干血斑样本用于HIV-1基因型耐药性检测的研究

目的研究干血斑（Dried blood spots,DBS）样本用于人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）耐药性检测的可行性。方法采集受检者外周静脉抗凝血,制备干血斑样本,提取病毒RNA,逆转录套式聚合酶链反应（RT-nestedPCR）扩增HIV pol区基因序列,应用Bioedit软件分析整理后,提交theStanfordsoftware进行耐药序列分析及亚型分析。用Bayer 340bDNA核酸定量分析仪测定血浆病毒载量（VL）。结果血浆VL〉1000拷贝／ml的16例DBS和血浆（PLA）样本,扩增阳性率均为100％;血浆VL〈1000拷贝／ml的8例治疗病人的PLA样本,扩增阳性率为25％（2／8）;而DBS样本扩增阳性率为0（0／8）。DBS和PLA样本用于亚型分析结果-致,11例样本均为AE亚型。耐药性分析结果,除了极个别其它突变位点有差异外,所有的蛋白酶抑制剂主要及次要耐药相关突变,以及核苷类逆转录酶抑制剂（NRTI）耐药突变和非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTI）耐药突变完全相同。7例治疗病人中,对NRTI（6／7）和NNRTI（5／7）耐药率高,而且为多重耐药。结论干血斑作为-种易采集、保存条件低、便于运输的血样本,可以替代静脉采血,用于在-些实验设备条件略差的偏远地区,以及难采血病人的耐药性监测和亚型分析。     

深圳地区男男同性恋人群中HIV-1感染者耐药基因变异研究

目的调查分析深圳地区未接受抗病毒治疗的男男同性恋人群中,人免疫缺陷病毒（HIV）感染者的耐药突变流行情况,以进一步指导抗病毒药物的选择。方法收集2007—2008年,从未接受抗病毒治疗的男男同性恋人群中HIV—1感染者的血浆,采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和套式聚合酶链反应（Nested—PCR）方法,扩增蛋白酶（PR）1基因区和反转录酶（RT）基因区,并对扩增片断进行序列测定和分析,并用Mega等软件构建进化树及亚型分析。结果共获得94份HIV-1分离株的完整的PR和RT基因序列,发生耐药突变位点的35份（37．2％）样本序列检出42个耐药性突变位点,其中1份样本产生了核苷类抑制剂（NRTI）、非核苷类抑制剂（NNRTI）耐药性突变,以及蛋白酶抑制剂（PI）主要耐药突变和P1次要耐药突变;5份样本产生了NRTI耐药性突变,20份样本产生了NNRTI耐药性突变,9份样本产生了P1次要耐药突变。非核苷类耐药性突变、核苷类耐药性突变和P1次要耐药突变位点分别以V179E、V118I和A71V为主,分别占65．0％（13／20）、66．7％（4／6）和55．6％（5／9）。结论深圳地区男男同性恋人群中的、未经抗病毒治疗的HIV1感染者中,存在原发性耐药相关基因突变位点变异,耐药基因变异处于较低水平的流行状态。     

福建省HIV-毒株耐药基因变异分析

目的了解福建省I型艾滋病病毒（HIV-1）的耐药基因变异情况。方法选取2005-2012年福建省抗病毒治疗1年以上、病毒载量高于1000拷贝／mL的HIV感染者／艾滋病病人标本,进行基因型耐药性检测。同时收集前期研究中的耐药性检测数据进行对比分析。结果共检测73例病毒学治疗失败病人标本,其中60例（82.19％）成功扩增序列,结合125份未接受抗病毒治疗者的样本,共获得185份样本进行耐药分析。未治疗组和治疗组对蛋白酶抑制剂（PI）的耐药发生率均较低,分别为1.60％（2／125）和8.33％（5／60）;未治疗组对反转录酶抑制剂（RTI）的耐药发生率为4.80％（6／125）;治疗组对RTI耐药发生率较高,为61.67％（37／60）,尤其是对NVP、EFV、3TC和FTC。最常见的耐药突变有M184V、D67N、K70R、K219Q、T215F、G190A、Y181C和K103N。结论福建省HIV-1感染者的总体原发性耐药突变率较低,病毒学治疗失败病人对PI耐药发生率仍处于低水平,但对RTI耐药发生率较高。     

