聚合酶链反应法快速诊断真菌血症的实验研究

目的探讨聚合酶链反应（PCR）与普通血培养在诊断真菌血症方面的应用。方法分别以5×107,1×108,5×108CFU/ml的白色念珠菌菌液1ml注射造成兔的真菌血症模型,于注射前,注射后2,24,48及72小时分别抽取兔血进行PCR和血培养检测,比较PCR检测与血培养结果的差别,并观察1周内不同浓度注射组的病死率。结果在2h时各浓度组间PCR法和血培养两种检测方法无明显差异,24,48和72h各浓度组间两种检测方法有明显的差异（P〈0.05）,PCR法较灵敏。随着注射菌液浓度的提高,真菌血症兔模型的病死率也逐渐上升。结论PCR检测法较血培养法灵敏,用于早期快速诊断真菌血症有其重要的临床价值,白色念珠菌血症的致死性与其侵入机体的菌株量呈正相关。     

用聚合酶链反应可准确鉴定移植前牛胚胎的性别

聚合酶链反应(PCR)技术是胚胎性别鉴定的一大突破。我们发展了先进的PCR技术,用于移植前牛胚胎的性别鉴定,用两个特异的雄性Y染色体重复序列为标靶,以PCR方法对DNA进行扩增。我们进一步扩增了出现在雄性和雌性中的牛重复序列。这一方法极其准确,结果无一差错,可用于90％以上的牛半胚性别鉴定。     

用聚合酶链反应技术检测膀胱癌病毒基因

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对６８例膀胱癌及１５例正常膀胱粘膜中第１６、１８型人乳头瘤病毒（ＨＰＶ１６、１８）ＤＮＡ进行了检测。结果表明，新鲜及石蜡包埋的癌组织ＨＰＶ１６ＤＮＡ的阳性率分别为５３．８％及６６．７％，ＨＰＶ１８ＤＮＡ的阳性率为４．４％。ＨＰＶ１６ＤＮＡ在癌组织中出现与恶性度及浸润深度有一定关系。正常粘膜有少量ＨＰＶ１６ＤＮＡ存在。从正常粘膜到癌组织，ＨＰＶ１６ＤＮＡ检出率逐渐增高，反     

用聚合酶链反应技术检测膀胱癌病毒基因

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对６８例膀胱癌及１５例正常膀胱粘膜中第１６、１８型人乳头瘤病毒（ＨＰＶ＿１６、１８）ＤＮＡ进行了检测。结果表明，新鲜及石蜡包埋的癌组织ＨＰＶ＿１６ＤＮＡ的阳性率分别为５３．８％及６６．７％，ＨＰＶ＿１８ＤＮＡ的阳性率为４．４％。ＨＰＶ＿１６ＤＮＡ在癌组织中出现与恶性度及浸润深度有一定关系。正常粘膜有少量ＨＰＶ＿１６ＤＮＡ存在。从正常粘膜到癌组织，ＨＰＶ＿１６ＤＮＡ检出率逐渐增高，反映出其存在较为广泛及在癌变中的作用。     

聚合酶链反应快速诊断白色念珠菌菌血症

目的：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术诊断白色念珠菌菌血症。方法：设计的引物特异性扩增编码白色念珠菌细胞色素Ｐ４５０Ｌ１Ａ１的基因，其长度为２４３ｂｐ。ＥＤＴＡ抗凝血用去污剂溶解，用ＤＮａｓｅＩ去除人体白细胞和污染的细菌ＤＮＡ；念珠菌的细胞壁用溶胞酶消化并用ＳＤＳ和蛋白酶Ｋ裂解。用酚／氯仿／异戊醇提取模板ＤＮＡ。用ＰＣＲ技术扩增。结果：与细菌、病毒及人体细胞ＤＮＡ无非特异扩增。检出血中白色葡萄的阈值     

聚合酶链反应鉴定乙型肝炎病人尿液的传染性

聚合酶链反应（PCR）检测乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV－DNA）敏感、快速，对HBeAg阳性病人血液HBV-DNA的检测阳性率高达100%）。我们选用乙型肝炎病人38例的尿液，并采用PCR法检测尿液HBV－DNA发现尿液HBV－DNA与血液HBV－DNA及血液HBeAg之间具有相关性。现将结果报告如下。对象与方法一、对家均为住院病人三．血清HBsAs－HBeAg和nscatr均阳性（以下简称血清nseag阳性病人）的病人16例。2．血清HBShg、HBCAb阳性，但HBeAg阴性（以下简称血清HBeAg阴性病人）的病人22例。二、方法1．血清HBsAgtHBcAb、HBeAg及…     

