乙酰胆碱受体阻断剂对脂多糖活化THP-1细胞作用的影响

目的 观察乙酰胆碱受体阻断剂对脂多糖活化人单核细胞白血病细胞THP-1分泌细胞因子的影响,探讨乙酰胆碱通路在脓毒症中作用.方法通过细胞培养,实验细胞为THP-1细胞,分别加入不同浓度银环蛇毒素培养24h后,每孔加入100ng/ml脂多糖,同时做空白对照,CO2孵箱孵育6h,离心取上清液,检测TNF-α和IL-6,结果采用SPSS 17.0进行分析.结果 THP-1呈悬浮生长,使用不同浓度的银环蛇毒单独与THP-1细胞孵育24h后,检测上清TNF-α和IL-6分泌,比较是否加银环蛇毒两组间,P分别为0.71和0.32,结果无显著性差异.加入不同浓度银环蛇毒与THP-1细胞预孵育后,再使用LPS刺激6h,在银环蛇毒浓度为10μmol/L时,TNF-α和IL-6分泌大大增加.结论 银环蛇毒单独不能明显刺激THP-1细胞分泌TNF-α和IL-6,银环蛇毒对THP-1细胞Ach受体封闭存在一个剂量效应.     

结核分枝杆菌感染对THP-1细胞CD14表达的影响

目的:探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染THP-1细胞后对细胞表面白细胞分化抗原14(CD14)表达的影响.方法:Mtb以10:1感染佛波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,建立Mtb感染THP-1细胞的模型.采用流式细胞术检测THP-1细胞、PMA分化的THP-1细胞及Mtb感染THP-1细胞CD14的表达.结果:THP-1细胞和PMA分化的THP-1细胞表面表达CD14的阳性率分别为5.5%和21.6%,对Mtb的吞噬率分别为7.7%和93.0%;Mtb感染的THP-1细胞表面表达CD14的阳性率为27.5%.结论:PMA分化后的THP-1细胞表面CD14的表达增加,Mtb感染后CD14的表达进一步增加,对Mtb的吞噬率增加.     

内毒素介导Kupffer细胞脂多糖受体CD14的表达

目的　观察内毒素刺激下肝Kupffer细胞 (KCs)膜上脂多糖 (LPS)受体CD14的表达及其在细胞因子分泌中的作用。方法　从Wistar大鼠肝组织中分离出KCs ,培养 12h并调整细胞浓度为 1× 10 6/ml/孔 ,将细胞分为 2组。①LPS组 :每孔加入不同浓度LPS(0、10 0ng/ml ,1、10 0 μg/ml) ;②PI PLC组 :每孔先加入 1U磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI PLC)后再加入不同浓度LPS。用兔抗鼠CD14抗体和异硫氢酸荧光素 (FITC)标记的羊抗兔IgG对KCs进行免疫染色 ,流式细胞仪 (FCM)测定FITC阳性KCs数及其荧光强度(FI) ,并用酶联免疫法或放免法测定培养液中TNFα和IL 6的含量变化。结果　随着LPS浓度增加 ,LPS组FITC阳性细胞数显著增多 ,其FI逐渐增强 ,培养液中TNFα和IL 6的含量也逐渐增高 (P <0 .0 1) ;PI PLC组FITC阳性细胞数及FI较LPS组明显减少和减弱 ,培养液中TNFα和IL 6的含量在低浓度LPS刺激时差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,在高浓度LPS时刺激时才明显增加 (P <0 .0 5 )。结论　LPS能上调KCsCD14表达 ,同时伴有多种细胞因子分泌 ;PI PLC对内毒素介导KCs分泌细胞因子有一定抑制作用     

