.结果发现,在生后1、7和28天脊髓灰质前角运动神经元有强阳性染色,生后3天脊髓灰质前角运动神经元呈弱阳性染色,生后1、3、7和28天脊髓灰质后角神经元和少量胶质细胞也呈阳性反应.此外,在各组大鼠腰段脊髓后根内的胶质细胞亦可见GDNF免疫阳性反应.提示GDNF可能对脊髓运动神经元的发育、存活以及功能的正常发挥起重要作用.     

移植分泌神经营养因子-3的人胚神经干细胞对大鼠脊髓损伤后功能恢复的影响

目的探索Lentivirus介导神经营养因子(NT-3)转染的人胚神经干细胞(human neural stem cells,hNSCs)对大鼠损伤脊髓治疗机制和治疗的作用机制。方法在体外用Lenti- virus构建同时表达绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)和NT-3的hNSCs,将其移植到T_(10)脊髓半横断损伤的大鼠体内,用荧光显微镜和BBB评分观察体内转基因表达和大鼠功能恢复情况,用免疫组化染色检测移植细胞在体内存活分化情况。结果(1)在体外用Lentivirus成功构建了同时表达多基因的人胚基因工程NSC并检测到了稳定的转基因表达;(2)用荧光显微镜可以检测到到hNSC,能在体内长时间存活并表达转基因;(3)BBB评分检测到hNSCs移植组大鼠后肢功能有明显恢复;(4)移植的基因工程hNSC能在体内分化为神经元及星形胶质细胞等功能细胞。结论Lentivirus介导NT-3转染的hNSC能够调整损伤的局部微环境促进损伤脊髓的功能恢复。     

胶质细胞源性神经营养因子对大鼠脊髓损伤后前角神经元的保护作用

目的　研究胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对大鼠脊髓损伤后前角运动神经元的保护作用。　方法　雄性SD大鼠 4 5只随机分为等渗盐水组、GDNF组、神经生长因子 (NGF)组 ,每组 15只 ,采用改良Nystr¨om法后路压迫大鼠胸段脊髓模型 ,经蛛网膜下腔局部注射GDNF(1μg μl,10 μg d) 1周。伤后 1,2 ,4周应用尼氏染色、酶组织化学染色方法观察前角运动神经元存活数目及胆碱酯酶 (CHE)和酸性磷酸酶 (ACP)的变化。　结果　脊髓损伤后第 1,2周 ,GDNF组前角运动神经元存活数目 [(2 1.4± 3.8,2 0 .7± 3.6 )个 前角视野 ]明显多于等渗盐水对照组的 (17.3± 2 .8,16 .5± 3.0 )个 前角视野 (P <0 .0 1) ;GDNF组前角运动神经元中CHE灰度值 (6 5 .2± 2 3.8,98.7±31.6 )低于等渗盐水组 (94 .5± 35 .2 ,12 5 .6± 4 1.6 ) (P <0 .0 1) ;ACP灰度值 (74 .2± 2 5 .7,6 8.6±30 .6 )高于等渗盐水组 (5 8.5± 18.2 ,4 9.6± 2 1.6 ) (P <0 .0 1)。　结论　外源性GDNF能保护脊髓不完全性损伤后引起的运动神经元损害。     

神经营养因子在治疗脊髓损伤中作用的研究进展

脊髓损伤（Spinal Cord Injury，SCI）的治疗一直是医学界研究的热点，近年来神经营养因子（neurotrophic factors ,NTFs）的发现为脊髓损伤（Spinal Cord Injure，SCI）的治疗带来了新的希望。本文就目前应用较为广泛的几种神经营养因子进行综述。     

神经营养因子基因修饰细胞治疗脊髓损伤

脊髓损伤(SCI)的修复是医学界长久以来的梦想，由于分子生物学和基因治疗技术的飞快发展，这一梦想已经有了实现的可能。脊髓损伤的研究者们早就了解到，神经营养因子(NTF)能干涉损伤的病理反应和促进损伤神经的恢复。神经损伤后部分神经元死亡或逆行变化的重要原因是逆行运输至胞体的NTF明显减少。基因修饰就是将有功能     

神经干细胞移植与脊髓损伤修复

众所周知，脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)是临床治疗的世界性难题。以往，许多学者曾尝试周围神经移植、胚胎脊髓移植、雪旺细胞移植、大网膜移植及应用神经营养因子治疗脊髓损伤。这些研究虽有很大进展，但都未达到目的。近年，国内外把研究焦点集中到了具有自我复制能力和多向分化潜能的神经干细胞(neural stem cells，NSCs)上，已取得了一些突破。笔者就脊髓损伤修复和NSCs移植及应用前景作一简介。     