安徽省一线抗反转录病毒治疗失败的AIDS病人的耐药基因变异分析

目的了解安徽省一线抗反转录病毒治疗失败的艾滋病(AIDS)病人耐药基因变异情况。方法调查一线抗反转录病毒治疗失败的AIDS病人的人口学及流行病学特征,检测CD4及病毒载量,对病毒载量高于1 000拷贝/ml的病人进行基因型耐药检测。结果共调查61例AIDS病人,其中有41例病毒载量高于1 000拷贝/ml。40例成功扩增序列,基因型耐药检测的成功率为97.56%(40/41)。在40例AIDS病人中,核苷类反转录酶抑制剂(NRTI)相关耐药基因突变率居于前三位的,分别是M184V、T215Y和M41L,非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTI)相关基因耐药突变率居于前三位的,分别是K103N、Y181C和G190A,没有发现与蛋白酶抑制剂(PI)相关耐药基因突变。结论一线抗反转录病毒治疗失败的主要原因是出现NRTI和NNRTI耐药突变。在选择二线治疗方案时,要充分利用基因耐药检测评估抗反转录病毒药物的敏感性,尽量使用对HIV敏感的抗病毒药物,增加PI类药物,避免交叉耐药带来的治疗失败。     

HAART预防艾滋病母婴传播的可行性和有效性

目的总结和分析在云南省边远的农村地区,对孕妇实施高效反转录病毒治疗（HAART）以预防艾滋病病毒（HIV）母婴传播（PMTCT）的有效性和可行性。方法梳理和定量分析2005—2012年,云南省与美国艾伦戴蒙德艾滋病研究中心开展的预防艾滋病母婴传播项目的效果。结果在1861名HIV阳性孕妇中,1353名孕妇（72．7％）采用了HAART阻断方案。在1584名有HIV检测结果的婴儿中,阳性25人,阳性率为1．58％;其中1168名采用HAART妇女所生的婴儿中,仅有9人阳性,阳性率为0．8％;在孕28周前开始HAART的妇女所生婴儿中,HIV阳性率为0．2％（2／899）。结论HAART对于阻断HIV母婴传播效果非常显著,如果在孕28周前开始HAART,婴儿HIV感染率已经非常接近“零感染”的目标,可以推广和实施。     

血浆HIV-1 RNA与干血斑HIV-1 DNA基因型耐药检测比较

目的 通过对不同病毒载量的同一研究对象同时进行血浆HIV-1 RNA与干血斑HIV-1 DNA的基因型耐药检测并对结果进行比较,探讨HIV-1 DNA用于耐药检测的可行性和用途。方法 2021年12月采集云南省、广西壮族自治区及新疆维吾尔自治区接受ART后1年以上的HIV/AIDS患者静脉血5 mL,EDTA抗凝,分离血浆和制备成干血斑样本,分别提取病毒DNA和RNA进行pol区扩增,比较两种方法的扩增效率;并对同时扩增成功的序列利用MEGA7构建系统进化树并分析序列一致性。利用斯坦福大学HIV耐药数据库进行耐药位点分析,比较耐药性结果。结果 209例样本中,来自云南82份（39.2%）,来自广西壮族自治区69份（33.0%）,来自新疆维吾尔自治区58份（27.8%）。105例VL<20拷贝/mL,25例20拷贝/mL≤VL<200拷贝/mL,42例200拷贝/mL≤VL<1 000拷贝/mL,37例VL≥1 000拷贝/mL。不同病毒载量的样本分类中,使用血浆中HIV-RNA pol区扩增成功率分别为12.4%、28.0%、69.0%、89.2%;使用干血斑中HIV...     

