涎腺腺样囊性癌过继免疫治疗的实验研究：γlFN与TNFα对LAK…

通过体外实验观察了当γ干扰素（γｌＦＮ）和肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）作用于ＬＡＫ细胞（淋巴因子激活杀伤细胞）诱导阶段时对ＬＡＫ细胞杀伤涎腺腺样囊性癌细胞系２（ＡＣＣ－２）活性的影响。结果显示：ＴＮＦα可以提高低剂量白介素－２（ＩＬ－２）诱导的ＬＡＫ细胞杀伤活性，且对ＡＣＣ－２的杀伤活性要高于Ｒａｊｉ，增强作用的产生与它对ＬＡＫ细胞增殖的影响无关。γｌＦＮ可以呈剂量依赖性地抑制ＬＡＫ细胞杀伤活性，并     

涎腺腺样囊性癌过继免疫治疗的实验研究γlFN与TNFα对LAK细胞涎腺腺样囊性癌细胞的杀伤活性及可能机制

通过体外实验观察了当γ干扰素（γｌＦＮ）和肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）作用于ＬＡＫ细胞（淋巴因子激活杀伤细胞）诱导阶段时对ＬＡＫ细胞杀伤涎腺腺样囊性癌细胞系２（ＡＣＣ－２）活性的影响。结果显示：ＴＮＦα可以提高低剂量白介素—２（ｌＬ－２）诱导的ＬＡＫ细胞杀伤活性，且对ＡＣＣ－２的杀伤活性要高于Ｒａｊｉ，增强作用的产生与它对ＬＡＫ细胞增殖的影响无关。γｌＦＮ可以呈剂量依赖性地抑制ＬＡＫ细胞杀伤活性，并轻度抑制ＬＡＫ细胞的增殖     

涎腺腺样囊性癌过继免疫治疗的实验研究

为研究涎腺腺样囊性癌过继免疫治疗的特点，通过体外试验观察了肿瘤坏死因子α（ｔｕ－ｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒα，ＴＮＦ－α）与γ干扰素（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－γ，ＩＦＮ－γ）分别作用于白细胞介素２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２，ＩＬ－２）诱导的淋巴因子激活杀伤（ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｌｅｒ，ＬＡＫ）细胞杀伤靶细胞不同阶段时对ＬＡＫ细胞杀伤活性的影响。结果表明腺样囊性癌（ａｄｅｎｏｉｄｃｙｓｔｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＡＣＣ）－２为ＬＡＫ杀伤敏感细胞，ＴＮＦ－α与ＩＦＮ－γ均适合作为增强剂增强ＬＡＫ细胞杀伤ＡＣＣ－２的活性。ＴＮＦ－α的增强方式是与ＩＬ－２共同诱导ＬＡＫ细胞，而ＩＦＮ－γ则通过预保温ＡＣＣ－２细胞提高其被ＬＡＫ细胞杀伤的敏感性。     

蛋白激酶C亚型在涎腺腺样囊性癌中的表达

目的：探讨蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）与涎腺腺样囊性癌（ＳＡＣＣ）发生发展的关系。方法：采用Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ技术对ＰＫＣ５种亚型α,βⅠ,βⅡ,ε,δ在该肿瘤亚细胞水平的表达进行研究。结果：（１）ＳＡＣＣ及临近正常组织胞浆中均可见ＰＫＣ－α、ＰＫＣ－βⅠ,ＰＫＣ－βⅡ的表达,与临近正常组织相比,肿瘤组织胞浆中上述３种ＰＫＣ亚型表达明显降低（Ｐ〈０．０１）;（２）临近正常组织胞膜中未见ＰＫＣ     

舍格伦综合征涎腺组织HLA—DR抗原表达的研究

作者对２１列舍格伦综合征患者的涎朱组织ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达的免疫组织化学研究结果表明：ＳＳ腺组织中有ＨＬＡ－ＤＲ的异常表达。这些阳性着染，可见于导管细胞、腺泡细胞及部分淋巴细胞表面。与对照组相比，ＳＳ涎腺组织中此抗原表达的阳性率并无明显升高，但二者在反应强度方面有明显差异（Ｐ＜０．０５）。     

