葡萄糖转运蛋白4在宫内发育迟缓大鼠骨骼肌中的表达和转位

目的研究宫内发育迟缓(IUGR)大鼠骨骼肌胰岛素刺激下葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)表达和转位的变化,探讨IUGR个体发生胰岛素抵抗的分子机制。方法采用孕期全程低蛋白饮食法建立大鼠IUGR模型,检测18月龄IUGR子鼠骨骼肌胰岛素刺激下的2-D-3H葡萄糖的摄取,同时采用实时荧光定量RT-PCR和Western blot方法检测胰岛素受体(IR)、胰岛素受体底物1(IRS-1)及葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的m RNA和蛋白表达;用Western blot方法分别检测胰岛素刺激前后骨骼肌总/膜GLUT4的蛋白表达变化。结果 1与对照组相比,18月龄IUGR组大鼠骨骼肌胰岛素刺激后葡萄糖摄取率显著降低(P=0.035);2IR和IRS-1 m RNA和蛋白表达在两组大鼠骨骼肌中差异无统计学意义(P>0.05),但GLUT4 m RNA表达在IUGR组大鼠骨骼肌中显著下降(P=0.031);3基础状态时,两组大鼠骨骼肌GLUT4总蛋白表达无明显差异(P=0.967);IUGR组GLUT4膜蛋白表达略降低,但未及统计学意义(P=0.072);经胰岛素刺激后,两组大鼠骨骼肌与各自基础状态相比,GLUT4总蛋白变化不明显,GLUT4膜蛋白表达均较各自的基础状态显著增加,但IUGR大鼠骨骼肌GLUT4膜蛋白的上升程度显著低于对照组(P=0.001)。结论 IUGR老龄大鼠骨骼肌中GLUT4 m RNA表达降低以及胰岛素刺激下的GLUT4转位下降,可能降低对胰岛素的反应性,从而减少葡萄糖摄取,促进胰岛素抵抗发生。     

吸烟对大鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运子4基因表达及蛋白含量的影响

目的:探讨吸烟对胰岛素抵抗(IR)大鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运子4mRNA基因表达及蛋白含量的影响。方法:正常6周龄Wistar大鼠48只,随机分为3组,分别为正常饲养组、高脂饲养组及糖尿病组,每组再随机分为吸烟组与对照组,吸烟组进行12周熏烟实验,应用高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术进行IR的评价。应用RT-PCR及免疫组化技术检测被动吸烟大鼠及各自对照组大鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运子4mRNA基因表达及蛋白含量的影响。结果:正常吸烟组、高脂饲养及糖尿病吸烟组葡萄糖输注率(GIR)明显低于各自对照组[(27.21±4.71)比(34.93±4.91)mg/(kg·min);(12.78±2.34)比(21.68±2.27)mg/(kg·min);(13.81±2.34)比(17.22±1.90)mg/(kg·min);P<0.01]。正常饲养吸烟组、高脂饲养吸烟组及糖尿病吸烟组大鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运子4mRNA基因的表达量及蛋白含量与各自对照组相比无明显差异[(0.53±0.04)比(0.58±0.06)mg/(kg·min);(0.40±0.09)比(0.42±0.04)mg/(kg·min);(0.35±0.10)比(0.37±0.06)mg/(kg·min);P>0.05及(7.84±0.44)比(8.21±0.42)mg/(kg·min);(6.48±0.47)比(6.81±0.24)mg/(kg·min);(4.96±0.39)比(5.10±0.57)mg/(kg·min);P>0.05]。结论:吸烟能导致大鼠IR,吸烟对大鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运子4mRNA基因表达及蛋白含量无明显影响,葡萄糖转运子4mRNA基因表达及蛋白含量可能不参与吸烟致IR的发生机制。     

葡萄糖转运蛋白4转位与胰岛素抵抗

葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)转位障碍导致骨骼肌和脂肪细胞对葡萄糖摄取、利用减少是胰岛素抵抗的重要分子基础.胰岛素和运动是刺激骨骼肌内GLUT4转位的两个重要因素,胰岛素信号转导途径和蛋白激酶(AMPK)途径是葡萄糖的转运过程中主要的信号转导途径.对GLUT4转位的研究有助于阐明胰岛素抵抗的发生机制.     

