小鼠肝癌细胞系Hepa1-6 B7.1瘤苗抗肿瘤免疫的实验研究

目的：研究小鼠肝癌细胞系Hepal-6转染B7.1基因后在体内外抗肿瘤免疫的作用。方法：采用脂质体介导的方法用pLXSNB7.1转染PA317包装细胞，经G418筛选出高滴度阳性的细胞克隆，以流式细胞仪检测B7.1分子的表达情况；用所获病毒上清进一步感染Hepal-6细胞，观察转染B7.1基因后Hepal-6细胞作为肿瘤疫苗在体内外诱发抗肿瘤免疫的情况。结果：Hepal-6/B7.1高表达B7.1分子，其致瘤性明显降低。接种小鼠后成瘤率为20%，而亲代Hepal-6细胞成瘤率为100%，转B7.1基因肿瘤细胞疫苗可抑制肿瘤生长速度，延长荷瘤小鼠生存期；且转B7.1基因肿瘤细胞疫苗具有保护性免疫反应。结论：转B7.1基因的肿瘤细胞作为肿瘤疫苗可有效地激发机体的抗肿瘤免疫反应。     

垫料对NIH小鼠生长发育及繁殖性能的影响

目的探讨松木刨花、枫木刨花、纸皮和稻草4种垫料对NIH小鼠繁殖性能及仔鼠生长发育的影响，为确定能作为新型实验动物垫料的原材料提供参考。方法选用松木刨花、枫木刨花、纸皮（纸箱厂下脚料）和稻草4种垫料，用160只（80只雄80只雌）60日龄的、平均体重30g的NIH小鼠进行繁殖试验，记录了每对小鼠第1至第6胎的窝产仔数、胎窝重、离乳仔数和胎次间隔，同时也记录了每对小鼠第1、第2胎仔鼠从出生到90日龄的体重。结果松木刨花组小鼠的窝产仔数极显著低于稻草组和纸皮组（P〈0．01），姐垫料的小鼠在离乳率、胎次间隔和仔鼠初生重上，各组间差异均不显著（P〉0．05）；在生长发育方面，4组垫料间无显著差异（P〉0．05）。结论4种垫料中松木刨花垫料对NIH小鼠的生长发育、繁殖性能指标有一定影响，但与其它3组比较差异均不显著。而枫木刨花对小鼠的生长发育及繁殖性能影响不大，是一种比较适合的垫料原材料。     

自拟抗弓形虫汤对小鼠急性弓形虫感染的治疗机制研究

目的 观察自拟抗弓形虫汤对急性弓形虫感染小鼠的治疗作用及其作用机理。方法 将昆明雌性小鼠随机分三组（A中药抗弓形虫汤组、B复方SMZ组、C模型组），将弓形虫RH株速殖子感染小鼠，2h后灌胃给药，A组给予中药配伍0．5ml（18mg／m1），B组给予0．5ml复方SMZ悬浊液（12mg／m1），治疗组疗程14d，观察至30d，记录小鼠存亡情况；肝组织病理切片采用HE染色；在感染后第3d、6d和第20d用羟胺法分别检测各组小鼠的血清、心、肝和肺组织超氧化物歧化酶（SOD）活力。结果 A（16．55d）、B（23．20d）组小鼠存活时间均较C（7．85d）组差异有极显著性（P〈0．01），其中，A组与B组比较，差异有显著性（P〈0．05）；病理检查A组及B组有不同程度肝细胞肿大、炎症细胞浸润等病变，但与C组相比损伤程度明显减轻，差异有极显著性意义（P〈0．01），A组与B组比较，差异有显著性（P〈0．05）；A、B组小鼠各部位SOD活性较C组差异有极显著性（P〈0．01），但A组与B组比较，差异无显著性（P〉0．05）。结论 自拟抗弓形虫汤有显著的抗弓形虫作用，它从推迟小鼠死亡时间，保护肝细胞，增强抗氧化损伤等方面发挥重要作用。     