HSV-tk基因转导对涎腺腺样囊性癌细胞生物学特性的影响

目的：检测单纯疱疹病毒胸苷激酶基因的转导对高转移性涎腺腺样囊性癌细胞（ＡＣＣ－Ｍ）生物学行为的影响。方法：对基因转导细胞作生长曲线测定,电镜观察,细胞周期检测,细胞表面组织相容复合物（ＭＨＣ）Ⅰ类和Ⅱ类分子表达变化的测定。结论：ＨＳＶ－ｔｋ基因的转导对ＡＣＣ－Ｍ细胞的生物学行为无明显影响。     

涎腺腺样囊性癌c─erbB─2癌基因蛋白的研究

采用ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因蛋白抗体，对３４例涎腺腺样囊性癌（包括筛孔型、管状型、实性型）进行免疫组化染色。结果显示：涎腺腺样囊性癌３种组织学类型均过度表达ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因。经统计学分析表明，筛孔型与管状型涎腺腺样囊性癌的ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因表达差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。提示ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因的过度表达与肿瘤的分化及恶性程度关系密切。     

涎腺腺样囊性癌神经内分泌性探讨

目的 探讨涎腺腺样囊性癌具有神经内分泌性的可能性,方法 采用神经内分泌细胞及肿瘤细胞所特有及相关的抗体Ｓ－１００蛋白,神经特异性烯醇酶,嗜铬素Ａ和突触素４种标记物对其在该肿瘤的表达进行免疫组织化学研究。结果 ５０例涎腺腺样囊癌中Ｓ－１００蛋白阳性表达４２例（８４％）神经特异性烯醇酶阳性表达３２例（６４％）。嗜铬素Ａ阳性表达８例（１６％）,突触素阳性表达７例（１４％）,结论：涎腺腺样囊性癌部分细胞具     

肺高转移性涎腺腺样囊性癌细胞株的筛选

为了筛选出具有肺高转移性的克隆株，为涎腺腺样囊性癌肺转移提供实验基础。作者通过５次连续裸鼠体内传代，结合体外克隆技术、血小板凝集能力分析，从Ａｃｃ－２细胞系中筛选出肺高转移性腺样囊性癌细胞株——Ｍ－５ｃｌｏｎｅ２４，命名为Ａｃｃ－Ｍ。其转移能力与Ａｃｃ－２相比有明显增强，转移率由１８％提高至９６％（Ｐ＜０．００１），转移灶肺重量由０．３１ｇ提高至０．８８ｇ（Ｐ＜０．０１）；细胞使血小板凝集能力与转移率（ｒ１＝０．８９）、转移灶肺重量（ｒ２＝０．８５）呈高度相关。本研究提示，血小板凝集能力可作为判断涎腺腺样囊性癌细胞转移能力的一个指标     

涎腺肿瘤中c-erbB-2癌基因扩增及蛋白产物过度表达的研究

作者采用ＤＮＡ斑点杂交及免疫组织化学方法对２８５例涎腺肿瘤石腊包埋组织中ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因扩增及蛋白产物过度表达进行检测．结果表明：涎腺恶性肿瘤及多形性腺瘤有不同程度的ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因扩增,其中癌在多形性腺瘤中扩增率２０／３０（６６．６７％）,腺癌为１３／２０（６５．００％）,明显高于其它肿瘤（ｐ＜０．０５）．ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白产物过度表达出现在癌在多形性腺瘤中１６／３０（５３．３３％）、腺癌１１／２０（５５．００％）、肉瘤１／１０（１０．００％）及多形性腺瘤中５／３５（１４．２９％）,癌在多形性腺癌中及腺癌表达率明显高于其它肿瘤（ｐ＜０．０５）．提示：ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因可能与涎腺肿瘤细胞分化程度有关,在部分肿瘤的发生、发展过程中起一定的作用．     

