RNAi研究现状与进展

ＲＮＡｉ(ＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ)即ＲＮＡ干扰 ,自从 1 998年被阐明以来 ,一直是分子生物学和遗传学的研究热点。从植物、真菌到线虫乃至哺乳动物和人类 ,ＲＮＡｉ研究方兴未艾。本文将对ＲＮＡｉ机制的研究进展及ＲＮＡｉ技术在基因功能研究和基因治疗中的探索进行综述。1　ＲＮＡｉ的发现　　早在 1 0多年前 ,植物学家在研究转基因植物时就发现 ,部分外源基因导入植物后 ,不但未能正常表达 ,植物自身的等位基因表达也受到抑制 ,即所谓共抑制 (ｃｏｓｕｐ ｐｒｅｓｓｉｏｎ)现象。此后 ,在酵母菌和线虫研究中也发现类似现象 ,称…     

RNAi技术在研究神经科学中的应用

使用RNAi技术可以有效而且特异地抑制目的基因的表达，为神经科学的研究提供了有力的技术手段。     

慢病毒载体介导RNAi的研究进展

一、慢病毒及慢病毒载体 目前RNAi技术作为一种主要的分子生物学研究手段,被广泛应用于特异性抑制基因的表达研究.RNAi的作用机制表明:双链RNA分子首先被细胞内RNA酶Dicer降解成21～23个碱基大小的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),siRNA结合一个核酶复合物形成RNA诱导沉默复合物(RNA-in-duced silencing complex,RISC),RISC通过碱基配对定位到有同源序列的mRNA上,并在特定位置切割该mRNA,从而抑制该同源基因的表达[1].siRNA被认为是RNAi的主要效应物.     

RNAi下调F10基因表达对KLE细胞凋亡的影响

目的 探讨小分子双链RNA对KLE细胞中F10基因的沉默效应,并确定F10基因沉默对KLE细胞凋亡的影响.方法 采用体外转录法制备针对F10基因的dsRNA;脂质体转染KLE细胞,荧光定量PCR检测dsRNA转染KLE细胞不同时间后细胞中F10基因的表达水平;流式细胞仪检测F10基因沉默后KLE细胞凋亡的改变.结果 体外转录法能制备足够的dsRNA:F10基因表达水平的检测证实转染KLE细胞的dsRNA下调了F10基因表达,20 nmol/L dsRNA转染48 h的效应最为显著,基因下调达到83%;20 nmol/L dsRNA转染48 h,KLE细胞凋亡百分率从0.36%增加至8.91%.结论 体外转录制备的针对F10基因的dsRNA能特异有效沉默KLE细胞中的F10基因;F10基因的表达下调可诱导KLE细胞的凋亡.     

RNAi沉默HSP70基因对宫颈癌HeLa细胞的影响

目的:本研究初步探讨RNAi技术应用于宫颈癌基因治疗的特异性及其作用机理。方法:设计靶向HSP70基因siRNA序列,构建重组表达载体pTZU6+1-siRNA-HSP70,在脂质体介导下瞬时转染宫颈癌HeLa细胞,在体外诱导RNAi沉默HSP70基因,同时设转染空载体pTZU6+1为阴性对照组和不加任何试剂的空白对照组。采用RT-PCR和Western blotting方法检测实验组和对照组中HSP70表达;MTT法检测细胞生长与增殖;流式细胞术检测细胞的凋亡率和细胞周期分布。结果:与对照组相比,实验组转染HeLa细胞后,细胞的HSP70 mRNA和蛋白表达均明显下调(P<0.01);细胞生长抑制率增高(P<0.05);细胞周期相分布发生变化。结论:siRNA明显抑制HSP70的表达及宫颈癌HeLa细胞的增殖,并引起细胞凋亡和细胞周期改变,为进一步研究HSP70基因在宫颈癌细胞凋亡中的作用及其机制奠定了基础。     

RNAi在喉癌治疗中的研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近几年发展起来的一种新兴的基因沉默技术,它是由双链RNA介导的靶向基因序列特异性转录后沉默机制.目前,RNAi技术已被广泛应用于各种肿瘤研究.本文主要论述RNAi在喉癌治疗方面的应用及进展.     

