日本血吸虫活虫卵的保存

目的 目的 观察血吸虫活虫卵在不同保存液中的保存时间及孵化毛蚴的活力, 获得血吸虫活虫卵最佳保存条件, 探 索用作孵化参考品的可行性。方法 方法 收集人工感染血吸虫家兔直肠粪便, 经80、 100、 160孔/25.4 mm和200孔/25.4 mm 分样筛过滤去除粗粪渣, 260孔/25.4 mm收集血吸虫活虫卵, 于0.9% NaCl溶液、 1.2% NaCl溶液、 磷酸盐缓冲液 （PBS, pH 7.2）、 1.0%蔗糖溶液和Mili?Q水5种保存液中混匀, 分别于4 ℃和15 ℃恒温保存。每隔7 d对保存虫卵进行孵化, 观察毛 蚴活力并计数。结果 结果 在4 ℃条件下, 1.0%蔗糖溶液和1.2% NaCl溶液中虫卵孵化率分别于49 d后和126 d后降至0; 0.9% NaCl溶液和PBS保存液中虫卵孵化率于112 d后降至10%以下, 140 d后孵出的毛蚴活力较差; Mili?Q水保存的虫卵 孵化率于196 d后降至10%以下, 280 d后孵出毛蚴, 活力明显下降且不利于观察。在15 ℃条件下, 各保存液中虫卵的孵 化率分别在49 ~ 105 d之间逐渐降至0。结论 结论 实验室以Mili?Q水为血吸虫活虫卵保存液, 置4 ℃恒温保存, 196 d之内 的冷藏虫卵具有用作孵化阳性参考品的价值。     

南京血吸虫感染兔尿液中的虫卵观察

目的 观察和计数南京血吸虫(Schistosoma nanjingi)感染兔尿液中的虫卵和孵出的毛蚴。方法兔感染s．natotngi尾蚴1000条，75d后解剖，取出膀胱，观察和取出膀胱表面静脉丛中血吸虫，观察和计数膀胱内尿液中的血吸虫卵，尿液水洗后孵化及计数毛蚴。结果 膀胱表面静脉丛中取出血吸虫14对(28条)，膀胱中尿液发现虫卵18840只，卵壳表面有很小的颗粒状附着物，兔尿中有变性卵和变黑卵。尿液水洗后孵化，共孵出毛蚴874只，占虫卵总数的4．6％。结论 S.nanjingi与S.japonicum不同，兔感染S.nanjingi后，尿液中有很多血吸虫卵，且能孵出毛蚴。     

氰氨化钙杀血吸虫卵和杀蛆蝇效果

目的观察氰氨化钙对日本血吸虫卵和简易厕所粪坑内蛆的杀灭作用。方法采用对照方法,观察室内和现场牛粪与氰氨化钙（W/W）和粪坑中氰氨化钙与粪液（W/V）不同比例杀灭血吸虫卵和蛆的效果。结果1%（W/W）氰氨化钙与集卵牛粪沉渣拌匀2 h后均不能孵出毛蚴;室内按氰氨化钙与牛粪（W/W）2%堆积牛粪10 cm和20 cm厚加一层氰氨化钙,分别于5、7 d抽样孵化,未发现毛蚴;现场用原粪加2%（W/W）氰氨化钙搅拌堆积,2 d后抽样不能孵出毛蚴。1%（W/V）氰氨化钙撒入粪液搅匀,3 d蛆死亡率100%,效果维持15 d,苍蝇密度比对照组显著降低。结论氰氨化钙对血吸虫卵中的毛蚴和蛆蝇有较强的杀灭作用。     