聚合酶链反应快速检测胃组织和唾液中的幽门螺杆菌

针对幽门螺杆菌（HP）尿素酶A基因设计一对引物进行聚合酶链反应，检测1株HP标准株和7株临床分离株均阳性，而4株其它肠道菌均阴性，特异性100％。10倍系列稀释试验表明敏感性达到100pgDNA水平。从35例胃镜检查者取幽门旁组织块进行快速和常规尿素酶试验，细菌培养及PCR检测，15例HP阳性者PCR检测也为阳性，其中7例阳性者有3例唾液PCR检测为阳性，表明HP确存在于口腔中。本研究采用直接热裂解法处理临床标本，取其粗提物行PGR免除复杂的酚-氯仿抽提步骤，该法简便快速，且损失小，成功率高，在临床实验诊断中有推广价值。     

逆转录聚合酶链反应技术检测肿瘤微转移

逆转录聚合酶链反应技术检测肿瘤微转移４０００３８重庆第三军医大学西南医院房殿春王东旭罗元辉关键词肿瘤转移；聚合酶链反应中国图书资料分类号Ｒ７３０．４临床资料表明，肿瘤的转移和复发是影响患者预后的重要因素，而肿瘤细胞在淋巴结、外周血和骨髓中的微转移则是...     

PCR-RFLP方法检测医学重要真菌的临床应用研究

目的：建立并应用PCR-RFLP技术区分临床重要真菌的方法，进行实验研究和临床应用。方法：首先根据医学真菌的18SrRNA基因合成了白色念珠菌、热带念珠菌、假热带念珠菌、近平滑念珠菌、解脂念珠菌、新型隐球菌、烟曲霉菌等9种真菌的通用引物；建立鉴定医学真菌的PCR-RFLP方法。通过用白色念珠菌感染大鼠，建立了白色念珠菌感染的实验动物模型。将建立的方法用于临床，并与血培养法和协同凝集试验法进行了比较。结果：PCR-RFLP法的灵敏度高于协同凝集试验和血培养法。经过一年多的临床应用，我们分别用PCR结合限制性内切酶鉴定技术、协同凝集试验法和血培养法检测了118例血液病、肿瘤和其他发热患者的血液标本。应用协同凝集试验（CoA）法检出真菌血症19例，阳性率为16.1%。应用PCR和限制性内切酶技术共有40例检出真菌血症，阳性率为33.9%；其中白色念珠菌血症占真菌血症的65.0%，热带念珠菌感染占17.5%，假热带念珠菌感染占10%，光滑念珠菌感染占5.0%，近平滑念珠菌感染占2.5%，为临床不明原因发热患者寻找病因、进行抗真菌治疗提供了参考依据。结论：该技术具有快速、敏感、不需放射性同位素等优点，而且准确性极高，有着较好的临床应用前景。此技术应用于临床将为血液病、肿瘤和免疫抑制患者的诊断和救治工作起到积极的作用。     

白色念珠菌感染的分子生物学诊断研究进展

综述了白色念珠菌感染的分子生物学诊断研究进展，包括核型分析，限制性片段长度多态性分析，特异的ＤＮＡ探针及ＰＣＲ等方法。     

用核糖体RNA ITS区序列寡核苷酸探针鉴定临床常见真菌

目的：建立一种快速鉴定临床常见真菌菌种的方法。方法:选取真菌核糖体RNA的ITS区为靶基因，设计通用引物和种特异性探针，将3个属的6种临床常见真菌(白色念珠茵、热带念珠茵、光滑念珠茵、新型隐球菌、烟曲霉和黄曲霉)的种特异性探针加尾后固定于硝酸纤维素膜上；用标记生物素的真菌通用引物扩增11种医学真菌DNA，产物与固定在膜上的探针杂交。结果：通用引物可以扩增所试11种医学重要真菌的DNA，扩增片段长度约为560bp。6种真菌扩增产物只与其对应的探针杂交。结论：此方法快速、简便、特异，适合常规实验室开展。     

一步法快速鉴定皮肤癣菌

目的探讨一步法快速鉴定皮肤癣菌的临床价值。方法采用快速简便的一步法处理癣菌及非癣菌菌株获得菌株DNA。癣菌通用引物的敏感性测定:将获得的菌株DNA以及人DNA进行PCR扩增后跑电泳,观察是否出现特定大小的阳性条带。PCR反应体系的敏感性测定:用超微量分光光度计测量癣菌菌液的DNA浓度,再将癣菌菌液的DNA进行10倍连续稀释,获得不同浓度的癣菌菌液,随后进行PCR扩增,记录特定大小的阳性条带出现时的最小癣菌DNA浓度值,PCR重复做3次。结果所有癣菌菌株经PCR扩增后均出现366 bp的阳性条带,非癣菌菌株及人DNA经PCR扩增后均未出现任何条带。将浓度为600 ng/μl的癣菌DNA浓度经10倍连续稀释后,得到的7个浓度菌液,其中600 ng~6 pg经PCR扩增后出现366 bp的阳性条带,第7个600 fg浓度经PCR扩增后未出现任何条带。结论皮肤癣菌通用引物CHS1具有较高的特异性,可用作检测癣菌的特异性引物,本实验PCR体系的敏感度较高,为6 pg。     

