生长激素、肝细胞生长因子和烟酰胺对人胎胰岛细胞体外增殖的影响

目的 :探讨生长激素 (GH) ,肝细胞生长因子 (HGF)和烟酰胺 (NIC)对体外培养人胎胰岛细胞增殖的影响。方法 :胶原酶消化法制胰岛样细胞团 (ICCs) ,接种于 2 4孔培养板培养 ,在实验组中分别加入GH(1 0 0 μg/L) ,HGF(2 5 μg/L)和NIC(1 0mmol/L)及其组合 ,同时设空白组为对照 ,间日调换培养液并测定胰岛素分泌量 ,于培养 6d末测定胰岛细胞内胰岛素含量 ,收集细胞计数 ,观察细胞有丝分裂相及胰岛细胞分布情况。结果 :①在人胎胰岛细胞体外培养第 2d、第 4d、第 6d胰岛素分泌量各实验组均高于空白组 (P <0 .0 1 ) ,以GH +HGF +NIC组最高 ,GH +HGF +NIC组与GH +NIC组、GH +HGF组、HGF +NIC组相比 ,差异无统计学意义 ,但与GH组、HGF组、NIC组比较 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。②各组胰岛细胞内胰岛素含量与胰岛样细胞团数均呈正相关 ,r均大于 0 .80 (P <0 .0 5 )。结论 :GH、HGF、NIC均能显著促进体外培养的人胎胰岛细胞的增殖 ,胰岛素含量及分泌量增加 ,3者有协同作用。     

人胎胰岛样细胞团体外增殖条件的研究

目的　探讨人脐血清(UCS)、生长激素(GH)、烟酰胺(Nic)以及肝细胞生长因子(HGF)等多种因子对人胎胰岛样细胞团(ICCs)体外增殖的作用,为临床胰岛细胞移植提供数据。方法　取8例水囊引产的胎儿胰腺,胶原酶消化法制备胰岛样细胞团,分别加入UCS、GH、Nic、HGF及小牛血清等多因子组合培养,进行形态学观察,同时放射免疫法测定胰岛素分泌量。结果　8例胎儿胰腺组织体外培养均见到ICCs的生长和繁殖,培养6d后,UCS + (GH +Nic +HGF)组ICCs获得量显著高于另外三个培养组。二硫腙染色示UCS + (GH +Nic +HGF)组ICCs均为B细胞,其纯度达80 %～90 %。结论　UCS、GH、Nic以及HGF共同作用于人胎胰岛细胞的体外培养时具有交互作用,能明显促进B细胞的增殖,显著提高胰岛样细胞团的获得率和胰岛素的分泌量。     

肝细胞生长因子对c-kit+Lin-细胞的增殖作用

目的 探讨在无血清无基质的条件下,肝细胞生长因子(HGF)和因子组合对扩增c-kit Lin-细胞的影响.方法 采用免疫磁珠法分离小鼠骨髓c-kit Lin-细胞,研究在干细胞因子(SCF),FLt-3配基(FL),促血小板生成素(TPO)和白血病抑制因子(LIF)组合中添加不同浓度的HGF培养7 d,检测细胞总数,c-kit Lin-细胞扩增倍数及细胞凋亡率.结果 各因子组均可显著扩增c-kit Lin-细胞,扩增倍数2～8倍不等.其中,10ng/ml HGF组扩增c-kit Lin-细胞效果最为显著.为8.00倍,细胞总数扩增45.43倍,细胞凋亡率为17.42%.但随剂量加大,虽然细胞总数上升,c-kit Lin-细胞扩增反而下降.40 ng/ml组细胞总数扩增80.50倍,c-kit Lin-细胞扩增效果不明显,仅为2.87倍,细胞凋亡率最低.为5.91%.结论 10 ng/ml的HGF能协同SCF FL TPO LIF扩增c-kit Lin-细胞,使细胞凋亡率降低,其表型并不受影响,但过高剂量会诱导其分化.     