荣宝对血吸虫病畜粪虫卵影响的实验观察

目的观察荣宝对家畜粪便中血吸虫卵的杀灭作用。方法在含有血吸虫卵的家畜新鲜集卵粪渣中按0.5%、1.0%、2.0%、3.0%的比例分组加入荣宝混合,同时按0.25%、0.5%、1.0%、2.0%的荣宝比例分别与同一新鲜粪便作直接搅拌。另外,制作高度10.0cm和18.5cm的粪柱,并按1.0%和3.0%的比例分别在粪柱底面和顶层洒上荣宝,各组以相同的粪便和方法作对照,处理一定时间后,抽样（高度组在粪柱中部取样）观察各组毛蚴孵化情况。结果荣宝与集卵粪渣混合或与新鲜粪便直接搅拌处理24h以上时,集卵粪渣加入0.5%-3.0%比例荣宝、新鲜粪便加入0.25%-2.0%比例荣宝的粪便中血吸虫卵均不能孵化;如果混合处理在2h以下时,集卵粪渣中加入0.5%-1.0%荣宝仍可见毛蚴孵出,加入2.0%-3.0%荣宝则不能,最佳药物浓度为1.0%-2.0%,有效处理时间24h以上。10.0cm高度粪柱中加入3.0%荣宝处理4d或1.0%荣宝处理5d开始不能孵出毛蚴;18.5cm高度粪柱中加入1.0%或3.0%荣宝处理8d尚可见到毛蚴孵出。所有对照组在各处理时间均可孵出毛蚴。结论荣宝具有杀灭家畜粪便中血吸虫卵的作用,其粪、药混合处理方式优于分层处理。     

盐浓度、温度、孵化时间对日本血吸虫虫卵孵化的影响

目的研究盐浓度、温度、孵化时间对日本血吸虫虫卵孵化的影响。方法分别采用浓度为0、0.5、1.2、2g/100ml的氯化钠溶液并分别在4、16、26、37℃条件下对日本血吸虫虫卵进行孵化,且在适宜温度下,观察日内、日间孵化的变异系数;分别在20min、1h、2h、4h、8h、12h观察各组孵化情况。结果氯化钠浓度在1.2g/100ml以下可孵化出40～154个毛蚴,温度在26℃孵出264个毛蚴,随着标本放置时间的延长,孵出毛蚴数由225个减少至198个。结论无盐、26℃、孵化2h是粪便血吸虫虫卵孵化的适宜条件。     

吡喹酮治疗埃及血吸虫病1例尿液虫卵定量观察

目的观察吡喹酮治疗埃及血吸虫病效果和病人尿液中虫卵定量计数。方法治前和治后每日收集尿液2次,沉淀后镜检虫卵,计数和孵化毛蚴。结果吡喹酮治疗埃及血吸虫病后,血尿症状消失。治前795 ml尿液中有虫卵1 480个,203个卵(13．7％)孵出了毛蚴;治后每日尿液中均有血吸虫卵,逐渐减少,均不能孵出毛蚴。治后45天和3个月尿液检查均未发现虫卵。结论吡喹酮治疗埃及血吸虫病效果良好。     

自动摄影术在血吸虫毛蚴孵化实验结果观察中的应用

目的 目的 探讨自动摄影术用于观察常规尼龙绢集卵毛蚴孵化实验结果的价值。方法 方法 在牛粪便中掺入一定量的血吸虫新鲜虫卵, 以含虫卵的粪便为实验组, 包括低污染组和高污染组; 以不含虫卵的粪便为阴性对照组, 每组40份样本。以常规血吸虫尼龙绢集卵孵化法对粪便样本进行毛蚴孵化, 采用手电筒光照、 放大镜及自动录像相结合的方法, 对粪便样本中毛蚴孵化的过程进行录像。通过观察录像记录, 判断粪便样本中是否有血吸虫毛蚴孵出。同时采用常规肉眼观察方法进行结果判断, 比较自动摄影术与肉眼观察法2种方法的毛蚴阳性检出率差异及优缺点。结果 结果 建立了手电筒光照、 放大镜影像放大及自动摄影术相结合的毛蚴孵化结果观察方法, 证实了自动摄影术对粪便中血吸虫虫卵毛蚴孵化的阳性检出率高于常规肉眼观察方法, 尤其是在虫卵低污染组检出率有明显的差异。40份低污染组中常规肉眼观察法和自动摄影术观察法的阳性检出率分别为57.5%和85.0% （χ2 = 11.723, P > 0.05）, 40份高污染组中阳性检出率分别为97.5%和100% （χ2 = 1.253, P < 0.05）, 80份高低污染组平均阳性检出率分别为77.5%和92.5% （χ2 = 6.894, P > 0.05）。结论 结论 自动摄影术可有效提高毛蚴常规尼龙绢集卵孵化实验的阳性检出率。     

