川芎嗪与环孢菌素A联合应用对转基因多药耐药细胞K562/MDR的逆转作用

目的研究中药川芎嗪(TMP)与环孢菌素A(CsA)联合应用对转基因多药耐药细胞K562/MDR的耐药性逆转作用及可能机制。方法应用非细胞毒性剂量的TMP和CsA单独及联合作用于K562/S和K562/MDR细胞,MTT法检测细胞对阿霉素(ADM)的药敏性,计算耐药倍数及逆转倍数。利用罗丹明123(Rh123)进行蓄积与排出试验,免疫组化检测P-gp的表达,RT-PCR方法检测MDR1基因的表达。结果与K562/S细胞相比,K562/MDR细胞的耐药倍数为19.2倍;TMP及CsA可显著降低ADM对K562/MDR细胞的IC50(P0.01),逆转倍数分别为4.9倍及9.2倍,两者联合应用,逆转倍数为15.4倍。TMP及CsA单独应用均能降低K562/MDR细胞P-gp的表达,联合应用使K562/MDR细胞P-gp的表达率明显低于单独应用(P0.01);TMP和CsA单独及联合应用,MDR1基因表达均有不同程度的下调。结论 TMP和CsA联合逆转K562/MDR细胞的多药耐药性具有协同作用,其机制可能与下调MDR1基因表达和降低P-gp水平有关     

高三尖杉酯碱白血病多药耐药细胞系K562/HHT的诱导及米非司酮逆转耐药的研究

目的: 研究高三尖杉酯碱（HHT）诱导的白血病多药耐药细胞株耐药机制以及米非司酮(RU486)逆转其耐药效应。方法：采用反复短期暴露并逐渐增加HHT浓度的方法建立白血病多药耐药细胞系K562/HHT，MTT法检测K562/HHT细胞对化疗药物的敏感性及RU486对该细胞的细胞毒效应，RT-PCR法检测细胞MDR1基因、葡萄糖神经酰胺合成酶（GCS）基因的表达，流式细胞术检测细胞P-糖蛋白的表达和柔红霉素积累量，免疫组化法检测细胞Bcl-2、Bax、caspase-3的表达状况。结果： 成功诱导出多药耐药细胞系K562/HHT，K562/HHT较其亲代细胞K562对HHT、阿霉素、长春新碱、依托泊苷的耐药性分别提高462.6、2.8、1 183.4、2.6倍，K562/HHT细胞MDR1基因、GCS基因、P-糖蛋白和Bcl-2/Bax比值明显高于K562细胞（P<0.05），caspase-3表达、柔红霉素积累量明显低于K562细胞（P<0.05）。10 μmol/L的RU486对K562/HHT细胞无明显杀伤（存活率94.67%±2.48%），该浓度RU486可不同程度地逆转K562/HHT细胞对上述化疗药物的耐药性，RU486作用后K562/HHT细胞caspase-3表达、柔红霉素积累量明显高于作用前（P<0.05），Bcl-2/Bax比值明显低于作用前（P<0.05）。结论： 白血病细胞系K562在HHT的作用下可形成多药耐药细胞系K562/HHT，其耐药性的形成与P-糖蛋白、GCS、Bcl-2/Bax比值及caspase-3等机制有关，RU486可通过提高细胞内药物积累、调节Bcl-2/Bax比值和caspase-3的表达逆转此细胞的耐药性。     

As_2O_3逆转K_(562/ADM)细胞多药耐药的研究

目的　阐述As2 O3 (三氧化二砷 )治疗人红白血病机制。方法　采用人红白血病多药耐药株K562 / ADM作为实验模型 ,研究As2 O3 对该细胞MDR逆转的可能性。结果　①K562 / ADM 细胞对ADM具有明显的抗性 ,与K562 细胞相比 ,抗性倍数约为 4 0倍 ,而两者对As2 O3 的IC50 接近 ,无显著差异 ;②低毒剂量的As2 O3 (1 0 μmol/L)与ADM(4 0 μg/ml)联合运用 ,可升高细胞内ADM的浓度 ,降低细胞对ADM的IC50 ,使该细胞对ADM的抗性有数倍逆转。结论　As2 O3 是一种有效的MDR逆转剂。     