可溶性 CD40配体对THP-1细胞增殖及survivin m RNA表达的影响

目的：研究可溶性CD40配体（Soluble CD40 Ligand ,sCD40L）对人白血病THP‐1细胞增殖的作用,并探讨其对生存素mRNA（survivin mRNA）及白细胞介素6（IL‐6）表达的影响。方法：采用MTT 法检测sCD40L孵育THP‐1细胞体外增殖的影响;通过RT‐PCR检测survivin mRNA 表达;ELISA测定IL‐6的影响。结果：不同浓度的 sCD40L对THP‐1细胞增殖有抑制作用,并呈剂量－时间依赖关系;sCD40L对THP‐1细胞survivin及IL‐6的表达有明显的抑制作用,并呈剂量－时间依赖性。结论：sCD40L 在体外能够明显抑制 THP‐1细胞增殖,具有剂量－时间依赖性。sCD40L 抑制T HP‐1细胞增殖与survivin及IL‐6表达相关,并可能与其下调有关。     

脂多糖结合蛋白抑制肽对内毒素诱导的人单核巨噬细胞株表达CD14的影响

目的研究脂多糖结合蛋白(LBP)抑制肽对内毒素(LPS)诱导的人单核巨噬细胞株U937细胞表达CD14的影响。方法佛波脂(PMA)诱导U937成熟后分为5组:正常对照组、LPS组(100ng/mLLPS 100ng/mLrhLBP)、低剂量抑制肽组、中剂量抑制肽组及高剂量抑制肽组,后3组分别给予10、100和1000ng/mL抑制肽。用RTPCR和蛋白定量方法(Westernblot)测定CD14mRNA和蛋白的表达,ELISA测定培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量。结果LBP抑制肽显著抑制LPS刺激后U937细胞CD14的mRNA与蛋白表达,同时也抑制了TNFα的分泌,较LPS组有显著差异。结论LBP抑制肽通过抑制由CD14介导的LPS信号跨膜转导和TNFα的分泌,对LPS所致疾病如脓毒血症、急性肺损伤可能有潜在的治疗作用。     

β淀粉样蛋白诱导大鼠小胶质细胞脂多糖受体CD14和肿瘤坏死因子-αmRNA的表达

目的：研究不同浓度的p淀粉样蛋白（Aβ1-42）诱导大鼠小胶质细胞脂多糖受体CD14和肿瘤坏死因子-αLmRNA表达的变化。方法：小胶质细胞株复苏培养后分为2组：Aβ1-42组和抗CD14加Aβ1-42组。抗CD14加Aβ1-42组使用抗CD14抗体拮抗CD14的表达，再分别用不同浓度的Aβ1-42（0、62．5nmol／L、125nmol／L、250nmol／L）进行干预，2组均在Aβ1-42干预2h后用RT—PCR法检测CD14及TNF—αmRNA表达的量。结果：不同浓度的Aβ1-42干预小胶质细胞2h后，62．5nmol／L与0nmol／L Aβ1-42组CD14mRNA的表达相比较，差异无统计学意义。当Aβ1-42浓度为125nmol／L和250nmol／L时，CD14mRNA的表达逐渐增加（P〈0．05）。使用CD14抗体后，抗CD14加Aβ1-42组中CD14mRNA的表达与Aβ1-42组比降低（P〈0．05）。Aβ1-42组TNF-αmRNA的表达随Aβ1-42的浓度增加而增加（P〈0．05），与Aβ1-42组相比，抗CD14加Aβ1-42组中TNF-αmRNA的表达在Aβ1-42浓度为125nmol／L开始明显受到抑制（P〈0．05）。结论：Aβ1-42诱导的小胶质细胞可通过脂多糖受体CD14使TNF-αmRNA的表达增加，且与Aβ1-42的作用浓度呈正相关。     

脂多糖活化小鼠大脑小胶质细胞后炎性细胞因子的表达

目的采用细菌脂多糖（LPS）对原代培养的BALB/c小鼠大脑皮质小胶质细胞进行刺激,检测小胶质细胞IL-1bI、L-6和TNF-α等细胞因子的基因表达情况。方法分离纯化小胶质细胞,采用1μg/ml LPS刺激24h,再采用RT-PCR检测IL-1bI、L-6和TNF-a mRNA表达水平。结果体外培养的小胶质细胞经LPS刺激后,细胞因子IL-1bI、L-6和TNF-a mRNA表达水平明显上调。结论 LPS活化的小胶质细胞可产生大量的炎性细胞因子。     