RNAi有可能为HIV治疗带来希望

研究人员发现人类细胞系中发生的RNA干扰(RNAi)可能仅有1年多的时间,但此项研究的发现正在预防HIV及其他病毒感染人类细胞的机制研究方面产     

靶向survivin基因的RNAi诱导喉癌Hep 2细胞凋亡的研究

目的通过构建RNAi表达载体,转染喉癌细胞株Hep 2,观察其对survivin表达的抑制作用。方法构建针对survivin基因的干扰载体,用脂质体转染喉癌细胞Hep 2,分析干扰载体对survivin表达的抑制情况,检测细胞凋亡。结果survivin在喉癌细胞Hep 2中呈高表达,其基因序列与GenBank序列对比一致,干扰载体pGensil/survivin能抑制survivin的表达,抑制率为68%,并诱导了喉癌细胞的凋亡。结论针对survivin的小分子RNA可以有效抑制喉癌细胞Hep 2中survivin蛋白的表达,并促进喉癌细胞凋亡。     

RNAi技术沉默K562细胞中c-myc基因的初步研究

目的运用RNAi技术，设计针对c-myc的小干扰RNA(siRNA)，研究其干扰效果。方法针对c-myc mRNA的第1357靶位点设计siRNAs，经Lipofectamine^TM 2000脂质体法转染K562细胞，进行RT-PCR、细胞计数和MTT法及流式细胞仪检测，观察其干扰效果。结果转染组与阴性对照组和空白对照组相比，c-myc mRNA表达明显减弱．细胞计数和MTTD(λ)值均有显降低，并有明显的凋亡率。结论运用RNAi技术，可以有效地干扰c-myc的表达．并进一步诱导细胞凋亡。     

RNAi构建p53基因低表达细胞

目的构建p53基因低表达的人且不胎肺成纤维细胞（HELF）。方法利用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术建立p53基因低表达的HELF。采用Real—time PCR法及免疫组织化学SABC法,分别从mRNA和蛋白水平检测不同组（p53基因低表达细胞组、对照细胞组、正常细胞组）HELP的p53基因表达改变。结果转染p53质粒组（低表达组）细胞,p53基因mRNA和蛋白表达水平均较正常细胞组及转染PC质粒组细胞明显降低,差别有意义（P〈0．05）,表达量约是正常细胞的50％;转染PC质粒组（对照组）细胞与正常组细胞p53基因mRNA表达问差异元意义（P〉0．05）.结论1353基因低表达HELF构建成功。     

RNAi和微小RNA：从动物模型到疾病治疗

RNA干扰（RNA interference，RNAi）首次由Fire在1998年发现并命名，是双链RNA（dsRNA）介导的特异性基因表达沉默现象，主要参与者为小干扰RNA（small interfering RNAs，siRNAs）。RNAi研究是目前基因功能研究和基因治疗研究的热点，它也是抵御感染的一种重要保护机制。在2001年和2002年连续被Science杂志评为自然科学最重要的科技成果之一。     

RNAi沉默肺癌细胞中VEGF的表达治疗肺癌机制的初步研究

目的：探讨RNAi干涉沉默肺癌细胞中VEGF的表达治疗肺癌机制.方法：将pSilencerTM-3.1-VEGF分别稳定转染入人肺癌细胞株A549,建立稳转细胞系.通过RT-PCR检测Bcl-2和Bax的mRNA的水平.免疫印迹方法检测稳转的人肺癌细胞株A549中P53,Bcl-2和Bax的表达.流式细胞仪检测稳转的人肺癌细胞株A549细胞系的凋亡.结果：稳定转染pSilencerTM-3.1-VEGF的人肺癌细胞株A549细胞系中VEGF的表达明显下调.稳转的人肺癌细胞株A549细胞系中P53,Bcl-2和Bax的表达无明显变化,未观察到明显的细胞凋亡现象.与对照组比较,在人HUVEC细胞系的作用下,稳定转染的人A549细胞虽Bax的表达未发生变化,但P53表达明显增高,Bcl-2表达下调,并且呈现细胞凋亡现象.外源性VEGF能够增加Bcl-2的表达,并导致P53表达下调.结论：RNAi沉默肺癌细胞中VEGF的表达未影响肺癌细胞自身的变化,其对肺癌发展的抑制可能是通过抑制了血管内皮细胞上的VEGF/VEGFR通路,从而引起了肺癌细胞的凋亡.     

