豚鼠慢性充血性心力衰竭动物模型的研究

目的探讨豚鼠慢性充血性心力衰竭(CHF)动物模型的制作方法。方法采用降主动脉缩窄法建立豚鼠CHF模型(模型组20只,对照组10只)。8周后观察以下指标:临床表现、血流动力学、左心室重与体重比值、肺重与体重比值及室壁厚度。结果降主动脉缩窄8周后,14只豚鼠出现呼吸困难(BPC组),但BPC组豚鼠的左室收缩压及舒张末压均显著增高,左室压升高和降低最大速率均显著降低;左心室重与体重比值、肺重与体重比值及室壁厚度明显增高,呈现明显的心衰指征。而缩窄8周后未见呼吸困难的豚鼠(BWPC组)仅左心室重与体重比值增加,尚处于代偿期。结论降主动脉缩窄8周后可造成豚鼠CHF。     

心肌肥厚和心力衰竭时左心室收缩力及钙瞬变的变化

目的:研究心肌肥厚和心力衰竭时左心室收缩力及钙瞬变的变化。方法:采用主动脉缩窄术构建压力负荷型心衰小鼠模型及心肌肥厚小鼠模型,小动物超声机测量小鼠心室壁厚度及射血分数,Langendorff灌流术分离小鼠左心室心肌细胞,高速CCD摄像机系统和双激发荧光倍增系统同步测量左心室心肌细胞肌小节收缩舒张功能和胞内钙瞬变。结果:与假手术组相比,肥厚小鼠心室壁明显增厚,胞质基础钙浓度、钙瞬变振幅增高,钙瞬变达峰时间、恢复时间和肌小节舒张时间明显延长,肌小节初长度缩短;心衰组小鼠心腔扩大,射血分数(EF)、钙瞬变峰值、峰高、达峰时间及胞质内钙恢复的速度明显下降,肌小节初始长度显著缩短,收缩幅度下降,静息期基础钙浓度显著上升,收缩及舒张时间均明显延长。结论:在心力衰竭的发展过程中,随着心脏结构的改变,心肌细胞对胞内钙的释放和回收能力均下降,使单个心肌细胞收缩无力、舒张时间延长,进而影响整个心脏的收缩舒张功能。改善心肌细胞钙循环可能在缓解心衰患者临床症状和改善预后方面起到关键作用。     

心衰对左心室内外膜梯度差异的影响

目的:探讨正常、心衰时左心室内、外膜心肌细胞收缩舒张功能的差异。方法:采用主动脉缩窄术构建压力负荷型心衰小鼠。Langendorff灌流术分离小鼠左心室内、外膜心肌细胞。高速CCD摄像机系统和双激发荧光倍增系统同步测量内外膜心肌细胞肌小节收缩和胞内钙瞬变。张力传感器和微操作系统测量细胞的被动舒张张力(僵硬度)。结果:(1)正常小鼠内外膜收缩舒张功能存在差异,钙瞬变、钙Tau值、肌小节收缩幅度、僵硬度均为内膜大于外膜;(2)心衰时,小鼠左心室内外膜收缩舒张功能都受损,钙瞬变内外膜均降低,肌小节收缩幅度均减小,僵硬度均增大;(3)心衰时内外膜的钙瞬变差异消失,而肌小节收缩和僵硬度的差异依然存在。结论:正常心脏内膜是产生心肌收缩力的主要力量,心衰时内外膜细胞收缩舒张功能均受损,且内外膜本来存在的部分梯度差异在心衰时消失。     

