海南省间日疟原虫环子孢子蛋白基因分型及地理分布

目的 确定海南省疟区间日疟原虫环子孢子蛋白（CSP）基因型及地理分布，为制定合理的防治对策提供科学依据。方法 采用套式等位特异聚合酶链反应（PCR）技术，检测在海南省疟区内感染的间日疟病人滤纸血滴样本。结果 在99份受检血样中，有54份显示约700bp和约180bp二条扩增带，为温带族虫株，占54.54%;33份显示约700bp扩增带，为热带族虫株，占33.33% ;12份显示约700bp和588bp两条扩增带，为PV-2型虫株，占12.12%。结论 海南省流行的间日疟原虫CSP呈多态性，且存在地理分布差异。     

辽宁省间日疟原虫环子孢子蛋白基因型分析

目的探讨辽宁省间日疟原虫环子孢子蛋白(CSP)的基因型与地理分布。方法采集镜检确诊的间日疟患者血样15份,Chelex-100离子交换法提取DNA,进行单管-套式PCR扩增,根据琼脂糖凝胶电泳结果判定环子孢子蛋白(CSP)基因型别。结果 12份本地感染间日疟血液标本中6份鉴定为PV-Ⅰ型温带族虫株(占50.00%),6份鉴定为PV-Ⅰ型温带族和PV-Ⅱ型混合虫株(占50.00%);3例输入性间日疟病例中PV-Ⅰ型热带族和温带族各1例,PV-Ⅰ型温带族和PV-Ⅱ型虫株混合感染1例。结论目前辽宁省间日疟原虫存在2种CSP基因型,即PV-Ⅰ型温带族虫株和温带族、PV-Ⅱ型混合感染虫株,无热带族虫株。     

广西间日疟原虫环子孢子蛋白基因型的初步研究

目的　了解广西间日疟原虫种群的基因型组成及其地理分布。　方法　用滤纸法采集经镜检确诊的间日疟原虫阳性病人血样 31份 ,Chelex- 10 0离子交换法用于提取滤纸血样中的 DNA,改进的套式 -等位特异 - PCR和琼脂糖凝胶电泳用于鉴别性片段的扩增、分析和鉴定。　结果　在 19份广西当地间日疟病例血样中 17份鉴定为温带族虫株(89.5 % ) ,2份为热带族虫株 (10 .5 % ) ;12份输入病例血样中 ,温带族 8份 (6 6 .7% ) ,热带型 3份 (2 5 .0 % ) ,PV- 2型 1份(8.3% )。　结论　目前广西当地流行的间日疟以温带族虫株为主 ,少数热带族病例出现在环江和防城县 ;但输入间日疟病例中热带族虫株感染占较大比例。     

山东省间日疟原虫MSP-1和CSP等位基因型及同源性分析

目的分析山东省间日疟原虫MSP-1和CSP基因类型及其同源性,为病例溯源提供科学依据。方法采集2011年山东省报告的12例间日疟患者血样,提取疟原虫基因组DNA;分别根据间日疟原虫MSP-1和CSP基因序列设计引物,进行巢式PCR扩增、酶切、测序、序列比对及同源性分析。结果 12份间日疟患者血样MSP-1基因全部出现470bp扩增条带以及350、120 bp酶切片段,均为Sal-1型;MSP-1进化树分析显示,9份省内感染者样品序列同属一个分枝,1份印度感染者样品序列与印度分离株位于同一分枝。12份间日疟患者样品CSP基因均包含GDRA(D/A)GQPA序列,为PV-Ⅰ型,其中10份省内感染者和1份广东感染者样品CSP基因出现560~840 bp和150~230 bp两种扩增条带,为PV-Ⅰ型温带族,1份在印度感染者样品CSP基因仅出现560~840 bp条带,为PV-Ⅰ型热带族。CSP进化树表明,10份省内感染者及1份广东感染者样品序列同属一个分枝,1份在印度感染者样品序列与印度和印度尼西亚分离株位于同一分枝。结论山东省本地感染间日疟原虫MSP-1基因型均为Sal-1型,CSP基因型均为PV-Ⅰ型温带族,本地虫株具有较强的基因同源性。     

中缅边境间日疟原虫环子孢子蛋白基因分型

根据间日疟原虫环子孢子蛋白(CSP)基因设计特异分型引物,利用巢式PCR技术(Nested-PCR)对采自中缅边境的间日疟患者血样作分型鉴定。检出的174份血样中,PV-I型热带族占54.6%(95/174)、温带族占35.6%(62/174)、PV-II型占2.9%(5/174)、混和感染占6.9%(12/174)。表明中缅边境的间日疟原虫存在4种基因型,以热带族为优势虫株,缅甸拉咱与云南腾冲间日疟原虫CSP基因型构成无差异(χ2=3.381,P0.05)。     