糖尿病的干预治疗体会

糖尿病为糖调节受损,包括空腹血糖受损(IFG)、糖耐量减低(IGT)及二者合并存在三种状态,IFG的诊断标准为空腹血糖5.6-69mmol/L;IGT诊断标准为负荷后2h血糖7.8-11.0mmol/L;IFG/IGT诊断标准为空腹血糖>5.6-6.9mmol/L,负荷后2h血糖7.8-110mmol/L[1].糖尿病的发病率呈逐年上升趋势,约95%以上为2型糖尿病,2型糖尿病的绝对危险比一般人群高3-10倍,糖尿病患者的心血管疾病危险明显增加,以IGT患者更为显著,其中部分患者已存在特征性血管改变[1] ,而且也更容易合并其他危险因素(如肥胖,血脂异常等),因此早期发现糖尿病的状态并综合强化干预治疗可以有效预防其进展为2型糖尿病及其相关心血管并发症和微血管疾病.     

分子基因异常对多囊卵巢综合征发病机制的研究进展和中药的干预作用

多囊卵巢综合征（polycysticovarysyndrome,P-COS）是遗传因素与环境因素相互作用的一种复杂的异质性疾病,也是导致妇女月经紊乱最常见的原因。主要特征为慢性无排卵、胰岛素抵抗（IR）和雄激素过多引起的多样化的临床和生化表现。而家族性的无排卵和多囊卵巢提示PCOS存在遗传基础,且有明显的家族聚集性,易在一级亲属中发生[1]。许多研究者提示基因因素在PCOS病因学中起到非常重要的作用旧[2]。分子基因的研究认为P-COS是多基因遗传参与,包括环境因素的影响旧[3]。     

RNAi技术在医学上的应用研究进展

RNAi，作为一种调控特定基因表达的手段，被称为基因组的免疫现象，已成为最近生物医学领域的研究焦点之一。本文就RNAi技术在抑制肿瘤和HIV、HBV、HCV、SARS等病毒以及其它一些疾病的研究进展。     

RNAi技术沉默K562细胞中c-myc基因的初步研究

目的 运用RNAi技术,设计针对c-myc的小干扰RNA(siRNA),研究其干扰效果。方法 针对c-mycmRNA的第1357靶位点设计siRNAs,经Lipofectamine^TM2000脂质体法转染K562细胞,进行RT-PCR、细胞计数和MTT法及流式细胞仪检测,观察其干扰效果。结果 转染组与阴性对照组和空白对照组相比,c-mycmRNA表达明显减弱,细胞计数和MTTD(λ)值均有显著降低,并有明显的凋亡率。结论 运用RNAi技术,可以有效地干扰c-myc的表达,并进一步诱导细胞凋亡。     

RNAi的研究进展

RNAi(RNA interference,即RNA干扰)是指通过反义RNA与正链RNA形成双链RNA特异性地抑制靶基因的现象,它通过人为地引入与内源靶基因具有相同序列的双链RNA(有义RNA和反义RNA),从而诱导内源靶基因的mRNA降解,达到阻止基因表达的目的[1-2].RNAi是最近几年发现和发展起来的新兴基因阻断技术.     

基因组不稳定肝细胞CDT1基因过表达和RNAi慢病毒载体的构建

目的构建基因组不稳定细胞CDT1基因过表达和RNAi模型,为进一步探讨该基因在辐射诱发基因组不稳定的功能提供研究工具。方法根据CDT1基因信息,以慢病毒载体GV218设计合成两种重组质粒,分别包含CDT1基因全长序列以及阴性对照序列;以慢病毒载体GV248设计合成两种重组质粒,分别包含CDT1基因的小干扰序列以及用于干扰对照的阴性序列。利用Western blot和qPCR进行过表达和RNAi重组质粒表达的检测。通过转染293T细胞进行慢病毒的包装。利用ELISA和荧光法分别进行滴度的检测。再用包装好的慢病毒感染辐射诱导基因组不稳定性HL-7702肝细胞,利用qPCR检测CDT1表达量。结果测序结果表明重组质粒构建成功,并能够有效转染293T。过表达病毒滴度为4.3×108TU/ml;RNAi病毒滴度为2.0×108TU/ml。过表达慢病毒能有效上调CDT1的表达,过表达效率为65%。RNAi干扰慢病毒能够有效抑制CDT1的表达,抑制效率为88%。结论成功构建基因组不稳定肝细胞CDT1基因过表达和RNAi模型,为进一步研究CDT1在辐射诱发基因组不稳定细胞中的功能提供了有效的研究工具。     

糖耐量减低的干预治疗

随着对糖尿病的深入研究，糖耐量减低也逐渐受到重视。糖耐量减低是一种重要的代谢紊乱综合征。大量证据表明糖耐量减低患者发展成为糖尿病及合并大血管疾病的危险性较正常糖耐量者相比显著增加；减少2型糖尿病及其并发症发生的重要环节之一，是早期发现糖耐量减低，及早干预治疗。