AG1478对大鼠脊髓损伤后反应性星形胶质细胞增生的影响

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂AG1478对大鼠脊髓损伤后反应性星形胶质细胞增生的影响。方法:SD大鼠60只,随机分为对照组,AG1478组和假手术组,各组20只。观察AG1478对大鼠脊髓损伤后磷酸化表皮生长因子受体(pEGFR)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达、髓鞘脱失、神经功能恢复及体重的影响。结果:AG1478组大鼠pEGFR和GFAP的表达较对照组明显减弱(P0.01),损伤区脱髓鞘范围明显较对照组减小(P0.01),BBB评分明显高于对照组(P0.01),体重较对照组增加更明显(P0.05)。结论:AG1478可能通过阻断星形胶质细胞上的EGFR通路抑制胶质增生,促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复。     

AG1478对GRC-1细胞的诱导凋亡作用及其机制

目的:探讨表皮生长因子受体阻滞剂TyrophostinAG1478对肾癌GRC-1细胞的诱导凋亡作用及其机制,为肾癌的生物学特征研究和药物治疗提供理论依据。方法:将不同浓度的AG1478作用于体外培养的肾癌GRC-1细胞,以研究表皮生长因子受体信号转导阻滞剂对细胞增殖和细胞周期分布的影响。结果:AG1478抑制肾癌GRC-1细胞的增殖,诱导细胞周期停留在G1期,诱导肾癌GRC-1细胞凋亡。结论:表皮生长因子受体特异性阻滞剂可抑制肾肿瘤细胞的增殖,有望成为抗肾脏恶性肿瘤药物。     

表皮生长因子受体抑制剂对氧糖剥夺/复氧诱导的血脊髓屏障损伤的保护作用研究

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂PD168393对体外氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的血脊髓屏障(BSCB)损伤的保护作用及其可能的机制。方法:体外培养大鼠来源的脊髓微血管内皮细胞和混合胶质细胞,应用transwell培养体系建立体外BSCB模型;将培养的细胞分为3组:对照组(正常培养)、损伤组(OGD/R处理)和治疗组(OGD/R后给予10 nM PD168393干预)。损伤组和治疗组复氧3 h、6 h和12 h后,应用荧光素渗漏实验及内皮细胞跨膜电阻值(TEER)测定来评估各组BSCB通透性变化;应用免疫荧光、Western Blot技术检测各组内皮细胞间紧密连接蛋白ZO-1、Occludin表达的差异;应用ELISA法检测各组细胞分泌致炎因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的差异。结果:损伤组在各个时间点的荧光素渗漏量均高于对照组(均P0.05),而治疗组荧光素渗漏量均低于损伤组(均P0.05);损伤组TEER值显著低于对照组(均P0.01),而治疗组TEER值显著高于损伤组(均P0.05);损伤组紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达量低于对照组(均P0.05),而治疗组ZO-1和Occludin的表达量较损伤组显著提高(均P0.05);损伤组分泌的致炎因子IL-6、iNOS、TNF-α均显著高于对照组,治疗组在各时间点致炎因子IL-6、iNOS、TNF-α的分泌均低于损伤组(均P0.05)。结论:EGFR抑制剂PD168393有助于维持OGD/R损伤后BSCB的完整性;其机制可能与抑制致炎因子的表达及减少BSCB紧密连接蛋白的破坏有关。     

TDP照射对大鼠脊髓内突触再生效应的电镜定量研究

本文利用电镜定量技术，研究了TDP对保留L4背根大鼠脊髓内的突触再生效应。结果表明，术后4天时，突触的数密度（Nv）明显下降。术后35天时，树突周围的简单终末明显增多，和复合终末一样，它们常与同一树突形成两个以上的突触联接，从而使突触的总体数密度（Nv）恢复到正常水平。TDP照射后，大鼠的运动功能恢复时间早，整体反应也较为机警迅速。文中对这些变化做了初步探讨。     

