联合应用磁性纳米Fe3O4颗粒和5溴汉防己甲素对柔红霉素诱导的K562／A02细胞凋亡效应的影响

本研究探讨磁性纳米Fe3O4颗粒[MNP（Fe3O4）]和5溴汉防己甲素（5-BrTet）联合治疗慢性髓系白血病的潜在可能性。采用流式细胞术、Wright染色和光学显微镜检测细胞凋亡情况;采用Western blot法检测细胞BCL-2和BAX表达水平。结果表明：MNP（Fe3O4）或5-BrTet与柔红霉素（DNR）联用对K562／A02细胞有细胞毒作用,而联合应用MNP（Fe3O4）和5-BrTet可协同促进DNR诱导K562／A02细胞凋亡,且细胞出现典型的凋亡形态改变,同时可见BCL-2表达下调,BAX表达上调。结论：MNP（Fe3O44）或5-Br/Tet联合DNR均能有效促进K562／A02细胞凋亡。两者联合应用作用增强,其机制可能与BCL-2表达下调及BAX表达上调有关。     

复方浙贝颗粒联合阿霉素对K562／A02移植瘤细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

本研究旨在探讨复方浙贝颗粒联合阿霉素对K562／A02移植瘤细胞凋亡及BCL-2、BAX蛋白表达影响。将多药耐药K562／A02细胞接种于BALB／c—nu裸鼠腋前皮下构建多药耐药移植瘤模型,用Annexin V—FITC／PI流式细胞术检测实验各组移植瘤细胞的凋亡率;用免疫组织化学染色法检测实验各组移植瘤细胞的BCL-2、BAX蛋白表达,并计算蛋白表达积分的光密度值（IOD）。结果发现,复方浙贝颗粒各剂量联合阿霉素组的细胞凋亡率与对照组、阿霉素组相比有统计学意义（P〈0．05）;与对照组和阿霉素组相比,复方浙贝颗粒各剂量联合阿霉素组多药耐药移植瘤BCL-2表达的IOD值降低（P〈0．05）,BAX表达的IOD值增高（P〈0．05）。结论：复方浙贝颗粒是通过增强阿霉素对耐药移植瘤的促细胞凋亡,减少耐药移植瘤的BCL-2蛋白表达,增加BAX蛋白表达而逆转多药耐药。     

5-溴汉防己甲素和柔红霉素对K562/A02细胞凋亡和survivin基因表达的影响

本研究探讨5-溴汉防己甲素(BrTet)联合柔红霉素(DNR)治疗耐药慢性髓系白血病的潜在可能性及其相关机制。采用流式细胞术检测DNR,BrTet或DNR和BrTet联合作用K562/A02细胞48小时后凋亡率情况;采用RT-PCR法检测对照组K562细胞、耐药K562/A02细胞及DNR或(和)BrTet作用于K562/A02细胞48小时后存活蛋白(survivin)mRNA表达水平;采用Western blot法检测各组细胞survivin蛋白表达水平。结果表明:BrTet与DNR联合作用对K562/A02细胞的诱导凋亡率较其余各组显著升高,同时联合用药组K562/A02细胞survivin mRNA和蛋白的表达较空白对照组和单药组下调,K562/A02细胞survivin表达较K562细胞升高。结论:BrTet联合DNR能有效逆转耐药,促进K562/A02细胞凋亡,其机制可能与survivin表达下调有关。     