肝细胞生长因子和表皮生长因子对体外肝细胞生长的影响

取成年小鼠肝细胞在RPMI1640培养液中加热60℃胎肝提取液(FE_(60)HSS),加热80℃胎肝提取液(FE_(80)HSS)及加热60℃成年雄性小鼠颌下腺提取液(M_(60)EGF),用I~(125)UdR掺入法测定其肝细胞DNA合成,结果显示FE_(60)HSS为8575±17cpm,FE_(80)HSS为4788±990cpm,M_(60)EGF为4592±1120cpm,和对照组1902±657cpm比较差异有非常显著意义(P值均<0.01)。FE_(60)HSS组对细胞DNA合成较FE_(80)HSS明显,说明HSS对加热80℃不很稳定。     

人肝细胞生长因子在CHO细胞的表达和生物学活性

将人肝细胞生长因子（ＨＧＦ）ｃＤＮＡ（２．２ｋｂ）经ＤＮＡ连接酶插入到ｐＥＥ１４质粒的多克隆位点上，构建了ＰＥＥ１４／人ＨＧＦ（１１．４５ｋｂ）真核细胞表达质粒。用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将ｐＥＥ１４／ＨＧＦ质粒转导至ＣＨＯ细胞表达，表达ＰＥＥ１４人／人ＨＧＦ的ＣＨＯ细胞的培养液能促进原代培养大鼠细胞的ＤＮＡ合成。ＣＨＯ细胞表达和合成的人ＨＧＦ的水平高于２９３和ＮＳＯ细胞。     

烟酰胺对高糖介导胰岛细胞bax及bcl-2表达的影响

目的 探讨烟酰胺对高糖环境下胰岛细胞bax及bel-2蛋白表达的影响。方法 体外培养大鼠胰岛细胞，应用免疫组化方法检测培养液中葡萄糖终浓度为22．2mmol／L及加入烟酰胺后胰岛细胞bax及bcl-2蛋白表达。结果 培养液中葡萄糖终浓度为22．2mmol／L时，胰岛细胞bax表达阳性，bcl-2表达较对照组降低。加入烟酰胺后bax表达降低，bcl-2表达增强。结论 烟酰胺能够上调bcl-2表达，下调bax表达，在高糖介导的胰岛细胞损伤中起一定作用。     

表皮生长因子对体外长期孵育保存的人胎胰岛的支持作用

目的：研究表皮生长因子(EGF)对促进人胎胰岛增殖与分泌功能．方法：12个人胎胰岛分别在含有EGF(实验组)和不含有EGF(对照组)的培养基中孵育，观察胰岛B细胞的分布，测定培养基中和细胞内胰岛素浓度和胰岛素释放量．结果：培养结束后实验组胰岛B细胞明显高于对照组；培养基和胰岛B细胞中胰岛素释放量实验组高于对照组．结论：培养液中加入EGF能延长胰岛细胞存活期、促进胰岛细胞增殖和分泌功能．     

人胎胰岛B细胞体外增殖及其影响因素

糖尿病是世界疾病的第五大死因、胰岛细胞移植是可能治愈糖尿病的唯一有效方法。但胰岛细胞来源匮乏和移植后免疫排斥反应一直困扰着胰岛细胞移植的开展^［1］。解决此问题主要有两种方法：①利用微包囊等免疫隔离技术开展异种胰岛细胞移植，理论上它是同时解决细胞来源医乏和免疫排斥的有效方法，但其缺陷在于微包纯的自身稳定性，生物相容性及隔离室外的纤维化问题。免疫隔离膜能否屏蔽细胞因子对膜内胰岛的损害也是值得进一步研究的课题^［2］。②探讨人胎胰岛B细胞体外扩增的条件及其影响因素、以期通过体外扩增来获得足量功能的胶岛B纫胚和降低其免疫原性，使临床胰岛移植将可能达到理想的效果。因此促进胰岛细胞和增殖因素的研究具有重大的现实意义^［3］。现就此作一综述。     

乳癌组织中肝细胞生长因子及其受体C-Met的表达

目的：研究乳癌组织中肝细胞生长因子（HGF）及其受体C-Met的表达及对预后的意义.方法：采用免疫组织化学SP法检测39例人乳腺浸润性导管癌（组织学分级：Ⅰ级5例,Ⅱ级19例,Ⅲ组15例;PTNM分期：Ⅰ期22例,Ⅱ期10例,Ⅲ期7例）及12例乳腺纤维腺瘤组织中HGF和C-Met的表达,分析乳癌组织学分级及临床分期与HGF和C-Met的关系.结果：乳癌组织中HGF和C-Met的阳性表达率高于乳腺纤维腺瘤组织（P＜0.05）,其阳性表达率随癌组织的组织学分级及临床分期增高而增高.结论：乳癌组织中HGF和C-Met高表达可能与患者的不良预后相关.     