大鼠脊髓组织CNTFRα mRNA的表达及其坐骨神经损伤后表达的变化

目的：通过对大鼠脊髓组织中睫状神经营养因子受体α（ＣＮＴＦＲα）的分布与细胞定位及其在坐骨神经损伤后表达变化的研究，来探讨ＣＮＴＦ在脊髓组织中的可能作用。方法：利用原位杂交和点杂交的方法，对ＣＮＴＦＲα在大鼠脊髓组织中的分布与坐骨神经损伤后的表达变化进行研究。结果：ＣＮＴＦＲαｍＲＮＡ几乎存在于所有脊髓神经元与胶质细胞中；坐骨神经损伤后１ｄ表达增加，以后降到较低水平，到１４ｄ再次升高，但第２峰较第１峰为低。结论：ＣＮＴＦＲαｍＲＮＡ在大鼠脊髓组织中的广泛分布，表明ＣＮＴＦ对脊髓组织各类神经元与胶质细胞均有神经营养作用。坐骨神经损伤后１ｄ，ＣＮＴＦＲαｍＲＮＡ表达的增加，可能与损伤应激相关；１４ｄ的再次升高是否由于再生过程中，雪旺细胞大量增殖，ＣＮＴＦ大量表达所诱导，还有待进一步的研究；ＣＮＴＦＲα表达的改变，可能是损伤神经元在损伤与再生修复过程中，神经元本身代谢适应性改变的一部分     

实时定量PCR检测GDNF基因转染大鼠BMSCs后的转录水平

目的 了解外源性胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的转录水平.方法 体外分离培养大鼠BMSCs,将其随机分为GDNF基因转染组、空质粒转染组和未转染组3组;GDNF基因转染组和空质粒转染组分别用GDNF基因和空质粒重组腺病毒感染BMSCs,并按感染后培养时间的不同(3、6、9和12天)又分为4个亚组.采用实时定量PCR技术检测GDNF基因在BMSCs中的转录水平.结果 空质粒转染组和未转染组无GDNF mRNA的表达,GDNF基因转染组在转染后3～12天的GDNF mRNA相对表达量为0.007 51±0.000 67.结论 腺病毒介导的基因转染技术将GDNF基因转染至骨髓间充质干细胞中,有外源性基因GDNF mRNA的表达,这为进一步研究以GDNF基因转染的BMSCs治疗中枢神经系统疾病奠定了基础.     

神经营养因子、周围神经及嗅鞘细胞与脊髓再生

神经营养因子是一类由神经元、神经胶质细胞及神经支配靶组织产生的神经营养多肽,是维持神经元生存、促进轴突生长的重要因素。周围神经移植可促进损伤神经元轴突再生,使其成为治疗脊髓损伤及促进脊髓再生研究的候选之一。嗅鞘细胞表现出类似于星形胶质细胞和雪旺细胞的双重特性,可分泌多种神经营养因子,具有促进脊髓损伤后的髓鞘重塑、轴突再生和功能恢复的潜在作用。     

急性脊髓损伤的药物治疗

随着交通、运输业和矿业的发展,急性脊髓损伤的发病率也不断上升。日前在临床治疗中普遍存在重视手术治疗（脊髓减压、脊柱稳定手术）,而忽视脊髓功能保护药物应用的趋势。其实,有相当一部分脊髓损伤的病人在早期并非完全性损伤,而是由于处理不当导致的继发性损伤造成的。因此,早期应用减轻水肿、对抗有害因子的药物和神经营养药物在保护脊髓功能中有着非常重要的作用。     

神经营养因子在脊髓的分布及其对脊髓损伤后再生的作用

神经营养因子是促进神经元发育、维持神经元特殊形态与功能的一类分泌性多肽.现在有大量证据表明NTFs在神经系统老化、创伤、神经退行性变等情况下能调节神经元的可塑性和神经再生.本文对神经营养因子及其受体在正常与受损伤脊髓的分布,以及对脊髓损伤的修复作用等进行了综述.     

GDNF和HSV-GDNF对体外培养大鼠脊髓运动神经元损伤后Bcl-2表达的影响

目的:观察GDNF和单纯疱疹病毒载体介导的GDNF(HSV-GDNF)对体外培养大鼠脊髓运动神经元损伤后Bcl-2表达的影响。方法:将培养8d的神经元,随机分成4组,行划痕损伤后观察神经元存活数、Bcl-2免疫反应(BCL-2-IR)阳性神经元数目和平均光密度。结果:损伤后第1、3、5和7天,GDNF和HSV-GDNF组的三项指标均明显高于同期对照组;第1、3天,GDNF功效优于HSV-GDNF;第5、7天,HSV-GDNF的功效较好。结论:GDNF和HSV-GDNF具有增强受损运动神经元Bcl-2表达的作用,且HSV-GDNF作用时间较长。     