电刺激促进大鼠骨骼肌细胞GLUT4转位并激活Akt信号通路

目的：利用L6细胞模型研究电脉冲刺激对骨骼肌细胞GLUT4转位及其信号通路的影响.方法：将稳定过表达GLUT4myc-AS160的L6-GLUT4myc-AS 160大鼠骨骼肌细胞体外培养于6孔培养板中,用含2％胎牛血清的细胞分化液诱导分化为肌管,将6孔板随机分成对照组、胰岛素组和电脉冲刺激（EPS）组,用终浓度为100 nmol/L的胰岛素或电刺激仪对细胞刺激,对照组不做任何处理.ELISA测定细胞膜上的GLUT4myc含量,免疫印记法测定蛋白激酶B（Akt）和Rab-GTPase激活蛋白AS160的磷酸化.结果：与对照组相比,1h电刺激显著增加细胞膜表面GLUT4myc水平并磷酸化Akt及Rab-GTPase激活蛋白AS160.结论：电刺激促进L6骨骼肌细胞GLUT4myc转位,激活Akt信号通路.     

宫内生长受限大鼠骨骼肌蛋白激酶B和葡萄糖转运蛋白4的表达和活性变化

目的 研究宫内营养不良造成的宫内生长受限(IUGR)子鼠骨骼肌中蛋白激酶B(PKB)和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达和胰岛素诱导活性变化,探讨IUGR个体发生胰岛素抵抗的分子机制.方法 通过妊娠期全程低蛋白饮食法建立大鼠IUGR模型,采用Western blot方法检测雄性子鼠(8周)基础状态下骨骼肌PKB的表达和胰岛素刺激后磷酸化水平的变化,同时测定GLUT4的表达和胰岛素刺激后向细胞膜的转位.结果 胰岛素刺激前后,IUGR鼠骨骼肌中PKB和磷酸化的PKBSer473表达水平都明显低于对照鼠(P<0.01),胰岛素刺激使对照组的PKBSer473磷酸化水平明显增加(P<0.01),IUGR组仅轻度增加.两组子鼠骨骼肌中总GLUT4的蛋白表达没有差别,胰岛素刺激后,对照组细胞膜中GLUT4蛋白浓度显著升高(P<0.01),IUGR组增高的幅度明显低于对照组(P<0.01).结论 宫内蛋白营养不良造成的IUGR鼠骨骼肌中PKB的表达和活性降低,导致胰岛素介导的GLUT4转位受阻,可能引起葡萄糖摄取和利用障碍,促进糖尿病发生.     

氯氮平对大鼠脂肪细胞GLUT4的影响

目的:了解氯氮平对大鼠血糖(FPG)、血浆胰岛素(FINS)、胰岛素敏感指数(ISI)及脂肪细胞上葡萄糖转运蛋白(GLUT)4表达的影响。方法:12只雄性SD大鼠随机均分成氯氮平组和空白对照组,分别将氯氮平片按20 mg/(kg.d)剂量溶于生理盐水中给大鼠灌胃,空白对照组直接蒸馏水灌胃,共28 d。在第1,14,28天分别剪尾采血,测FPG、FINS,计算ISI,用Western blot法分别测大鼠脂肪细胞内外膜上GLUT4的含量。结果:第14天时氯氮平组大鼠的FPG水平高于空白对照组(P<0.05),ISI水平略低于空白对照组,但差异无显著性(P>0.05)。灌胃28 d时,氯氮平组的FPG、FINS均高于空白对照组差异有显著性(P<0.05),ISI水平低于对照组且差异有显著性(P<0.05)。氯氮平组大鼠脂肪细胞内外膜上的GLUT4含量均较空白对照组下降,但差异不明显。结论:长期服用氯氮平的大鼠体内产生胰岛素抵抗,外周组织GLUT4的表达降低,氯氮平可能既影响胰岛素的分泌功能又同时减少了外周组织对葡萄糖的吸收利用从而影响了糖代谢的正常进行。     

