携反义基质金属蛋白酶-2的重组腺病毒对肝癌生长的影响

目的探讨携带反义二型基质金属蛋白酶（MMP2）基因的重组腺病毒（Ad-MMP2^AS）对人肝癌细胞株（Bel-7402）体外侵袭性和人肝癌动物模型生长的抑制作用。方法用已构建的Ad-MMP2^AS感染人肝癌细胞株（Bel-7402）,用侵袭小室模型检测Ad-MMP2^AS对Bel-7402细胞降解人工基底膜的抑制作用;用Western Blot和明胶酶谱检测Ad-MMP2^AS对Bel-7402细胞分泌MMP2的影响;用感染了Ad-MMP2^AS的Bel-7402细胞接种于裸鼠皮下,使其在裸鼠体内成瘤,以观察其成瘤能力;用Ad-MMP2^AS瘤内注射,以观察它对肝癌生长的抑制作用。结果Ad-MMP2^AS感染的Bel-7402细胞分泌MMP2被抑制、穿过人工基底膜Matrigel的Bel-7402细胞数下降52％、感染Ad-MMP2^AS的Bel-7402细胞的成瘤量下降4．3倍,Ad-MMP2^AS瘤内注射后瘤体生长减少63％。结论Ad-MMP2^AS能明显抑制肝癌的生长,对肝癌有治疗潜力。     

携带基质金属蛋白酶组织抑制因子的重组腺病毒对宫颈癌细胞生物学效应的影响

目的探讨携带基质金属蛋白酶组织抑制因子（TIMPs）基因的重组腺病毒（Ad-TIMP-3）对宫颈癌细胞生物学效应的影响。方法将Ad-TIMP-3感染CaSKi和HeLa细胞,采用RT-PCR方法检测感染细胞内TIMP-3mRNA的表达,Western blot方法检测感染细胞TIMP-3和p53的表达。分别采用4＇6-二脒-2-苯基吲哚（DAPI）染色、MTT法、细胞黏附性及侵袭性实验检测Ad-TIMP-3对细胞凋亡、存活率、黏附性和侵袭能力的影响。结果感染Ad-TIMP-3的CaSKi细胞中TIMP-3mRNA及蛋白质的表达量均呈时间依赖性增加。TIMP-3表达上调可诱导CaSKi和HeLa细胞表达p53。Ad-TIMP-3体外感染可显著促进细胞凋亡、降低细胞的存活率（P〈0.001）,并存在旁观者效应;使细胞的侵袭能力及黏附能力下降（P〈0.01）。感染Ad-TIMP-3的CaSKi和HeLa细胞的存活率显著低于感染Ad-p53的细胞（P〈0.05,P〈0.01）。结论体外感染Ad-TIMP-3抑制肿瘤效果显著,为体内宫颈癌基因治疗研究奠定了基础。     

肝癌组织中TIMP-1和TIMP-2的表达意义

目的 了解TIMP－1和TIMP－2在肝癌组织中的表达状态,探讨TIMP－1和TIMP－2在肝癌组织生长、侵润及转移中所起的作用。方法 以抗TIMP－1和TIMP－2单克隆抗体（mAb)为试剂,采用免疫组织化学法检测原发性肝癌、肝高分化腺癌的肝组织中TIMP－1和TIMP－2的表达,并与10例正常肝组织做对照。结果 10例原发性肝癌患的肝组织中TIMP－1和TIMP－2蛋白表达的阳性率为100％,在癌组织及非癌组织中均有表达。癌组织中的TIMP－1和TIMP－2蛋白表达的强度比较为6例高于、4例低于周围的非癌组织（慢性肝炎及肝硬化组织）,癌组织中TIMP－1和TIMP－2蛋白的表达呈散在性分布,但TIMP－1比TIMP－2表达强。9例肝高分化腺癌的腺癌组织中无TIMP－1和TIMP－2相关抗原的表达,但癌周组织的肝细胞有3例TIMP－1和TIMP－2蛋白表达为阳性。10例正常肝组织中TIMP－1和TIMP－2蛋白表达均为阴性。结论 TIMP－1和TIMP－2存在于原发性肝癌的癌组织中,其表达的部位与强度可能与癌的生长、浸润及转移有关。     

