FOXC2对人食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及相关机制研究

目的: 探讨叉头框（FOX）C2对食管癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及机制。方法: 选择人食管癌细胞CaES-17,Eca-109,TE13及人食管上皮细胞（HEEC）,选择FOXC2较高表达的食管癌细胞（CaES-17）作为转染细胞,设siRNA FOXC2组、pcDNA-FOXC2组及未转染组和转染阴性对照组。采用qRT-PCR检测细胞FOXC2表达;CCK-8检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;WB检测MMP2、MMP9、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail、Wnt3a、β-catenin、p-β-catenin的蛋白表达水平。结果: 食管癌细胞FOXC2蛋白表达明显高于食管上皮细胞;与对照组相比,上调FOXC2表达可使MMP9、Snail表达明显升高,下调FOXC2表达可抑制食管癌细胞增殖,并抑制食管癌细胞的迁移和侵袭能力及降低Wnt3a蛋白表达。结论: 下调FOXC2抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,作用机制可能与调控MMP-9、Snail水平及Wnt/β-catenin通路有关。     

NKX6.3对食管癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响及作用机制

目的 探讨NKX6.3对食管癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响及可能的作用机制。方法 人食管癌EC9706细胞分别转染NKX6.3（NKX6.3组）和空白质粒（miR-NC组）,设空白对照组（Control组）。CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞内活性氧、线粒体膜电位及细胞凋亡情况,Transwell 法检测细胞侵袭能力,Western blot检测增殖相关蛋白Ki67、侵袭相关蛋白（Vimentin、E-cadherin及N-cadherin）,凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax及Caspase-3）的表达。结果 Control组、miR-NC组和NKX6.3组食管癌EC9706细胞中NKX6.3表达、细胞增殖能力、细胞内活性氧、线粒体膜电位、细胞凋亡及侵袭能力,以及Ki67、Vimentin、E-cadherin、N-cadherin、Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达差异均有统计学意义（P＜0.01）。其中,NKX6.3组NKX6.3表达量、细胞内活性氧,细胞凋亡率,Vimentin、E-cadherin、Bax及Caspase-3蛋白表达水平较miR-NC组升高;而线粒体膜电位、细胞增殖率、细胞侵袭数目、N-cadherin及Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.01）。结论 NKX6.3可抑制食管癌细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡,该作用可能通过调控食管癌细胞中的增殖凋亡相关蛋白表达及活性氧水平实现。     

长链非编码RNA BDNF-AS在乳腺癌中的表达及作用

  目的  探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）-AS在乳腺癌组织和细胞系中的表达及其对乳腺癌癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。  方法  收集2016年1月至2018年12月88例于兰州大学第一医院行乳腺癌手术切除患者的组织样本。RT-qPCR检测癌组织、癌旁组织、乳腺癌细胞系（MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468和SK-BR-3）及正常乳腺细胞HBL-100中lncRNA BDNF-AS的表达并分析其与临床特征的相关性。MDA-MB-231细胞经pcDNA3.1质粒过表达lncRNA BDNF-AS,使用MTT法检测细胞活性,EdU实验检测细胞增殖能力,比色法检测Caspase-3活性;Western blot检测凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2）、侵袭转移相关蛋白（MMP-9、E-cadherin）和BDNF蛋白表达,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。  结果  lncRNA BDNF-AS在乳腺癌组织（P < 0.05）和乳腺癌细胞中表达显著降低（P < 0.01）。乳腺癌组织中的lncRNA BDNF-AS表达与患者TNM分期（P < 0.05）和淋巴结转移（P < 0.05）呈负相关。lncRNABDNF-AS过表达可降低MDA-MB-231细胞活性（P < 0.01）、EdU检测的阳性细胞数（P < 0.01）、Caspase-3活性（P < 0.01）,下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白表达（P < 0.01）。lncRNA BDNF-AS过表达可抑制划痕愈合和细胞侵袭（P < 0.01）,下调MMP-9蛋白和上调Ecadherin蛋白表达（P < 0.01）及下调BDNF mRNA和蛋白的表达。  结论  在乳腺癌中lncRNA BDNF-AS表达下调,BDNF-AS抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,并促进凋亡。      