大鼠脊髓损伤后勿动蛋白受体的动态表达

目的观察大鼠脊髓损伤后勿动蛋白受体(NgR)在脊髓组织中的动态表达变化。方法108 只Sprague-Dawley 大鼠随机分成正常组、假手术组和模型组,每组36 只,其中模型组采用改良Allen 法造模。3 组分别于干预后24 h、3 d、7 d、14 d 处死大鼠,每组9 只,以免疫组化及Western blotting 检测各组大鼠脊髓组织中NgR表达的变化,以荧光定量PCR检测NgR mRNA表达变化。结果正常组、假手术组各时间点NgR表达无明显变化(P>0.05)。模型组在损伤后24 h NgR及其mRNA表达较低,3 d 后下降至最低,7 d 后迅速上升达到高峰,14 d 时有所下降。与正常组比较,模型组在损伤后各时间点,NgR免疫组化及Western blotting蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05);与假手术组比较,模型组在损伤后各时间点,NgR mRNA表达差异均有统计学意义(P<0.01)。结论大鼠脊髓损伤后,NgR及其mRNA表达均在7 d 时上升至峰值,并较长时间保持高水平表达。这可能是造成脊髓损伤后轴突再生困难的重要原因之一。     

表皮生长因子受体酪氨酸酶抑制剂一线治疗不同表皮生长因子受体突变阳性晚期非小细胞肺癌疗效关系

目的表皮生长因子受体酪氨酸酶抑制剂(EGFR-TKI)是治疗表皮生长因子受体(EGFR)突变阳性非小细胞肺癌(NSCLC)一线标准治疗方案,但不同EGFR突变状态与疗效的关系报道较少。本研究分析晚期NSCLC不同EGFR突变状态(外显子19缺失、21突变)经EGFR-TKI一线治疗后的疗效。方法收集徐州市肿瘤医院自2008年1月1日至2013年12月31日经组织病理学证实的门诊及住院晚期EGFR突变(19外显子缺失、21外显子突变)的NSCLC患者(ⅢB/Ⅳ期)72例(均进行过EGFR基因检测),分析两个不同EGFR突变状态与一线EGFR-TKI治疗疗效及无病进展生存期(PFS)之间的关系(统计学方法采用χ~2或Fisher's检验)。结果 72例患者中EGFR19外显子缺失的患者37例,EGFR 21外显子突变的患者35例。所有患者均可评价疗效,其中EGFR19外显子缺失的患者一线EGFR-TKI治疗后完全缓解(CR)1例,部分缓解(PR)27例,稳定(SD)5例,进展(PD)4例,客观缓解率(ORR)75.7%,疾病控制率(DCR)89.2%;EGFR 21外显子突变的患者一线EGFR-TKI治疗后CR 1例,PR 17例,SD 6例,PD 11例,ORR 51.4%,DCR 68.6%;两组ORR及DCR差异均有统计学意义(P=0.032,P=0.031)。EGFR 19外显子缺失的患者一线EGFR-TKI治疗后1年PFS率为81.2%(30例),而EGFR 21外显子突变的患者1年PFS为57.1%(20例),两组间统计学有差异(P=0.025)。两组间毒副作用相似。结论 EGFR突变状态是晚期NSCLC患者一线EGFR-TKI治疗PFS和ORR的疗效预测因素。     

红外线照射对萎缩性胃炎大鼠胃黏膜表皮生长因子及其受体表达的影响

目的研究红外线照射对实验性慢性萎缩性胃炎模型大鼠胃黏膜细胞表皮生长因子（EGF）及其受体EGFR表达的影响,并探讨其作用机制。 方法采用随机数字表法将清洁级健康成年雄性Wistar大鼠40只分成正常对照组、模型对照组及红外线组,采用多因素综合法将模型对照组及红外线组大鼠制成慢性萎缩性胃炎动物模型,制模方法包括将30%酒精和2%水杨酸钠制成混合溶液,连续灌胃8周,每日1次,每次2ml,同时结合劳累(跑步)、饥饱失常（禁食）等多因素干预。待制模完成后,红外线组大鼠则给予红外线照射,每日照射1次,每次10min。于红外线连续照射20d后将各组大鼠处死,采用免疫组织化学法检测各组大鼠胃黏膜EGF及EGFR表达情况。 结果正常对照组胃黏膜中EGF、EGFR表达［其阳性染色评分分别为（2.10±0.65）分、（4.20±2.24）分］较弱,模型对照组EGF、EGFR表达［其阳性染色评分分别为（4.91±2.58）分、（6.75±2.63）分］较正常对照组明显增强（P<0.05）;红外线组EGF、EGFR表达［其阳性染色评分分别为（2.75±1.01）分、（4.75±1.66）分］较模型对照组明显减弱（P<0.05）,与正常对照组间差异无统计学意义（P>0.05）。 结论红外线照射能抑制慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜中EGF、EGFR过度表达,在胃黏膜病变愈合过程中能发挥保护胃黏膜、促进组织修复等作用。     