慢性心衰大鼠心肌细胞内异常钙诱导钙释放的研究

目的研究慢性心衰大鼠心肌细胞内异常的钙诱导钙释放。方法将实验动物分为手术组和假手术组,运用全细胞膜片钳、激光扫描共聚焦显微镜、蛋白印迹（Western-blot）等方法研究胞浆内钙诱导钙瞬变及钙调控相关蛋白L-型钙通道（LTCC）表达的变化。结果慢性心衰大鼠心肌细胞肌浆网内的钙瞬变（ΔF/F0=12.72±1.13）显著低于对照组大鼠心肌细胞肌浆网内的钙瞬变（ΔF/F0=28.87±2.02,P〈0.01）;慢性心衰大鼠心肌细胞内LTCC的表达较对照组下调。结论 LTCC表达下调所致心肌兴奋-收缩耦联的异常是导致心衰的原因之一。     

益气活血法对舒张性心力衰竭大鼠心肌细胞钙稳态的影响

目的 研究不同比例益气活血药对舒张性心力衰竭(DHF)大鼠的疗效,探讨其对心肌细胞钙稳态的影响机制。方法 采用改良缩窄腹主动脉术制备压力负荷致DHF大鼠模型。将大鼠分为假手术组、模型组、益气组(黄芪3 g、党参1.5 g)、益气活血1∶1组(黄芪3 g、党参1.5 g、丹参3 g、三七1 g)、益气活血2∶1组(黄芪6 g、党参3 g、丹参3 g、三七1 g),每组20只,连续干预12周。治疗4、12周进行心功能检测,测量舒张期左室前壁厚度、舒张期左室后壁厚度、舒张期左室内径、左室射血分数和左室短轴缩短率及舒张早期跨二尖瓣血流速度(E)与舒张早期二尖瓣环运动幅度(e)比值(E/e);12周进行血流动力学检测,分别在静息状态和盐酸多巴胺负荷状态下记录左室压力下降速率、左室舒张末期压力(LVEDP)以评价左室舒张功能,记录左室压力上升速率,左室收缩压力(LVESP)以评价左室收缩功能,并记录心率及颈动脉压力;12周后处死大鼠,检测心肌细胞舒缩功能及钙转运情况,测量心肌细胞的收缩速率、舒张速率、收缩50%时间(CT50)和舒张50%时间(RT50);测定钙释放速率、钙回摄速率、钙释放50%时...     

豚鼠慢性充血性心力衰竭及致心肌肥厚模型的研究

目的 :探讨豚鼠慢性充血性心力衰竭 (CHF)及致心肌肥厚的动物模型制作方法。　方法 :采用升主动脉缩窄制作豚鼠CHF模型 (模型组 ,n =1 3) ,与对照组 (n =1 0 )同室饲养。 6周后观察以下指标 :临床表现、血流动力学、双心室重量与体重比值及室壁厚度。　结果 :模型组中 ,1只豚鼠死亡。未出现呼吸困难 4只中 :左心室舒张末压轻度增高 ,但无显著差异 ;双心室重量与体重比值增高。合并呼吸困难的 8只中 ,左心室舒张末压明显增高 ,双心室重量与体重比值增高 ,室壁厚度增加。　结论 :升主动脉缩窄 6周 ,豚鼠CHF及致心肌肥厚的动物模型基本形成。     

槐定碱对慢性心衰大鼠心肌保护作用机制的研究

目的 研究槐定碱对慢性心衰大鼠心肌保护作用的机制.方法 将60只雄性SD大鼠分为假手术组、心衰组、低（5 mg·kg-1）、中（10 mg·kg-1）、高（20 mg·kg-1）剂量槐定碱干预组（每组12只）,运用激光扫描共聚焦显微镜、蛋白印迹等方法研究各组心肌细胞胞浆内咖啡因诱导钙瞬变及钙泵（SERCA2a）表达的变化.结果 与假手术组相比较,心衰组大鼠心肌细胞肌浆网内钙瞬变幅度显著下降（18.33±1.52与36.18±2.64,P＜0.05）;中、高剂量药物干预组大鼠心肌细胞肌浆网内钙瞬变幅度较心衰组明显升高（33.45±2.47、32.19±1.98与18.33±1.52,P＜0.05）;心衰组大鼠心肌细胞SERCA2a表达较假手术组明显下调,中、高剂量药物干预组大鼠心肌细胞SERCA2a表达较心衰组均明显升高.结论 SERCA2a表达上调促使肌浆网内钙容量增加是槐定碱心肌保护作用的主要机制之一.     