EphB1通过PI3K/AKT信号通路促进食管鳞状细胞癌EC-9706细胞增殖、迁移、侵袭并抑制其凋亡

目的:研究促红细胞生成素产肝细胞受体B1(erythropoietin-producing human hepatocellular receptor B1,EphB1)对食管鳞状细胞癌EC-9706细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,并探索其可能的作用机制。方法:qRT-PCR法分析40对食管鳞状细胞癌手术患者的癌组织及邻近正常组织中EphB1表达情况,并分析其临床特征。在EC-9706细胞中分别转染si-EphB1 RNA和oe-EphB1 RNA及其阴性对照。通过qRT-PCR和蛋白免疫印迹实验检测转染效率;CCK-8实验分析EphB1对细胞活力的影响;Hoechst 33258染色和流式细胞学实验检测细胞凋亡;划痕愈合实验及Transwell侵袭实验明确细胞迁移及侵袭能力;蛋白免疫印迹实验检测EphB1蛋白、增殖相关蛋白［增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）］、凋亡相关蛋白［Bad、Bcl-2、Caspase 3 及剪切型-Caspase 3（cleaved-Caspase 3）］、侵袭转移相关蛋白［基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2）、Snail、波形蛋白(Vimentin)、N-cadherin、E-cadherin］以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白（PI3K、AKT、p-AKT）的表达水平。结果:EphB1在食管鳞状细胞癌组织及细胞系中高表达(P均＜0.05),EphB1的表达水平与食管鳞状细胞癌患者的TNM分期、有无淋巴结转移和远处转移具有显著相关性(P均＜0.05)。与对照组相比,通过细胞转染技术沉默EphB1和过表达EphB1使EC-9706细胞的增殖、迁移、侵袭能力明显降低或增强,并诱导或抑制细胞凋亡(P均＜0.05)。在蛋白水平上,si-EphB1和oe-EphB1处理EC-9706细胞48 h后,增殖相关蛋白PCNA蛋白表达水平分别显著降低或增加（P均＜0.05）,并分别增加或降低促凋亡相关蛋白Bad、cleaved-Caspase 3的表达水平（P均＜0.05）,下调或上调抗凋亡蛋白Bcl-2、Caspase 3的蛋白表达（P均＜0.05）,抑制或促进侵袭转移相关蛋白MMP-9、MMP-2、Snail、Vimentin、N-cadherin的蛋白活性,但却上调或下调 E-cadherin的表达水平（P均＜0.05）。同时,Western blotting实验结果还证实EphB1可诱导食管鳞状细胞癌EC-9706细胞中通路蛋白PI3K、p-AKT的活性增强（P均＜0.05）。结论:EphB1可能通过调控PI3K/AKT信号通路促进食管鳞状细胞癌EC-9706细胞的增殖、迁移及侵袭,并抑制其凋亡。     

小干扰RNA抑制bcl-xL表达对食管癌细胞化疗敏感性的影响

目的探讨凋亡抑制分子bcl-xL表达下调对食管癌细胞化疗敏感性的影响。方法根据人bcl-xL基因序列设计和合成3对小干扰RNA,将其转染于体外培养的人食管癌细胞株Eca-109,通过RT-PCR和Western-blotting检测bcl-xL的表达情况,筛选出对bcl-xL表达抑制作用最强的小干扰RNA,通过MTT法检测小干扰RNA转染细胞和对照细胞在不同浓度顺铂和紫杉醇作用下的细胞增殖抑制率,计算出半数抑制浓度IC50值并进行对比分析。结果食管癌细胞转染靶向bcl-xL的3种小干扰RNA后,bcl-xL mRNA和蛋白表达均显示出不同程度下调,其中siRNA1对癌细胞bcl-xL表达的抑制作用最强。siRNA1转染食管癌细胞后可使顺铂和紫杉醇对癌细胞的IC50值由转染前的（31.4±4.3）μmol/L和（35.3±6.1）μmol/L下降至转染后的（8.4±3.3）μmol/L和（15.1±4.7）μmol/L（P〈0.01）。结论小干扰RNA抑制bcl-xL表达可增强食管癌细胞对顺铂和紫杉醇化疗的敏感性。     