The high resolution acoustic images of tumors of the salivary gland]

We have tried to find out if the combination of DNL/rIL-2 and antitumor drug is able to induce a synergistic increase in the antitumor therapeutic effect.DNL were obtained from the patients who suffered from primary tongue cancer were been performed operation of radical neck dissection.When the ratio of the effectors to the targets was 5:1 with local administration,rIL-2 5x10(5)Kg/d and PYM 5mg kg/d ip administration,the inhibitory rate of tumor growth was 86%.The results showed a significant rate increase when compared with the therpeutic effect obtained by DNL/rIL-2,or PYM alone (P<0.05).In addition,we used Burgi formula to evaluated the antitumor effect of DNL/rIL-2 combined with PYM.The q value was 1.46.These results suggest that immunotherapy and chemotherapy perhaps function synergistically.     

转肿瘤坏死因子-α基因的肿瘤引流淋巴结细胞对人舌鳞癌SCID鼠移植瘤的生长抑制作用

目的探讨在体外具有强大抗瘤活性的经肿瘤坏死因子-α（TNF-α）基因转导的肿瘤引流淋巴结细胞（DNL）在体内的抑瘤效果以及与平阳星（PYC）联合应用的可行性。方法将舌鳞癌细胞系Tca8113细胞注入SCID鼠背部皮下建立移植瘤模型，取经TNF-α基因转导的DNL细胞在肿瘤区局部注射，联合应用低剂量PYC，观察肿瘤生长情况。至第8周以瘤重计算抑瘤率，并取瘤体标本经处理后作电镜和TUNEL检查，观察细胞凋亡情况。结果TNF/DNL加重组白细胞介素-2（rIL-2）组和TNF/DNL加rIL-2加PYC组抑瘤率均较高，2组间差异有统计学意义（P<0.05）；TNF/DNL加rIL-2组超微电镜及TUNEL检测均见凋亡细胞，与对照组相比，凋亡指数（AI）较高（P<0.05）。结论经TNF-α基因转导的DNL局部应用具有明显的抑瘤效果，与PYC联合应用抑瘤效果更大。诱导肿瘤细胞凋亡可能是TNF/DNL抗人舌鳞癌的重要机制之一。     

Experimental study of the effect of TNP-470 on human salivary adenoid cystic carcinoma cell in vitro]

OBJECTIVE: To investigate the effects of TNP-470 on human salivary adenoid cystic carcinoma cell line ACC M in vitro. METHODS: Cell proliferation was assessed by MTT assays and dye exclusion counting. Morphological changes of apoptosis were observed with fluorescent microscope. DNA ladder, apoptosis rate and cell cycle were examined by DNA agarose gel electronphores and fluorescence flow cytometry (FCM), respectively. RESULTS: The 50% inhibitory concentrations (IC50) of TNP-470 on ACC-M cells proliferation by MTT assays and dye exclusion counting were 40.68microg/ml and 46.38microg/ml. Apoptosis were observed by fluorescent microscope. DNA electrophoresis for the cells treated with TNP-470 showed brighter DNA ladder; Sub-G1 peak and G2/M arrest were also determined by FCM (P<0.01). CONCLUSION: TNP-470 has the effect of inducing apoptosis in ACC-M cells in vitro, which may be one of its antitumor mechanisms.     

BDNF对唾液腺腺样囊性癌细胞株抗失巢凋亡能力和转移的影响

目的：观察脑源性神经营养因子（BDNF）对唾液腺腺样囊性癌细胞系抗失巢凋亡能力和转移的影响，揭示BDNF与唾液腺腺样囊性癌高转移特性的关系。方法：以唾液腺腺样囊性癌（SACC）高、低转移细胞系ACC-2和ACC—M为研究对象，利用MTT、悬浮培养、流式细胞仪、软琼脂克隆形成实验观察BDNF对SACC细胞系体外培养过程中增殖和抗失巢凋亡的影响。以SPSS10．0软件对实验结果进行配对t检验。结果：ACC-2和ACC—M在体外培养过程中均具有一定的抗失巢凋亡能力，且ACC—M高于ACC-2（P〈0．01）。25、50、100ng/mlBDNF对ACC-2和ACC—M增值均无显著影响（P〉0．05）。50ng／ml BDNF可以显著提高ACC-2的抗失巢凋亡能力（P〈0．01）和克隆形成（P〈0．01）。结论：SACC的转移特性与抗失巢凋亡能力相关，适合浓度的BDNF可以提高SACC的抗失巢凋亡能力。     