温州地区HIV/AIDS病人抗病毒治疗后耐药基因变异研究

目的通过调查分析温州地区已接受抗病毒治疗病人体内艾滋病病毒(HIV)毒株的耐药基因的突变发生率,为采取相应防治措施提供可靠的依据,同时指导抗病毒药物的使用。方法收集温州的11个县市区在2010-2015年接受抗病毒治疗的HIV感染者/艾滋病(AIDS)病人625例,病毒载量大于1 000拷贝/mL的70例,进行HIV蛋白酶(PR)全长和部分反转录酶(RT)基因的扩增、脱氧核糖核酸(DNA)测序、亚型鉴定,并与国际HIV耐药数据库比对分析。结果在68例获得有效序列患者中,其中亚型分布显示,CRF01_AE占52.94%(36/68),B亚型占17.65%(12/68),BC重组占25.00%(17/68),C亚型占4.41%(3/68)。抗病毒治疗患者对蛋白酶抑制剂(PI)、核苷类反转录酶抑制剂(NRTI)和非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTI)的耐药率,分别为0.48%(3/625),7.84%(49/625)和8.32%(52/625),总耐药率为8.80%(55/625)。NRTI主要突变位点为M184V,NNRTI主要突变位点为Y181C。结论通过对抗病毒治疗病人调查发现,温州总体耐药率处于较低水平。M184V、Y181C突变位点检出率高,耐药的严重程度依次为NNRTIsNRTIsPIs。应结合实际,科学合理用药。     

基于干血斑的北京地区未治疗的男男性行为者HIV-1传播耐药性分析

目的为了掌握男男性行为者(MSM)中1型艾滋病病毒(HIV-1)传播耐药性(TDR)的发生率,本研究以干血斑(DBS)样本为材料,探究了北京地区未进行抗病毒治疗(ART)的MSM中传播耐药性情况。方法 2017年7月至2018年4月期间,招募HIV-1阳性且未开始ART的MSM,采集其DBS样本。对HIV-1pol基因蛋白酶区和反转录酶区进行扩增并测序。通过斯坦福大学耐药突变数据库确定样本的耐药情况,并根据世界卫生组织提供的突变列表确定筛选出传播耐药突变。结果共收集到141份符合要求的DBS样本,对其中的137份成功进行扩增测序。结果表明,MSM中的传播耐药性突变的发生率为6.6%(9/137)。其中,非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTI)相关耐药突变占比最多(3.6%),其次为核苷类反转录酶抑制剂(NRTI,2.9%)和蛋白酶抑制剂(PI,2.2%)。出现频率最高的NNRTI耐药突变为K103N(3/5),NRTI耐药突变为M184I(4/4),PI耐药突变为M46I(2/3)。结论北京地区MSM中TDR的发生率相对较高,ART开始前对该人群进行耐药检测具有重要意义。     

浙江省三个城市274例HAART病人耐药性及其影响因素

目的了解浙江省杭州、宁波、温州三个市艾滋病病毒(HIV)感染者/艾滋病(AIDS)(简称HIV/AIDS病人)高效抗反转录病毒治疗(HAART)后,HIV-1基因耐药性的影响因素。方法在三个治疗病人数最多的市,采用问卷调查和血液采集,检测病人病毒载量,对病毒载量大于1 000IU/mL的样本,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和扩增测序(In-house)法扩增测序,使用斯坦福大学HIV耐药数据库对比得到基因耐药结果。结果共274例研究对象纳入研究分析,HIV-1毒株总耐药率为7.7%。治疗时间1-3年的耐药率差异无统计学意义(χ2=0.554,P=0.456),治疗4-5年后,耐药率差异有统计学意义(P=0.004,P=0.028)。HIV-1毒株对核苷类(NRTI)和非核苷类(NNRTI)抗病毒治疗药物的耐药程度,明显高于蛋白酶抑制剂(PI)(χ2=29.672,P<0.001),核苷类反转录酶抑制剂与非核苷类相比,耐药程度无统计学差异(χ2=2.875,P=0.593)。在多因素Logistic回归模型分析中,吸毒、无固定性伴、治疗方案D4T+3TC+NVP和治疗方案AZT+3TC+NVP与耐药发生的关联具有统计学意义。结论浙江省进行HAART的AIDS病人,其体内毒株已经出现耐药现象,但耐药率处于较低水平。应加强对吸毒人群和无配偶或无固定性伴人群的随访,提高服药依从性,对各相关的治疗方案要加强监测,有利于降低耐药的发生。     