α-亚麻酸对大鼠骨骼肌细胞胰岛素信号转导蛋白和葡萄糖转运蛋白4的影响

目的:从胰岛素信号转导方面研究α-亚麻酸对胰岛素抵抗的作用及可能的机制,为富含α-亚麻酸的植物油应用于糖尿病的防治提供实验依据。方法:原代培养大鼠骨骼肌细胞,应用免疫印迹法检测α-亚麻酸对大鼠骨骼肌细胞蛋白激酶B(PKB)信号转导通路及葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)表达的影响。结果:在0.125-1.0μmol/L的浓度范围,α-亚麻酸对骨骼肌细胞PKB的磷酸化及GLUT4蛋白的水平呈剂量一效应关系及时间-效应关系,对PKB的表达水平未见影响;采用P13K抑制剂LY294002(15μmol/L)抑制P13K/PKB信号通路后,GLUT4蛋白水平、PKB磷酸化同空白对照相比较均无显著性差别(P>0.05)。结论:α-亚麻酸通过作用于肌细胞胰岛素的P13K/PKB信号通路,进而调节GLUT4的蛋白表达水平,增加骨骼肌对胰岛素的敏感性,减轻或避免骨骼肌胰岛素抵抗和糖代谢障碍。     

胰岛素抵抗状态下大鼠心肌细胞葡萄糖转运蛋白4变化的研究

目的观察胰岛素抵抗状态下葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）在心肌细胞内表达的变化。方法30只Wistar雄性大鼠随机分为实验对照组、高脂饮食组、高脂高糖饮食组，分别给予普通饮食、高脂饮食和高脂高糖饮食喂养8w，以建立胰岛素抵抗大鼠模型。用钳夹技术检测胰岛素抵抗的存在，分别测量大鼠的体重、空腹血糖和葡萄糖摄取率，并用原位杂交的方法检测心肌细胞GLUT4mRNA的染色细胞的阳性率，应用SPSS13．0软件进行统计学分析，比较组间各指标的差异，并进行直线相关分析。结果高脂饮食组和高脂高糖组存在胰岛素抵抗，而对照组未出现胰岛素抵抗；高脂组与高脂高糖组大鼠的葡萄糖摄取率明显低于对照组（P〈0．05），而高脂组又高于高脂高糖组（P〈0．05）；与大鼠体重增加值的相关分析表明，高脂组和高脂高糖组的葡萄糖摄取率与大鼠体重的增加值呈显著的负相关（P〈0．01）；原位杂交法检测心肌细胞内GLUT4mRNA的染色细胞阳性率，高脂组、高脂高糖组的染色阳性率明显低于对照组（P〈0．05），而高脂组和高脂高糖组无统计学差异（P〉0．05）；两者的直线相关分析显示，高脂组和高脂高糖组的GLUT4mRNA的阳性率与葡萄糖摄取率呈正相关（P〈0．01）。结论胰岛素抵抗可致心肌细胞GLUT4mRNA转录水平下降。     

葡萄糖转运蛋白4转位与钙超载后心肌细胞胰岛素抵抗的关系

目的初步研究钙超载后心肌细胞胰岛素抵抗与葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）转位的关系,探讨钙超载后心肌细胞胰岛素抵抗的分子机制。方法采用伊屋诺霉素构建不同程度成年大鼠心肌细胞钙超载模型;应用同位素示踪技术观察胰岛素刺激大鼠心肌细胞的葡萄糖摄取效应,采用Western blotting分析检测胰岛素刺激的心肌细胞膜GLUT4的含量变化。结果钙超载后心肌细胞表现出严重的胰岛素抵抗,胰岛素刺激的GLUT4转位仅为对照组的82.4%（P〈0.05）。结论胰岛素刺激的GLUT4转位障碍是心肌细胞钙超载后胰岛素抵抗的重要分子机制之一;缺血再灌注心肌细胞内钙超载是急性胰岛素抵抗的始动因素。     