人角膜表皮生长因子受体的表达

目的 了解化学烧伤,角膜炎及眼穿通伤角膜表皮生长因子受体(EGFR)是否表达。方法对7例化学烧伤,6例角膜炎穿孔或白斑,6例角膜穿通伤的角膜片做免疫组化。结果 7眼化学烧伤中仅1眼ECFR阳性表达,其余为阴性;角膜炎6例中 5例角膜穿透移植,术后角膜透明,视力增加。6例角膜穿通伤全部有EGFR表达。结论 EGFR在角膜的表达有可能对阐明不同疾病的病理过程和评价手术有帮助。     

66例肿瘤患者表皮生长因子受体抑制剂相关皮肤不良反应的观察和护理

表皮生长因子受体抑制剂在肿瘤临床治疗中广泛应用但普遍伴有不同程度的皮肤不良反应。本文选取了66例吉非替尼、厄洛替尼或西妥昔单抗治疗的肿瘤患者为研究对象,对46例出现痤疮样皮疹患者,皮肤不良反应参考分级标准进行临床护理干预,同时密切观察患者皮疹严重程度的变化;对15例出现手足综合征患者,告知日常生活中手部和足部的注意事项和护理;对20例出现指甲疼痛、发黑或脱落患者,指导进行甲沟周围皮肤护理。通过正确、及时的护理及宣教,皮肤不良反应均得到有效改善,未出现情况恶化。治疗过程中无1例患者因皮肤不良反应提前终止治疗。     

大鼠脊髓损伤后对巢蛋白及突触素Ⅰ表达的影响

目的 探讨同种异体骨髓单个核细胞(BMMNCs)移植对脊髓全横断损伤区局部微环境中巢蛋白和突触素Ⅰ表达的影响及意义.方法 120只清洁级Winstar大鼠(雌雄不拘)随机(随机数字法)取87只分为3组.假手术组29只:切除相应的椎板不损伤脊髓;模型组29只:建立脊髓全横断模型;细胞移植组29只:建立脊髓全横断模型后,给予BMMNCs移植治疗.各组大鼠分别于5d、1周、2周、4周利用免疫组织化学技术、RT-PCR检测脊髓组织中巢蛋白(nestin)与突触素Ⅰ (Synapsin Ⅰ)的表达变化及利用MIAS-2000图像处理系统分析观察nestin和Synapsin Ⅰ阳性产物在脊髓的分布,并测量阳性产物的吸光度值.采用SPSS 17.0统计分析数据,组间比较,方差齐者采用完全随机设计资料的方差分析,样本间的两两比较用q检验;方差不齐者用成组设计多个样本比较的秩和检验(Kruskal-Wallis法),样本间两两比较的秩和检验(Nemenyi法);P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 免疫组织染色、RT-PCR及图像处理系统分析结果显示模型对照组在伤后约5d可见损伤区域附近nestin表达升高,2周达高峰,4周后nestin表达明显下调,细胞移植组在脊髓伤5d可见损伤区域附近nestin表达升高,1周达高峰,4周后nestin表达明显下调,且各时期与假手术组、模型组相比较差异均具有统计学意义(P＜0.05).损伤5d后,在损伤区域出现突触素Ⅰ的表达,但模型组、细胞移植组突触素Ⅰ的表达量在各时间点均低于假手术组,细胞移植组高于模型组(P＜0.01).结论同种异体的骨髓单个核细胞移植可能改变了局部的微环境并上调了脊髓内巢蛋白和突触素Ⅰ的表达.     