携带基质金属蛋白酶组织抑制因子的重组腺病毒对人乳头瘤病毒阳性子宫颈癌细胞放疗敏感性的影响

目的 研究携带基质金属蛋白酶组织抑制因子-3(TIMP-3)的重组腺病毒(Ad-TIMP- 3)对人乳头瘤病毒(HPV)阳性子宫颈癌细胞放疗敏感性的影响.方法 采用Ad-TIMP-3感染HeLa-Luc和CaSki细胞,MTT法检测Ad-TIMP-3对HeLa-Luc和CaSki细胞增殖的影响,平板克隆形成实验检测Ad-TIMP-3与X线联合应用对细胞生长能力的影响.将经过不同处理的HeLa-Luc细胞接种于裸鼠腋下,分别观察正常对照组、单独病毒组、单独放射组和联合应用组裸鼠体内肿瘤的生长情况,绘制生长曲线.结果 Ad-TIMP-3能显著抑制HeLa-Luc和CaSki细胞增殖,呈现剂量效应关系.Ad-TIMP-3与X线联合应用可显著减少HeLa-Luc和CaSki细胞平板克隆形成数(P均<0.05).单独病毒组、单独放射组和联合应用组裸鼠移植瘤重量分别为(0.216±0.098)、(0.276±0.073)和(0.044±0.043)g,均明显低于正常对照组的(0.534±0.218)g(P均<0.05),联合应用组明显低于单独病毒组和单独放射组(P均<0.05).单独病毒组、单独放射组和联合应用组的抑瘤率分别为59.60%、48.30%和91.80%.结论 Ad-TIMP-3能抑制子宫颈癌细胞增殖,与X线联合应用可显著提高子宫颈癌细胞对放射治疗的敏感性,抑制子宫颈癌细胞体内致瘤能力.     

MMP-2,MMP-9,TIMP-1和TIMP-2在肝癌中原位表达

目的 :探讨肝癌中基质金属蛋白酶MMP 2 ,MMP 9和组织金属蛋白酶抑制剂TIMP 1 ,TIMP 2的mRNA和蛋白质表达与临床病理特征和预后的关系。方法 :在 5 6例有完整随访资料的原发性肝癌标本中原位杂交检测MMP 2mRNA ,TIMP 2mRNA ;免疫组化检测MMP 2 ,MMP 9,TIMP 1 ,TIMP 2蛋白质的表达。结果 :MMP 2mRNA ,TIMP 2mRNA ,MMP 2 ,MMP 9,TIMP 1和TIMP 2蛋白质在肝癌中的阳性表达分别为 4 8(85 .7% )例 ,35 (6 2 .5 % )例 ,4 4 (78.6 % )例 ,4 1 (73.2 % )例 ,30 (5 3.6 % )例 ,38(6 8% )例。MMP 2mRNA ,MMP 2 ,MMP 9在肝癌中呈高表达 ,而TIMP 1蛋白呈低表达 (P <0 .0 1 ,P <0 .0 5 )。TIMP 2mRNA与TIMP 2蛋白 ;MMP 2mRNA与MMP 2蛋白在肝癌中的表达呈正相关 (分别为r=0 .31 6 ,P <0 .0 5 ;r=0 .35 6 ,P <0 .0 5 )。MMP 2mRNA的表达与肝癌肿瘤大小和临床分期呈正相关 (分别为r =0 .4 4 1 ,P <0 .0 1 ;r=0 .340 ,P <0 .0 5 ) ;MMP 9蛋白表达阳性的肝癌患者术后生存时间缩短 (P <0 .0 5 )。Kaplan Meier单因素分析发现MMP 2 ,MMP 9表达阳性患者的预后差 (P <0 .0 1 ,P <0 .0 5 )。多因素Cox回归分析显示MMP 2 ,MMP 9的蛋白表达可作为肝癌估测预后的指标。结论 :基质金属蛋白酶MMP 2 ,MMP 9的过表达以及其与TIMP 2 ,MMP     

TIMP-1siRNA对肝纤维化大鼠TIMP-1及胶原表达的影响

目的:探讨基质金属蛋白酶抑制因子-1（tissue inhibitor of metalloproteinases-1,TIMP-1）的siRNA经体内转染后对CCl4诱导的肝纤维化大鼠TIMP-1及胶原表达的影响。方法:将32只雄性SD（Sprague Dawley）大鼠随机分为4组:正常组、模型组、TIMP-1 siRNA处理组和TIMP-1 siRNA阴性对照组。CCl4皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型,共12周。HE染色验证肝纤维化程度,免疫组织化学染色检测TIMP-1和Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;Western blot检测TIMP-1的蛋白表达,qRT-PCR法检测TIMP-1和Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA表达。结果:病理组织学显示相较模型组、阴性对照组,肝组织肝纤维化程度在TIMP-1 siRNA处理组中明显减轻。TIMP-1和Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达量也明显减少（P=0.000）。结论:TIMP-1 siRNA能抑制或阻断TIMP-1表达,进而促进以Ⅰ、Ⅲ型胶原为主的细胞外基质的降解,肝纤维化程度得到改善,对CCl₄诱导的大鼠肝纤维化有一定的防治效果。     