头孢克罗的体内抗菌活性

按半数有效量实验法将普通级KM小鼠随机分组，每组10只。给小鼠腹腔注射最小致死菌量（0．5ml／鼠）的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌，接种细菌后，即刻以不同剂量的头孢克罗（化学名为3-氯-7－d－（2-苯甘氨酰胺）－3-头孢烯-4-羧酸）和头孢氨苄灌胃给药（0．4ml／只），对照组给赋形剂（0．4ml／只），记录各组感染后7d内的小鼠死亡数．并以Bliss法计算ED50。结果显示：头孢克罗和头孢氨苄对大肠杆菌感染小鼠的ED50分别为5．19、19．94mg／kg；对金黄色葡萄球菌感染小鼠的ED50。分别为0．20、0．94mg／kg．结果表明：头孢克罗对大肠杆菌感染小鼠的保护作用是头孢氨苄的3．8倍；对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用是头孢氨苄的4．7倍。     

一种真菌菌丝体甲醇提取物-A7的抗肿瘤活性研究

目的 研究一种真菌菌丝体甲醇提取物－A7的抗肿瘤活性。方法 MTT法观察A7对人BEL－7402肝癌细胞、HCT－8结肠癌细胞、SPC-A－1肺腺癌细胞、GLC－82肺腺癌细胞和EC－109食管癌细胞的生长抑制作用；以小鼠移植性肿瘤S180模型，观察A7的体内抗肿瘤作用。结果 A7对前述癌细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为0．8，1．7，4．7，5．0，7．6μg/mL，均小于10μg/mL。动物实验表明，50mg/kgA7对S189实体肉瘤的抑制率达46．8％（P＜0．001）。结论 A7在体外和体内都具有一定的抗肿瘤活性。     

6种中药组方对小鼠B16黑素瘤细胞增殖和黑素生成的影响

目的研究6种中药组方水提物、醇提物对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素生成的影响。方法以MTT法测定各组方对B16细胞的增殖活性;NaOH裂解法测定各组方对B16细胞的黑素生成量。结果组方1、2、3水提物和组方2、4、6醇提物具有明显促细胞增殖作用（P〉0．05）;水提物中细胞增殖率最高的为组方2（0．625mg／ml）,增殖率为22．60％;醇提物中细胞增殖率最高的为组方4（0．078mg／ml）,增殖率为11．60％。组方1、2、4、5、6水提物和6种组方醇提物均具有促进黑色素生成的作用（P〈0．05）。水提物中黑素增率最高的为组方1（0.313mg／ml）,增率为75．38％;醇提物中黑素生成增率最高的为组方1（1．25mg／ml）,增率为88．01％。结论各组方对鼠黑素瘤B16细胞增殖及黑素生成均有一定的促进作用,但其作用强度与组方的组成密切相关。     

实验动物垫料毒性安全评价进展

垫料（Laboratory animal bedding）是影响实验动物健康与实验结果的重要因素之一。目前使用的垫料主要有刨（shaving）、锯末（sawdust）、玉米芯（corncob）、再生纸（recycled-paper）、秸秆（straws）、果壳（hulls）及其他纤维类材料（plant fiber andother）等。本文从实验动物垫料原材料毒性、抽提物毒性、以及垫料对实验动物生长繁殖的影响几个方面进行了分析，认为杨木和玉米芯是比较理想的垫料原料。     