脊髓康对大鼠脊髓损伤后神经功能恢复及脑源性神经营养因子表达的影响

目的探讨脊髓康对脊髓损伤(SCI)后神经功能恢复以及脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白和mRNA表达的影响。方法144 只雌性Sprague-Dawley 大鼠,体质量180~220 g,随机抽取24 只作为假手术组,仅咬除T9~T11段椎板、棘突。其余采用改良Allen 法成功建立SCI 动物模型后,随机分为5 组,即模型组、醋酸泼尼松组及脊髓康高、中、低剂量组,每组24 只。脊髓康高、中、低剂量组分别按生药剂量50 g/(kg &#8901; d)、25 g/(kg &#8901; d)、12.5 g/(kg &#8901; d)灌胃;醋酸泼尼松组以醋酸泼尼松0.06 g/(kg &#8901; d)灌胃;假手术组与模型组均以同体积生理盐水灌胃。分别于术后24 h、3 d、7 d、14 d,进行Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分、斜板试验,干预后3 d、7 d、14 d 处死大鼠取脊髓样本,采用免疫组化、Western blotting、荧光定量PCR法检测脊髓损伤区BDNF蛋白和mRNA的表达情况。结果术后24 h 假手术组大鼠BBB评分、斜板试验角度明显高于其他各组(P<0.01)。术后3~14 d 脊髓康中剂量组和醋酸泼尼松组BBB评分均高于模型组(P<0.05),且术后14 d 脊髓康中剂量组BBB评分明显高于其他各组(P<0.01)。免疫组化和Western blotting 显示,不同时间点醋酸泼尼松组和脊髓康中剂量组BDNF蛋白表达水平均明显高于模型组(P<0.01),二者具有等效性(P>0.05)。荧光定量PCR显示,醋酸泼尼松、脊髓康可促进SCI后脊髓损伤区BDNF mRNA的表达,早期醋酸泼尼松效果较为明显,而干预后14 d 脊髓康中剂量效果明显优于醋酸泼尼松。结论脊髓康可促进大鼠SCI后神经功能的恢复,提升SCI后脊髓内BDNF蛋白及mRNA的表达水平。     

GDNF-Enhanced Axonal Regeneration and Myelination Following Spinal Cord Injury is Mediated by Primary Effects on Neurons

我们先前研究表明胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）联合施万细胞移植能促进脊髓损伤后轴突再生和髓鞘形成。然而,GDNF介导这一过程的细胞靶点尚不清楚。在此,我们报道了GDNF可增加在体再生轴突的数目和直径,并促进体外背根神经节神经元的轴突向外生长,提示GDNF对神经元有直接作用。在施万细胞一背根神经节神经元共培养下,GDNF显著增加施万细胞生成的髓鞘数目;GDNF处理对孤立培养的施万细胞增殖无作用,但可促进已与神经轴突有突触联系的施万细胞增殖;GDNF可增加孤立施万细胞中分子量为140kDa的神经细胞黏附分子（NCAM）的表达,但对黏附分子L1表达或神经营养因子NGF、NT3及BDNF分泌没有影响。总之,这些结果支持假设：GDNF提高轴突再生和施万细胞髓鞘形成主要是通过GDNF对神经元的直接作用介导的,并且提示GDNF联合施万细胞移植可能是促进脊髓损伤后轴突再生和髓鞘形成的有效策略之一。     

脊髓损伤后神经修复的研究进展

传统观点认为，中枢神经系统损伤后受损神经元和轴突不能再生。近年来的研究发现，成年动物脊髓损伤后，可以有不同程度的恢复，在适当的生长环境下，中枢神经系统内的一些受损的神经元轴突能有少许再生，并能与靶细胞形成功能性的突触联系。应用神经营养因子、细胞移植治疗脊髓损伤的研究正在迅速发展中。     

脊髓损伤后对大鼠骨质的影响

选用36只Wistar大鼠，随机分为实验组及假手术组，每组18只。实验组切断脊髓。每组于手术后1、2、3个月各处死6只大鼠，测量血清Ca，P，AKP含量，并测定胫骨上段BMC及BD。结果表明，在脊髓损伤后大鼠血清AKP明显增高（P＜0．05），Ca，P变化不明显，实验组与假手术组比较差异有显著性（P＜0．05），说明脊髓损伤后大鼠体内骨转化增高，骨质明显下降。     

Effects of Epidural Spinal Cord Stimulation and Treadmill Training on Locomotion Function and Ultrastructure of Spinal Cord Anterior Horn after Moderate Spinal Cord Injury in Rats

