南瓜胰蛋白酶抑制剂

南瓜胰蛋白酶抑制剂(CMTI)具有独特的结构特点和抑制机制。此文对丝氨酸蛋白酶抑制剂的分类和CMTI的分子结构特征、酶学特性以及生理功能等方面的研究进展做一介绍。     

胰蛋白酶抑制剂研究概况

胰蛋白酶抑制剂泛指具有抑制胰蛋白酶活性作用的一类物质 ,此文对其来源、结构与功能的关系、在基因工程方面的发展以及目前研究较多的肿瘤相关胰蛋白酶抑制剂近几年的研究概况进行了综述。     

尿胰蛋白酶抑制剂研究进展

早在1909年,Bauer和Reich首次报道了尿液中存在胰蛋白酶抑制剂。直到五、六十年代才先后报道了数种方法在酸性条件下分离纯化了几种小分子量的尿胰蛋白酶抑制剂(Urinary Trypsin Inhibitor,UTI)1972年Proksch和Routh成功地在非酸性条件下分离纯化了一个较高分子量(约70K)的UTI,它可能就是现今我们认识到的小便中的完整UTI分子。1977年Sumi等亦分离纯化了尿中的完整UTI分子(67 K),这是日本人从欧洲人手中接过这一课题的标志,到八十年代初,日本人在此领域的研究迅猛突起,从提纯、生化特性、结构直到临床应用都进行了一系列的研究,并很快获得了商品。     

尿胰蛋白酶抑制剂生产中病毒灭活工艺的效果观察

目的验证尿胰蛋白酶抑制剂(UTI)生产工艺中采用的60℃水浴10 h和乙醇处理3 h的病毒灭活效果。方法将Sindbis病毒、伪狂犬病毒(PRV)和脊髓灰质炎病毒(PV1)3种指示病毒分别加入不同的UTI原料样品中,进行60℃水浴10 h和乙醇处理3 h,处理不同时间后分别取样,用微量细胞病变法检测不同时间段样品中的病毒残留滴度。结果60℃水浴10 h可灭活(6.503±0.102)LgTCID50/mL的Sindbis病毒,灭活(6.42±0.158)LgTCID50/mL的PRV以及(6.587±0.061)LgTCID50/mL的PV1。乙醇处理3 h后可灭活(5.88±0.204)LgTCID50/mL的Sindbis病毒,灭活(6.378±0.268)LgTCID50/mL的PRV以及(5.963±0.118)LgTCID50/mL的PV1。经两种方法处理后的样品加入细胞经3代盲传均未见细胞病变(CPE)出现。结论UTI生产工艺中采用的60℃水浴10 h和乙醇处理3 h均可灭活所验证的3种指示病毒,灭活效果>6.0 LgTCID50/mL。     

人尿胰蛋白酶抑制剂工艺研究

报道了人尿胰蛋白酶抑制剂的提取新工艺。新鲜男性尿碱化除去沉淀,调 pH 4.0,用 PolyerdeⅣ搅拌吸附,吸附剂经抽滤、洗涤、NH_4HCO_3洗脱。冼脱液经硫酸铵沉淀、透析、冻干得产品。活性回收率为60～68%,比活为515～660 u/mg。     

类胰蛋白酶抑制剂可望用于治疗哮喘

类胰蛋白酶是一种由肥大细胞释放的蛋白酶,被认为是哮喘的发炎过程中所必需的物质。它在发炎反应的早期极为活跃且影响多种炎性过程,因而是一个好的生物靶标。与白三烯类拮抗剂不同,类胰蛋白酶抑制剂可以阻断白三烯、嗜酸性细胞、缓激肽和其他由肥大细胞释放的炎性介质,因此治疗哮喘更为有效。由于类胰蛋白酶能够刺激上皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞的增生,促进肺部组织的成纤维化,因而它能够阻断哮喘过程中肺部组织形态的改变。尽管吸入性甾体化合物也能减轻哮喘症状和发炎程度,但类胰蛋白酶水平较高,对肺部的病理组织学改变没有影响。阿…     

从生产胰岛素后的猪胰残渣中提取制备胰酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶的研究

在党的无产阶级教育方针指引下,从我国国民经济实际需要出发,我们在学校教学、科研、生产三结合基础上选择了胰脏综合利用这一研究课题,从生产胰岛素后的猪胰残渣中制备了胰酶、结晶胰蛋白酶、糜蛋白酶和具有高度专一性的胰蛋白酶抑制剂等多种生化药品,为扩大胰岛素和胰酶的生产开辟了一条新途径。通过调查了解,目前国内还没有一种较好的方法能从胰脏中同时大量制得胰岛素和各种酶类。几种产品不能同时兼得,造成互争原料,在一定程度上影响胰岛素的生产。国外曾报道从牛胰脏残渣中提取牛胰蛋白酶等,但因收率较低,方法繁杂,成本高,未见在生产中广泛     

重组牛胰蛋白酶抑制剂对大鼠急性胰腺炎的治疗作用

目的：观察重组牛胰蛋白酶抑制剂（rBPTI）对大鼠急性坏死性胰腺炎（ANP）的治疗作用。方法：取大鼠60只，随机分成6组：假手术组、模型组、rBPTI的3个剂量组、抑肽酶组。注射牛磺胆酸钠建立大鼠ANP模型，股静脉注射给药48h后，测定专鼠血清和组织淀粉酶和脂肪酶含量，观察胰腺组织病理变化。结果：rBPTI治疗组可明显降低血清和组织淀粉酶、脂肪酶的浓度，与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01），且使胰腺的病理变化减轻。结论：rBPTI对牛磺胆酸钠诱导大鼠ANP具有治疗作用，作用效果同天然BPTI相当。     