人体大片形吸虫虫卵孵育特点

目的 了解人体大片形吸虫虫卵的孵育特点。方法 收取患者服药前1~4 d的全量粪便,采用尼龙袋集卵法收集虫卵。按不同的保存温度和保存时间将虫卵分组孵育: A组,新鲜粪便;B组,4℃下保存10 d、20 d和88 d;C组,室温20~21 ℃下保存10 d。虫卵置于28 ℃恒温水浴箱中孵化。结果 共收取3位患者的10份粪便。各组虫卵在孵育后第11~16 d孵出毛蚴。结论 无论含虫卵的粪便是新鲜,还是保存于4 ℃下,或是室温下,均不影响其孵化;但虫卵必须在有水的环境及适宜的温度下才能顺利发育并最终孵化出毛蚴。     

日本血吸虫云南品系SIEA对小鼠感染皖鄂品系血吸虫的免疫保护作用

目的观察日本血吸虫云南品系未成熟卵可溶性抗原SIEA免疫小鼠后攻击感染皖鄂品系血吸虫尾蚴,是否也能诱导出免疫保护效果。方法20只ICR小鼠随机分为免疫组和对照组,经日本血吸虫云南品系SIEA免疫后攻击感染皖鄂品系血吸虫尾蚴,感染后46d观察减虫率、粪卵减少率、雌虫子宫内虫卵数、肝表面虫卵结节数、肝脏各期虫卵数及各期虫卵构成比。结果SIEA免疫后粪卵及雌虫子宫内虫卵减少率分别为34．45％,23．69％（P〈0．05）;肝表面虫卵结节密度下降29．03％（P〈0．05）;肝组织内虫卵减少29．07％（P〈0．05）,成熟虫卵减少48．41％（P〈0．05）。肝组织内成熟虫卵比例下降,未成熟卵比例增加（P〈0．05）。结论日本血吸虫（云南品系）未成熟卵可溶性抗原（SIEA）的抗原性较强,小鼠经云南品系SIEA免疫后攻击感染皖鄂品系血吸虫尾蚴也诱导小鼠产生了抗卵胚发育及抗雌虫生殖免疫力,结果提示将来在中国大陆使用SIEA疫苗时,似可不必考虑血吸虫品系的影响。     

一种快速血吸虫毛蚴孵化法

血吸虫毛蚴孵化操作法是对含有血吸虫虫卵的沉淀物加去氯自来水 ,置于有 15 W灯光照明的 2 5 - 30℃温箱中 2- 6 h后才能观察结果。这种方法所耗时间长 ,不能及时满足学生实验操作及观察 ,为此 ,我们对血吸虫毛蚴孵化法作了如下改进。将已感染血吸虫的兔子肝脏取出 ,用捣碎机 (2 0 0 0 r/min)捣碎 ,将肝脏碎末用 1.2 %的食盐水进行自然沉淀 ,直到沉淀水全清为止 ,倾去上清液 ,将沉淀物盛入 5 0 0 ml量杯中 ,在 4℃冰箱内放置备用。学生实验时 ,用恒温水浴箱把自来水加热到 30℃后 ,把水倒入 5 0 0 ml洁净的三角烧瓶的容量之 2 / 3处 ,用吸…     

牛血吸虫病的快速粪便毛蚴孵化法

目的 比较3种孵化法检测牛血吸虫病的效果.方法 将野外收集的血吸虫病阳性牛粪和实验室人工定量掺入虫卵的牛粪,分别用粪便铜丝筛淘洗尼龙兜过滤孵化法(常规法)、快速粪便毛蚴孵化法(快速法)、粪便双层尼龙兜淘洗孵化法(双层法)做病原学检测.结果 快速法毛蚴相对孵出率为100％,而常规法为40.00％ ～ 81.86％,双层法...     