慢性压力超负荷兔左心室结构和功能的动态变化

目的 探讨慢性压力超负荷兔左心室结构和功能的动态改变.方法 采用肾上腹主动脉缩窄方法制备兔左心室短期压力超负荷模型,设立假手术组,术后2周和8周通过心导管法测定左心室功能,然后测量左心室质量指标;采用胶原酶两步消化法分离获取左心室中层单个心肌细胞,应用激光扫描共聚焦显微镜技术测定中层细胞体积和蛋白含量.结果 术后2周和8周,缩窄组主动脉收缩压、舒张压、左室收缩压均较假手术组显著升高;术后2周,与假手术组比较,缩窄组左室压力最大上升和下降速率(±dp/dtmax)、左室舒张末压(LVEDP)、左室收缩指数、T值(左室松弛时间常数)无明显改变,左室舒张末期容积(LVEDV)、左室质量指数(LVWI)、左室后壁厚度(PWT)及中层细胞体积、蛋白含量亦无明显差异;术后8周,与假手术组比较,缩窄组±dp/dtmax、左室收缩指数及LVEDV无明显改变,LVEDP和T值明显升高,LVWI、PWT及中层细胞体积、蛋白含量显著增加.结论 腹主动脉缩窄2周,兔左心室收缩功能正常,此时并无心肌肥大,缩窄8周时左室收缩功能正常而舒张功能明显受损,且左心室显著肥厚.     

腹主动脉缩窄型高血压大鼠心肌肌浆网钙泵活力的测定

目的:观察腹主动脉缩窄型高血压大鼠心肌肌浆网钙泵活力。方法:20只雄性SD大鼠随机分为2组(每组10只):假手术组和腹主动脉缩窄高血压组。鼠尾容积法测定术前1周和术后2周及4周的血压变化。4周后处死大鼠,测定大鼠心脏重量、左室重量和左室重量指数;无机磷酸根法测定心肌肌浆网钙泵活力,双波长荧光分光光度计检测心肌细胞内钙离子浓度。结果:腹主动脉缩窄型高血压组收缩压和左室重量指数明显高于假手术组(P<0.01);与假手术组比较,腹主动脉缩窄型高血压组心肌细胞内钙离子浓度明显升高(P<0.01),心肌肌浆网钙泵活力显著降低(P<0.01)。结论:心肌肌浆网钙泵活力下降、心肌细胞钙离子浓度升高可能参与了缩窄升主动脉引起压力超负荷所致大鼠的心肌肥厚。     

芒果苷联合卸负荷改善压力超负荷大鼠心室肥厚

目的 通过卸负荷及药物干预相结合建立大鼠胸骨上小切口缩窄及松解模型,探讨芒果苷对大鼠压力超负荷后卸负荷的心室肥厚转归的影响.方法 选用5周龄、体质量150 ～180 g雄性SD大鼠48只,行非人工通气下胸骨上小切口升主动脉缩窄术致大鼠左心室肥厚,利用单一去缩窄以及去缩窄联合应用芒果苷干预方法,将所有存活动物随机分为假手术组、超负荷组(升主动脉缩窄6周)、卸负荷组(升主动脉缩窄术后6周后松解4周)以及芒果苷组[缩窄术后6周后松解,松解术后以芒果苷干预4周,20 mg/(kg·d).i.g],通过心肌大体标本、动物超声心动图,病理学染色比较大鼠在此过程中的心脏形态、质量,左室壁厚度及心肌病理学改变.结果 与假手术组相比,超负荷组心肌左室后壁收缩期厚度(4.25 ±0.43) mm、舒张期厚度(2.89±0.42)mm及室间隔收缩期厚度(3.92±0.71)mm、舒张期厚度(2.59±0.49)mm显著增厚(P＜0.01),心脏体积增大、心脏质量体质量比(4.44±0.77) mg/g明显升高(P＜0.01)、心肌细胞排列紊乱,胞质增多,间质纤维化明显.卸负荷后左室后壁收缩期厚度(3.85 ±0.56) mm、舒张期厚度(2.47±0.52) mm及室间隔收缩期厚度(3.81±0.53)mm、舒张期厚度(2.51±0.54) mm有一定程度的改善,但不明显.心脏体积减小、心脏质量体质量比(3.03±0.18)mg/g降低(P＜0.01)、心肌细胞体积缩小但排列紊乱,间质纤维化程度无明显减轻.芒果苷联合卸负荷干预后较单一卸负荷组左室后壁收缩期厚度(2.80±0.37)mm、舒张期厚度(1.94±0.27)mm,室间隔收缩期厚度(2.90±0.51)mm、舒张期厚度(1.89±0.38) mm及心脏质量体质量比(2.32±0.33) mg/g改善明显(P＜0.01),心脏体积进一步减小,心肌细胞体积缩小且排列规则,间质纤维化程度有一定改善.结论 芒果苷联合卸负荷可显著改善超负荷大鼠心室肥厚.     