微小 RNA 与食管鳞状细胞癌

微小 RNA（miRNA）可通过细胞信号转导、上皮间质转化、血管生成等调控机制影响食管鳞状细胞癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和转移。特定的血清 miRNA 可作为食管鳞状细胞癌诊断、预后的新型肿瘤标志物。近来研究表明 miRNA 可提高食管鳞状细胞癌放疗敏感性甚至逆转多药耐药,具有极大的临床价值。     

Ku80基因沉默对人食管癌细胞黏附、侵袭能力的影响

 目的 利用shRNA抑制Ku80蛋白表达来研究Ku80对人食管癌细胞黏附、侵袭能力的影响。方法 用Western blot和RT-PCR方法证实RNA干扰的有效性和可行性。用细胞黏附实验、细胞侵袭实验来研究Ku80基因沉默对人食管癌细胞黏附、侵袭能力的影响。结果 干扰载体shRNA-H2,K3抑制Ku80蛋白的表达,抑制率分别为63%和50%（P<0.01）,且抑制Ku80 mRNA的含量,达84%和58%（P<0.01）。同时, 干扰载体shRNA-H2,K3抑制人食管癌细胞的黏附率分别（63.19±4.93）%和（52.87±2.67）%及抑制人食管癌细胞的侵袭能力,抑制率为69.6%和62.1% (P<0.01)。结论 Ku80在食管癌的侵袭及转移过程中起作用,Ku80基因沉默有望成为肿瘤基因治疗的一个靶点。     

siRNA干扰Mig-7基因对人胃癌MKN45细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）抑制迁移诱导基因7（Mig-7）基因表达,对人胃癌MKN45细胞侵袭和迁移的影响及可能机制。方法 化学合成靶向Mig-7基因的siRNA,脂质体法转染MKN45细胞,分别用real-time PCR和Western blot法验证其沉默效率;MTT法检测细胞的增殖情况;Transwell小室方法检测细胞侵袭及迁移能力;Western blot法检测基质金属蛋白酶2（MMP-2）和MMP-9蛋白表达。结果 化学合成siRNA转染胃癌MKN45细胞后,Mig-7的mRNA 水平下降（80±2.91）%,蛋白表达水平下降（89.1±2.67）%;沉默Mig-7基因后,各组细胞体外生长速度差异无统计学意义（P>0.05）,但侵袭和迁移能力下降,MMP-2蛋白表达水平下降,与阴性转染组和对照组相比差异有统计学意义（P=0.000）。而各组MMP-9蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论 下调人胃癌MKN45细胞中Mig-7的表达,可能通过下调MMP-2蛋白表达从而抑制细胞的侵袭和迁移能力。     

GOLPH3对食管癌细胞系增殖凋亡及放射敏感性影响研究

目的 研究GOLPH3对食管癌细胞系增殖凋亡及放射敏感性的影响。方法 以qRT-PCR和蛋白印迹法分别检测食管癌细胞系和正常食管上皮细胞GOLPH3 mRNA和蛋白水平,在OE33细胞中转染GOLPH3 siRNA,同时给予照射处理。MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞克隆实验检测放射敏感性,蛋白印迹法检测活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的Caspase-9(Cleaved Caspase-9)蛋白水平。结果 食管癌细胞中GOLPH3 mRNA和蛋白水平明显高于正常食管上皮细胞(P<0.05)。GOLPH3 siRNA可明显下调食管癌OE33细胞中GOLPH3 mRNA和蛋白水平。下调GOLPH3或者照射处理以后的食管癌细胞的增殖活性降低,细胞凋亡率升高,并且细胞中Cleaved Caspase-3、Bax、Cleaved Caspase-9蛋白水平也升高(P<0.05)。下调GOLPH3后的OE33细胞经照射处理以后,细胞增殖活性下降更多,细胞凋亡率和细胞中Cleaved Caspase-3、Bax、Cleaved Caspase-9蛋白水平升高更多(P<0.05)。下调GOLPH3后OE33细胞经照射处理后,细胞放射增敏比为1.673。结论 GOLPH3在食管癌细胞中高表达,下调其表达可以增加OE33细胞放射敏感性,诱导细胞凋亡并抑制其增殖。     