人TIMP-2蛋白在肝癌细胞迁移与侵袭中的作用

目的 通过原核表达获取人TIMP-2蛋白,探讨TIMP-2在肝癌细胞迁移及侵袭中的作用。 方法 以SMMC-7721肝癌细胞总RNA为模板,用RT-PCR技术扩增出人TIMP-2基因cDNA,通过基因重组技术构建原核表达载体pGEX-TIMP-2并在大肠杆菌Origami(DE3)中诱导表达人TIMP-2重组蛋白。采用亲和层析法纯化表达产物,并用Western blotting鉴定;用RNAi技术和添加外源蛋白方法分析TIMP-2蛋白对肝癌细胞迁移和侵袭的作用;荧光定量PCR 、Western blotting检测siRNA-TIMP-2转染细胞后肝癌细胞内源性TIMP-2的mRNA及蛋白表达水平。 结果 外源添加的TIMP-2 蛋白抑制肝癌细胞迁移及侵袭的能力,而RNAi技术能抑制内源的TIMP-2蛋白增强肝癌细胞迁移及侵袭的能力;肝星状细胞的条件培养液能够促进肝癌细胞迁移和侵袭,而这种作用能够被TIMP-2蛋白抑制。 结论 肝癌微环境中的TIMP-2蛋白水平与肝癌细胞的迁移和浸润密切相关。     

强脉冲光对人皮肤MMP-1、MMP-8及TIMP-1表达的影响

目的观察强脉冲光照射后人皮肤中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)及基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)的表达,探讨强脉冲光嫩肤的分子生物学机制。方法选择皮肤类型为Ⅲ～Ⅳ型志愿者,年龄大于20岁。制定个体化治疗方案,选择恰当的治疗参数,取560 nm/590 nm的滤光片,单/双/三脉冲的不同脉冲方式,脉宽为2.0～4.0 ms,脉冲延迟25～40 ms,能量密度16～20 J/cm2,治疗间隔3周,治疗次数3～4次,于治疗后2～3周在照射部位及非照射部位各切取1块皮肤样本,约5 mm×5 mm×5 mm大小,免疫组化染色,光镜下观察。结果照射后皮肤MMP-1、MMP-8及TIMP-1均有阳性表达,3周时的MMP-1、MMP-8表达弱于2周时的表达,而3周时的TIMP-1表达与2周时相比差异无统计学意义。非照射部位阴性染色。结论强脉冲光可增强人皮肤中MMP-1、MMP-8、TIMP-1的表达,后3者对皮肤重塑起一定的作用。     

蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂重组腺病毒对人肝癌细胞MHCC97H侵袭转移的影响

目的 构建携带蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂（sv-cystatin）基因的重组腺病毒载体（Ad/sv-cystatin）,研究其对人肝癌细胞MHCC97H在体内、外侵袭转移的影响。 方法 构建携带sv-cystatin的重组腺病毒,体外感染MHCC97H细胞,采用CCK-8法检测细胞生长,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力,通过裸鼠皮下肝癌细胞肺转移模型观察Ad/sv-cystatin瘤内注射对裸鼠的治疗作用。 结果 体外实验证实Ad/sv-cystatin能够感染MHCC97H细胞。与对照组及空载体组相比,Ad/sv-cystatin对MHCC97H细胞体外生长、侵袭和迁移均具有明显的抑制作用,瘤内注射Ad/sv-cystatin可以显著降低MHCC97H细胞的肺转移。 结论 重组腺病毒Ad/sv-cystatin具有抑制人肝癌细胞MHCC97H体内外侵袭转移的作用,在肝癌基因治疗方面具有开发应用潜能。     

MMP-2及其抑制剂TIMP-2与食管癌的分化及侵袭的关系

目的探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)及其抑制剂金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP-2)与食管癌的分化及侵袭的关系。方法随机抽取2010年1月至2014年1月溧阳市人民医院收治的食管癌患者52例,观察所有病理切片检验结果,比较MMP-2及其抑制剂TIMP-2在不同组织部位的表达。结果 MMP-2在食管癌病灶组织中表达明显阳性的有30例,弱阳性的有18例,与食管正常组织相比,差异有统计学意义(P<0.05);TIMP-2在食管癌病灶组织中表达明显阳性的有31例,弱阳性的有17例,与食管正常组织相比,差异有统计学意义(P<0.05)。病理切片结果显示,有35例(67.3%)受检者食管部位的组织细胞MMP-2检验结果为阴性(-),另有17例(32.7%)检验结果为弱阳性(+)表达,与TIMP-2的表达结果具有一致性。结论 MMP-2及其抑制剂TIMP-2在体内的平衡状态与食管癌的分化及侵袭具有密切的关系,可以作为评估病情的重要指标。     