广西间日疟原虫环子孢子蛋白基因型的初步研究

目的：了解广西间日疟原虫种群的基因型组成及其地理分布。方法 用滤纸法采集经镜检确诊的间日疟原虫阳性病人血样31份，Chelex-100离子交换法用于提取滤纸血样中的DNA，改进的套式－等位特异－PCR和琼脂糖凝胶电泳用于鉴别性片段的扩增，分析和鉴定。结果 在19份广西当地间日疟病例血样中17份鉴定为温带族虫株（89．5％），2份为热带族株（10．5％）；12份输入病例血样中，温带族8份（66．7％），热 带型3份（25．0％）PV－2型1份（8．3％）。结论 目前广西当地流行的间日疟以温带族虫株为主，少数热带族病例出现在环江和防城县，但输入间日疟病例中热带族虫株感染占较大比例。     

间日疟原虫环子孢子蛋白基因型的鉴别研究

[目的 ]建立间日疟原虫环子孢子蛋白 (CSP)基因分型法用于地理株的鉴定。[方法 ]Chelex 10 0离子交换法提取滤纸血样中的微量DNA ;套式PCR和等位特异PCR技术、琼脂糖电泳分析法、斑点印迹和Southern印迹 探针杂交技术分别用于判别性片段的扩增、分析和鉴定。[结果 ]用本文描述的套式 等位 特异PCR分型法 ,从一小片滤纸血样提取的微量DNA中 ,扩增出不同长度范围的 3种判别性片段 :6 5 0～ 770bp(间日疟种特异 ) ,15 0～2 30bp(温带族特异 ) ,5 88～ 6 15bp(PV 2型特异 )。用本法检测参考虫株出现的带型和长度与设计的靶序列完全吻合。检测 5 9份国内感染血样 ,42份鉴定为温带族虫株 ,15份为热带族虫株 ,2份为PV 2型虫株。 4份境外感染血样中 ,2个巴基斯坦分离株均为温带族 ,缅甸和老挝各 1株均为热带族虫株。 [结论 ]①本法能同时区分PV 1型 ,PV 2型以及温带族与热带族虫株 ,且较现有 (PCR 探针杂交 )法更为简便、快捷 ;②现场血样初步检测结果显示 :我国存在PV 1型 (温带族与热带族 )虫株和PV 2型虫株 ,也可能存在温带族东南亚组虫株。     

我国间日疟原虫基因型种群结构及其地理分布

目的　用分子技术调查中国间日疟原虫种群结构与地理分布。　方法　用滤纸血滴法采集我国 10个省 (自治区 )间日疟现症病人血样 ,用套式 、半套式 等位特异PCR基因分型法鉴定其型、族归属及其CSP基因型 ,并作流行病学统计分析。　结果　在 384个间日疟原虫分离株中 ,检出温带族 2 5 8株 ,分为 14个不同的(等位变异 )基因型 ,遍布全国各省 ,其中主带≤ 731bp的基因型仅见于南方 5省 ;热带族 79株 ,分为 5个不同基因型 ,分布于北纬 2 5°以南的 5个省 (自治区 ) ;PV 2型 16株 ,包括 2个基因型 ;另 33个分离株为不同型(族 )或不同基因型虫株的重复 (混合 )感染。　结论　目前我国北纬 2 5°以北各省是单一温带族间日疟原虫分布区 ,北纬 2 5°以南地区是温带族与热带族间日疟原虫重叠分布区 ,其中海南和云南两省局部地区同时尚存在PV 2型 ;温带族内存在地理分布明显不同的 2个基因类群。     

我国南方五省间日疟原虫环子孢子蛋白基因型与疟疾防治效果关系的探讨

目的 探讨我国南方间日疟原虫环子孢子蛋白（CSP）基因型种群结构、疟区分类及其防治意义。 方法 应用单管-套式/多重PCR对采自海南、云南、广西、广东、贵州等5省（自治区）共346份间日疟原虫阳性患者滤纸血样作环子孢子蛋白（CSP）基因型鉴定， 结合5省（自治区）疟疾历史资料和近年流行状况进行分析。 结果 广东、广西和贵州等3省（自治区）疟原虫PV-1型温带族虫株均占90% 以上，热带族仅有个别发现，未见PV-2型；云南省疟原虫PV-1温带族占71.4%、 热带族占28.6%，PV-2型仅个别发现；而海南省PV-1型温带族、热带族和PV-2型等3大基因型类群分别约占1/3。 结论 广东、广西和贵州等3省（自治区）间日疟原虫PV-1型温带族占绝对优势, 疟疾控制效果好, 而海南、云南两省间日疟原虫基因型类群较复杂，疟疾控制难度大，说明间日疟原虫种群基因型结构复杂性和多重感染程度是影响当地间日疟流行势态及其防治效果的重要因素，是防治与监测中重要的流行病学指征之一。     