CaMK Ⅱ途径在慢性心衰模型触发性心律失常产生中的作用

目的研究异丙肾上腺素和高频率刺激对心衰心肌细胞晚发后除极(DADs)产生的影响以及钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)途径在DADs产生中的作用。方法制备家兔慢性心衰模型,酶解法分离心室肌细胞,将细胞分为正常对照组(Ctl组)、正常对照+异丙肾上腺素干预组(Ctl+ISO组)、慢性心衰组(CHF组)、慢性心衰+异丙肾上腺素干预组(CHF+ISO组)、慢性心衰+异丙肾上腺素干预+KN93干预组(KN93组)。应用全细胞膜片钳技术记录动作电位(AP),采用含1μmol/L异丙肾上腺素的正钙蒂罗德液灌流心室肌细胞,在1～2Hz电刺激下,诱发心肌细胞产生DADs。在此基础上用KN93(1μmol/L)灌流心衰心肌细胞,观察CaMKⅡ的特异抑制剂KN93对DADs发生率、DADs的幅值、联律间期和发生个数的影响。结果灌流正钙蒂罗德液,并在1Hz电刺激下,Ctl组、Ctl+ISO组、CHF组、CHF+ISO组的DADs发生率分别为15.0%(3/20)、45.0%(9/20)、26.7%(12/45)、92.3%(36/39)。以含1μmol/L异丙肾上腺素和1μmol/L KN93的蒂罗德液灌流心衰心肌细胞,在1Hz电刺激下,KN93组的DADs诱发率为50%(7/14);再给予2Hz的刺激,记录到DADs的幅值为(1.82±0.78)mV、联律间期为(524.62±390.91)ms、个数为(2.42±0.90)。结论异丙肾上腺素和高频率刺激均可诱发心衰心肌细胞DADs的产生;模型应激状态下,KN93可以抑制慢性心衰心肌细胞DADs,CaMKⅡ信号转导途径可能是慢性心衰触发性心律失常产生的重要途径。     

不同用途的心室肌细胞的分离

目的 :建立适合于不同用途的心室肌细胞的酶解分离方法。方法 :恒流 Langendorff灌流 ,I型胶原酶酶解分离 ,应用膜片箝技术记录离子电流、双波长显微荧光光度术检测细胞内游离钙离子浓度及视频跟踪系统测定心肌单细胞收缩。结果 :采用不同分离技术参数获得的心肌细胞能满足上述三种实验条件下的要求。酶解分离的单个心室肌细胞静息电位为 (- 74 .0 6± 4 .5 4 ) m V,记录到心室肌细胞典型的钾、钠、钙离子电流和稳定的心室肌细胞内游离钙比值 ,心室肌单细胞收缩特性稳定。结论 :通过调整分离技术参数获得的心室肌细胞性能稳定 ,具有正常的电 -机械生理特性和耐钙性。     