5-氮-2′-脱氧胞苷选择性上调癌-睾丸抗原在腺样囊性癌细胞系的表达

目的：探讨5-氮-2′-脱氧胞苷（5-aza-2′-deoxycytidine,5DC）对癌-睾丸抗原（cancer-testis anti-gens,CTAs）在腺样囊性癌细胞株ACC-2（低转移株）和ACC-M（高转移株）中表达的调节作用。方法：采用RT-PCR检测5DC处理后6种癌-睾丸抗原（MAGE-1,MAGE-C2,NY-ESO-1,SCP-1,KU-CT-1,SLLP-1）在ACC-2和ACC-M中的表达情况;采用免疫细胞化学染色观察其中3种抗原在蛋白水平的表达。结果：RT-PCR显示：正常对照组,MAGE-1和MAGE-C2在ACC-2和ACC-M中均表达,而NY-ESO-1仅在ACC-M中表达。不同浓度的5DC处理后,MAGE-1、MAGE-C2在ACC-2和ACC-M中的表达增强（P〈0.05）;NY-ESO-1表达无明显改变。免疫细胞化学结果显示：5DC处理后,MAGE-1和MAGE-C2在两个细胞系的表达增强。结论：5DC可选择性增强MAGE-1和MAGE-C2在ACC-2和ACC-M的表达,提示MAGE-1和MAGE-C2可作为腺样囊性癌的潜在靶向抗原。     

槲皮素对人腺样囊性癌ACC-M细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的 观察槲皮素对人腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖和凋亡的作用,探讨槲皮素影响ACC-M细胞凋亡的可能机制。方法 采用CCK-8 法检测不同浓度的槲皮素对ACC-M细胞增殖的抑制作用并计算抑制率,计算IC₅₀;流式细胞术检测 ACC-M细胞凋亡率和细胞周期分布;实时荧光定量RT-PCR检测 ACC-M细胞中Survivin mRNA的表达。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析。结果 槲皮素抑制 ACC-M细胞增殖的作用明显,且呈浓度依赖性,IC₅₀为151.12 μmol/L（P<0.05）;Annexin V/PI 双染法检测显示,槲皮素能够诱导ACC-M细胞凋亡,且与剂量、时间呈正相关（P<0.05）;PI染色法检测显示,槲皮素主要作用于 G2/M 节点,能将细胞特异性地阻滞于 G2/M 期;RT-PCR检测显示,随着药物浓度增加,ACC-M细胞中Survivin mRNA的表达水平均呈不同程度的降低,200 μmol/L 槲皮素可显著抑制Survivin mRNA的表达。结论 槲皮素能够抑制ACC-M细胞增殖,诱导其凋亡,且呈时间-剂量依赖性。槲皮素可能通过下调Survivin的表达水平而发挥抗腺样囊性癌的作用。     

TNF-α基因转导的Tca8113细胞体外诱导DNL的细胞毒活性

目的:探讨TNF鄄α基因转导的人舌癌Tca8113细胞在体外能否诱导口腔鳞癌的引流区淋巴结细胞(DNL)而提高起其细胞毒活性。方法:体外用逆转录病毒载体将TNF鄄α基因导入Tca8113细胞并进行放射灭活,灭活的转基因细胞与来自舌鳞癌患者的DNL共培养后,采用LDH释放改良法检测诱导后DNL对未转基因Tca8113细胞的杀伤活性。结果:转基因Tca8113细胞诱导的DNL对未转基因Tca8113细胞的杀伤活性高于未经诱导的DNL。结论:TNF鄄α基因修饰的Tca8113细胞能够从肿瘤引流区淋巴结细胞中诱导出高细胞毒活性的免疫活性细胞,诱导出的免疫细胞中可能含有CTL。     