circLPAR3靶向miR-1238对食管癌细胞放射敏感性的影响

目的:探讨circLPAR3对食管癌细胞放射敏感性的影响及作用机制。方法:收集37例食管癌患者的癌组织和癌旁组织,体外培养食管癌细胞系Eca-109、EC9706和KYSE30及食管上皮细胞HET-1A,RT-qPCR法检测组织和细胞中circLPAR3和miR-1238的表达水平。以Eca-109细胞为研究对象,转染...     

{2-[(3-Carboxy-1-oxopropyl) amino]-2-deoxy-<Emphasis Type="SmallCaps">d</Emphasis>-Glucose} suppresses proliferation and induces apoptosis in the human esophageal cancer cell line

The aim of this study was to investigate the molecular mechanisms of apoptosis induced by {2-[(3-Carboxy-1-oxopropyl) amino]-2-deoxy-d-Glucose} (COPADG) in the esophageal cancer cell line Eca-109 and to establish a relationship between the rate of apoptosis and Fas and Bcl-2 protein expression. Eca-109 cells were cultured under standard condition. Cell growth was measured by MTT assay. Apoptosis and cell proliferation were determined by flow cytometry. Expressions of apoptosis-regulated genes Fas and Bcl-2 were detected by immunohistochemical methods and image analysis. COPADG dose- and time-dependently inhibited the growth of Eca-109 cells in vitro. Incubation of Eca-109 cells with 40 μmol/l of COPADG for 48 h induced significant apoptosis. After drug treatment, Fas protein expression was increased, while Bcl-2 protein expression was decreased. COPADG is able to induce apoptosis in the esophageal cancer cell line Eca-109. The mechanism of apoptosis in these cells may be related to up-regulation of Fas gene expression and the down-regulation of Bcl-2, which may serve as the experimental evidence for development of new drugs for the non-surgical management of human esophageal cancer.     

腺病毒介导NDRG2在体外对人食管鳞癌细胞系Eca-109增殖和凋亡的影响

目的：研究抑癌候选基因NDRG2在体外对人食管鳞癌细胞系Eca-109增殖和凋亡的影响。方法：腺病毒介导NDRG2转染人食管鳞癌细胞系Eca-109,逆转录酶-多聚酶链反应（RT-PCR）和Western blot法分别检测NDRG2基因的mRNA和蛋白表达水平,甲基噻唑基四唑法（MTT法）绘制细胞生长曲线,流式细胞仪（FCM）分别分析细胞周期和细胞凋亡。结果：腺病毒介导NDRG2转染人食管鳞癌细胞系Eca-109后,NDRG2的mRNA和蛋白表达水平明显上调,细胞增殖受到明显抑制（P〈0.05）;流式细胞仪检测显示,与对照组相比,感染后48小时Eca-109细胞G2期细胞明显减少（P〈0.01）,S期细胞明显增多（P〈0.01）;转染后的Eca-109细胞中凋亡细胞明显增多,感染48h后达16.0%。结论：过表达NDRG2可明显抑制人食管鳞癌细胞Eca-109的增殖并诱导细胞凋亡。     

RhoA对食管癌Eca-109细胞VEGF表达的调控作用

目的 探讨小G蛋白超家族成员RhoA对食管癌Eca-109细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的调控作用。方法 食管癌Eca-109细胞转染过表达RhoA质粒（V14RhoA）或沉默表达RhoA质粒（shRhoA）后，采用Western blotting和酶联免疫吸附试验（ELISA）法分别检测其细胞内外VEGF蛋白表达，Western blotting和Real-time PCR分别检测Eca-109细胞转染V14RhoA和shRhoA后p53和VEGF表达的情况。结果 Western blotting和ELISA法检测显示，Eca-109细胞转染V14RhoA后细胞内、外VEGF表达水平升高，而转染shRhoA后VEGF的表达被显著抑制。Western blotting和Real-time PCR检测显示，Eca-109细胞转染V14RhoA后p53表达显著降低，而VEGF表达显著升高（P＜0.05）。结论 食管癌Eca-109细胞中RhoA表达的变化可以引起细胞内外VEGF水平的变化，并且RhoA可通过抑制p53表达从而增加对VEGF的调控。     