载有柔红霉素的磁性纳米Fe2O4提高裸鼠异种移植模型中多药耐药K562白血病细胞对化疗效果

肿瘤的多药耐药是肿瘤化疗失败的主要原因,由于载有柔红霉素的磁性纳米Fe3O4颗粒在体外显示了良好的耐药逆转效果,本实验研究了载有柔红霉素的磁性纳米Fe3O4颗粒在体内对白血病多药耐药逆转效果。将裸鼠高成瘤性白血病细胞株K562-n及其相应的多药耐药株K562-n／VCR分别接种于裸鼠的两侧腹股沟皮下,以建立人类白血病移植瘤模型;将双侧成瘤裸鼠随机分为5组,A组给予生理盐水,B组给予磁性纳米Fe3O4颗粒,C组给予柔红霉素,D组给予载有柔红霉素的磁性纳米Fe3O4颗粒,E组给予载有柔红霉素的磁性纳米Fe3O4颗粒同时在肿瘤表面建立固定磁场。在实验开始后的第1,5,9,13,17,21天分别测量肿瘤体积。实验结束后,分离瘤组织并用lit-PCR,Western blot检测mdr-1的转录和表达。结果表明：D组、E组的K562．n／VCR肿瘤体积显著小于A、B、C3个组（D或E组相对于A,B或C组P〈0．05）。病理检查显示：A组、B组肿瘤细胞生长良好,未见明显细胞坏死;C组肿瘤细胞有散在细胞坏死,部分细胞出现核固缩、核碎裂等;D、E组肿瘤组织内可见细胞明显破碎、坏死、组织的纤维化。D和E组的mdr-1的转录水平明显低于A、B、C3个组,但是P．gp的表达在5个组申无差异。C组、D组、E组3个组I（562-n肿瘤平均肿瘤体积显著小于的A、B两组的平均肿瘤体积（C、D或E组相对于A或B组P〈0．05）。A组、B组肿瘤细胞生长良好,未见明显细胞坏死;在C、D、E组肿瘤组织内可见细胞明显破碎、坏死、组织的纤维化。结论：载有柔红霉素的磁性纳米Fe3O4颗粒在体内具有明显的逆转多药耐药的作用,但是相对于单用柔红霉素,载有柔红霉素的磁性纳米Fe3O4颗粒在敏感的K562-n的肿瘤中并不能进一步提高疗效;本实验中外加磁场并未增加疗效。     

复方浙贝颗粒联合阿霉素对K562/A02移植瘤细胞膜转运蛋白表达的影响

为了观察复方浙贝颗粒(CZBG)联合阿霉素对K562/A02移植瘤细胞膜耐药相关蛋白P-gp、MRP、LRP表达的影响,将K562/A02细胞接种于BALB/c-nu裸小鼠腋前皮下以构建MDR移植瘤动物模型,给予复方浙贝颗粒灌胃联合阿霉素腹腔注射,实验结束后处死小鼠,剥离肿瘤,将瘤块组织制成切片,通过免疫组织化学结合Image ProP lus6.0免疫组织化学彩色图象分析,观察复方浙贝颗粒联合阿霉素对K562/A02移植瘤组织细胞膜P-gp、MRP、LRP表达的影响。结果表明:与阿霉素组相比,CZBG各剂量组移植瘤细胞膜所表达P-gp、MRP的积分光密度值(IOD)明显降低(p0.05),而未见明显LRP表达。结论:CZBG能协同阿霉素抑制K562/A02移植瘤组织细胞膜P-gp、MRP表达。     

汉防己甲素联合柔红霉素对K562／A02细胞株P21蛋白和P糖蛋白表达的影响

本研究旨在探讨汉防己甲素（TET）对人慢性髓系白血病（CML）急性红白血病细胞株K562／A02多药耐药的逆转作用,及其逆转耐药与细胞周期依赖性激酶抑制因子（p21）、P糖蛋白（P—gp）及其基因的关系,为TET的临床应用提供新的理论基础。K562／A02细胞实验分组为：①单用柔红霉素（DNR）对照组;②DNR＋TET0．5mg／L组;⑧DNR＋TET1．0mg/L组;④DNR＋TET2．0m8／／L组。采用Western blot法检测实验各组K562／A02细胞P21的表达。采用流式细胞仪（FCM）检测实验各组细胞P—gp的表达,采用半定量PCR（RT—PCR）测定细胞MDR1基因mRNA表达水平。结果表明：K562／A02细胞中P21蛋白的表达随着TET浓度的增加而增强,P—gp蛋白的表达随着TET浓度的增加而减低。K562细胞中mdr1基因几乎无表达,K562／A02细胞中mdrl基因高表达,随着TET浓度的增加K562／A02细胞mdrl基因表达不断降低。结论：TET对K562／A02耐药具有逆转作用且呈浓度依赖性,其逆转耐药可能与其上调P21蛋白的表达、下调mdrl及P—gp的表达有关,     