与肿瘤耐药有关的P-gp、GST蛋白在K562／ADM和转MDR基因K562／MDR中的表达

化疗是血液系统恶性肿瘤和部分实体瘤的重要治疗手段之一，但耐药性的产生是癌症化疗失败的主要因素之一。本实验应用免疫细胞化学技术(SP-ICC)、分光光度法检测并比较慢性粒细胞白血病急性变细胞株K562、人工用阿霉素(ADM)诱导建成的肿瘤耐药细胞株K562／ADM和用逆转录病毒转染MDR基因建成的肿瘤耐药细胞株K562／MDR三种细胞株细胞表面的P-gp和细胞内GST的表达和GST比活力的改变，     

肿瘤耐药基因的研究进展

肿瘤细胞对多种化疗药物产生交叉耐药性称为多药耐药(multidrug resistance, MDR），是造成肿瘤耐药化疗失败的主要原因。经过20余年国内外诸多实验室通过诱导耐药细胞株及对动物模型耐药表型的研究，发现多药耐药的发生存在多机制，多环节。针对不同耐药机制，已经发现一系列逆转剂。因此，对MDR机制研究和逆转MDR成为肿瘤治疗亟待解决的问题     

人质膜型唾液酸酶与人红白血病细胞多药耐药相关

目的探讨人质膜型唾液酸酶(Neu3)与人红白血病细胞多药耐药的关系。方法分别或联合柔红霉素(DNR)与唾液酸酶特异性抑制剂(NeuAC2en)处理K562和K562/ADM细胞,MTT法检测细胞生存率;RT-PCR检测多药耐药基因(MDR)、多药耐药相关蛋白(MRP)、06-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)、谷胱甘肽S转移酶(GST)、BCL-xl、BAX和BCL-2mRNA表达;Western blot法检测MDR基因蛋白产物P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达;TBA法检测唾液酸酶活性。结果与K562细胞相比,K562/ADM细胞对DNR具有一定的抵抗性,NeuAC2en与DNR有协同作用(P<0.01);应用NeuAC2en或DNR后K562和K562/ADM细胞Neu3活性均明显下降,两种药物联合应用Neu3活性下降最明显(P<0.01);相同处理条件下,与K562细胞相比,K562/ADM细胞中Neu3、MDR1、BCL-xl和BCL-2表达增加,BAX无明显变化;应用DNR后,MDR1、Neu3、BCL-xl、BCL-2表达均下降,而DNR与NeuAC2en联合应用,以上基因表达水平下调最明显。...     

姜黄素对耐药细胞株K562/ADM的耐药逆转作用研究

目的:研究姜黄素对慢性粒细胞白血病多药耐药细胞株K562/ADM中多药耐药基因mdrl表达的下调作用.方法:采用RT-PCR和Western blot方法检测各处理组K562/ADM细胞株中mdrl基因表达;利用MTT试验检测姜黄素处理后K562/ADM细胞株对阿霉素敏感性的改变.结果:姜黄素抑制了K562/ADM细胞株中多药耐药基因mdrl的表达,姜黄素明显增加K562/ADM细胞株对阿霉素的敏感性.结论:姜黄素通过抑制P-gP的药物外排作用有效逆转K562/ADM细胞株的多药耐药性.     

三氧化二砷耐药白血病细胞株K562/AS2的建立及其与多药耐药的关系

目的:建立三氧化二砷(As₂O₃)耐药白血病细胞株,用于研究其耐药机制。初步探讨该细胞系与多药耐药的关系。方法:As₂O₃耐药白血病细胞株的建立通过逐步增加药物浓度方法。细胞毒实验采用MTT法,细胞周期测定采用碘化丙啶荧光染色法,细胞表面P-糖蛋白(P-gp)、细胞内柔红霉素(DNR)浓度、以及细胞免疫表型测定采用流式细胞术测定。结果:As₂O₃耐药白血病细胞株K562/AS2的细胞倍增时间和细胞周期与敏感细胞株K562相似。K562/AS2对As₂O₃、DNR、足叶乙甙(VP16)和阿糖胞苷(Ara-C)的耐药倍数分别为(7.4、2.9、3.8和1.1倍)。多药耐药细胞K562/A02对As₂O₃、DNR、VP16和Ara-C的耐药倍数分别为(0.8、94、2.5和0.9倍)。K562细胞与K562/AS2细胞之间的表面P-gp和细胞内DNR荧光强度无明显差异。结论:建立一株对临床可获得药物浓度(2μmol/L)的As₂O₃产生耐药的白血病细胞K562/AS2。K562/AS2对As₂O₃的耐药倍数是敏感株K562的7.4倍。K562/AS2对DNR和VP16部分耐药,其机制与多药耐药基因1(mdr1)表达产物P-gp作用无关。     