羊在日本血吸虫病传播中的作用Ⅱ温度和湿度对羊粪中虫卵存活的影响及虫卵在自然环境中的存活状况

目的调查羊粪中日本血吸虫虫卵在江滩自然环境中的存活情况及其影响因素,为研究羊在日本血吸虫病传播中的作用提供实验依据。方法建立日本血吸虫感染山羊动物模型,收集感染性山羊粪便,观察环境温度和羊粪含水量对羊粪中日本血吸虫虫卵孵化率的影响。选择江堤外一块草滩作为实验现场,观察春、冬季羊粪在江滩的暴露时间对虫卵孵化率以及阳光直晒对虫卵生存的影响。结果在25℃实验室环境中,羊粪中日本血吸虫虫卵孵化率与羊粪含水量呈高度正相关(r=0.87)。当羊粪含水量降至7.6%时,虫卵失去孵化能力。保持羊粪含水量不变,将羊粪暴露在-5℃环境中,随暴露时间延长,粪便中虫卵孵化率逐渐降低;暴露5 h后,孵化率降至0。将羊粪样本暴露于5、15℃和25℃环境中,随暴露时间延长,粪便中虫卵孵化率逐渐降低,暴露52 d后仍有2.3%、5.0%和0.9%虫卵存活并可孵化出毛蚴。将羊粪暴露于35℃环境中,随暴露时间延长,粪便中虫卵孵化率逐渐降低,暴露13 d后孵化率降为0。冬季(气温-2~10℃)随暴露时间延长,暴露于江滩滩面的羊粪中虫卵孵化率逐渐下降,暴露21 d后孵化率降至0。春季(气温16~19℃)随暴露时间延长,暴露在江滩滩面的羊粪中虫卵孵化率逐渐下降,暴露5 d后虫卵孵化率降至0.9%。同一滩块暴露相同时间后,暴露在有阳光直晒滩面羊粪中的虫卵孵化率低于无阳光直晒滩面。结论羊粪中的日本血吸虫虫卵生存与环境温度和羊粪含水量(即湿度)有关,温度和湿度是影响虫卵孵化的主要自然因素。     

血吸虫毛蚴动态自动识别系统在尼龙绢集卵 孵化法中的应用价值

目的　探讨血吸虫毛蚴动态自动识别系统在常规尼龙绢集卵孵化法观察毛蚴中的价值。方法　在牛粪中加入不同数量的日本血吸虫新鲜虫卵，分为低感染组、中感染组和高感染组，以不含虫卵的牛粪为阴性对照组，比较不同组毛蚴识别系统与肉眼观察法检测毛蚴的效率、准确率；同时观察不同毛蚴数量和不同检测时间毛蚴识别系统检出毛蚴数量。结果　该系统可自动识别毛蚴，阳性检测率和检测效率均明显高于肉眼观察法；尤其在低感染组，毛蚴识别系统阳性检测显著高于肉眼观察法（[χ2] = 10.769，P = 0.002）。毛蚴识别系统检测1 min可用于现场检测粪便样本。结论　血吸虫毛蚴动态自动识别系统可有效提高尼龙绢集卵孵化法毛蚴检测效率和准确率，可替代肉眼观察法用于血吸虫病现场查病及相关研究。     