葡萄糖神经酰胺合成酶抑制剂PDMP对K562/A02细胞柔红霉素耐药逆转的研究

本研究旨在探讨葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramide synthase,GCS)抑制剂D,L-threo-1-phenyl-2-decanoylamino-3-morpholino-1-propanol(PDMP)hydrochloride对K562/A02细胞株柔红霉素(daunorubicin,DNR)耐药的逆转作用及其逆转机制。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度PDMP对K562细胞和K562/A02细胞的增殖抑制效应及其对K562/A02细胞DNR耐药逆转作用;用流式细胞术检测PDMP对K562/A02细胞内DNR浓度及细胞凋亡率的影响;半定量RT-PCR和Western blot方法检测K562及K562/A02细胞mdr1、GCS基因的表达以及PDMP对K562/A02细胞两种基因表达的影响。结果表明:DNR对K562和K562/A02细胞的IC50分别为0.23±0.02和7.15±0.24μg/ml,当PDMP≤20μmol/L时,对K562及K562/A02细胞株无明显生长抑制作用;20μmol/L和10μmol/L PDMP均能增加K562/A02细胞对DNR的敏感性,其耐药逆转倍数分别为2.59和1.69;两种浓度PDMP作用于耐药株48小时后能增加细胞内DNR浓度(p0.05)和细胞凋亡率(p0.01)。20μmol/L PDMP处理K562/A02细胞48小时后可在mRNA和蛋白水平下调GCS和mdr1基因的表达(p0.01)。结论:PDMP可以增强K562/A02细胞对DNR的敏感性,其机制可能与增加细胞内药物浓度及细胞凋亡率、下调GCS和mdr1基因表达有关。     

磁性纳米四氧化三铁颗粒对卵巢癌细胞株SKOV3/DDP耐药的逆转作用

目的探讨磁性纳米四氧化三铁颗粒(Fe3O4-MNPs)逆转人卵巢癌顺铂耐药细胞株(SKOV3/DDP)耐药性的机制。方法将SKOV3/DDP细胞分为对照组、顺铂(DDP)组、Fe3O4-MNPs组和DDP+Fe3O4-MNPs组,用Westernblot方法检测P-糖蛋白(P-gp)、肺耐药相关蛋白(LRP)和多耐药相关蛋白1(MRP1),电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP)法测定细胞内铂含量。结果 DDP+Fe3O4-MNPs组P-gp、LRP和MRP1蛋白表达水平较DDP组下降明显(P<0.05)。DDP+Fe3O4-MNPs组细胞内铂含量明显高于DDP组(P<0.05)。结论 Fe3O4-MNPs逆转耐药的作用机制可能与Fe3O4-MNPs促进DDP进入细胞内,下调P-gp、LRP和MRP1蛋白表达,提高细胞内DDP浓度有关。     

环孢菌素D衍生物PSC 833逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

目的 证实PSC833逆转剂的高效性，探讨PSC833逆转肿瘤细胞多药耐药的机制。方法 以人红白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562／A02（耐阿霉素）为实验研究对象，采用MTT法检测细胞毒性；直接免疫荧光测定法检测P糖蛋白（P-gp）表达水平；RT－PCR法检测mdr1 mRNA水平，以流式细胞术测定两种细胞系内柔红霉素（DNR）的潴留来的反映P-gp的外排功能。结果 与K562细胞系相比，K562／A02耐药细胞系mdr1 mRNA及P－gp高表达，DNR潴留减少。1μmol/L的PSC833对K562／A02铁mdr1 mRNA及P－gp表达水平无明显影响（P＞0.05），PSC833对K562／A02细胞的DNR细胞毒性有剂量依赖性增敏作用，其增敏作用至少是环孢菌素A（CsA）、维拉帕米（Ver）的3倍。PSC833能增加K562／A02耐药细胞系的DNR潴留。1μmol/L的PSC833能使K562／A02细胞内DNR潴留量恢复至K562细胞的100.9%，而10μmol/L CsA只恢复至K562细胞的86.9%，PSC833对K562细胞系的DNR细胞毒性及DNR潴留均无明显影响（P＞0.05）。结论 PSC833较CsA、Ver逆转活性至少高3－10倍，其逆转K562／A02多药耐药的机制可能是通过抑制P－gp功能，而非直接下调mdr1 mRNA及P-gp水平。     