酪氨酸受体激酶B在胚胎脊髓修复成鼠损伤脊髓过程中的变化

目的确定酪氨酸受体激酶Ｂ（ｔｒｋＢ）在胚胎脊髓修复成鼠脊髓损伤过程中的变化。方法将妊娠１４天胚胎脊髓植入急性损伤的成体脊髓后１，３，５，７，１０，１５和３０天，用原位杂交、斑点杂交和免疫组化技术对ｔｒｋＢｍＲＮＡ与蛋白作定性和定量观察。结果定性观察表明，在正常大鼠脊髓内，ｔｒｋＢｍＲＮＡ杂交产物主要分布在神经元和胶质细胞，神经纤维杂交反应不明显；脊髓损伤后阳性神经元和胶质细胞都有所增加，但阳性神经纤维增加的数目略为突出；胚胎脊髓植入损伤脊髓后，上述各阳性反应成分进一步增加，尤其是阳性神经纤维的增加更为显著。定量观察显示的ｔｒｋＢｍＲＮＡ的分子杂交反应与定性观察结果大体一致。免疫组化显色的ｔｒｋＢ蛋白，无论分布还是反应强度都与其ｍＲＮＡ的变化大致相符。结论损伤脊髓在移植修复过程中能够以调整受体合成的方式来适应营养环境的变化，但胶质细胞受体合成增加可能起了与神经成分争夺神经营养因子的副作用     

胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞移植治疗大鼠脑损伤

目的探索移植转染胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因的大鼠神经干细胞（NSCs）能否促进脑损伤大鼠的神经功能修复。方法利用阳离子脂质体转染GDNF基因到大鼠NSCs，在脑立体定向仪引导下分别将PBS、NSCs、转基因NSCs移植到脑损伤大鼠局部损伤灶边缘，通过观察记录大鼠行为能力的变化，评价移植细胞后大鼠神经功能的修复情况。结果转染后72h，荧光蛋白大量表达。转基因细胞移植后可以在14d时仍表达GDNF基因，各实验组于移植后3d时行为学指标差异无统计学意义（P〉0．05），而在移植后7d，移植转基因NSCs组和NSCs组即与对照组在行为学指标上差异有统计学意义（P〈0．05）；在移植后14d，移植转基因NSCs组与其余两组在行为学指标上差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论转基因NSCs移植后可以分泌GDNF并促进脑外伤大鼠神经功能的恢复。     

姜黄素对大鼠急性脊髓损伤的保护作用及机制的初步研究

目的研究姜黄素对急性脊髓损伤的保护作用及其可能机制。方法采用改良Allen’s打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型,将60只SD雌性大鼠随机平均分为假手术组、模型组、姜黄素低剂量组(40mg/kg,CUR-L组)、姜黄素高剂量组(100mg/kg,CUR-H组),每组各15只。术后7d采用脊髓损伤后后肢运动功能评分系统(BBB法)评测大鼠后肢运动功能;化学比色法检测大鼠脊髓组织中丙二醛(MDA)含量变化;蛋白质印迹(Western blot)及免疫组化检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)蛋白表达;苏木精-伊红(HE)染色观察脊髓组织的病理改变。结果与模型组相比,姜黄素组大鼠后肢功能明显改善;脊髓组织中MDA含量降低;Nrf2、γ-GCS蛋白的表达上调;脊髓组织病理损伤减轻。结论姜黄素对大鼠急性脊髓损伤有保护作用,其机制可能是通过激活Nrf2/抗氧化反应原件(ARE)通路从而上调γ-GCS蛋白表达来实现的。     

Lentivirus介导神经营养因子-3促进脊髓损伤大鼠功能恢复

目的探讨Lentivirus介导分泌神经营养因子-3(NT-3)直接体内转基因治疗大鼠脊髓损伤作用和机制。方法将28只Wistar大鼠在T10水平制成半横断损伤模型,随机分为体内转基因治疗组和损伤对照组,每组14只;用携带NT-3和绿色荧光蛋白(GFP)的Lentivirus对大鼠行直接体内转基因治疗;荧光显微镜观察体内转基因表达,后肢运动功能评分法(BBB评分)检测大鼠后肢功能恢复情况。结果用荧光显微镜检测到损伤脊髓内有较多的持续表达转基因的细胞;BBB评分结果显示,从伤后第4周开始,实验组大鼠后肢功能较对照组明显恢复(P<0.01),至第10周时,实验组和对照组BBB分差增大,达3.3分。结论Lentivirus是一种有效的转基因载体,由Lentivirus介导分泌NT-3的直接体内转基因治疗能够明显促进损伤脊髓的功能恢复。