复肝春6号对荷H22小鼠抑瘤作用的实验研究

目的研究复肝春6号（FGC-6）抗肝癌作用及与5-氟尿嘧啶（5-Fu）的协同抗肿瘤作用。方法建立H27荷瘤小鼠模型并随即分为6组：模型组、5．Fu大、小剂量组、FGC-6大、小剂量组、FGC-6与5一Fu联用组．各组连续给药10d。观察各组小鼠的瘤重；检测荷瘤小鼠NK细胞活性、淋巴细胞增殖活性及脾细胞分泌IL-2的能力。结果各组用药均可明显抑制H22移植瘤的生长，与模型组比较差异显著（P〈0．05）；FGC-6与5-Fu联用时，据金氏公式计算q值为1．37，大于1．15；与模型组比较，FGC-6大剂量组及FGC-6与5-Fu联用组小鼠的NK细胞活性、淋巴细胞增殖活性及脾细胞IL-2分泌能力明显提高（P〈0．05），而5，Fu大剂量组的如上3指标均明显降低（P〈0．05）。结论FGC-6对H22肝癌移植瘤生长有明显抑制作用，其机制可能与提高荷瘤小鼠机体免疫功能有关；小剂量FGC-6与小剂量5-Fu联用具有协同抗肿瘤作用。     

低剂量辐射增强环磷酰胺对移植肿瘤生长的抑制作用

目的：探讨低剂量辐射（LDR）与环磷酰胺（CP）伍用对肿瘤生长的影响。方法：采用C57BL／6J，小鼠右后肢腓肠肌内接种Lewis肺癌细胞做为肿瘤动物模型。在肿瘤直径达7mm时，给予75mGyX射线全身照射和100mg／kgCP腹腔注射化疗，用游标卡尺隔日测量肿瘤直径，建立肿瘤生长曲线，同时检测了不同治疗措施后小鼠脾脏自然杀伤细胞（NK）、淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK）、特异性细胞毒性T细胞（CTL）的杀伤活性。结果：同单纯CP化疗组相比，LDR与CP伍用组的肿瘤直径在治疗后不同时间均明显缩小（P＜0．05～0．01），肿瘤生长速率明显降低；LDR和CP伍用组小鼠的NK、LAK、特异性CTL杀伤活性较单纯CP化疗组明显提高（P＜0．05～0．01）。结论：LDR可通过减轻CP所致的免疫抑制副作用提高机体免疫系统的功能并增强CP的抑瘤作用。     

黄芩茎叶活性部位抗病毒作用的研究

目的：研究黄苓茎叶活性部位（SLSBGAF）的抗病毒作用。方法：体外细胞培养观察1：2～1：256不同稀释度SLSBGAF对柯萨奇B族病毒（CoxB3、CoxB4、Cox B5）、流感病毒、副流感病毒、腺病毒（Adv3、Adv7）、呼吸道合胞病毒（RSV）．疱疹病毒（HSV-1、HSV-2）等10种病毒致细胞病变（CPE）的抑制作用；流感病毒感染小鼠模型，分别观察SLSBGAF对小鼠肺指数、间接荧光染色观察肺内病毒增殖的影响，并以小鼠存活时间和死亡率为指标观察药物的保护作用。结果：SISBGAF对CoxB3等10种病毒所致细胞病变有明显的抑制作用，有效浓度为0．20～1．56mg／mL，IC50值为0．08～0．34mg／mL，治疗指数（TI）值分别为4和8；sLSBGAF（54．3，108．5，217mg／kg）灌胃给药对流感病毒引起的小鼠肺炎有治疗作用，肺指数和病毒的肺内增殖低于对照组，并呈一定的量效相关性；此外对流感病毒所致小鼠死亡有不同程度的保护作用，217mg／kg剂量组作用明显，死亡保护率为40％，生命延长率为39．08％。结论：SLSBGAF可用于流感病毒、副流感病毒、柯萨奇病毒等相关感染性疾病的预防和治疗。     