纳米铁颗粒联合三氧化二砷和阿霉素对Raji细胞凋亡和自噬的影响

目的:探讨四氧化三铁磁性纳米颗粒(Fe3O4-MNP)联合三氧化二砷(As2O3)及阿霉素(ADM)对非霍奇金淋巴瘤细胞株Raji凋亡和自噬的影响。方法:MTT法测定单药和联合用药后Raji细胞的生长抑制率;流式细胞术检测凋亡细胞及细胞内ADM浓度;蛋白印迹分析法测定凋亡相关蛋白BCL-2、NFκB、Survivin、BAX、P53、Caspase-3,自噬相关蛋白LC3、Beclin-1、P62/SQSTM1的表达水平。结果:ADM联合As2O3能明显抑制Raji细胞的生长,它的抗肿瘤效应强于单用ADM或As2O3组,但弱于ADM+As2O3+Fe3O4-MNP组(P0.05);ADM+As2O3+Fe3O4-MNP细胞的凋亡率及ADM药物累积量均高于对照组、ADM组、As2O3组及ADM+As2O3组(P0.05),并且该组细胞中凋亡相关蛋白BCL-2、NFκB、Survivin表达下调幅度和BAX、P53、Caspase-3表达上调幅度均大于其它组(P0.05),自噬相关蛋白LC3、Beclin-1表达高于其它组,P62/SQSTM1的表达低于其他组(P0.05)。结论:Fe3O4-MNP联合As2O3和ADM通过促进凋亡和诱导自噬抑制了Raji细胞的生长,提高了抗肿瘤效应,对于恶性淋巴瘤治疗将是一个有前景的新方法。     

高压氧联合阿霉素对白血病K562/A02细胞凋亡的影响

本研究探讨0.2MPa高压氧(HBO)联合阿霉素对白血病多药耐药细胞K562/A02细胞凋亡的影响。利用流式细胞术法和透射电子显微镜检测细胞凋亡和caspase-3表达,用定量qReal-time PCR法检测HIF-1α、BCL-2和BAXmRNA表达水平,运用caspase-8试剂盒检测caspase-8的活性,Western blot法检测P-gp活性。结果表明:0.2MPa HBO联合阿霉素组细胞凋亡率高于ADM组[(47.36±3.87)%vs(28.51±1.09)%],差异有统计学意义(p<0.05)。0.2MPa HBO联合阿霉素组细胞HIF-1αmRNA、P-gp及BCL-2的蛋白水平低于ADM组,差异有统计学意义(p<0.05)。0.2MPa HBO联合阿霉素组细胞的BAX、caspase-3及caspase-8蛋白活性均高于ADM组,差异有统计学意义(p<0.05)。结论 :0.2MPa HBO联合阿霉素可逆转耐药细胞株K562/A02对阿霉素的耐药,提高细胞凋亡率,其机制可能与HIF-1α下调P-gp和BCL-2的表达以及提高caspase活性有关。     

去铁胺对白血病细胞K562/A02的影响及机制研究

本研究旨在探讨铁螯合剂去铁胺对人白血病耐阿霉素细胞K562/A02的影响及其作用机制。采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测不同浓度去铁胺作用48小时对K562/A02细胞增殖的抑制效应;流式细胞术检测去铁胺25、50、100和200μmol/L作用K562/A02细胞48小时后细胞的凋亡率;半定量RT-PCR检测各组细胞凋亡基因BAX、BCL-2以及多药耐药基因1(MDR1)mRNA表达变化;Western blot检测各组细胞P-糖蛋白(P-gp)表达变化。结果显示,随着去铁胺药物浓度的增加,细胞活力逐渐下降,凋亡率明显增加,呈剂量依赖性;随着去铁胺浓度增加,BAX表达水平逐渐升高,但MDR1 mRNA与P-gp的表达受到显著抑制。结论:去铁胺可以通过螯合细胞内铁,影响细胞DNA的合成;同时去铁胺可抑制阿霉素诱导的MDR1、P-gp表达,增加白血病细胞对化疗药物的敏感性,进而诱导凋亡。     

