补中益气汤对肺腺癌顺铂耐药细胞株与顺铂敏感细胞株荷瘤BALB/c小鼠移植瘤P-gp蛋白表达的影响

目的探讨补中益气汤对肺腺癌顺铂(DDP)耐药与敏感细胞株荷瘤BALB/c小鼠移植瘤P-gp蛋白表达的影响。方法体外培养肺腺癌顺铂耐药株A549/DDP及敏感细胞株A549,接种于BALB/c小鼠腋窝皮下,荷瘤成功后给予顺铂或顺铂联合低、中、高剂量补中益气汤治疗。实验共分为10组:A549/DDP或A549荷瘤对照组、A549/DDP或A549荷瘤+顺铂组、A549/DDP或A549荷瘤+顺铂+低剂量补中益气汤组、A549/DDP或A549荷瘤+顺铂+中剂量补中益气汤组、A549/DDP或A549荷瘤+顺铂+高剂量补中益气汤组。给药结束后,测量移植瘤体积并计算药物抑瘤率及抑瘤作用提高率,蛋白质印迹法检测移植瘤组织P-gp蛋白的表达。结果顺铂对A549/DDP移植瘤体积无显著影响(P0.05),而使A549移植瘤体积显著缩小(P0.05);联合低、中、高剂量补中益气汤的A549/DDP及A549移植瘤体积均缩小(P0.05),抑瘤率均增加(P0.05),随着中药剂量的增加,移植瘤体积随之缩小,抑瘤率随之增加,抑瘤作用提高率也随之增加;单独顺铂可上调A549/DDP移植瘤组织中P-gp蛋白表达(P0.05),下调A549移植瘤组织中P-gp蛋白表达(P0.05);联合低剂量补中益气汤并未显著下调A549/DDP及A549移植瘤组织中P-gp蛋白表达(P0.05);联合中、高剂量补中益气汤的A549/DDP及A549移植瘤组织中P-gp蛋白表达均显著下调(P0.05),两剂量间无差异(P0.05)。结论在顺铂耐药与顺铂敏感的肺腺癌移植瘤组织中,补中益气汤均有缩小移植瘤体积、提高顺铂抑瘤率、下调P-gp蛋白表达的作用,尤以中、高剂量作用最显著。     

3-BrPA对肺癌A549/DDP细胞耐药的逆转作用研究

目的探究3-Br PA对肺癌A549/DDP细胞耐药的逆转作用及其机制。方法 1细胞培养:RPMI1640培养基培养肺癌A549细胞及人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP细胞;2采用CCK8及Western blot法观察3-Br PA对A549/DDP细胞的耐药逆转作用和P-糖蛋白(P-glycoprote,P-gp)的表达水平;采用流式细胞术检测不同浓度3-Br PA作用A549/DDP细胞后细胞内罗丹明-123(Rhodamine-123,Rh123)的蓄积情况。结果顺铂对A549细胞、A549/DDP细胞及3-Br PA作用后的A549/DDP细胞的IC50分别为6.714μg/ml、38.99μg/ml及12.86μg/ml,逆转倍数为3.03,相对逆转效率为81%。3-Br PA可使A549/DDP细胞的P-gp表达下调。3-Br PA可使A549/DDP细胞内的Rh123蓄积增多并呈剂量依赖性。结论 3-Br PA可逆转A549/DDP细胞对顺铂耐药,作用机制可能与其抑制P-gp的功能和表达有关。     

YAP调控肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的机制分析

目的探讨Yse相关蛋白(Yes-associated protein, YAP)对A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响及其机制。 方法采用MTS检测顺铂对肺腺癌A549细胞以及肺腺癌耐顺铂A549/DDP细胞的50%抑制浓度(IC₅₀)。使用qPCR以及Western blot检测A549和A549/DDP细胞中YAP mRNA以及蛋白的表达。Western blot检测维替泊芬(Verteporfin, VP)处理A549/DDP后YAP蛋白表达变化。将A549/DDP细胞设置为DMSO对照组、顺铂组(DDP组)、维替泊芬组(VP组)、顺铂联合维替泊芬组(DDP+VP组),采用MTS检测0、24和48 h各处理组细胞活力的变化。采用qPCR检测VP处理A549/DDP后干细胞标志物ALDHA1、CD133、OCT4、NANOG、SOX2的mRNA表达变化。 结果顺铂对A549和A549/DDP细胞的IC50分别为(4.07±0.03)μg/ml、(23.44±0.98)μg/ml,耐药指数为5.76。A549/DDP细胞中YAP显著高于A549细胞(P<0.05)。VP处理A549/DDP细胞后YAP蛋白表达水平较DMSO组明显降低。DDP+VP组较单独DDP组,其细胞活力在24 h和48 h均明显降低(P<0.05)。qPCR检测发现A549/DDP细胞经VP处理后,干细胞标志物ALDHA1、CD133、OCT4、NANOG、SOX2的mRNA均较DMSO组明显降低(P<0.05)。 结论YAP可能参与了肺癌细胞的顺铂耐药。抑制YAP可通过抑制肿瘤干细胞特性,进而发挥逆转耐药的作用。     