内毒素耐受对THP-1细胞分泌TNF-α和IL-10的影响

目的:观察细菌脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)反复刺激人单核细胞株THP-1细胞,诱导产生的内毒素耐受对该细胞分泌炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和抗炎因子白细胞介素(interleukin,IL)-10的影响?方法:采用1 μg/ml牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)LPS或1 μg/ml大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)LPS刺激THP-1细胞24 h,洗脱后,分别采用相同LPS再刺激24 h,构建内毒素耐受模型?采用ELISA技术检测细胞条件培养液中TNF-α和IL-10分泌水平的变化?结果:P.gingivalis LPS或E.coli LPS刺激THP-1细胞24 h后,TNF-α和IL-10分泌水平均较刺激前明显增高(P < 0.05)?2种LPS重复刺激后,TNF-α分泌水平较第1次刺激后明显降低(P < 0.05),IL-10分泌水平则较第1次刺激后明显增高(P < 0.05)?结论:内毒素耐受能抑制THP-1细胞分泌TNF-α,促进该细胞分泌IL-10,进而可能影响牙周组织的炎症和免疫反应?     

熊果酸对脂多糖诱导的THP-1细胞的作用及其机制

探讨熊果酸对THP-1细胞的保护作用及其机制.以脂多糖诱导的THP-1炎症细胞为模型,观察不同浓度的熊果酸(10,30,50 μmol/L)对细胞黏附、迁移功能的影响,RT-PCR法检测MCP-1、CCR2 mRNA的表达,继而探讨NF-kB活性.结果显示,与模型组比较,熊果酸(30,50 μmol/L)能够显著降低I...     

CD14在B1细胞的表达研究

目的：比较分析小鼠B1细胞和B2细胞CD14的表达,探索B1细胞在天然免疫中的作用.方法：取正常C57BL/6小鼠的腹腔和脾细胞,anti-IgM免疫磁珠分选B1和B2细胞,提取总RNA后用半定量逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测CD14 mRNA的表达,以anti-CD14抗体、anti-CD19抗体流式细胞仪分析CD14分子在B1和B2细胞表面的表达;进一步给予小鼠腹腔内注射脂多糖（LPS）,于不同时间点分选B1细胞,RT-PCR检测CD14 mRNA表达水平的变化.结果：RT-PCR及流式细胞仪检测结果显示CD14在正常小鼠B1细胞有较低水平的表达,而B2细胞几乎没有表达,LPS刺激后B1细胞的CD14表达水平明显升高.结论：CD14表达于正常小鼠B1细胞,并且可能在B1细胞对LPS的应答中具有重要作用.     

内毒素对巨噬细胞膜CD14表达的影响及与膜脂微环境关系

目的 研究内毒素脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)刺激下巨噬细胞膜脂改变对CD14表达的影响。方法 LPS体外刺激巨噬细胞，用Western blot及RT-PCR检测随时问变化细胞膜CD14 mRNA及蛋白表达的变化；同时观察膜脂微环境变化对CD14表达的影响。结果 LPS刺激巨噬细胞1h CD14表达增加，5h达高峰，8h降至正常水平；而CD14 mRNA水平3h达高峰，5h降低。LPS刺激巨噬细胞5h后细胞膜脂成分降解，膜脂流动性降低，CD14表达增加；用脂质体预处理后膜脂含量增加，膜脂流动性增加，CD14表达降低。结论 LPS体外刺激能上调巨噬细胞膜CD14表达，且此调节作用可能至少发生在转录水平；LPS刺激巨噬细胞使主要膜脂成分降解，膜流动性降低，这可能是LPS上调CD14的重要原因。     