黄磷吸入肺损伤及呼吸窘迫综合征与组织细胞凋亡

目的：（1）了解大鼠急性黄磷及其化合物吸入中毒致急性肺损伤（ALI）及急性呼吸窘迫综合征（ARDS）的肺组织病理变化及肺组织细胞凋亡;（2）了解血必净治疗对肺组织病理及细胞凋亡的影响。方法：健康SD大鼠85只,随机分为正常对照组、模型组以及3个治疗组。建立大鼠急性黄磷及其化合物吸人中毒致ALI—ARDS模型,造模后依时给药和杀鼠,取肺组织行病理检查及细胞凋亡原位检测（TUNEL法）。结果：（1）模型组大鼠肺组织结构严重破坏,出现明显肺水肿、出血、变性、坏死,且有大量炎性细胞浸润,肺组织细胞凋亡数显著增加;（2）3个治疗组肺组织病理损害较模型组均有不同程度减轻,肺组织细胞凋亡数减少。结论：（1）大鼠急性黄磷吸入成功复制了ALI—ARDS模型;（2）血必净对大鼠急性黄磷及其化合物吸入损伤致ALI—ARDS具有治疗作用;（3）肺组织细胞凋亡参与了大鼠急性黄磷及其化合物吸入损伤致ALI—ARDS的病理过程,血必净可能具有调节细胞凋亡作用。     

氯沙坦对急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的治疗作用

目的研究肾素-血管紧张素系统(RAS)药物氯沙坦在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)治疗中的作用。方法采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制小鼠ALI/ARDS模型,术后分别腹腔注射不同浓度氯沙坦(5、10、15、20、25mg/kg),研究氯沙坦对ALI/ARDS小鼠肺损伤的影响,并观察氯沙坦作用后ALI/ARDS小鼠7d生存率的变化。结果氯沙坦显著改善ALI/ARDS小鼠肺损伤的程度,在5～15mg/kg范围内,ALI/ARDS小鼠的氧合指数和肺湿重/干重比(W/D)显示改善的趋势;但当氯沙坦的浓度超过15mg/kg时,氧合指数和W/D反而逐渐变差。氯沙坦(15mg/kg)干预使小鼠血清中TNF-α[(554.1±62.7)pg/mL比(759.2±21.5)pg/mL,P0.01]、IL-6[(1227.3±130.0)pg/mL比(2670.4±174.1)pg/mL,P0.01]和IL-1β[(444.0±38.6)pg/mL比(486.6±61.7)pg/mL,P0.05]水平均显著降低;肺水肿明显减轻;小鼠7d生存率显著提高(6.7%比0)。结论在一定剂量范围内RAS药物氯沙坦可减轻CLP诱导的ALI/ARDS肺损伤,提高ALI/ARDS小鼠7d生存率。     

肥大细胞对小鼠Lewis肺癌细胞生长周期的影响

目的探讨肥大细胞(MC)对Lewis肺癌(LLC)细胞生长的影响及其与MC释放的一氧化氮(NO)的关系。方法取对数生长期LLC细胞,于6孔培养板中培养6 h后,将其分为4组:LLC细胞单独培养组(LLC组)、MC和LLC细胞混合培养不加药组(MC+LLC组)、MC和LLC细胞混合培养加脂多糖(LPS)组(MC+LLC+LPS组)、MC和LLC细胞混合培养加N-单甲基-L-精氨酸(L-NMMA)和LPS组(MC+LLC+L-NMMA+LPS组)。用流式细胞仪分析癌细胞的周期分布。结果与LLC组比较,MC+LLC组S期LLC细胞显著减少(P<0.05);但2组G0/G1期LLC细胞比较差异无统计学意义(P>0.05)。与MC+LLC组比较,MC+LLC+LPS组S期LLC细胞显著减少(P<0.05),G0/G1期LLC细胞显著增多(P<0.05)。MC+LLC+L-NMMA+LPS组S期LLC细胞显著少于MC+LLC组(P<0.05)。MC+LLC+L-NMMA+LPS组S期LLC细胞多于MC+LLC+LPS组,但差异无统计学意义(P>0.05)。50、100 mg·L-1的MC对MC+LLC+L-NMMA+LPS组LLC细胞生长周期的影响差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MC能抑制LLC细胞的生长,其抑制效应可能与MC释放的NO有关。不同浓度的MC对LLC细胞周期的影响无显著差异。     