红景天联合顺铂协同诱导人肺腺癌耐药细胞的凋亡

目的观察红景天联合顺铂对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP的生长抑制和凋亡诱导作用。方法应用MTT法检测红景天、顺铂对A549/DDP细胞的生长抑制并计算IC50,采用Annexin V-FITC试剂盒、流式细胞仪定量检测凋亡率;采用Western印迹法检测各组细胞Caspase-3、聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶(PARP)表达水平。结果 A549/DDP对顺铂具有一定耐药性;在红景天、顺铂分别作用24 h后,A549/DDP细胞凋亡率为(11.49+1.73)%、(19.87+3.65)%;显著低于联合用药组(34.88+5.62)%(P<0.05)。联合用药组Caspase-3、PARP活化程度高于红景天组、顺铂组。结论联合红景天与顺铂具有协同作用,抑制肺腺癌耐药细胞生长,促进肺腺癌耐药细胞凋亡,提示红景天在化疗耐药的肺癌治疗中有一定的应用前景。     

去甲斑蝥酸钠对耐顺铂肺腺癌A549/DDP细胞的逆转作用及机制

目的 探讨去甲斑蝥酸钠(SNCTD)对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549/DDP的逆转作用及可能分子机制.方法 (1)采用CCK法筛选出SNCTD对A549/DDP的无毒浓度(即对细胞抑制率＜10%的药物浓度),并检测出顺铂及与无毒浓度SNCTD联合对耐药细胞株的IC50;(2)采用流式细胞仪检测无毒浓度SNCTD对细胞内罗丹明123的蓄积情况;(3)采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测1、2倍无毒浓度SNCTD处理细胞48h后耐药相关基因mdrlmRNA,MRP1 mRNA的表达.结果 (1)SNCTD对A549/DDP的无毒浓度为5μg/ml,与顺铂联合用药降低A549/DDP的耐药性,逆转倍数为1.97;(2)无毒浓度SNCTD处理耐药细胞48h后细胞内罗丹明123荧光强度明显增强(F=36.99,P＜0.05);(3)1、2倍无毒浓度SNCTD处理耐药细胞后mdr1,MRP1mRNA表达明显减低,并具有浓度依赖性.结论 SNCTD对A549/DDP具有耐药逆转作用,其作用机制可能与下调耐药相关基因mdr1,MRP1的表达,影响膜蛋白外排泵功能有关.     

补中益气汤干预肺腺癌A549细胞移植瘤Wnt/β-catenin信号通路对顺铂敏感性的影响

目的 探讨补中益气汤干预肺腺癌A549细胞移植瘤Wnt/β-catenin信号通路对顺铂敏感性的影响。方法 体外培养A549细胞，接种于BALB/cnu裸鼠腋窝皮下，8 d成瘤，隔天开始分别给予低剂量(1.46 g/kg)、中剂量(2.91 g/kg)、高剂量(5.82 g/kg)补中益气汤治疗25 d。30只裸鼠随机分为5组：对照组、顺铂组、顺铂+低剂量补中益气汤组、顺铂+中剂量补中益气汤组、顺铂+高剂量补中益气汤组。测量移植瘤质量并计算药物抑瘤率；Western印迹检测细胞质中p-糖原合成激酶(GSK)-3βser9、p-GSK-3βtyr216、GSK-3β蛋白的表达；实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹法检测移植瘤组织β-catenin、Survivin蛋白的表达。结果 给药25 d后，顺铂联合不同剂量补中益气汤使移植瘤质量均显著缩小(P<0.05),抑瘤率均显著增加(P<0.05),且呈剂量依赖性。与对照组相比，顺铂联合不同剂量补中益气汤组可显著下调移植瘤细胞质p-GSK-3βser9蛋白的表达(P<0.05),并显著下调β-catenin、Sur...     