重组腺病毒Ad-CD/TK对人肝癌细胞的作用

目的:通过构建含CD/TK双自杀基因的重组腺病毒,探讨治疗肝细胞癌的途径.方法:目的基因CD/TK,自真核载体pCEA-CD/TK中切出,亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,构建成转移质粒pAdtrack-CMV-CD/TK,经PmeⅠ酶切后与pAdeasy-1质粒混匀共转化细菌BJ5183,挑选克隆pAd-CD/TK,经PacⅠ酶切后转染293细胞,PCR鉴定后,在人肝癌细胞中测定其感染效率并观察其体外对人肝癌细胞的作用.结果:pAdtrack-CMV-CD/TK和pAd-CD/TK经酶切鉴定正确,pAd-CD/TK转染293细胞,制备腺病毒后,发现其对人肝癌细胞有较高的感染效率,给予氟胞嘧啶后,发现被感染细胞能够被杀死,并具有很高的旁观者效应.结论:构建的含CD/TK双自杀基因的重组腺病毒对人肝癌细胞有较高的感染效率,在体外观察到对人肝癌细胞有较好的杀灭作用.     

重组人生长激素对肝癌细胞MHCC-97H的作用及机制

目的探讨重组人生长激素（rhGH）对肝癌细胞MHCC-97H的作用及机制。方法以无血清培养液诱导肝癌细胞MHCC-97H凋亡,再以浓度为0μg/L（GH0组）、5μg/L（GH5组）、25μg/L（GH25组）、50μg/L（GH50组）、100μg/L（GH100组）和500μg/L（GH500组）的rhGH完全培养液进行培养,MTT法观察MHCC-97H细胞生长情况,流式细胞技术检测细胞凋亡率、细胞周期和细胞增殖指数,RT-PCR和Western blotting法分别检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2 mRNA和蛋白表达情况。结果与GH0组比较,GH25组、GH50组、GH100组和GH500组MHCC-97H细胞增殖明显,S期细胞百分比和细胞增殖指数显著增加（P〈0.05）;GH25组、GH50组和GH100组细胞凋亡率显著降低（P〈0.05）,Bax mRNA和蛋白表达显著降低（P〈0.05）,Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著增加（P〈0.05）。结论 rhGH体外显著促进肝癌细胞MHCC-97H增殖,并通过调节凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达来抑制无血清培养液诱导的细胞凋亡。     

Inhibitory Effect of Pulmonary Carcinoma by Adenovirus-Mediated CD/UPRT Gene

The cell killing effects and bystander effects of double suicide gene on pulmonary carcinoma cells were explored. Lung adenocarcinoma cells (A549) were transfected with different liters of adenovirus vector and followed with different concentrations of 5-FC after a recombinant adenovirus vector carrying CD/UPRT gene (Ad-CD/UPRT) was constructed. The cell viability was measured by MTT assay 4 days later. The cell viability was dropped to 30.57 %-8.62 % after 10 MOI of Ad-CD/UPRT transfected and 5-FC (10-1000μg/mL) administration. Furthermore, Ad-CD/UPRT-infected A549 cells showed a profound neighbor cell killing effect in the same methods. These results suggested that Ad-CD/UPRT/5-FC system can effectively suppress growth of lung adenocarcinoma cells, which may provide a novel and powerful candidate for lung cancer gene therapy strategies.     