HPLC-ELSD同时测定山银花中绿原酸、木犀草苷和川续断皂苷乙的含量

目的:建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定山银花中绿原酸、木犀草苷和川续断皂苷乙的方法。方法:采用Col-umn XB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,用乙腈(A)-0.5%冰醋酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱,以蒸发光散射检测器检测绿原酸和川续断皂苷乙。梯度程序为:0 min(A:9%,B:91%)保持10→12 min(A:29%,B:71%)→20 min(A:33%,B:67%)→25 min(A:45%,B:55%),流速1.0 ml/min;检测器漂移管温度100℃,载气流速为3.0 ml/min。结果:绿原酸、木犀草苷及川续断皂苷乙的回归方程分别为:Y绿原酸=1.341 1X+4.360 1,r=0.999 5;Y木犀草苷=25 948.31X-22.863 41,r=0.999 92,Y川续断皂苷乙=5.688 8 X+5.350 6,r=0.999 6。线性范围分别为:绿原酸0.005-0.045 mg/ml;木犀草苷0.017 7-0.085 5 mg/ml,川续断皂苷乙0.048 6-0.243 mg/ml。结论:该方法操作简便、结果准确,专属性强,分离效果和重现性好,可有效缩短总分析时间,为较全面控制金银花药材的质量控制提供了简便可靠的方法。     

核因子-κB在红霉素抗炎机制的表达

目的：从分子水平上探讨红霉素（EM）的抗炎作用机制,为临床防治慢性阻塞性肺疾病提供新的思路。方法：体外培养人支气管上皮细胞（16HBE）,将细胞随机分为8组,先加入EM干预,后加入肿瘤坏死因子（TNF-α）刺激。分组：①空白对照组;②TNF-α（20μg／L,16h）;③EM（0．3mg／L,24h）＋TNF-α（20μg／L,16h）;④EM（3mg／L,24h）＋TNF-α（20μg／L,16h）;⑤EM（30mg／L,24h）＋TNF-α（20μg／L,16h）;⑥EM（0．3mg／L,48h）＋TNF-α（20μg／L,16h）。然后收集各组细胞分别提取核蛋白,应用电泳迁移率改变分析法（EMSA）检测核因子-κB（NF-κB）的活性。结果：EMSA结果显示,TNF-α刺激人支气管上皮细胞（16HBE）后,细胞内NF-κB表达增高。先加入不同浓度及作用时间的EM,后加入前炎因子TNF-α刺激16HBE,EMSA结果显示各组细胞NF—κB表达均降低,且提示有随着EM浓度增加,作用时间延长,NF-κB表达受抑制愈明显的趋势,但随着EM浓度增加及作用时间延长到一定的范围,NF-κB表达受抑制差别不明显。结论：TNF-α能激活16HBENF-κB,促进炎症的发生发展,在炎症进程中发挥着重要作用。EM能抑制人16HBENF-κB的激活水平,这可能是EM的抗炎作用机制之一。     

玉米多糖铁在毕格犬体内的药代动力学研究

目的:采用原子吸收分光光度法对玉米多糖铁在毕格犬体内的药代动力学特征进行研究。方法:毕格犬灌胃(11.0 mg/kg、5.7 mg/kg、2.9 mg/kg)给予玉米多糖铁后,不同时间点测定犬体内铁离子的浓度,所得数据用DAS软件求算药动学参数并分析。结果:当玉米多糖铁中铁离子浓度在0.2⁵μg/ml范围内时其线性关系良好,标准曲线的相关系数r=0.999 65μg/ml范围内时其线性关系良好,标准曲线的相关系数r=0.999 6⁰.999 9,平均回收率达到91%以上、RSD值低于15%。药动学参数表明其在毕格犬体内的药动学模型符合二室模型,其中三个剂量组的t1/2分别为(1.69±0.25)×103、(1.4±0.51)×103和(1.88±1.41)×103min;AUC0-∞分别为(5.87±1.39)×103、(4.53±1.11)×103和(3.91±2.12)×103mg/(L·min)。结论:本研究数据为进一步研究玉米多糖铁的临床应用提供了极具价值的实验参数。     