补中益气汤对A549/DDP与A549荷瘤BALB/c小鼠移植瘤生长的影响

目的观察补中益气汤对A549/DDP与A549荷瘤BALB/c小鼠移植瘤生长的影响。方法 BALB/c小鼠右腋窝皮下接种A549/DDP或A549细胞株,成瘤后连续腹腔注射顺铂25 d,2次/d,中药治疗组同时连续灌胃低、中、高剂量补中益气汤25 d,2次/d。给药后0、5、10、15、20、25 d,测量移植瘤的长径与短径,计算移植瘤的体积并绘制肿瘤的生长曲线。实验结束后处死小鼠,剥离瘤组织并称重,计算药物抑瘤率及抑瘤作用提高率。结果对于A549/DDP移植瘤,给药10 d后,补中益气汤开始缩小移植瘤体积,随着给药时间的延长和给药剂量的增加,移植瘤体积逐渐缩小;给药25 d后,随着补中益气汤剂量的增加,移植瘤重量随之减轻,抑瘤率随之增加,抑瘤作用提高率也随之显著增加。对于A549移植瘤,给药5 d后,补中益气汤即开始缩小移植瘤体积,随着给药时间的延长和给药剂量的增加,移植瘤体积逐渐缩小;给药25 d后,随着补中益气汤剂量的增加,移植瘤重量随之减轻,抑瘤率随之增加,抑瘤作用提高率也随之显著增加。结论补中益气汤能抑制BALB/c肺腺癌荷瘤小鼠肿瘤的生长,在顺铂耐药与顺铂敏感的肺癌组织中均可发挥抑瘤作用。     

十全大补汤含药血清对A549和A549/DDP细胞株顺铂耐药性及凋亡的影响

目的研究十全大补汤含药血清对人肺腺癌顺铂(DDP)敏感细胞株A549和耐药细胞株A549/DDP耐药性及凋亡的影响。方法将24只SD大鼠随机分为十全大补汤含药血清低剂量组(1.625 g/ml)、中剂量组(3.25 g/ml)、高剂量组(6.5 g/ml)、空白血清组(等体积生理盐水),每天灌胃给药1次,连续7 d后提取血清;MTT法检测各组细胞对DDP的半数抑制浓度(IC50)值,并计算耐药指数;AnnexinⅤ/PI法检测各组细胞的早期凋亡率。结果 A549细胞中,中、高剂量组IC50值均较空白血清组下降(均P0.01),而中剂量组的IC50值与高剂量组无差别,但较低剂量组显著降低(P0.05);A549/DDP细胞中,低、中、高剂量组的IC50值均较空白血清组下降(均P0.01),而中剂量组IC50值与高剂量组无差别,但较低剂量组显著降低(P0.01);DDP处理A549细胞后,中、高剂量组分别增加细胞的早期凋亡率(P0.05,P0.01),中、高剂量组之间无差别(P0.05),但中剂量组较低剂量组增加细胞的早期凋亡率(P0.05);DDP处理A549/DDP细胞后,低、中、高剂量组均增加细胞的早期凋亡率(P0.05,P0.01),但中、高剂量组之间无差别,而中剂量组较低剂量组增加细胞的早期凋亡率(P0.05)。结论十全大补汤含药血清对A549及A549/DDP细胞均有降低DDP耐药性的协同增效作用,可能与其促进肿瘤细胞凋亡有关;在A549/DDP细胞中十全大补汤含药血清的协同增效作用更强,且中剂量含药血清效率最高、效果最佳。     