Objective:To investigate the effects of epidural spinal cord stimulation (ESCS) and treadmill training on the locomotion function and ultrastructure of spinal cord anterior horn after moderate spinal cord injury in rats.Method:Nine adult female Sprague-Dawley rats were randomly distributed into three groups: ①spinal cord injury group (SI, n=3). ②spinal cord injury plus ESCS group (SE, n=3). ③spinal cord injury plus treadmill training group (TT, n=3). All rats received a moderate spinal cord injury surgery. Four weeks after surgery, rats in SE group received an electrode implantation procedure, with the electrode field covering spinal cord segments L2—S1. Four weeks after electrode implantation, rats received subthreshold ESCS for 30 min/d. Rats in TT group received 4cm/s treadmill training for 30min/d. Rats in SI group received no intervention, as a control group. All procedures in these three groups lasted four weeks.The open field Basso,Beattie and Bresnahan(BBB) scale was used before and after intervention to evaluate rats′ hindlimb motor function. Result:After four weeks intervention, rats in TT group improved their open field locomotion scores to 20. In contrast, no significant improvement was observed in groups SI and SE. The morphology of synapses and neurons were similar regardless of whether rats had undergone ESCS, treadmill training or not. Conclusion:ESCS alone was not sufficient to improve the walking ability of spinal cord injured rats. ESCS or treadmill training alone might not contribute to the changes of ultrastructure in anterior horn of spinal cord that underlie the recovery of walking ability. Further research is needed to understand the contributions of combination of ESCS and treadmill training to the rehabilitation of spinal cord injured rats.     

Caspase阻滞剂zVAD-fmk对大鼠脊髓损伤细胞凋亡的影响

目的：观察Caspase阻滞剂zVAD-fmk对大鼠脊髓损伤细胞凋亡的影响。方法：将48只大鼠制备为压迫性脊髓损伤模型。分为单纯损伤组24只及实验组(应用zVAD-fmk)24只。损伤后8h、3及7d对脊髓损伤区进行HE、细胞凋亡的检测，免疫组化检测Caspase-3的表达变化。同时采用BBB评分和斜板试验观察脊髓神经功能恢复情况。结果：2组均见TUNEL阳性的凋亡细胞和Caspase-3表达。实验组凋亡的细胞数减少。免疫组化检测Caspase-3表达降低，神经功能增强。结论：Caspase阻滞剂zVAD-fmk能减少继发性脊髓损伤细胞凋亡和促进神经功能的恢复。     

孕酮对大鼠脊髓损伤后早期细胞凋亡的影响

目的:探讨孕酮对大鼠脊髓损伤后早期细胞凋亡的影响。方法:60只雄性SD大鼠随机分成假手术组、损伤组、孕酮组,采用改良的Allen’s撞击法制作脊髓损伤模型。孕酮组在造模成功后1、6、24、487、2 h腹腔注射16 mg/kg孕酮。术后6、24、48、75 h取材,采用HE染色观察脊髓形态学的变化,免疫组织化学法检测Caspase-3的表达,原位末端标记法(TUNEL染色)检测细胞凋亡。结果:假手术组大鼠脊髓形态正常,偶见凋亡细胞及Caspase-3阳性细胞;与损伤组相比,孕酮组术后各时间点的凋亡指数下降,Caspase-3阳性细胞数显著减少,差异有统计学意义。结论:抑制脊髓损伤后的细胞凋亡可能是孕酮的神经保护作用机制之一。     

脊髓损伤后大鼠行为学改变及早期腓肠肌的变化

目的探索脊髓损伤后大鼠行为学改变及早期腓肠肌变化。方法108 只Wistar 大鼠,其中38 只为假手术组(n=38),其余制作脊髓切除模型,分为损伤组(n=38)和康复训练组(n=32)。应用BBB 法评价大鼠脊髓损伤后不同时间点的行为学变化;通过免疫组织化学法观察腓肠肌的变化。结果康复训练组BBB 评分从术后3 周开始高于损伤组,但两组得分始终未超过10 分。Dystrophin 免疫荧光染色显示,脊髓损伤后损伤组和康复训练组腓肠肌肌纤维横截面积均减小,但康复训练组萎缩程度较轻。结论脊髓损伤后大鼠后肢运动功能可出现一定的自发性恢复,康复训练有利于脊髓损伤大鼠运动功能的恢复,并能减缓后肢肌肉萎缩。