血吸虫毛蚴动态自动识别系统在尼龙绢集卵 孵化法中的应用价值

目的　探讨血吸虫毛蚴动态自动识别系统在常规尼龙绢集卵孵化法观察毛蚴中的价值。方法　在牛粪中加入不同数量的日本血吸虫新鲜虫卵,分为低感染组、中感染组和高感染组,以不含虫卵的牛粪为阴性对照组,比较不同组毛蚴识别系统与肉眼观察法检测毛蚴的效率、准确率;同时观察不同毛蚴数量和不同检测时间毛蚴识别系统检出毛蚴数量。结果　该系统可自动识别毛蚴,阳性检测率和检测效率均明显高于肉眼观察法;尤其在低感染组,毛蚴识别系统阳性检测显著高于肉眼观察法（[χ2] = 10.769,P = 0.002）。毛蚴识别系统检测1 min可用于现场检测粪便样本。结论　血吸虫毛蚴动态自动识别系统可有效提高尼龙绢集卵孵化法毛蚴检测效率和准确率,可替代肉眼观察法用于血吸虫病现场查病及相关研究。     

日本血吸虫虫卵杀灭剂筛选及快速杀灭技术的研究 Ⅰ化学杀卵剂的筛选

目的从市售的农药或其他化学药品中筛选日本血吸虫虫卵杀灭剂,为建立快速杀卵技术提供物质基础。方法将待筛选化学样品分别配制成浓度为1000、100、10、1mg/L的溶液;分别加入4000～8000只日本血吸虫活虫卵,室内浸泡24h后经盐水和冰水洗涤,常规法孵化,收集所有孵出毛蚴,计算相对孵化率。结果共筛选了6大类41种化学药物,其中35种对日本血吸虫虫卵孵化有不同程度抑制作用。经浓度为1mg/L80%敌敌畏乳油、25%氯硝柳胺悬浮剂和杀虫丁浸泡后的虫卵相对孵化率分别为0、1.01%和6.61%。结论 80%敌敌畏乳油对日本血吸虫虫卵有较强抑制作用,可作为候选杀卵剂对其杀卵条件进行优化研究。     

室温下片形吸虫卵孵化观察及尖膀胱螺感染实验

目的  研究室温下用三角烧瓶孵化片形吸虫卵的效果,以及片形吸虫毛蚴感染尖膀胱螺的试验。 方法  采用云南大理本地采集的牛体片形吸虫排出的新鲜虫卵进行孵化,分A、B两组,A组每日换水,B组不换水,观察孵化效果。 结果  在平均水温24℃的情况下,两组均在第13d孵出毛蚴,但A组（换水组）孵出较多且观察较容易,B组（未换水组）孵出较少且液体混浊影响观察,两组孵化持续时间为20~30d;用孵出毛蚴感染尖膀胱螺,未能感染。 结论  在夏季室温22℃以上可以用三角烧瓶孵化片形吸虫卵,每日更换瓶内去氯水,孵化效果较好,不用使用温箱等设备,肉眼即可观察,且成本相对较低,可适用于基层或现场;另外依据本实验结果推测尖膀胱螺可能不是片形吸虫的适宜中间宿主,成功感染还需寻找其他条件。     

检测水体日本血吸虫毛蚴PCR方法的建立

目的建立一种灵敏、特异的痕量检测日本血吸虫毛蚴的PCR方法。方法取感染6～8w日本血吸虫的小鼠肝脏,碾磨后沉淀,孵化并利用间接连续离心法富集毛蚴,采用蛋白酶K-苯酚法提取毛蚴基因组DNA。登陆GenBank查询获得日本血吸虫保守序列18S小亚基单位核糖体脱氧核酸(18SrDNA)基因,利用引物设计软件PrimerPremier5.0和Oligo6自主设计一对引物,建立检测日本血吸虫毛蚴的PCR方法。梯度稀释血吸虫毛蚴基因组DNA进行PCR方法的灵敏性试验,设置阴性对照,PCR产物通过电泳鉴定。结果 PCR扩增日本血吸虫毛蚴得到特异性DNA片段,片段长度为463bp,阴性对照组无扩增产物。PCR法可检测出日本血吸虫毛蚴DNA的最低浓度为62.5pg/μL。结论建立的检测日本血吸虫毛蚴PCR方法灵敏、特异,具有一定的预警作用。