骨骼肌细胞膜去极化对葡萄糖转运子4转位的调节作用

目的：探讨高钾造成的骨骼肌细胞膜去极化对葡萄糖转运因子4（GLUT4）转位的调节作用。方法：用55mmol／L的葡萄糖酸钾孵育L6GLUT4myc肌管使细胞膜去极化。用偶联抗体的比色法检测细胞膜上GLUT4的数量。结果：膜去极化介导的GLUT4myc转位呈时间依赖性,2min和5min时细胞膜上GLUT4myc的含量显著高于基础组（P〈0．05）,并随时间的延长回复到基础状态：去极化作用同样急性增加钙,钙调蛋白依赖性蛋自激酶Ⅱ的磷酸化。结论：高钾诱导的细胞膜去极化可使膜表面GLUT4myc快速增加,钙,钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ可能参与高钾刺激的骨骼肌细胞GLUT4myc转位的机制。     

Effect of Huanglian Jiedu Decoction (黄连解毒汤) on glucose transporter 4 expression in adipose and skeletal muscle tissues of insulin resistant rats

Objective： To investigate the effects of Huanglian Jiedu Decoction （黄连解毒汤, HLJDD） on glucose transporter 4 （GLUT4） protein expressions in insulin-resistant murine target tissues. Methods： The experimental male Wistar rats were established into insulin resistant models by injecting streptozotocin （STZ 30 mg/kg） via caudal vein and feeding them with high fat high caloric diet, and randomly divided into the model group, the aspirin group and the HLJDD group. Besides, a normal group was set up for control. Changes of body weight （BW）, levels of serum fasting blood glucose （FBG）, serum fasting insulin （FINS） and oral glucose tolerance test （OGTT） were routinely determined. The expression of GLUT4 protein in adipose and skeletal muscle tissues before and after insulin stimulation was determined with Western blot. Results： In the HLJDD group after treatment, BW and FBG got decreased, OGTT improved, and the expression and translocation of GLUT4 protein elevated obviously, either before or after insulin stimulation, as compared with those in the model group, showing significant differences respectively. Conclusion： The mechanism of improving insulin resistance by HLJDD is probably associated with its effect in elevating GLUT4 protein expression and translocation in adipose and skeletal muscle tissues of insulin resistant rats.     

西格列汀对肥胖大鼠血清及不同组织视黄醇结合蛋白4表达水平的影响

目的：研究西格列汀对肥胖大鼠代谢指标、血清视黄醇结合蛋白4(RBP4)及附睾脂肪、肝脏组织 RBP4表达水平的影响。方法将40只SD大鼠随机分为对照组( ND组,n=10)和高脂组(HD组,n=30)。16周后HD组成功建立肥胖模型(n=16),并随机分为肥胖对照组(OB组,n=8)、西格列汀干预组( SITA 组, n =8)。分别测定干预前后体重(BW)、空腹血糖(FBG)、三酰甘油(TG)、胆固醇(TCH)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、空腹胰岛素( FINS)及血清RBP4水平,并计算胰岛素抵抗指数( HOMA-IR)。 Western blot法检测大鼠附睾脂肪和肝脏组织RBP4表达水平。结果①与 ND 组相比, HD 组 BW、FBG、TG、TCH、LDL-C、FINS、HOMA-IR、RBP4升高,HDL-C降低,差异有统计学意义(P <0．05,P <0．01)。在 HD 组中,OB 组、SITA组间各指标差异无统计学意义。西格列汀干预后, SITA 组较 OB 组 FBG、TG、TCH、LDL-C、FINS、HOMA-IR、RBP4降低,HDL-C升高,差异有统计学意义( P<0．05,P<0．01)。②与ND组比较,OB组附睾脂肪RBP4蛋白表达水平显著增加( P <0．05);与 OB 组相比, SITA 组附睾脂肪RBP4蛋白表达水平显著降低( P<0．01)。③ Pearson相关分析显示ND组、血清RBP4与TG呈正相关性;HD组、血清RBP4与FINS、HOMA-IR、TG、附睾脂肪 RBP4呈正相关性,与HDL-C呈负相关性。结论肥胖大鼠血清RBP4水平升高,附睾脂肪RBP4表达水平增高。西格列汀干预能显著降低肥胖大鼠血清RBP4水平及附睾脂肪中RBP4蛋白表达水平,并可改善糖脂代谢。     