g562／AS2细胞株对三氧化二砷耐药机制的初步研究

目的：研究K562／AS2细胞株对三氧化二砷（ATO）耐药的机制。方法：采用MTT法检测细胞毒性。细胞表面P-糖蛋白（P—gP）、细胞内柔红霉素（DNR）浓度采用流式细胞术检测。DNA聚合酶、拓扑异构酶Ⅱ（TopoⅡ）、多药耐药基因1（mdr1）、多药耐药相关蛋白1（MRP1）以及肺耐药相关蛋白基因（lrp）表达水平的检测采用RT—PCR法。结果：K562和K562／AS2细胞表面P—gP任意荧光强度、K562／AS2细胞内DNR浓度均无显著差异（P〉0．05）。K562／AS2细胞株MRPⅠ和TopoⅡ表达明显高于K562细胞（P〈0．05），DNA多聚酶，mdr1和lrp表达与敏感细胞株K562细胞相同（P〉0．05）。结论：ATO耐药细胞K562／AS2高表达MRP1，并产生低倍数的多药耐药。K562／AS2细胞TopoⅡ基因表达增高，其意义有待进一步阐明。     

柴胡皂苷在体外对人白血病细胞株K562/ADM多药耐药性的逆转作用

目的: 研究柴胡皂苷(SS)对白血病细胞株K562/ADM 多药耐药性(MDR)的逆转作用,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法: 分别以不同浓度(1~100 mg/L)的SS作用于体外培养的K562和K562/ADM 细胞48 h,采用MTT 法检测细胞增殖抑制率,确定SS的非毒性剂量;采用非毒性剂量SS 1.25、2.5和5.0 mg/L,分别与不同浓度(0.05~100 mg/L)阿霉素(ADM)联合作用,检测各组细胞生长抑制50%的ADM浓度(IC₅₀),计算逆转指数和两药相互作用系数(CDI),观察SS协同ADM作用后的细胞形态;利用流式细胞术检测SS联合ADM作用后K562/ ADM细胞内ADM的蓄积程度、细胞凋亡和细胞周期变化。结果: 随着SS浓度的增加,细胞增殖抑制率也相应增加,呈剂量-效应关系;SS的非细胞毒性剂量为5.0 mg/L,逆转倍数为21.5倍;SS协同ADM作用后形态学方法显示肿瘤细胞数量减少,并出现了大量凋亡细胞,呈剂量-效应关系;SS可明显提高ADM在K562/ADM细胞内的蓄积,与未加SS对照组比较差异显著(P<0.05);SS可增强ADM对K562/ADM细胞的凋亡诱导作用,与未加SS对照组比较差异显著(P<0.05);K562/ADM细胞被阻滞在G₀/G₁期,与未加SS对照组比较差异显著(P<0.05)。结论: SS对白血病耐药细胞株K562/ADM有增殖抑制和逆转多药耐药性的作用,其部分逆转机制可能是通过增加细胞内化疗药物蓄积,诱导细胞凋亡和使细胞阻滞在G₀/G₁期而实现的。     

质膜蛋白与肿瘤多药耐药现象

多药耐药 (MDR)是影响肿瘤化疗效果的主要障碍 ,是由于在耐药细胞质膜上的一系列蛋白是使细胞免受有害因素的攻击。通过 30年的研究 ,证实了肿瘤细胞逃逸化疗药物攻击的许多途径。很显然 ,多药耐药已经成为肿瘤阻碍各种化疗药物有效治疗的途径。因此 ,评价肿瘤多药耐药机制及其耐药程度 ,探讨新的逆转肿瘤多药耐药方法有助于提高化疗效果。本文就MDR中质膜蛋白的分子结构和表型、耐药机制及其逆转方法的研究进展进行综述。     