HIV-1侵入细胞抑制剂研究进展

目前高效抗逆转录病毒治疗(highly active an-tiretroviral therapy,HAART)已广泛用于抗人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染,该法系用核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)、非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI)和蛋白酶抑制剂(PI)联合治疗,主要作用于HIV-1的逆转录酶和蛋白质前体,阻断病毒核酸和蛋白质的合成,可明显     

临沧市2012年高效抗反转录病毒治疗失败的AIDS患者耐药基因变异分析

目的：了解临沧市2012年经高效抗反转录病毒治疗（highly active antiretroviral therapy, HAART）失败的AIDS患者耐药基因的变异情况。方法调查HAART失败AIDS患者的流行病学特征,检测CD4＋T淋巴细胞计数和病毒载量,对HIV RNA＞1×10^3 copies/ml的患者行HIV-1耐药基因检测。结果66例中有53例检出基因耐药突变。最常见的核苷类反转录酶抑制剂耐药突变位点为M184V、D67N和K70R,非核苷类反转录酶抑制剂耐药突变位点为K103N、G190A和V179D。仅发现3个蛋白酶抑制剂突变位点,分别为D33F、M46I和L76V。结论临沧市AIDS患者出现较多反转录酶抑制剂突变位点是一线抗反转录病毒治疗失败的主要原因。在选择二线治疗方案时,增加蛋白酶抑制剂可避免多重耐药导致的治疗失败。     

德宏地区艾滋病病人ART后的耐药性观察

目的了解德宏地区艾滋病（AIDS）病人在进行抗反转录病毒治疗（ART）后,发生耐药的情况。方法为德宏地区进行ART的病人检测CD4＋T淋巴细胞计数、病毒载量及基因型耐药性,以SPSS 17.0分析病人的耐药数据。结果 78例病人中,男49例,女29例,以汉族（41.0%）和景颇族（34.6%）病人为多,农民占71.8%。随访地点主要在陇川（43.6%）和潞西（37.2%）。性传播、静脉吸毒传播和母婴垂直传播分别占53.8%（42/78）、30.8%（24/78）和15.4%（12/78）。ART 24个月后最常见的核苷类反转录酶抑制剂的耐药突变是M184I/V、D67N/S、T69F和T215F/Y,非核苷类反转录酶抑制剂耐药突变中K101E/I/Q、K103N/R/S/V、Y181C和G190A/S发生率最高,蛋白酶抑制剂耐药突变较少。结论德宏地区AIDS病人ART后出现较多反转录酶耐药位点,ART规范应加强并提高服药依从性。     

湖南省6558例HIV/AIDS病人HAART疗效及不良反应分析

目的了解湖南省开展艾滋病病毒（HIV）感染者/艾滋病（AIDS）病人（简称HIV/AIDS病人）高效抗反转录病毒治疗（HAART）的疗效、不良反应及耐药等情况。方法采用回顾性研究,对湖南省2003年9月至2012年12月间接受HAART的病例进行分析。结果共有6558例HIV/AIDS病人接受了HAART：1）CD＋4T淋巴细胞（简称CD4细胞）计数随治疗时间的延长明显升高,按照基线CD4细胞水平划分为≤99个/μL、100~199个/μL、200~350个/μL三组,然后做两两比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。2）在治疗后7-12个月,64%的病人体内病毒复制得到了完全抑制,病毒载量检测值〈50拷贝/mL;在治疗后7-12个月,病毒载量〈50拷贝/mL的比例及病毒载量常用对数值lgVL变化幅度最大,12个月以后下降趋势减缓,约3年后进入平台期。3）服药后较常见的不良反应是胃口改变、恶心呕吐、皮疹及疲倦等,因不良反应更换治疗方案的病例占总换药病例的70.1%（1719/2451）,因不良反应停药占总停药病例的33.6%（178/529）。4）最近一次病毒载量检测〈50拷贝/mL的2739例病人中,连续2次CD4细胞计数较基线水平增幅〈20%,或治疗一年以上未达200个/μL的共375例,免疫无应答比例13.7%。5）2011及2012连续两年耐药监测显示,总耐药率为2.6%,处于较低水平。结论湖南省艾滋病HAART在免疫学和病毒学方面均取得了较好的疗效,需进一步加强不良反应、免疫无应答及耐药情况的监测和处理。     