姜黄素、红霉素逆转K562/A02细胞多药耐药机制的研究

目的研究姜黄素（curcumin，Cur）及红霉素（erythromycin，EM）对多药耐药（MDR）细胞株K562／A02的影响及作用机制。方法MTF法测定Cur、EM作用后K562／A02细胞对阿霉素（ADM）敏感性的变化。流式细胞仪测定细胞内柔红霉素的平均荧光强度（DNR MFI）。免疫组化法检测细胞膜上P—gP的表达。RT—PCR法检测细胞mdr1 mRNA水平：结果Cur、EM均可减低ADM对K562／A02细胞的IC50值，两药合用时逆转倍数可达11．3倍。K562／A02细胞内DNR MFI明显低于K562细胞（P〈0．01），Cur、EM均可明显增加K562／A02细胞内DNR MFI（P〈0．05），以两药合用时作用最为明显，Cur2．5μg／ml处理组细胞内DNR MFI略高于EM120μg／ml处理组，但差异无统计学意义（P〉0．05）。免疫组化检测结果显示K562／A02细胞P—gP表达明显高于K562细胞（P〈0．01），各组药物分别处理后，K562／A02细胞膜P—gP表达减低（P〈0．01），但仍高于K562细胞（P〈0．01）；各药物组处理5d细胞膜P—gP表达均低于3d组（P〈0．01），Cur与EM合用时细胞膜P—gP表达降低最为明湿，低于其它处理组（P〈0．01）。RT—PCR结果显示K562／A02细胞mdr1 mRNA水平明显高于K562细胞（P〈0．01），各组药物处理后，K562／A02细胞mdr1 mRNA水平均减低（P〈0．01），5d组低于3d组，但仍高于K562细胞（P〈0．01）；Cur与EM合用时K562／A02细胞mdr1 mRNA水平降低最为显著，Cur 2．5μg／ml处理5dK562／A02细胞mdr1 mRNA水平低于EM120μg／ml处理5d组（P〈0．01）。结论Cur、EM均可部分逆转K562／A02细胞的MDR，降低其P—gP的表达和功能，逆转作用有时间依赖性；两药联合应用时逆转作用明湿增强，Cur2．5μg／ml逆转作用略强于EM120μg／ml。     

尼洛替尼联合5-溴汉防己甲素逆转K562/A02细胞耐药的研究

目的 探讨尼洛替尼、5-溴汉防己甲素(BrTet)及其联合应用对K562/A02细胞多药耐药的逆转作用及其机制.方法 尼洛替尼、BrTet单独或联合作用于K562/A02细胞,应用MTY法检测细胞增殖抑制率、流式细胞术检测细胞凋亡率、RT-PCR检测mdr1 mRNA的表达及Western blot分析P糖蛋白(P-gp)的表达的情况.结果 5 nmol/L尼洛替尼和0.5μmol/L BrTet单独使用48 h后,柔红霉素(DNR)对K562/A02细胞的IC50分别为4.52 mg/L和5.41 mg/L,联合使用后,DNR对K562/A02细胞的IC50降为2.98 mg/L.单用DNR、尼洛替尼和BrTet均不能增加K562/A02细胞凋亡率(P>0.05),DNR联合尼洛替尼和BrTet后细胞凋亡率明显增高.单用5 nmol/L尼洛替尼和0.5μmol/L BrTet 48 h后,K562/A02细胞mdr1 mRNA灰度值为0.48±0.04、0.64±0.01,两者合用K562/A02细胞mdr1 mRNA灰度值下降为0.35±0.04.单用5 nmol/L尼洛替尼作用48 h,P-gp的表达水平为0.61±0.05;单用0.5μmoL/L BrTet作用48 h,P-gp的表达水平为0.52 ±0.02;两者合用K562/A02细胞P-gp的表达水平降为0.44±0.03.结论 单独应用尼洛替尼和BrTet均可部分逆转K562/A02细胞的耐药,机制可能与降低mdr1 mRNA和P-gp的表达及增加K562/A02细胞凋亡有关,并且两药联用具有明显的协同作用.     

重组变构人TRAIL联合柔红霉素对白血病细胞诱导凋亡作用及其机制的研究

为了研究重组变构人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（recombinanat mutant human TRAIL, rmhTRAIL）单用及与柔红霉素（DNR）联合应用对白血病细胞株U937、K562的诱导凋亡作用及其机制，以正常人胚肺成纤维细胞株MRC-5作对照，采用MTT法检测体外培养的U937、K562白血病细胞株在rmhTRAIL单用和联合DNR作用下增殖的抑制效应；用半定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）法检测DNR处理前后白血病细胞TRAIL死亡受体和诱杀受体的mRNA表达水平。结果表明：rmhTRAIL对白血病细胞株U937、K562有较明显的抑制增殖作用，DNR与TRAIL联合对抑制肿瘤细胞具有协同性，与各药单独使用比较均有显著差异（P〈0．05）；经DNR作用后，U937、K562细胞的死亡受体DR4、DR5水平上调，而两种诱杀受体DcR1、DcR2表达未受影响。结论：在体外rmhTRAIL单用或与DNR联用均能明显抑制白血病细胞增殖，rmhTRAIL与DNR对白血病细胞的杀伤有协同作用。其诱导机制可能与U937、K562细胞死亡受体DR4、DR5表达水平上调有关。