K562／MDR逆转作用研究进展

如何克服慢性髓系白血病化疗中的多药耐药性 ,提高化疗疗效 ,延长生存期 ,是临床上迫切需要解决的问题。自K562细胞株建立以来 ,许多学者对K562 MDR逆转作用进行了广泛的研究 ,结果发现部分免疫抑制剂、基因、细胞因子及新型激素等具有逆转白血病化疗药物耐药性的作用。本文就这方面的一些新进展作一介绍。     

β-榄香烯对K562/阿霉素细胞多药耐药性的逆转及其对P-糖蛋白表达的影响

目的探讨β-榄香烯（β-elemene）对多药耐药细胞株K562／阿霉素（ADM）的耐药逆转及其对该细胞P-糖蛋白（P-gp）表达的影响。方法采用MTT法检测细胞的药敏性及耐药逆转,免疫组织化学及免疫电镜观察P-gp的表达,流式细胞术进行定量分析,应用SPSS（10．0 production pacility）软件包对实验结果进行统计学处理。结果1．非细胞毒性浓度的β-elemene（4．0mg／L）可显著降低ADM对K562／ADM细胞的IC50（P〈0．01）,逆转倍数为2．18倍;2．P-gp在耐药细胞株K562／ADM中呈高表达,而在敏感细胞株K562中表达很低,进一步定位研究结果表明,P-gp主要分布于细胞膜上;3．非细胞毒性浓度的β-elemene（4．0mg／L）能够显著降低耐药细胞P-gp的表达。结论β-elemene能够明显逆转K562／ADM细胞对ADM的耐药性,降低该细胞P-gp的表达是其主要逆转机制之一。     

流式细胞术检测雄黄对人乳腺癌MCF-7／ADM细胞内Bcl-2表达的影响

目的：多药耐药性(MDR)的产生是肿瘤化疗失败的主要原因，而逆转MDR旨在全部或部分恢复肿瘤细胞对药物的敏感性。研究已经证明中药雄黄可以部分逆转人乳腺癌MCF-7／ADM细胞对阿霉素(ADM)的MDR。为进一步探讨雄黄实现其耐药逆转的可能机制，我们采用流式细胞术检测了雄黄逆转前后，MCF-7／ADM细胞Bcl-2表达的改变情况。     

两种中药制剂联合应用诱导K562／ADM细胞凋亡的研究

肿瘤多药耐药(multidrug resistance，MDR)的形成是多环节的复杂过程。过去逆转MDR的研究多针对耐药机制的某一环节，逆转效果受到限制。本研究试图将作用机制不同的川芎嗪(Tetramethylpyrazine，TMP)与β-榄香烯乳剂(β-elemene)联合应用实行多环节逆转，以期进一步提高逆转效果。     

表遗传修饰对多药耐药基因1调控的研究进展

多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1，MDR1)的耐药机制与药物的泵出有关。过去的十年里，在有关耐药基因的调控方面已经做了大量的研究。MDR1基因表达受许多因素的影响。最近研究证实，表遗传修饰在调控MDR1基因表达中起重要作用。表遗传通过对DNA的甲基化和组蛋白脱乙酰化的修饰来调节MDR1基因的表达。应用化学物质可以逆转MDR1基因依赖性多药耐药，提高化疗敏感性，这将为癌症治疗提供新策略。     