异丙基肾上腺素心力衰竭大鼠醛固酮的改变

目的建立异丙基肾上腺素诱导SD大鼠充血性心力衰竭模型,观察血清醛固酮的变化。方法用ISO（170mg／kg）对SD大鼠皮下注射2次,建立大鼠充血性心力衰竭模型,在造模后18周进行血流动力学检测左室舒张末压力、左室内压峰值、左心室压力上升／下降最大速率及心率,取血检测醛固酮,并取心肌观察病理形态学特征。结果与正常对照组相比,模型组大鼠心率及左室舒张末压力明显增加（P〈0.01）,左室内压峰值、左心室压力上升／下降最大速率明显下降（P〈0．01）,左心室重量指数明显增加（P〈0．01）,醛固酮显著升高（P〈0．01）。光学显微镜结果显示,异丙基肾上腺素组大鼠心肌细胞肥大,部分心肌细胞有嗜酸变性和／或坏死,心肌间质结缔组织增生。结论应用大剂量异丙基肾上腺素诱导大鼠充血性心力衰竭模型,该作用可能与血浆ALD升高有关。     

白细胞介素-2参与缺氧/复氧引起的心肌功能损害

目的 :观察在缺氧 /复氧过程中白细胞介素 - 2 (IL- 2 )对心肌的影响及其可能机制。方法 :采用放射免疫法检测心肌组织中 IL- 2的含量 ;用视频跟踪系统和细胞内双波长钙荧光系统检测心肌细胞收缩和细胞内钙的变化。结果 :在缺血再灌注心肌组织中 IL- 2明显增多 [(14 .34± 5 .99vs2 2 .2 5± 3.6 8) ng/ g心肌组织 ]。在缺氧期间加 IL-2 (2 0 0 U/ ml) ,复氧期间心肌收缩和细胞内钙各参数回复的程度与单纯复氧的细胞相比均降低。IL- 2灌流后心肌线粒体丙二醛的含量在缺氧 /复氧后明显高于对照组 [(7.75± 0 .4 1vs6 .81± 0 .5 3) nmol/ mg蛋白 ]。结论 :IL- 2参与缺氧 /复氧引起的心肌功能损害 ,其机制可能与 IL- 2加重心肌线粒体脂质过氧化有关。     

多普勒组织成像对慢性心力衰竭左室舒缩功能的评价作用

目的：探讨脉冲多普勒组织成像（PW-DTI）技术在评价慢性心力衰竭（CHF）左室舒缩功能方面的应用。方法:应用PW-DTI技术测量35例CHF患者和25例正常对照者二尖瓣环运动速度（MAV）并与常规超声心功能指标进行对照分析。结果：CHF患者二尖瓣环收缩期、舒张早期和舒张晚期峰值速度（分别为Sa，Ea，Aa）及舒张早、晚期峰值速度比值（Ea/Aa）低于正常人（P<0.01）。 Sa与左室射血分数（LVEF）显著正相关（r=0.890，P<0.001）。 CHF组舒张功能受损程度不同各亚组的Ea（P<0.001）、充盈假性正常和限制性充盈异常亚组的Aa(P<0.001)及松弛功能减低和充盈假性正常亚组的Ea/Aa（P<0.001；P<0.01）低于正常组。结论 :PW-DTI技术测量MAV可以较好地评价CHF左室舒缩功能。     

强心合剂对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响

研究强心合剂(主药：鹿角、淫羊藿等)治疗充血性心力衰竭(CHF)的作用机制。建立腹主动脉缩窄所致后负荷过重的大鼠CHF模型．并予强心合剂治疗。5周后．分别用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数．RT-PCR法检测心肌细胞凋亡基因BCl-2和Bax mRNA的表达。同时测量CHF大鼠左室重量指数(LVMI)，并分别以地高辛、卡托普利作为对照组进行比较。结果：本方不仅降低LVMI，还能促进Bcl-2mRNA表达．抑制Bax mRNA表达。明显抑制心肌细胞凋亡。其疗效与卡托普利相当。结论：强心合剂可能通过调控凋亡基因而抑制心肌细胞凋亡．从而延缓或部分逆转心脏重构的发生、发展。     