医学重要真菌的实验室诊断进展之二--分子生物学鉴定技术的研究进展

医学真菌的实验室常规鉴定方法尽管有了很大发展，但仍存在耗时长、敏感性低的问题。近年来，研究者做了大量工作，试图应用分子生物学方法鉴定医学重要真菌弥补传统方法的不足。本文根据近年来的文献报道，概括总结了以念珠菌为主的分子生物学检测方法的进展情况。     

医学重要真菌的实验室诊断进展之一--实验室常规方法的改进和发展

如何快速、准确地诊断机会性真菌感染，特别是深部真菌感染一直是临床微生物实验室面临的难题之一。由于传统的真菌培养耗时长，敏感性低，血清学方法特异性和敏感性差，这就要求研究者改进和发展传统技术进行诊断，指导临床选择合适的抗真菌药物，及早治疗侵袭性真菌病。本文根据近年来的文献报道，对以念珠菌为主的实验室常规诊断方法的改进和发展作一概述。     

一种新型核酸快速回收方法

目的：建立一种简便快速的核酸浓缩回收新方法，方法：采用不同浓度的线性聚丙烯酰胺作为共沉淀载体，加入醋酸钠和无水乙醇后混匀离心，利用紫外检测和电泳方法确定对不同种类，大小和体积的核酸的回收率。结果：该方法可在１５ｍｉｎ内完成全部操作，适用于２０ｎｔ以上的单链和双链ＤＮＡ，ＲＮＡ的浓缩，对于０．１μｇ以上，大于４００ｂｐ的ＤＮＡ片段，回收率几乎达１００％，回收浓缩产物不影响后续的逆转录，ＰＣＲ，酶切和     

HBV－DNA套式一次PCR方法的建立

应用乙型肝炎病毒ＤＮＡＣ基因区的一对外引物（ＨＢＣ＿１和ＨＢＣ＿２，扩增片段长度为５６６ｂｐ）及一对内引物（ＨＢＣ＿３和ＨＢＣ＿４，扩增片段长度为３０１ｂｐ）对不同稀释度的ＨＢＶ－ＤＮＡ（ａｄｒ亚型）进行套式一次ＰＣＲ扩增，结果表明灵敏度可达到１０ａｇ水平。此方法快速、简便、灵敏、材异，与分子杂交的灵敏度相当。     

梭菌属神经毒素的基因鉴定与分型

目的:建立梭菌属神经毒素基因快速鉴定和分型的PCR方法。方法:根据GenBank提供的肉毒毒素及破伤风毒素基因序列,综合应用多种生物学软件与在线分析平台,设计特异性及通用检测引物,对各型梭菌属毒素基因进行PCR扩增,验证扩增反应的特异性、通用性、灵敏度及重复性。结果与结论:设计了针对A,B,E,F型肉毒毒素、破伤风毒素基因轻链毒性活性区的5对特异引物,以及重链跨膜区和结合区的一对通用引物(BonAB-P01/P02,BonB-P01/P02,BonE-P01/P02,BonF-P01/P02,TET-P01/P02,TY-P01/P02)。对各型神经毒素进行特异性扩增并在型间进行交叉实验,检测特异性良好,没有交叉反应;通用扩增结果显示均得到1 100 bp大小的条带。目前此检测方法灵敏度可达到(1~3)×103个菌。该检测方法特异性强,灵敏度高,可以用于梭菌属神经毒素基因的快速筛查与鉴定分型。     

应用原位逆转录PCR 检测石蜡切片中HCV RNA

目的：检测石蜡包埋组织中的HCV RNA。方法：原位PCR是一种能够检测单拷贝、低拷贝（20bp）DNA或RNA序列的新技术，本研究应用原位逆转录PCR检测石蜡包埋人肝外胆管癌组织中的HCV RNA。结论和结论：（1）基因组DNA去除一定要彻底。（2）选择合适的逆转录酶。（3）用原位PCR仪专用的封片装置封好，以防扩增液流出。（4）无水乙醇后固定10min防止扩增产物扩散。（5）对于不同组织来源的DNA或RNA进行原位PCR扩增的次数不同，不是循环次数越多越好，次数增多有可能使扩增产物从细胞内溢出，增加非特异性。