抑肽酶基因的克隆和表达

抑肽酶作为天然非特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂，用途广泛。目前抑肽酶制品主要从牛肺中提取。用基因重组技术，将抑肽酶结构基因导入表达载体pGrxA，并在抑肽酶基因上游引入FXa识别位点。将重组质粒转化至Origami^TM中，用异丙基硫代β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白，产物以可溶性形式存在于胞内。将菌体超声破壁和离心，融合蛋白经分子筛层析和离子交换层析纯化后，用FXa切割该融合蛋白可得到N端不含多余氨基酸残基且与天然构像一致的活性抑肽酶。     

重组刺桐胰蛋白酶抑制剂的复性纯化

刺桐胰蛋白酶抑制剂（ETI）是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，可抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶及组织纤溶酶原激活剂（t-PA）等。本研究利用大肠杆菌高密度发酵表达ETI，产物以包涵体形式存在，经体外以脉冲稀释的方式复性并纯化后，每升发酵液可得ETI 1000mg以上，纯度大于95％，比活为1．55IU／mg。ETI制成的ETI-Sepharose亲和胶，每ml可吸附重组瑞特普酶融合蛋白（Trx-rPA）2mg，可应用于制备t-PA及其衍生物如r-PA等药用蛋白。     

太湖蓝藻素—从太湖蓝藻水华中分离得到的天然胰蛋白酶抑制剂

通过各种层析方法,从太湖蓝藻水华中分离得到多种胰蛋白酶抑制剂。用质谱和核磁共振测定了其含量最多组分－－太湖蓝藻素的结构,确定与aeruginosin98-A同质。这是首次发现该物质在太湖蓝藻水华中存在。     

STUDIES ON TRYPSIN INHIBITORS Part IX. Synthesis and Trypsin Inhibitory Activity of the Duopentacontapeptide Corresponding to the Amino Acid Sequence of Porcine Pancreatic Secretory Trypsin Inhibitor II (Kazal)*

The synthesis of the protected duopentacontapeptide corresponding to the entire amino acid sequence 1–52 of porcine pancreatic secretory trypsin inhibitor II (Kazal type) is described. The benzyloxycarbonyltetradecapeptide tert-butyloxycarbonylhydrazide (sequence 1–14) was selectively deblocked with trifluoroacetic acid and used to acylate, by the azide procedure, the peptide free base corresponding to the sequence 15–52. The isolated material was purified by ion exchange chromatography and the protecting groups were removed by successive treatments with anhydrous hydrogen fluoride, 1M piperidine and mercuric acetate. Folding and formation of the disulfide bonds was accomplished by air oxidation in 0.02M phosphate buffer, pH8. Determination of the inhibitory capacity indicated that the synthetic material is about 50% effective, at 30:1 inhibitor:trypsin molar ratio, in inhibiting the tryptic hydrolysis of Nα-benzoyl-dl -arginine-4-nitroanilide. Full inhibition was achieved at a higher inhibitor:trypsin molar ratio. The stability constants and the standard free energy of binding of the complex between trypsin and the synthetic inhibitor have been determined.     

一种有效分离人尿激肽释放酶和人尿胰蛋白酶抑制剂的方法

人尿激肽释放酶和人尿胰蛋白酶抑制剂是存在于尿中的酸性蛋白.本文通过ZnCl2胶体沉淀和乙醇沉淀相结合的方法可有效分离两者,得率高、活性保留好.     

壳聚糖多孔珠作为亲和吸附剂载体纯化人尿胰蛋白酶抑制剂

ＵＴＩ粗品经壳聚糖多孔珠－胰蛋白酶亲和层析,得到比活为１３５０Ｕ／ｍｇ,收率为４０．２％ＵＴＩ组分,再经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤,发现存在四种分子形式,其相对分子质量分别为６７０００,４３０００,２３０００,１６０００。其中,１６０００的无ＵＴＩ活性。亲和层析提纯得到的ＵＴＩ的热稳定性比原尿中的ＵＴＩ的热稳定性要差。     

牛胰酶类制备方法

<正> 根据Colowick and kaplan,"Methodsin Enzymology", Vol. Ⅱ,1955;Perlmannand lorand, "Methods in Enzymology",Vol. ⅩⅨ, 1970.一、α-糜蛋白酶原(α-Chymotrypsino-gen)的制备:按照原书P.9该酶原制备程序中,注“22”指出,如果期望从同一批胰脏中分离脱氧核糖核酸酶,建议按照本书P.437脱氧核糖核酸酶制备中,使用较小的酸性介质以保护脱氧核糖核酸酶的提取手续。如下:     

马铃薯中羧肽酶抑制剂的放射免疫分析

从马铃薯中提取、纯化了羧肽酶抑制剂(CPI),免疫家兔后产生CPI抗血清.用氯胺-T法制备125Ⅱ-CPI,采用双抗体聚乙二醇混合法建立了CPI放射免疫分析方法,批内和批间RSD分别为10.2%和7.4%,检测灵敏度为1.5μg/L,平均回收率104%,ED50为16.4μg/L.