TIMP-3对前列腺癌PC-3M细胞株增殖和侵袭能力的影响

目的：观察TIMP-3对前列腺癌细胞PC-3M增殖和侵袭能力的影响。 方法：实验分为前列腺癌细胞PC-3M组、转染空质粒PCDNA3.1的PCDNA-PC-3M组和转染 TIMP-3的PCDNA-TIMP-3-PC-3M组。采用黏附实验、MTT比色法对比观察稳定转染的PCDN A-TIMP-3-PC-3M与PCDNA-PC-3M的黏附能力和增殖活力。采用单层细胞侵袭和Boyden 小室侵袭实验,对比观察TIMP-3对PC-3M细胞体外侵袭能力的影响。 结果：稳定转染TIMP-3的PC-3M细胞的黏附率和细胞增殖速度明显低于空质粒组和未 转染 组(P<0.05),稳定转染TIMP-3的PC-3M细胞的侵袭指数明显低于空质粒组和未转染 组（P<0.05）,空质粒组和未转染组间细胞增殖速度和细胞侵袭指数比较差异无显著 性（P>0.05）。 结论：TIMP-3对前列腺癌PC-3M细胞增殖和侵袭能力具有抑制作用。     

Gene therapy with antisense c-myc adenovirus for human gastric carcino- ma cell line in vitro and for implanted carcinoma in nude mice

Sufficient infonnation has been accumulated to suggest that achvation and alnplilication of oncogenes and inachvation and fUnchonal failme of tUInor suPPressor genesare responsible for the inihation and deVelopment of human malignant disease lhrough a mulhstep PIDCess['].Gastric careinoma, one Of the most common inalig~t tUmors, can be successop ~ with sopry inthe early stage, but adVanced cases are usually refectoryto chemotherapy or ladiotherapy. COnSeopenily, genetherapy becomes an at…     

腺病毒介导的p53对胆管癌细胞生长的抑制作用

目的 研究Ｐ５３基因对胆癌细胞的作用。方法 将重组体腺病毒Ｐ５３转移到人胆管癌细胞ＱＢＣ９３９,用ＲＴ－ＰＣＲ、克隆形成实验、流式细胞仪、ＤＮＡ片段化分析等方法对Ｐ５３基因的表达、细胞的生长抑制及机制进行分析。结果 用Ａｄ－ＬａｃＺ进行重组体腺病毒转导致率的检测,发现当ＭＯＩ为１００以上时,重组体腺病毒可使９０％以上的培养的人胆管癌ＱＢＣ９３９,细胞被传导,用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测,在胆管癌ＱＢＣ９     

腺病毒介导的p16对胆管癌细胞的生长抑制作用

目的 研究p16基因对胆管癌细胞的作用。方法 将重组体腺病毒p16转移到人胆管癌细胞QBC939,对p16基因的表达、细胞的生长抑制及机制进行分析。结果 用Ad-LacZ进行重组体腺病毒转导效率的检测,发现当MOI为100以上时,重组体朱病毒可使90%以上的培养的人胆管癌QBC939细胞被转导,用RT-PCR方法检测,在胆管癌QTBC939细胞系中p16呈低表达,重组体腺病毒能介导外源基因p16在胆管癌QBC939细胞系中高效表达,重组体朱病毒介导的p16在QBC939细胞中表达,能抑制QBC939细胞的生长和集落形成。流式细胞计数和细胞DNALadder,证实p16能诱导QBC939细胞发生凋亡并导致其发生G1期阻滞。结论 p16基因通过诱导肿瘤细胞凋亡及G1期阻滞在肿瘤的基因治疗方面发挥作用。     

固相致敏红细胞吸附技术快速检测肝硬化患者血清中TIMP-1

目的 建立一种改良固相致敏红吸附技术（ＳＰＡＳＥ）用于快速检测肝硬化患血清中ＴＩＭＰ－１。方法 用ＴＩＭＰ－１单克隆抗体包被微量血凝板，加热冲洗后加入待栓血清标本，最后加入单克隆抗体致敏红细胞，应用致敏红栓血清标本，最后加入单克隆抗体致敏红细胞。应用致敏红细胞作用批示系统，观察红细胞吸附状况来判定结果。结果 ＳＰＡＳＥ法全过程仅需要２．５￣３ｈ，４０８例肝病患血清检测ＴＩＭＰ－１结果为急性肝炎     

腺病毒介导的P120ctn基因对SMMC-7721细胞侵袭能力的影响

目的 以腺病毒介导连环蛋白P120(P120ctn)基因,转染人肝癌SMMC-7721细胞,观察其对SMMC-7721细胞侵袭能力的影响.方法 用腺病毒介导的P120ctn基因转染SMMC-7721细胞,用逆转录-PCR(RT-PCR)和Western Blot检测细胞中P120ctn表达水平,并测定转染后细胞侵袭能力的变化.结果 腺病毒介导的P120ctn转染SMMC-7721后,P120ctn的表达水平显著上升;体外侵袭实验显示转染后SMMC-7721的侵袭能力明显下降.结论 腺病毒介导的P120ctn基因能够在SMMC-7721细胞中有效表达,并显著抑制肝癌细胞的侵袭能力.