选择性COX-2抑制剂逆转肺癌顺铂耐药作用及机制研究

目的探讨选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂逆转肺癌对顺铂耐药的作用,并从分子水平研究其机制。方法 1.构建肺癌A549/DDP细胞裸鼠移植瘤模型。2.药物干预:将荷瘤裸鼠随机分为4组:对照组(腹腔注射生理盐水和胃内灌注0.5%羟甲基纤维素钠);顺铂(DDP)组(腹腔注射顺铂溶液);尼美舒利(NIM)组(胃内灌注尼美舒利溶液);NIM与DDP联合组(腹腔注射顺铂溶液和胃内灌注尼美舒利溶液)。DDP每4天腹腔注射1次,共5次,NIM连续灌胃21天。给药期间,测量瘤径及鼠重,绘制肿瘤生长曲线。3.计算抑瘤率:给药3周处死裸鼠,剥离移植瘤,检测各组移植瘤重量、体积,计算抑瘤率。4.免疫组化法检测各组肺癌A549/DDP裸鼠移植瘤细胞内耐药相关因子P-gp、LRP、MRP1的蛋白表达水平。结果 1. NIM有抑制肺癌生长的作用,瘤体积及瘤重抑瘤率分别为22.63%和15.98%。NIM与DDP联合用药后抑瘤作用更明显,瘤体体积及瘤重抑瘤率分别为60.83%和46.76%,分别明显大于NIM组、DDP组及对照组的抑瘤率,差异有统计学意义(P0.05),NIM有增强肺癌细胞对DDP敏感性的作用。2.免疫组化结果显示:P-gp、LRP、MRP1耐药基因在肺癌A549/DDP裸鼠移植瘤细胞内均呈阳性表达,在NIM与DDP联合中的阳性表达分别显著低于各自在DDP组及对照组中的表达,差异有统计学意义(P0.05)。结论 1.选择性COX-2抑制剂NIM有抑制肺癌生长的作用;2.选择性COX-2抑制剂NIM有逆转肺癌对DDP耐药的作用;3.选择性COX-2抑制剂NIM逆转肺癌对DDP耐药的机制,可能与下调肺癌细胞耐药因子P-gp、LRP、MRP1蛋白表达有关。     

顺铂联合热疗对人胃癌耐药细胞增殖及耐药相关基因Survivin表达的影响

目的通过体外实验观察顺铂联合热疗对人胃癌耐药细胞增殖及多药耐药基因Survivin表达的影响。方法选取人胃癌SGC7901/DDP细胞系进行体外培养。应用流式细胞术(FCM)检测对照组、化疗组、热疗组及热化疗组SGC7901/DDP细胞增殖的情况,并用FCM法半定量检测各组细胞中Survivin蛋白表达的变化;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法半定量检测4组SGC7901/DDP细胞中Survivin mRNA表达的变化。结果热疗及顺铂联合热疗都可以降低人胃癌耐药细胞SGC7901/DDP的增殖水平,并且顺铂联合热疗作用效果最明显。单纯热疗及顺铂联合热疗作用后,SGC7901/DDP细胞中Survivin蛋白及mRNA的表达明显下降,并且并顺铂联合热疗作用后下降最明显。结论热疗、顺铂联合热疗能够抑制人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP的增殖,并可诱导该细胞凋亡,抑制细胞周期诱导细胞凋亡是其抗肿瘤作用机制之一;下调Survivin蛋白及mR-NA的表达可能是热疗逆转人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP多药耐药性的机制之一。     

咽部吞咽的生理解剖学与吞咽障碍的失代偿

0引言吞咽是维持人体生存的重要功能活动.每人每天均必须进行无数次吞咽.对吞咽障碍(deglutitiondisoders,DD)进行有效的预防、诊断和治疗必须了解咽部有关的解剖和功能.1吞咽的生理解剖学“吞咽”不仅指口腔内食团(包括液、固体食物、药物和唾液等)在咽部的通过,而应将之定义为是在构成吞咽通道的唇、舌、腭、咽、喉、食管等各器官肌肉、神经的密切协同下,将吞咽物顺利、安全地运送至胃的全过程[1].食物在口腔内经过咀嚼、搅拌,由唾液润湿,变成食团,然后被吞咽经咽和食管入胃.咀嚼的作用是把大块食物分成小块,并经舌肌、颊肌、颌肌等的搅…     

Preparation and separation of the glucuronide and sulfate conjugates of thyroxine and triiodothyronine