严重烧伤大鼠在体肺泡巨噬细胞CD14基因表达对细胞因子影响的实验研究

目的:全身炎症反应综合征(SIRS)是炎症介质过度释放的全身炎症反应,文中探讨严重烧伤和内毒素对在体SD大鼠肺泡巨噬细胞(AM)CD14基因表达的影响及调控作用以及体外培养AM的CD14膜蛋白表达对AM产生肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的影响及调控作用. 方法:①在体部分:对20%m度烧伤大鼠行外周血脂多糖(LPS)浓度检测.大鼠烧伤和LPS注射后在各时相点分别处死并分离提取AM,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法观察膜表面CD14mRNA表达变化.②体外部分:各组大鼠行全肺在体支气管肺泡灌洗(BAL)分离AM进行体外培养,分别加入烧伤血清、烧伤血清+抗体、内毒素、内毒素+抗体,用RT-PCR及ELISA方法分别检测4组AM在各时相点CD14mRNA表达及分泌TNF-α和IL-6的变化. 结果:①烧伤及LPS注射后大鼠各时相点外周血LPS浓度均明显高于假烫组.②烧伤血清组、LPS组大鼠AM各时相点CD14 mRNA表达均明显增高,TNF-α和IL-6浓度亦相应显著增高(P＜0.01).烧伤血清作用1 h后TNF-α和IL-6浓度即显著增加;血清抗体组AM的CD14mRNA表达显著降低(P＜0.01),TNF-α和IL-6浓度亦显著降低(P＜O.01).内毒素抗体组AM在各时相点CD14mRNA表达显著降低(P＜0.01),TNF-α和IL-6浓度亦显著降低(P＜0.01).结论:严重烧伤后外周血LPS浓度增加,在体和离体AM CD14 mRNA表达均显著增加,这使LPS对免疫系统的激活作用显著增大,AM分泌TNF-α和IL-6明显增加,抗CD14抗体可以拮抗炎性介质的合成和分泌.提示严重烧伤后通过调节CD14的作用而减少炎性介质的合成和分泌是可行的.     

LPS等丝裂原所致THP-1细胞活化增殖的优化因素

目的 探讨LPS等丝裂原所致THP-1细胞增殖分化的优化因素.方法 利用MTT法及改良WST-8法测定,THP-1细胞的增殖情况,并对THP-1细胞生长特性及其曲线进行测定,同时测定成熟THP-1细胞的吞噬功能.由此探讨LPS、PHA、ConA对PMA诱导成熟的THP-1细胞活化增殖的最佳浓度及作用时间曲线.结果 WST-8法测定THP-1细胞增殖活性优于MTT法,比较敏感;THP-1细胞增殖测定表明LPS比PHA、ConA效果好;LPS浓度在1μg/ml、作用24 h可充分诱导活化巨噬细胞,同时巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力.结论 LPS可使巨噬细胞活化增殖,并且吞噬功能明显增强.     

内毒素血症小鼠血浆Ox-LDL的变化及其对LPS致炎效应的影响

目的探讨内毒素血症小鼠血浆氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)的变化规律及其对内毒素(LPS)作用的影响.方法静脉分别注射LPS 1、2.5、5 mg/kg,复制小鼠内毒素血症模型, ELISA法检测血浆Ox-LDL含量;Ox-LDL 0.35、1.4 mg/kg静脉注射预处理小鼠,30 min后注射LPS 1 mg /kg,ELISA法测定血浆TNF-α含量;观察Ox-LDL预处理对内毒素血症小鼠24 h死亡率的影响.结果内毒素血症小鼠血浆Ox-LDL明显升高,LPS注射后0.5～8 h ,各剂量组血浆Ox-LDL水平均显著高于正常对照(P<0.01);不同剂量Ox-LDL预处理小鼠血浆TNF-α水平均显著高于LPS单纯注射组同时相点(P<0.01),且24 h死亡率增加.结论内毒素血症小鼠血浆Ox-LDL水平明显增高,与LPS呈明显的量效关系;Ox-LDL能增强LPS的致炎效应,这可能与其部分封闭清道夫受体(SR),导致LP S清除减少有关.     

