用聚合酶链反应行为巨细胞病毒感染产前诊断的研究

对５０例正常育龄妇女，６３例正常孕妇及２０例有异常产史的孕妇进行了血清巨细胞病毒抗体ＣＭＶ－ＩｇＧ，ＣＭＶ－ＩｇＭ的检测及聚合酶链反应（ＰＣＲ）的检测，并对正常孕妇及异常孕产史孕妇进行绒毛ＣＭＶＰＣＲ检测，结果正常孕妇血清ＣＭＶＰＣＲ阳性率为３１．７５％，远远高于正常非孕妇的血清ＣＭＶＰＣＲ的阳性率１６％，正常孕妇人流的绒毛ＣＭＶＰＣＲ阳性率为２０．６３％，明显低于有异常孕产史常孕妇绒毛ＰＣＲ的阳     

应用聚合酶链反应检测新生儿黄疸患儿巨细胞病毒感染

本文对排除了引起新生儿黄疸常见病因的３９例患儿，用聚合酶链反应检测患儿外周血人巨细胞病毒ＤＮＡ。其中ＨＣＭＶ ＤＮＡ阳性９例，阴性３０例，对两组黄疸患儿进行比较，ＨＣＭＶ ＤＮＡ阳性组其血清总胆红素水平及黄疸消退时间与阴性组比较明显显著差异，两组血小板计数无差异。     

聚合酶链反应检测新生儿巨细胞病毒感染

聚合酶链反应检测新生儿巨细胞病毒感染蔡定邦郭亮李誉成张传顺陈享陈伟红作者单位：５２６０２１广东省肇庆市第一人民医院１９９５年１２月２０日收稿１９９６年１月２日修回人巨细胞病毒（Ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ，ＨＣＭＶ）感染极为广泛，是先天病...     

用聚合酶链反应诊断新生儿巨细胞病毒感染25例分析

本文采用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ），对２５例婴儿肝炎综合征患儿尿中ＨＣＭＶ－ＤＮＡ，用于确诊新生儿巨细胞病毒感染，阳性率为６８％。占本组病毒感染的首位。在新生儿黄疸发生率较高的广西，对原因不明的婴儿肝炎综合征患儿，应争取做患儿尿中ＨＣＭＶ－ＤＮＡ，因此法具有高度特异性、敏感性，取材方便，操作简便，反应周期短等优点，是目前检测ＨＣＭＶ的最敏感的实验方法，适用于临床推广使用。     

用聚合酶链反应和放射免疫法检测肾移植术后人巨细胞病毒感染

将５０例肾移植术后发热病人的尿标本接种细胞，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测第１代细胞培养上清中的人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ。结果１９例为ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，阳性率为３８．００％，用固相放射免疫法（ＲＩＡ）检测ＨＣＭＶ抗原，阳性的有１５例，阳性率为２７．７７％。将５４倒尿标本接种人胎肺二倍体单层细胞，分离到６株ＨＣＭＶ。用ＥＬＩＳＡ检测６５例病人单份血清的ＨＣＭＶ－ＩｇＭ抗体，阳性的有１７例，检测４５例病人双份血清ＩｇＧ抗体，１１例的第２份血清的ＨＣＭＶ－ＩｇＧ抗体滴度比第１份有４倍以上升高。上述结果表明，ＰＣＲ检测结果与ＲＩＡ的检测结果基本符合；病人血清抗体的阳性率与ＰＣＲ检测的阳性率基本符合。     

聚合酶链反应改良法检测石蜡包埋组织中的巨细胞病毒

聚合酶链反应改良法检测石蜡包埋组织中的巨细胞病毒钱丽清，张忠德，程新建，梁书锋，吴圣楣，顾友梅我们用二甲苯脱蜡粗提ＤＮＡ，简化了ＤＮＡ抽提步骤，用二次扩增代替一次扩增，提高了检测的敏感性，探求到一种既简便又敏感的用于石蜡包埋组织检测的改良聚合酶链反应...     