As_2O_3对ACC-M细胞增殖及VEGF和bFGF表达的影响

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人类腺样囊性癌ACC-M细胞体外增殖及表达VEGF和bFGF的影响。探讨As2O3对ACC-M细胞表达VEGF和bFGF的影响。方法:倒置相差显微镜下观察ACC-M细胞生长情况,采用MTT法检测不同浓度As2O3作用不同时间对ACC-M的抑制效应;以RT-PCR、Western blot方法检测As2O3作用后ACC-M细胞的两种血管生成相关因子VEGF和bFGF表达的变化。结果:As2O3抑制ACC-M细胞呈时间-剂量依赖关系。RT-PCR检测显示,As2O3作用后ACC-M细胞VEGF和bFGF基因表达无明显变化。Western blot检测显示,As2O3明显抑制ACC-M细胞VEGF和bFGF蛋白表达,呈时间-剂量依赖关系。结论:As2O3在体外明显抑制ACC-M细胞;As2O3明显抑制ACC-M细胞VEGF和bFGF基因的蛋白产物,其作用机制可能为抗腺样囊性癌的血管形成。     

TNP-470联合顺铂抗腺样囊性癌生长和肺转移的实验研究

目的　研究血管生成抑制剂TNP 470联合顺铂 (CDDP)对口腔腺样囊性癌生长及肺转移的抑制作用。方法　分别将建株的口腔腺样囊性癌肺转移细胞株 (ACC M)细胞悬液注射至裸鼠皮下和尾静脉 ,建立口腔腺样囊性癌皮下移植瘤及实验性肺转移模型。从移植后的第 3周开始 ,于裸鼠对侧皮下注射TNP 470 30mg/kg,隔日 1次 ,共7次。CDDP分别在第 3周和第 4周腹腔给药各 1次 ,剂量为 5mg/kg。停药后第 2d处死裸鼠。测量肿瘤大小 ,称重并计数肺转移结节数。以兔抗人Ⅷ因子相关抗原抗体免疫组化染色后 ,计数皮下瘤块血管密度。结果　与单用TNP 470相比 ,TNP 470联合CDDP对口腔腺样囊性癌生长和肺转移的抑制作用更强 ,但对皮下移植瘤的血管密度影响无明显差异。结论　TNP 470联合CDDP对口腔腺样囊性癌生长和肺转移有明显的抑制作用。     

两种干扰素抗Tca8113、ACC—M体外增殖的比较研究

目的比较干扰素α和干扰素γ分别对舌鳞状细胞癌(Tca8113)和腺样囊性癌(ACC-M)直接抗癌作用及抗癌特异性.方法采用MTT法和集落法(HTCA),分别检测两种干扰素对Tca8113、ACC-M及L929细胞增殖活性的影响.结果1000U/ml干扰素α、干扰素γ对Tca8113细胞生长抑制率分别为(45.4±4.1)%,(45.9±5.4)%;集落形成抑制率分别为(52.0±2.9)%,(54.6±4.1)%;对ACC-M细胞生长抑制率分别为(23.1±2.1)%,(26.5±1.3)%;集落形成抑制率分别为(26.2±2.0)%,(27.3±1.8)%.两种干扰素之间无显著性差异(P＞0.05),两种细胞系(株)之间有显著性差异(P＜0.05).1000U/ml干扰素α、干扰素γ对L929细胞生长抑制率分别为(3.9±1.1)%,(4.1±0.7)%,与Tca8113相比有显著性差异(P＜0.01).两种干扰素均有较好的抗癌作用特异性.结论干扰素α、干扰素γ对舌鳞状细胞癌有较强的直接抗癌作用和较好的抗癌特异性,但对腺样囊性癌抑制作用不明显.