An enzymatic method for synthesis of labelled thyroxine glucuronide (T4G) and triiodothyronine glucuronide (T3G) from labelled thyroxine (T4) and triiodothyronine (T3) is presented. The synthetic glucuronides are completely digested by beta-glucuronidase, with recovery of the parent T4 or T3. They have distinctive elution patterns on HPLC and on Sephadex G25 chromatography, and can be clearly separated from T4 and T3 as well as from synthetic T4 sulfate (T4S) and T3 sulfate (T3S). On LH 20 chromatography, elution of T4G and T3G is intermediate between that of T4 and T3 and that of T4S and T3S. T3G can be well separated from other thyronines by HPLC alone, but T4G coelutes with rT3 on HPLC; these are then separated by adding a Sephadex G25 chromatography step. Biosynthetic 131I-T3G and 125I-T4G from the bile of a cat given 131I-T3 and 125I-T4 had similar HPLC chromatographic patterns to those of synthetic T3G and T4G. That the identified peaks from analysis of the bile were indeed T3G and T4G was confirmed by recovery of the parent T3 and T4 after beta-glucuronidase digestion.     

我国骨关节结核诊治的回顾与展望

骨关节结核是危害人们健康的严重感染性疾病,近95％由他处结核病继发而来.罹患骨关节结核疾病后几乎均将致残,严重影响人们的健康、工作和生活.建国以来在党和国家的关心和支持下,骨关节结核的诊治水平取得了长足进步.时至今日,由于多种原因,学科发展和被重视程度受到一定的制约,同整个医疗行业的发展不相适应.回顾过去,展望未来,我们需要重新审视骨关节结核的诊治方法,努力推进骨关节结核诊疗技术的科学发展.     

妊娠时间与肺结核复发的相关性研究及诊治对策

目的 分析肺结核史患者妊娠时间和肺结核复发间相关性.方法 选取我院收治的有肺结核史的妊娠妇女576例作为研究对象,对其妊娠前肺结核治疗、治愈后妊娠时间、妊娠后复发肺结核等进行分析,总结有肺结核史育龄女性的妊娠时间和肺结核复发之间的关系.结果 肺结核治愈后不同时间段妊娠者的结核复发率比较,差异具有显著性（P＜0.05）,停药后间隔时间越久妊娠,肺结核复发的几率越小.结论 加强孕期痰菌检查,及早发现复发肺结核,提高母婴安全.     

血管通路的评价、选择及并发症防治

随着终末期肾衰竭患者的逐年增多，用于维持性血液透析患者的费用支出也逐年增加，其中相当比例的资金用于血管通路的建立及相关并发症的处理。据Lysaght估计，2001年全球维持性透析患者超过110万人，并以每年7％的速度增长，到2010年将达到200万人，今后10年医疗费用将超过1万亿美元。美国国立卫生研究院(NIH)估计，每年因血管通路建立和相     

Kinetics and persistence of cardiovascular and locomotor effects of immobilization stress and influence of ACTH treatment

Stress triggers crucial responses, including elevated blood pressure and heart rate (HR), to handle the emergency and restore homeostasis. However, continuation of these effects following cessation of the stress is implicated with many stress-related disorders. Here, we examine the kinetics and persistence of cardiovascular and locomotor responses to single and repeated immobilization stress (IMO), with and without prior treatment with adrenocorticotropic hormone (ACTH). Radiotelemetry probes were implanted into male Sprague-Dawley rats to continually monitor mean arterial pressure (MAP), HR and locomotor activity. Rats were subjected to IMO for 2 h daily (10 a.m. to noon, 6 consecutive days). The first IMO induced the greatest change in MAP (about 30 mm Hg) and HR (about 200 bpm). Following each IMO, MAP and HR were elevated during the remaining light phase and in the subsequent dark phase, HR was lower than prior to IMO. We further examined whether elevation of ACTH to a level similar to IMO will elicit similar effects, and if it will alter subsequent responses to IMO. Injection of ACTH (13 IU/kg, s.c.) triggered a short-lived rise in MAP, and decreased HR. After six daily injections of ACTH and recovery time (8 days), rats were immobilized as above. The cardiovascular responses were similar during the IMO, but the ACTH-pretreated group displayed differences following cessation of the IMO. In addition, IMO led to a large reduction of locomotor activity during the dark (normally active) phase to levels similar to the light phase. Following the IMOs, locomotor activity recovered more slowly in the ACTH-pretreated group. The study revealed that IMO-triggered cardiovascular and locomotor responses are evident after termination of the stress. In addition, prior exposure to ACTH delayed recovery in cardiovascular and locomotor functions following cessation of stress.