荧光定量聚合酶链反应检测技术在小儿巨细胞病毒感染诊断和治疗中的应用

目的 建立小儿人巨细胞病毒（HCMV）感染的分子诊断方法。方法 采用荧光定量聚合酶链反应（FQ－PCR）法测定45例疑诊HCMV感染的患儿，并与常规PCR及酶联免疫吸附试验（ELISA）比较。对确诊为HCMV肝炎的25例分别在5个时点（治疗前、出院时、3个月、6个月及9个月）监测其外周血白细胞中HCMV DNA拷贝（copies)数。结果 常规PCR、ELISA和FQ－PCR的阳性率分别为60．00％，33．33％和66．67％，灵敏度分别为84．38％，46．88％和93．75％。HCMV肝炎治疗组和对照组的HCMV DNA量在5个时点的差异有非常显著意义（P＜0．001）。以10^3 copies/ml的FQ－PCR值为临界值（≥10^3有症状，＜10^3无症状）可预测活动性HCMV感染的出现。结论 FQ－PCR可作为小儿HCMV感染的有效诊断方法之一，动态检测HCMV DNA含量有助于指导治疗、估计疾病的发展和预后。     

巨细胞病毒感染的诊断和产前诊断

巨细胞病毒感染因其发病率高、垂直传播带给胎儿的巨大危害而在优生产前诊断中受到广泛的重视。特别是近年发展起来的基因诊断、无创性诊断更是为其开辟了广阔的前景。本文就巨细胞病毒感染诊断的传统方法和最新方法加以论述。     

胎儿巨细胞病毒感染产前诊断的研究进展

巨细胞病毒宫内感染的危害性已经广为优生产前诊断工作者们熟知,引起越来越多的学者致力于研究产前诊断该病毒感染的新方法,特别在基因诊断。微创性诊断方而成果卓越。本文就巨细胞病毒产前诊断的最新进展综述如下。     

应用荧光定量聚合酶链反应产前诊断巨细胞病毒感染

目的探讨FQ-PCR产前诊断巨细胞病毒感染的临床应用价值。方法用FQ-PCR对20例巨细胞病毒感染孕妇的胎儿进行产前诊断,同时对孕妇感染CMV-DNA拷贝数的高低与发生垂直传播的关系进行了探讨。结果4例胎儿绒毛组织CMV-DNA阳性,阳性率为20%(4/20),CMV-DNA平均为5.0×106,±2.2×106拷贝/ml:16羊水标本阴性,CMV-DNA<25拷贝/ml,新生儿血、尿液CMV-DNA均阴性,产后临床追踪观察3年,无CMV感染迹象。孕妇感染CMV-DNA拷贝数的几何均数为8.0251±0.3986时,有可能发生垂直传播(t=16.24,P<0.01)。结论FQ-PCR产前诊断巨细胞病毒感染结果可靠,有一定的临床应用价值。     

巢式聚合酶链反应诊断肺炎衣原体感染的临床应用探讨

目的 应用并评价巢式聚合酶链反应技术诊断肺炎衣原体（Chlamyolia pueumoniae,Cp)感染。方法 采用以衣原体属及Cp种的16SrRNA特异片段为目的基因。对已知鼻咽拭子Cp培养结果的81例病例进行连续2次扩增,检测Cp基因组DNA,并对其应用予以评价。结果 以培养结果为标准。PCR方法的灵敏度为5/17（29.41%）,特异度为52/64（81.25%),阳性预计值为5/17（29.41%),特异度为52/64（81.25%)。阳性予计值为5/17（29.41%),阴性邓丈夫值为52/64（81.25%)。结论 这种巢式聚合酶链反应技术尚不能用于临床诊断Cp感染,有必要以诊断金标准对其应用进行评价。     

用PCR技术产前诊断人巨细胞病毒感染

用ＥＬＩＳＡ法筛选早孕妇女血人巨细胞病毒ＩｇＭ（ＨＣＭＶ－ＩｇＭ），在孕１２￣２０周用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术检测其羊水中ＨＣＭＶ－ＤＮＡ，对胎儿巨细胞病毒感染作出产前诊断。在３８４例孕妇中，筛选出血ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阳性２６例为实验组，其羊水ＨＣＭＶ－ＤＮＡ检出率为３４．６２％；从２５８例ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阴性中选出２０例为对照组，其羊水ＨＣＭＶ－ＤＮＡ检出率为１０．０％，两组比较有显著性差异（     