心先安对心功能不全的疗效观察

目的：观察大剂量,短疗程心先安（ＭｃＡＭＰ）治疗慢性心功能不全（ＣＨＦ）疗效。方法：应用大剂量ＭｃＡＭＰ治疗５２例ＣＨＦ患者,前后应用无创心功能检测进行对比分析。结果：用药后心脏除左室收缩功能、心泵功能改善,血管外周阻力（ＴＰＲ）降低外（Ｐ〈０．００１）,左室舒张末压降低,心舒张功能亦好转（Ｐ〈０．０５）,临床心功能改善,总 率６７．３１％。结论：大剂量心先安是治疗ＣＨＦ的有效药物之一。     

异丙肾上腺素诱导慢性心力衰竭大鼠模型的建立

目的:建立异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)诱导SD大鼠慢性心力衰竭(CHF)模型,并对其进行评估。方法:用ISO (170 mg/kg)给SD大鼠皮下注射2次,建立大鼠CHF模型,分别在用药后3、6、18周进行心脏超声检测左室舒张末内径(LVEDD)、左室收缩末内径(LVESD)、左室射血分数(LVEF)、缩短分数(FS),18周取心肌观察病理形态学特征。结果:随着时间的延长,大鼠CHF程度逐渐加重,病死率增加;随着LVEF和FS下降,LVEDD、LVESD扩大(P<0.01),左室重量指数明显增加(P<0.01)。结论:大剂量ISO诱导建立大鼠CHF模型的方法简便、可靠;超声心动图检测对于大鼠CHF模型的建立与评估具有指导意义。     

纳洛酮减弱白细胞介素-2对大鼠心肌的抑制作用

目的 :研究白细胞介素 - 2 (IL - 2 )的心脏作用并探讨其相关机制。方法 :采用视频跟踪系统测定大鼠单个心室肌细胞的收缩 ;细胞内双波长钙荧光系统检测细胞内游离钙离子浓度 ;应用 Langendorff灌流装置 ,观察 IL - 2对完整心脏收缩力学的影响。结果 :与对照相比 ,IL - 2 (5、5 0 U/ml)显著抑制单个心室肌细胞的收缩幅度 [(74 .95±4 .79vs98.0 9± 5 .0 2 ) % ,(6 4.30± 5 .2 4 vs97.38± 4 .0 5 ) % ]、最大收缩速度 [(70 .2 3± 4 .85 vs98.0 9± 5 .4 6 ) % ,(6 1.15± 5 .2 0 vs97.38± 6 .85 ) % ]、最大舒张速度 [(71.2 2± 4 .79vs98.32± 6 .0 8) % ,(6 8.16± 5 .2 4 vs97.5 5±5 .0 0 ) % ]和舒张末细胞长度 [(88.2 8± 5 .84 vs97.95± 5 .5 2 ) % ,(84 .18± 6 .5 2 vs98.94± 6 .76 ) % ];IL- 2 (5、5 0 U/ml)显著降低电刺激诱导的心肌细胞内钙瞬变幅度 [(74 .94± 4 .90 vs98.0 9± 3.74 ) % ,(71.0 0± 5 .2 8vs97.38±5 .5 2 ) % ],使舒张末钙水平升高 [(113.91± 5 .93vs10 0 .10± 3.0 2 ) % ,(119.0 9± 7.12 vs10 0 .5 2± 6 .0 0 ) % ]。阿片受体阻断剂纳洛酮 (10 nmol/L)可阻断 IL- 2对心肌细胞收缩和细胞内钙的作用。在离体心脏 ,与对照相比 ,IL- 2 (5 0U/ml)可显著降低左心室