单纯性肥胖患者血清C反应蛋白水平的变化

为研究血清高敏C反应蛋白(high sensitivity CRP,hs-CRP)水平与肥胖及胰岛素抵抗的关系,采用乳胶增强速率免疫散射比浊法测定31例单纯性肥胖患者及30例正常人血清高敏C反应蛋白水平。结果显示,单纯肥胖组和体质量正常组血清CRP水平[中位数(四分位距)]分别为2.78(1.27-4.67)和0.62(0.32-2.32)mg/L,单纯肥胖组明显高于正常组(P<0.01)。血清CRP与体质量指数(BMI)、胰岛素敏感性简易参数(HOMA-IR)、空腹胰岛素(FINS)及空腹血糖(FPG)分别呈正相关(r=0.443,0.454,0.406及0.306,P<0.01),与腰围和脂肪百分比也呈正相关(P<0.01)。提示单纯性肥胖患者血清CRP水平较正常人升高;血清CRP与胰岛素抵抗密切相关,慢性炎症参与了胰岛素抵抗的发生和发展。     

腹型肥胖患者胰岛β细胞功能和胰岛素敏感性的变化

目的探讨腹型肥胖患者胰岛细胞功能和胰岛素敏感性变化。方法入选腹型肥胖组52例、正常对照组47例和2型糖尿病组（T2DM）102例,其中腹型肥胖组9例、非腹型肥胖组3例、正常对照组9例和T2DM组7例,进行了高葡萄糖钳夹试验和用MRI测定内脏脂肪面积（VA）和皮下脂肪面积（SA）。结果正常对照组胰岛素分泌第一时相（FPIR）、葡萄糖代谢清除率（GDR）和胰岛素敏感性指数（ISI）水平高于腹型肥胖组和T2DM组,空腹胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA—IR）和胰岛素原（Proinsulin）水平低于腹型肥胖组和T2DM组（P〈0．05）。腹型肥胖组腰臀比（WHR）、胰岛素分泌指数（HOMA—β）、空腹血糖（FBG）、VA、SA、FPIR、胰岛素分泌第二时相（SPIR）和胰岛素分泌最大量（INS-Max）高于T2DM组,FBG低于T2DM组（P〈0．05）。多元逐步回归分析显示．FBG是影响FPIR独立的相关因素;WHR是影响ISI独立的相关因素（P〈0．05）。结论腹型肥胖患者存在明显胰岛素抵抗,同时已经出现了早期胰岛功能损害。     

探讨骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白4含量在早发2型糖尿病患者中的特点

目的 探讨骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白含量在早发2型糖尿病(T2DM)患者中的特点.方法 试验共分为4组:年轻非糖尿痛对照组(YN),老年非糖尿病对照组各6例(ON);早发T2DM(EOD)和晚发T2DM各8例(LOD),手术前当天抽取患者空腹血,测定FPG、HbA1c、FINS;手术中取骨骼肌组织约500 mg,应用Western blot方法测定各组骨骼肌细胞GLUT4蛋白含量.结果 糖尿病组的FPG和HbA1c水平均高于非糖尿病对照组,EOD组患者血糖和HbA1c高于LOD组,差异有显著性;糖尿病组中的GLUT4蛋白含量低于非糖尿病对照组(P<0.05);EOD组中骨骼肌细胞GLUT4蛋白含量高于LOD组(P<0.05);通过相关分析发现,在糖尿病组中骨骼肌GLUT4蛋白水平和WHR、HOMAIR以及腰围呈负相关.结论 骨骼肌细胞GLUT4蛋白含量降低,在2型糖尿病人胰岛素抵抗的发生过程中起到了一定的作用;早发2型糖尿病人胰岛素抵抗程度较轻,可能和骨骼肌细胞中GLUT4含量较高有关.     