应用聚合酶链反应对有异常妊娠史妇女人巨细胞病毒感染的探讨

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对于有异常妊娠史妇女６０例，检测了血液、尿液和宫颈分泌物中的人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ；用ＥＬＩＳＡ检测血清中的ＨＣＭＶ－ＩｇＭ抗体。结果表明：有死胎、畸胎妊娠史的妇女，血、尿和宫颈分泌物中的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ以及ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阳性率分别为４２．８５％（１２／２８）、２８．５７％（８／２８）、５３．５７％（１５／２８）和２５．００％（７／２８）；习惯性流产史的妇女分别为２１．８７％（７／３２）、１２．５％（４／３２）、３１．２５％（１０／３２）和１５．６２（５／３２）；正常对照为１４．２８％（５／３５）、１１．４２％（４／３５）、１７．１４％（６／３５）和６．７１％（２／３５）。统计表明：畸胎、死胎组的血、尿和宫颈分泌物中的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ明显高于对照Ｐ＜０．０５，有显著差异。习惯性流产组的四项指标与对照比较均无差异Ｐ＞０．０５。结果提示，血清中的ＨＣＭＶ－ＩｇＭ的阳性率低于血液和宫颈分泌物中的阳性率，而接近于尿中的结果。不同部位的标本，以宫颈分泌物的阳性率最高，其次是血液，再其次是尿液。     

孕早期宫颈分泌物中获取胎儿细胞DNA进行产前诊断的可行性

目的：探索获取胎儿细胞DNA用于产前基因诊断的可行性，及能否用于预期胎儿性别。方法：收集92例孕早期人工流产妇女宫颈分泌物和绒毛组织，提取宫颈分泌物中DNA，扩增Y染色体特异重复序列DNA。短期培养制备绒毛染色体，分析核型确定流产胎儿性别。结果：92例经绒毛染色体核型分析的人工流产胎儿中，正确预期胎儿性别72例，准确率78％。结论：采集孕早期宫颈分泌物，可获得胎儿滋养层细胞DNA用于产前诊断，其准确性和可靠性有待进一步提高。     

聚合酶链反应技术对病毒性心肌炎诊断的临床及实验研究

采用聚合酶链反应技术，检测病毒性心肌炎患者血清及石蜡包埋心肌组织中的小ＲＮＡ病毒。用小ＲＮＡ病毒感染实验家兔，检测感染家兔血清及心肌组织中的小ＲＮＡ病毒，结果被感染家兔血清及心肌组织内皆呈小ＲＮＡ病毒阳性，而对照组未感染毒家兔血清及心肌组织检测为阴性。     

荧光定量PCR产前快速诊断唐氏综合征

目的探索荧光定量PCR方法在产前快速诊断唐氏综合征中的作用。方法收集65例妊娠20~24w,进行羊水穿刺胎儿细胞培养染色体核型分析的胎儿羊水,采用荧光定量PCR技术对标本D21S11位点进行PCR扩增、检测,并与染色体核型分析的结果进行对照分析。结果65例未培养羊水标本经过荧光定量PCR检测,发现2例唐氏综合征,显示1:1:1三条或2:1两条D21S11位点等位基因带,63例显示1:1两条带;与细胞培养染色体核型分析的结果基本一致。结论荧光定量PCR技术具有检测速度快、需要模板量少,检测结果准确等特点,可用于染色体异常的产前快速诊断。     

毛细管PCR技术在传染病快速诊断上的初步应用

常规ＰＣＲ反应需要２～６小时，而在毛细管ＰＣＲ反应中，由于采用毛细管作为反应容器，因此能在１５分钟完成３０个循环。对国产毛细管ＰＣＲ仪进行优化的结果表明：循环参数为９４℃０秒（即＜１秒），５０℃～５５℃０秒，７２℃２０秒，ＰＣＲ反应达到最佳。敏感性实验表明：常规ＰＣＲ可检测１．０ｆｇＨＢＶＤＮＡ，毛细管ＰＣＲ可检测０．１ｆｇＨＢＶＤＮＡ。用１１种引物从多种标本中成功地扩增了９种病原微生物相应基因片段。建立了ＫＩ－玻璃粉法快速制备ＰＣＲ模板的方法，几乎适合所有类型的临床标本。将毛细管ＰＣＲ用于检测血清中ＨＢＶＤＮＡ，结合快速热处理法制备ＰＣＲ模板，可在１．５小时内对２０例标本报告结果。毛细管ＰＣＲ技术的建立，为传染病的基因诊断向快速化发展开辟了新的途径。