细胞膜磷脂对LPS-CD14结合的影响

目的 研究不同成分磷脂与巨噬细胞膜的结合特性及LPS-CD14结合的影响，阐明磷脂的抗炎机制。方法 ^14C-PE或^14C-PS检测磷脂与膜的结合特性，同时观察小鼠血浆对结合的影响；并用CD14抗体阻断法测定磷脂对LPS-CD14结合的影响。结果 在正常小鼠血浆存在条件下，随磷脂浓度增国，磷脂与细胞膜的结合量也增加，而^14C-PS和^14C-PE相比较与细胞结合更多。不加血浆的实验组，磷脂与细胞膜的结合明显减少。PE（10umol/L）能显著抑制^14C-PE(1umol/L）与细胞膜结合，PS（10umol/L）能非常显著抑制^14C-PS(1umol/L）与细胞膜结合。CD14抗体能显著抑制^14C-PE及^14C-PS与细胞膜的结合，而小鼠IgG并无此抑制作用。结论 不同磷脂与细胞膜的结合量的不同，不同磷脂在细胞膜上有各自的特异性位点；PE、PS与LPS结合至mCD14是同一或邻近位置，从而调节依赖于mCD14的LPS炎症反应。     

重庆地区汉族人群CD14基因启动子区-159 T→C多态性及其与LPS反应分析

目的观察重庆地区汉族人群CD14基因启动子区-159单核甘酸多态性(single nuc leotide polymorph ism,SNP)分布特征,及其与CD14表达和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)反应的关系。方法选择298例重庆地区汉族健康个体,采用限制性片段长度多态性法(restrictionfragm ent lengthpoly-morph ism,RFLP)进行基因分型,检测LPS刺激前后外周血单核-巨噬细胞mCD14荧光强度和血浆sCD14浓度。结果重庆地区汉族人群CD14-159 T/T、T/C、C/C基因型频率分别为32.21%、50.67%和17.11%,样本符合Hardy-W e inberg平衡,正常情况下,不同基因型mCD14水平差异不明显,而sCD14浓度有显著性差异(P<0.05),LPS刺激能增强mCD14和sCD14的表达,但各基因型的增强幅度没有明显差异。结论重庆地区汉族人群CD14-159 SNP等位碱基以T为主,T→C变异可抑制sCD14的表达,但对mCD14表达和LPS刺激反应的影响可能不明显。     

内毒素及肿瘤坏死因子对肝细胞超微结构的影响

目的：研究内毒素及肿瘤坏死因子对肝细胞超微结构的影响。方法：我们采用胶原酶二步法灌注一月龄ＳＤ雄性大鼠肝脏,制备肝细胞悬液并进行了原代培养,重点研究了内毒素、肿瘤坏死因子对原代短期培养肝细胞超微结构的影响。结果：表现为糖原减少、溶酶体增多、线粒体肿大、嵴溶解、内质网扩张及断裂、甚至可见核空泡化、染色质消失。其中以肿瘤坏死因子引起的肝细胞损伤为重;若二者联合作用,则肝细胞受损更加严重。结论：内毒素与     

rhGH、IGF-1对烧伤小鼠CD14 mRNA转录的影响

目的:探讨rhGH、IGF-1对严重烧伤小鼠早期腹腔巨噬细胞(Mα)CD14 mRNA转录的影响.方法:在体实验:20只小鼠被随机地分成A、B组(烧伤前连续5 d分别给予rhGH和生理盐水)和C、D组(假烫前连续5 d分别给予rhGH和生理盐水).离体实验:10只小鼠被分成E、F组(烧伤和假烫组),Mψ加入rhGH(0,1.6,8,40 ng/ml)和IGF-1(0,0.2,1,5μg/m1)培养.用细胞原位杂交方法,观察了全身应用rhGH及体外培养加入rhGH、IGF-1对小鼠巨噬细胞CD14 mRNA转录的影响.结果:在体实验:(1)预先肌注rhGH,可使假烫组小鼠腹腔MψCD14mRNA的转录明显增加.(2)烧伤后腹腔MψCD14mR-NA的转录也明显增加,预先应用rhGH的小鼠烧伤后不会出现MψCD14 mRNA的过度转录.(3)体外培养实验:rhGH(40ng/ml)可使烧伤小鼠Mψ CD14 mRNA转录增加,其他浓度无显著改变,IGF-1各浓度均增加CD14 mRNA的转录.结论:rhGH、IGF-1可能通过增加MψCD14基因表达使Mψ易于被激活,从而有利于免疫功能的增强.rhGH的这一作用可能通过IGF-1来实现.烧伤后应用0.2 mg/(kg@d)剂量的rhGH不会引起Mψ的过度激活.