有氧运动与六味地黄丸对实验性糖尿病大鼠骨骼肌GLUT-4基因表达的影响*

[目的]研究有氧运动与六味地黄丸对糖尿病大鼠血糖、胰岛素、葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)基因表达的影响.[方法]40只雄性Wistar大鼠尾静脉注射四氧嘧啶复制糖尿病动物模型.将成模的糖尿病大鼠按血糖和体质量随机分为糖尿病组、运动组、六味地黄丸组、运动+六味地黄丸组,同时设立正常对照组,6周后测定空腹血糖、血清胰岛素水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量测定骨骼肌GLUT-4 mRNA表达.[结果]糖尿病组大鼠血糖显著升高,GLUT-4mRNA含量显著降低;补充六味地黄丸和有氧运动干预后血糖显著下降,GLuT-4 mRNA含量显著增加.[结论]有氧运动和六味地黄丸能改善糖尿病大鼠糖代谢,降糖机制可能与增加骨骼肌GLUT-4 mRNA的表达有关.     

严重烫伤肌肉葡萄糖摄取障碍机理的研究

观察３０％体表皮肤全层烫伤大鼠骨骼肌细胞膜萄糖转运体位点的动态变化以阐明严重烫伤后肌肉葡萄糖摄取障碍的原因。结果显示，严重烫伤后肌肉总葡萄糖转运体结合位点变化不明显，但细胞内膜葡萄糖转运体位点向质膜转移的胰岛素刺激效应比对照组明显降低。     

钒酸钠治疗增加实验性糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4表达的研究

目的探讨钒酸钠类胰岛素作用及骨骼肌GLUT4(葡萄糖转运蛋白4)在其作用中机制.方法 Wistar大鼠40只,体质量180～250 g,随机分为2组,一组应用链脲佐菌素(55 mg/kg)腹腔内注射,5 d后血糖大于13.5 mmol/L定为糖尿病大鼠,另一组为正常对照鼠,然后将正常对照组与糖尿病组大鼠各随机分为2组.加钒组隔日管饲0.4%钒酸钠水稀释液,对照组饮用0.9%生理盐水,观察基本指标变化,持续2周后在麻醉情况下迅速分离提取骨骼肌及血液标本,应用Western blot 和RT-PCR技术测定GLUT4的蛋白和基因表达.结果钒酸钠治疗糖尿病大鼠PG、TG、INS降低,糖尿病大鼠GLUT4蛋白和GLUT4mRNA表达与正常对照组比较降低明显,钒酸钠治疗糖尿病大鼠GLUT4蛋白和GLUT4mRNA表达增加接近正常对照组水平.结论钒酸钠治疗糖尿病大鼠在不增加胰岛素释放的情况下具有明显改善糖脂代谢的效果,使降低GLUT4水平恢复接近正常,说明钒酸钠增加糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4表达使周围组织葡萄糖摄取利用紊乱增加可能是降低血糖机制之一.     

肥胖大鼠胰岛素敏感性变化及糖皮质激素对其的影响

目的:观察高脂饮食诱导肥胖大鼠的胰岛素敏感性变化及糖皮质激素干预后的变化。方法:用高脂饲料喂养成年大鼠80天,筛选出肥胖大鼠,比较空腹血糖、血清胰岛素水平及胰岛素抵抗程度的变化,再向肥胖大鼠(40只)和对照组大鼠(38只)腹腔分别注射生理盐水及不同剂量的琥珀酸氢化可的松,比较空腹血糖、血清胰岛素水平及胰岛素抵抗程度的变化。结果:肥胖大鼠空腹血糖、胰岛素水平及胰岛素抵抗程度明显高于对照组(P<0.01);与生理盐水组相比,糖皮质激素应用后均升高(P<0.01)。结论:肥胖可以引起高胰岛素血症及胰岛素抵抗,糖皮质激素可以诱导胰岛素抵抗。