CTGF基因转染对胰腺癌细胞MMP-9、VEGF表达及增殖的影响

目的：通过研究结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）基因对人胰腺癌SW1990细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、血管内皮生长因子（VEGF）表达及细胞增殖的影响,深入探讨CTGF在胰腺癌侵袭和转移中的作用机制。方法：经脂质体介导将含有CTGF重组表达质粒转染人胰腺癌SW1990细胞株,用G418筛选阳性细胞克隆及RT-PCR、蛋白质印迹法鉴定;采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测阳性细胞克隆MMP-9及VEGF表达的改变;噻唑盐（MTT）比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性。结果：成功建立稳定高表达CTGF的阳性SW1990细胞克隆,与对照组相比,阳性克隆MMP-9、VEGF mRNA及蛋白表达显著增高,细胞增殖活性也显著增加。结论：CTGF转染可显著增加胰腺癌细胞MMP-9、VEGF的表达并促进其细胞增殖,CTGF可能是胰腺癌基因治疗的潜在靶点。     

胎鼠肝nestin阳性细胞的分离培养和诱导分化研究

目的建立胎鼠肝nestin阳性细胞的体外分离、培养和诱导分化的方法。方法采用机械分离法结合悬滴培养法获得胎肝干细胞,原代培养2d后改变培养基,添加含20%胎牛血清的DMEM(含25ml/L葡萄糖,100U/ml青链霉素,pH值7.6),添加烟酰胺10mmol/L,胰岛素1mg/L,N2添加剂,碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、干细胞因子、白血病抑制因子各20μg/L诱导分化为nestin阳性细胞。结果和结论大鼠胎肝内存在nestin阳性细胞,在体外扩增后加入诱导剂可定向分化为胰岛β细胞。     

不同浓度bFGF对体外培养人牙髓细胞增殖的影响

目的：探讨不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 对体外培养人牙髓细胞增殖的影响，为寻求最佳影响浓度提供参考依据。方法：以常规组织块培养法体外获得牙髓细胞,随机分为5组，实验组分别加入bFGF，使其终浓度为0.1、1.0、10.0及100.0 μg•L^-1，无bFGF组作为阴性对照。采用MTT法分别测定各组吸光度A值，计算细胞相对增殖率（RGR），观察bFGF对牙髓细胞的增殖作用。结果：人牙髓细胞在不同浓度bFGF的作用下，除0.1 μg•L^-1bFGF组外，其他实验组RGR均高于对照组 (P<0.01)；组间比较显示10.0 μg•L^-1 bFGF组RGR最高，与1.0 μg•L^-1bFGF组比较差异有显著性(P<0.01)，但与100.0 μg•L^-1bFGF 组比较差异无显著性(P>0.05)。结论：bFGF能促进人牙髓细胞的增殖，bFGF的最小显效浓度是1.0 μg•L^-1，最佳增殖浓度是10.0 μg•L^-1。       

Effectsof the NovelGH Secretogogue, Hexarelin on GH Se-cretion and PhosphatidylinositolHydrolysis by Hum an Pitu-itary Som atotrophinom as in CellCulture

Ｏｆｐｏｔｅｎｔｉａｌｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ，ｓｙｎ－ｔｈｅｔｉｃｇｒｏｗｔｈｈｏｒｍｏｎｅ（ＧＨ）－ｒｅｌｅａｓｉｎｇｈｅｘａｐｅｐｔｉｄｅ（ＧＨＲＰ－６）ｉｓａｃｔｉｖｅａｆｔｅｒｏｒａｌａｎｄｉｎｔｒａｎａｓａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎａｎｄｔｈｕｓｈｏｌｄｓｐｒｏｍｉｓｅａｓａｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄｍｅａｎｓｏｆｄｉｒｅｃｔｌｙｔｒｅａｔｉｎｇＧＨ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ［１］．Ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｔｌｙ，ｔｈｅｒｅｈａｓｂｅｅｎｍｕｃｈｒｅｃｅｎｔｅｆｆｏｒｔｉｎｄｅｖ…     

人生长激素对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨人生长激素在体内对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法建立裸鼠胰腺癌移植瘤皮下模型,分为对照组、顺铂（DDP）组、重组人生长激素（rhGH）组和DDP＋rhGH组,通过流式细胞仪、免疫组化和TUNEL法检测移植瘤的细胞周期、核增殖抗原、凋亡细胞。结果 DDP组和DDP＋rhGH组比对照组或rhGH组S期细胞、核增殖抗原明显降低（P〈0.05）,凋亡指数明显升高（P〈0.05）;而rhGH组与对照组各项指标比较无明显差异（P〉0.05）。结论外源性人生长激素在体内对人胰腺癌细胞的增殖和凋亡无明显作用。