K562/AS2细胞株对三氧化二砷耐药机制的初步研究

目的：研究K562/AS2细胞株对三氧化二砷（ATO）耐药的机制。方法:采用MTT法检测细胞毒性。细胞表面P－糖蛋白（P-gp）、细胞内柔红霉素（DNR）浓度采用流式细胞术检测。DNA聚合酶、拓扑异构酶Ⅱ(Topo Ⅱ)、多药耐药基因1(〖STBX〗mdr1〖STBZ〗)、多药耐药相关蛋白1（〖STBX〗MRP1〖STBZ〗）以及肺耐药相关蛋白基因(lrp)表达水平的检测采用RT－PCR法。结果:K562和K562/AS2细胞表面P-gp任意荧光强度、K562/AS2细胞内DNR浓度均无显著差异（P>0.05）。K562/AS2细胞株〖STBX〗MRP1〖STBZ〗和Topo Ⅱ表达明显高于K562细胞（P<0.05），DNA 多聚酶，〖STBX〗mdr1〖STBZ〗和lrp表达与敏感细胞株K562细胞相同（P>0.05）。结论:ATO耐药细胞K562/AS2高表达〖STBX〗MRP1〖STBZ〗，并产生低倍数的多药耐药。K562/AS2细胞TopoⅡ基因表达增高，其意义有待进一步阐明。     

姜黄素对K562/A02细胞上P-gp的表达及其功能的影响

目的: 观察姜黄素(curcumin, Cur)对人红白血病多药耐药(mμLtidrugresistance, MDR)细胞系K562 /A02细胞上P gp蛋白表达及功能的影响。方法: 用MTT比色法测定Cu作用后K562 /A02细胞对多种化疗药物敏感性的变化; 用流式细胞仪测定Cur对K562 /A02细胞内柔红霉素 (DNR)潴留的影响; 用RT PCR法检测Cur作用后K562 /A02细胞中mdr 1mRNA的表达。结果: Cur能增强多种化疗药物对K562 /A02细胞的毒性作用。明显提高K562 /A02细胞内DNR的浓度(P<0. 01)。不同浓度的Cur作用后, K562 /A02细胞中mdr -1mRNA的表达逐渐降低, 其中 2. 5mg/LCur处理组与未处理组相比较差异显著(P<0. 01)。结论: Cur能部分逆转K562 /A02细胞的耐药性, 且呈浓度依赖性。Cur的作用机制主要与下调mdr- 1mRNA的表达, 导致细胞膜P gp的表达减少有关。     

慢性髓细胞白血病患者骨髓基质细胞与K562细胞共培养对伊马替尼耐药的影响

背景：伊马替尼耐药是慢性髓细胞白血病治疗的一个主要问题,研究证实白血病细胞可通过与骨髓基质细胞黏附而获得耐药表型,但对于黏附功能缺陷的慢性髓细胞白血病而言,骨髓基质细胞在伊马替尼耐药形成中的作用及其机制尚不清楚。 目的：体外模拟慢性髓细胞白血病患者骨髓微环境,探讨其对伊马替尼敏感性的影响及可能机制。 方法：分离、培养确诊但未经治疗的慢性髓细胞白血病患者骨髓基质细胞,与白血病细胞株K562细胞共培养构建慢性髓细胞白血病骨髓基质细胞-K562细胞共培养模型。MTT法检测0.2-3.2 μmol/L伊马替尼作用  48 h对K562细胞的增殖抑制率;将K562细胞暴露于0.5 μmol/L伊马替尼72 h,流式细胞术检测K562细胞凋亡率及CXCR4表达。将0.5 μmol/L伊马替尼作用4 h并以Calcein-AM荧光标记的K562细胞接种于基质细胞层培养24 h,去除悬浮细胞,收集黏附的K452细胞通过检测荧光强度计算细胞黏附率。 结果与结论：慢性髓细胞白血病骨髓基质细胞与K562细胞共培养减弱了0.2-3.2 μmol/L伊马替尼对K562细胞的增殖抑制作用;0.5 μmol/L伊马替尼处理72 h,共培养组K562细胞凋亡率显著低于悬浮组(P=0.020)。悬浮组和共培养组伊马替尼作用后K562细胞CXCR4表达阳性率均显著高于作用前(P=0.001)。0.5 μmol/L伊马替尼作用4 h使K562细胞与骨髓基质细胞的黏附率由(32.18±6.17)%提升至(68.97±11.08)%,差异有显著性意义(P=0.022)。结果表明慢性髓细胞白血病患者骨髓基质细胞与K562细胞共培养,能介导对伊马替尼耐药,可能与共培养及伊马替尼诱导K562细胞CXCR4的表达有关,但更多的机制还需深入研究。