逆转录聚合酶链反应检测和鉴定疟原虫的研究

在同一反应体系中建立能同时检测和鉴定恶性疟、间日疟及混合感染的逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法,并用于现场采集血样检测。先以恶性疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因为靶片段,设计1对针对恶性疟原虫的特异性引物,建立RT-PCR检测恶性疟原虫方法,在此基础上,增加1条针对间日疟原虫的种特异性引物,使在同一反应体系中,能够同时扩增恶性疟原虫和间日疟原虫的特异片段。恶性疟原虫和间日疟原虫模板在同一反应体系中分别被扩增出预期大小为359bp和449bp特定扩增带,健康人血样和空白对照均未见扩增带。用建立的RT-PCR检测方法对现场采集128份血样进行检测,与镜检的阳性符合率为9609%,14份镜检为阴性的发热病人全血标本中2份RT-PCR检测为间日疟阳性。RT-PCR检测疟原虫方法具有敏感性高、特异性强的特点,对疟疾诊断、镜检质量控制和流行病学研究具有较大的实用价值。     

间日疟原虫MSP-1 和 CSP 基因遗传多样性的分析

目的比较间日疟原虫两种主要分子标志(MSP-1 和 CSP)的遗传多样性. 方法分别用MSP-1和CSP基因分型方法鉴定间日疟原虫现场分离株,并进行基因多态性比较和分析. 结果共检测32份海南省现场确诊的间日疟病人血样,MSP-1等位基因型混合感染率为18.75%,平均克隆数1.16;CSP基因型混合感染率为35.29%,平均克隆数为1.47.如果同时考虑两种基因型,混合感染率则为50.00%.空间对应分析发现,热带族与Sal-1型关系密切,PvⅡ型与重组Ⅲ型分布靠近,其他基因型则较分散. 结论同时用MSP-1和CSP两种分子标志检测间日疟原虫,其基因型混合感染率高于用单一标志检测,两种标志检测结果存在一定对应关系.     

辽宁丹东间日疟原虫裂殖子表面蛋白1等位基因型分析

用套式PCR方法扩增辽宁丹东地区间日疟原虫裂殖子表面蛋白1(MSP-1)基因ICB5-ICB6片段,经PvuⅡ酶切和琼脂糖凝胶电泳,对产物进行序列分析。结果显示,11份镜检确诊的间日疟患者血液标本经套式PCR扩增均出现大小约为470 bp(Sal-1型)或400 bp(Belem型)的特异性片段。经PvuⅡ内切酶消化后,其中5份血样(470 bp),出现120和350 bp酶切片段,为Sal-1型;其余6份血样(400 bp)中,1份出现400 bp片段,为Belem型,1份出现120和280 bp两种酶切片段,为重组Ⅲ型,4份出现120和240 bp两种酶切片段,为朝鲜型。辽宁省丹东地区的间日疟原虫PvMSP-1基因存在3种不同的等位基因型,以Sal-1型和朝鲜型为主,但无不同等位基因型的混合感染。     

不同地区间日疟原虫环子孢子蛋白基因两侧翼DNA序列的比较

用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术、引物标记周期反应测序法和自动核酸序列分析仪直接测定我国和３个西太平洋国家共１８个间日疟分离株的环子孢子蛋白（ＣＳＰ）基因两侧翼ＤＮＡ序列，并与ＢＺＬ、Ｂｅｌｅｍ、Ｓａｌ－１、Ｎ．Ｋ．和Ｔｈａｉ等地区株进行比较。结果表明不同地区间日疟ＣＳＰ基因Ｎ端和Ｃ端非重复序列高度保守；１８个分离株与５个地区株的上述序列基本一致。但在Ｃ端可变区则有较多变异，包括一些尚无记载的地理局限性变异。     

应用聚合酶链反应在海南检测间日疟原虫的效果

目的： 建立适合疟疾流行区现场应用的ＰＣＲ 检测间日疟的方法, 并在现场与常规涂片镜检法进行比较。方法： 通过改良血样的采集及模板处理, 设计引物及优化反应条件等, 建立简便、敏感与特异的ＰＣＲ检测间日疟原虫的方法, 并在海南省疟疾流行区对３１０ 例间日疟患者与镜检法进行比较。结果： ＰＣＲ 检测间日疟原虫具有特异性, 其敏感性为１０ 个原虫／μｌ。ＰＣＲ检测和镜检法的阳性率分别为３４．２％ 和３１．９％ , 与ＰＣＲ比较, 镜检法有５ 例误诊或漏诊。结论： 此ＰＣＲ 法可用于现场检测间日疟患者。