P38MAPK在双氢青蒿素诱导Lewis肺腺癌细胞凋亡中的作用

目的探讨p38丝裂素活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPK）在双氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）所致小鼠Lewis肺腺癌（Lewis lung carcinoma,LLC）细胞凋亡中的作用。方法以DHA处理LLC细胞后,采用四甲基偶氮唑盐（microculture terazolium,MTT）法观察LLC细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,采用透射电镜观察凋亡细胞的形态,应用Western blot法检测p38MAPK表达及SB202190对其表达的影响。结果 DHA抑制LLC细胞增殖具有剂量效应关系,能使LLC细胞周期阻滞于G0/G1期;经20μg/ml DHA处理后,透射电镜下可见典型的凋亡细胞,Western blot显示p38MAPK表达阳性,并能被SB202190所抑制。结论 p38MAPK的活化参与了DHA诱导LLC细胞凋亡的过程。     

复尔康注射液体外抗肿瘤实验研究

目的：研究复尔康注射液对不同肿瘤细胞株的生长抑制作用。方法：以阿霉素为阳性对照,采用MTT法检测复尔康注射液对4种不同肿瘤细胞株的生长抑制作用。结果：复尔康注射液对人白血病HL-60、人红白血病K562、小鼠黑色素瘤B-16及人肝癌BEL-7402细胞的半抑制浓度（IC50）分别为42.80μg/ml、146.65μg/ml、463.37μg/ml和945.37μg/ml,在浓度为520μg/ml时,对4种细胞株的抑制率分别为89.12%、80.68%、63.40%和34.92%。结论：复尔康注射液在体外对4种肿瘤细胞株均具有明显的抑制作用,具有开发成抗癌新药的潜力。     

连翘对LPS作用的巨噬细胞TLR4蛋白表达的影响

目的观察连翘对LPS诱导巨噬细胞（RAW264．7）16h后TLR4蛋白表达的影响,探讨连翘对抗内毒素作用及其可能机制。方法体外实验共分6组,分别为control组,LPS组,连翘高、中、低剂量组及多黏菌素B组;连翘高、中、低剂量组及多黏菌素B组分别加入连翘水煎液50mg／ml、25mg／ml、12．5mg／ml及多黏菌素B10ug／ml培养0．5h后,再加入10ng／ml LPS,培养16h;Western blot法测各组细胞TLR4蛋白表达变化。结果control组RAW264．7细胞只表达少量TLR4,给予LPS刺激16h,TLR4表达明显升高（P〈0．01）,连翘高、中、低剂量组预处理均可明显降低TLR4的表达（P〈0．01）,并呈剂量依赖关系;连翘高剂量组与多黏菌素B组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论连翘预处理能抑制LPS诱导的巨噬细胞TLR4的表达可能是其抗内毒素作用的重要机制。     

非小细胞肺癌患者血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C的变化及意义

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者血清中半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（Cys C）的水平及其在肿瘤发生发展过程中的意义。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定102例NSCLC患者、60例良性肺部疾病患者和90例健康体检者血清Cys C水平,并进行比较分析。结果肺癌患者血清Cys C的水平明显高于良性肺疾病组和健康对照组[（1.47±0.78）mg/L比（1.04±0.51）mg/L和（1.06±0.36）mg/L,P〈0.01]。随着肿瘤的发展,患者血清Cys C的含量逐渐上升,无淋巴结转移低于有淋巴结转移[（1.06±0.39）mg/L比（1.83±0.97）mg/L,P〈0.05],TNM分期Ⅰ~Ⅱ期低于Ⅲ~Ⅳ期[（1.38±0.88）mg/L比（1.57±0.79）mg/L,P〈0.05]。中高分化肺癌血清Cys C的含量高于低分化肺癌[（1.63±0.73）mg/L比（1.26±0.48）mg/L,P〈0.05]。肺癌患者血清Cys C水平与性别、年龄及肺癌组织学类型无关。结论血清Cys C含量在肺癌患者中明显增高,并与肿瘤的临床分期、淋巴结转移及恶性程度相关,提示血清Cys C水平的变化在肺癌的发生发展过程中起重要作用。