沉默PGAM1基因对食管癌细胞生物学功能的影响

目的   探讨沉默磷酸甘油酸变位酶1（PGAM1）基因对食管癌细胞生物学功能的影响及可能机制。方法   收集2016年7月至2017年6月间在我院行手术切除的67例食管癌及对应癌旁正常组织,采用免疫组化SP法检测PGAM1表达并分析其表达与临床病理特征的关系。PGAM1 shRNA（shPGAM1组）或shRNA-NC（NC组）转染至食管癌Eca-109细胞,分析PGAM1基因沉默对Eca-109细胞凋亡和增殖的影响。采用实时荧光定量PCR（QPCR）和Western blotting法检测PGAM1对Akt／mTOR信号通路关键分子的影响。结果   食管癌组织中PGAM1高表达率为58.2％（39／67）,高于癌旁组织的31.3％（21／67）,差异有统计学意义（P＜0.05）。PGAM1表达与临床分期、分化程度、浸润深度有关（P＜0.05）,而与年龄、性别、淋巴结转移等无关（P＞0.05）。shPGAM1组和NC组中PGAM1 mRNA表达量分别为0.48±0.10和1.01±0.14,差异有统计学意义（P＜0.05）。MTT法检测结果 显示,培养24、48、72、96 h后,shPGAM1组Eca-109细胞增殖率分别为（87.65±7.42）％、（79.34±9.11）％、（70.17±6.84）％、（60.36±7.95）％,明显低于NC组,差异有统计学意义（P＜0.05）。48 h后shPGAM1组和NC组的Eca-109细胞凋亡率分别为（45.36±5.38）％和（24.81±4.67）％,差异有统计学意义（P＜0.05）;shPGAM1组和NC组Eca-109细胞培养上清的葡萄糖消耗量分别为（56.84±11.35）％和（99.87±10.48）％,shPGAM1组和NC组Eca-109细胞培养上清的乳酸含量分别为（48.02±10.18）％和（99.00±12.35）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）。shPGAM1组细胞的PTEN表达量高于NC组（P＜0.05）,而p-Akt、p-mTOR表达量均低于NC组（P＜0.05）。结论   PGAM1高表达与食管癌的发生、发展有关,通过激活Akt／mTOR信号通路诱导的Warburg效应,促使肿瘤细胞增殖,抑制其凋亡。     

重组人血管内皮抑素与紫杉醇联合诱导人食管癌细胞Eca-109凋亡的实验研究

目的 探讨重组人血管内皮抑素（恩度）与紫杉醇联合作用对人食管癌细胞Eca-109增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测恩度与紫杉醇联合用药48h后对Eca-109细胞增殖的抑制作用;倒置显微镜下观察恩度、紫杉醇单药与联合作用于人食管癌Eca-109细胞48h后细胞形态学的改变;Annexin V/PI双染流式细胞术检测恩度、紫杉醇不同用药组作用48h后的细胞凋亡率;RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、p21、p53 mRNA的表达情况。结果恩度、紫杉醇作用于Eca-109细胞48h后的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为276.6627μg/ml和3.8789μg/ml。恩度单药组、紫杉醇单药组、恩度+紫杉醇组、恩度→紫杉醇组、紫杉醇→恩度组作用Eca-109细胞48h后的抑制率分别为（33.62±2.30）%、（49.14±1.45）％、（56.29±0.71）％、（41.88±1.23）％和（51.48±0.98）％;与阴性对照组比较,恩度、紫杉醇各加药组对Eca-109细胞均有明显的抑制作用（P＜0.01）;恩度+紫杉醇组的抑制率高于其他各组（P＜0.05）。光镜下恩度、紫杉醇作用48h后Eca-109细胞具有典型的凋亡形态学改变,恩度单药组、紫杉醇单药组、恩度+紫杉醇组、恩度→紫杉醇组、紫杉醇→恩度组的总凋亡率分别为（8.78±0.19）％、（13.82±0.15）％、（18.88±0.29）％、（11.37±0.24）％和（14.88±0.34）％;恩度、紫杉醇各加药组的总凋亡率均高于阴性对照组（P＜0.05）;恩度+紫杉醇组的总凋亡率明显高于其他各组（P＜0.01）。与阴性对照组比较,恩度单药组、紫杉醇单药组、两药序贯组的Bcl-2 mRNA表达均明显降低;恩度与紫杉醇联合用药组的Bax mRNA表达均降低;各用药组的p21 mRNA表达均降低;恩度与紫杉醇序贯用药组的p53表达降低。结论 恩度与紫杉醇联合可协同诱导人食管癌细胞的凋亡,其作用机制可能与下调凋亡抑制基因的表达有关。     