红河州HAART的HIV／AIDS病人的耐药性及其影响因素

目的了解红河州接受高效抗反转录病毒治疗（HAART）后,艾滋病病毒（HIV）感染者/艾滋病（AIDS）病人（简称HIV/AIDS病人）体内HIV基因耐药性及其影响因素。方法选择2005-2011年入组的、抗病毒治疗超过1年的在治病人3371例,于2010-2012年间检测血浆HIV病毒载量,对病毒载量〉1000拷贝/mL的样本进行聚合酶链反应（PCR）和扩增测序,使用斯坦福大学HIV耐药数据库对比得到基因耐药结果。结果治疗1年以上的3371例病人做过血浆HIV病毒载量检测,HIV毒株总耐药率为4.5%（152/3371）,对核苷类反转酶抑制剂（NRTIs）的耐药率为3.1%（105/3371）、对非核苷类反转录酶抑制剂（NNRTIs）的耐药率为3.7%（121/3291）、对蛋白酶抑制剂（PIs）的耐药率2.5%（2/80）,对NRTIs、NNRTIs的耐药程度明显高于PIs类（χ^2=94.791,P〈0.05）。最为常见的耐药基因位点有M184V、D67N、T215Y、K219R、K70R、K103N、Y181C、G190A、K101P。经静脉吸毒感染者,HIV的耐药发生率高于性接触途径感染者（χ^2=10.898,P〈0.005）。在多因素Logistic回归模型分析中,近期吸毒、无固定性伴、不规范服药与耐药的发生呈负相关。结论云南省红河州进行HAART治疗的HIV/AIDS病人中,HIV毒株耐药率处于较低水平,对PIs耐药率极低,PIs仍可作为非核苷类药物耐药后的替代药品。应加强吸毒、无配偶或无固定性伴病人的随访,提高服药依从性,及时检测血浆病毒载量,有利于降低耐药的发生。     

The association between primary antiretroviral resistance and HAART virologic failure in a developing set

Santos is a Brazilian port city with high HIV incidence, high primary antiretroviral resistance levels, high HIV-1 BF recombinants prevalence, and high rates of antiretroviral virologic failure. We evaluated factors related to virologic failure after 48 weeks of HAART in this population. We compared demographic and HIV profiles among 43 individuals with virologic failure (group 1) and 37 with virologic success (group 2) after 48 weeks of HAART initiation. The overall primary antiretroviral resistance prevalence was 31.2%; 46.5% in group 1 and 13.5% in group 2 (p?相似文献   

中国部分地区应用高效抗逆转录病毒治疗HIV-1患者的耐药性检测

目的了解我国应用高效抗逆转录病毒治疗的人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者中耐药情况.方法收集我国上海、河南及安徽等地116份应用抗病毒治疗患者的血浆标本,采用逆转录聚合酶链反应扩增pol基因片段并进行序列测定,通过HIV耐药性数据库进行耐药相关性突变分析,并构建进化树.结果共获得44例HIV-1分离株的pol基因序列,有70%（31/44）的标本发现了针对常用的三类抗逆转录病毒药物的主要耐药性突变,其中有34%（15/44）的标本发现了针对核苷类逆转录酶抑制剂（NRTIs）的耐药性突变;有68%（30/44）的标本发现了针对非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTIs）的耐药性突变;仅有2%（1/44）的标本发现了对蛋白酶抑制剂（PIs）类药物的主要耐药性突变.亚型分析表明91%（40/44）为B亚型.结论在我国应用抗逆转录病毒治疗的患者中耐药性的产生已经十分严重,尤其是针对NNRTIs的高度耐药性较为突出,迫切需要应用耐药性检测进行指导.