吉西他滨对食管癌Eca-109细胞株凋亡的影响及其调控机制

目的 探讨吉西他滨（GEM）对食管癌Eca-109细胞株的凋亡及相关差异蛋白表达的影响及可能机制。方法 MTT法检测GEM在不同浓度（1、2、4、8、16 μg／ml）及不同时间（12、24 h）下对Eca-109细胞增殖的影响，并计算半数抑制浓度（IC50）。4.26 μg／ml GEM（处理组）处理Eca-109细胞，另设GEM未处理组，采用流式细胞仪检测24 h后两组凋亡情况； 提取两组相应蛋白，采用双向凝胶电泳和基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析鉴定表达差异量较大的蛋白质点，确定蛋白质类型和功能；Western blotting检测两组培养12、24 h后ASC、Mcl-1和Bax-α蛋白的表达；透射电镜观察两组细胞线粒体超微形态结构的改变。结果 GEM对Eca-109细胞增殖抑制呈浓度和时间依赖性，12、24 h的IC50分别为5.13 μg／ml和4.26 μg／ml；经GEM诱导Eca-109细胞凋亡的差异表达蛋白分别为Bax-α、ASC和Mcl-1。GEM处理组12、24 h 后ASC和Bax-α表达水平均高于GEM未处理组，而Mcl-1表达量则相反，两组差异有统计学意义（P＜0.01）。透射电镜结果 显示GEM处理组细胞线粒体的超微形态结构发生剧烈变化。结论 GEM能抑制食管癌细胞增殖，促进其凋亡，可能是通过线粒体凋亡通路调节ASC、Mcl-1和Bax-α表达来实现的。     

吉西他滨对食管癌Eca-109细胞株凋亡的影响及其调控机制

目的 探讨吉西他滨（GEM）对食管癌Eca-109细胞株的凋亡及相关差异蛋白表达的影响及可能机制。方法 MTT法检测GEM在不同浓度（1、2、4、8、16 μg／ml）及不同时间（12、24 h）下对Eca-109细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度（IC50）。4.26 μg／ml GEM（处理组）处理Eca-109细胞,另设GEM未处理组,采用流式细胞仪检测24 h后两组凋亡情况; 提取两组相应蛋白,采用双向凝胶电泳和基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析鉴定表达差异量较大的蛋白质点,确定蛋白质类型和功能;Western blotting检测两组培养12、24 h后ASC、Mcl-1和Bax-α蛋白的表达;透射电镜观察两组细胞线粒体超微形态结构的改变。结果 GEM对Eca-109细胞增殖抑制呈浓度和时间依赖性,12、24 h的IC50分别为5.13 μg／ml和4.26 μg／ml;经GEM诱导Eca-109细胞凋亡的差异表达蛋白分别为Bax-α、ASC和Mcl-1。GEM处理组12、24 h 后ASC和Bax-α表达水平均高于GEM未处理组,而Mcl-1表达量则相反,两组差异有统计学意义（P＜0.01）。透射电镜结果 显示GEM处理组细胞线粒体的超微形态结构发生剧烈变化。结论 GEM能抑制食管癌细胞增殖,促进其凋亡,可能是通过线粒体凋亡通路调节ASC、Mcl-1和Bax-α表达来实现的。