姜黄素通过影响自噬调控肝细胞上皮间质转化及肝纤维化进程的作用与机制研究

目的明确自噬在姜黄素调控肝细胞上皮间质转化进程及向肌成纤维细胞转变中的作用,阐明其中的调控机制。方法小鼠胚胎肝细胞BNL CL.2,与构建的BECN1基因干扰BNL CL.2细胞,以TGF-β1(2μg·L~(-1))处理细胞,给予姜黄素(10、20、30μmol·L~(-1))干预,real-time PCR与Western blot检测BNL CL.2细胞Beclin-1、LC3、Vimentin及α-SMA基因与蛋白的表达情况,光学显微镜下观察细胞形态变化,GFP-LC3质粒转染监测细胞自噬水平变化。结果 TGF-β1处理后,自噬水平下降,BNL CL.2细胞Vimentin及α-SMA表达增加,细胞形态发生间质型转变。姜黄素能抑制TGF-β1诱导后肝细胞Vimentin及α-SMA的表达,增加肝细胞自噬相关基因与蛋白BECN1、LC3的表达,升高细胞自噬水平,抑制肝细胞的上皮间质转化进程。干扰自噬相关基因BECN1后,姜黄素抑制肝细胞上皮间质转化的效应被部分阻断。结论姜黄素通过提高肝细胞自噬水平,抑制肝细胞上皮间质转化进程,进而抑制肝纤维化的发生与发展。     

R59022调节心肌细胞自噬促进ET-1诱导的乳鼠心肌细胞肥大

目的研究甘油二酯激酶(DGK)的抑制剂R59022对心肌细胞自噬及内皮素1(ET-1)诱导的心肌肥大的影响,并探讨其可能机制。方法原代培养乳鼠心肌细胞,ET-1诱导乳鼠心肌细胞肥大;Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、beclin-1、p62的表达以及Akt的磷酸化及非磷酸化蛋白表达;RT-PCR技术检测心肌肥大基因脑钠肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)的mRNA表达水平;细胞免疫荧光检测心肌细胞表面积。结果 ET-1作用乳鼠心肌细胞24 h明显促进心肌细胞肥大,并诱导自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、beclin-1的表达增强,p62表达减弱。自噬抑制剂氯喹(CQ)、3-甲基腺嘌呤(3-MIA)减小心肌细胞表面积,下调肥大基因BNP、β-MHC的mRNA表达,改善ET-1诱导的心肌细胞肥大,而自噬激动剂雷帕霉素(RAPA)则促进ET-1诱导心肌细胞肥大;R59022预处理增加ET-1诱导的LC3-Ⅱ/Ⅰ、beclin-1的表达,增强ET-1诱导的心肌细胞自噬,同时进一步促进ET-1诱导的心肌细胞表面积的增大,BNP、β-MHC的mRNA表达水平的增加,促进ET-1诱导的心肌细胞肥大;对Akt表达的结果显示,ET-1明显下调Akt的磷酸化水平,R59022对此有促进作用。结论 R59022增强ET-1诱导的心肌细胞自噬,促进心肌细胞肥大,其机制可能与抑制Akt的激活,从而抑制mTOR通路的活化有关。     

基于多数据库筛选胃癌的自噬相关基因及预后预测模型的建立

目的 通过多种癌症基因数据库构建胃癌自噬相关基因（ARGs）预后预测模型。方法 从人类自噬数据库和GSEA分子特征数据库获得自噬基因,与GEO数据库得到的胃癌差异表达基因进行比对,从而筛选出胃癌ARGs。对胃癌ARGs进行富集分析及通路分析、多因素COX回归分析,筛选关键ARGs,应用R语言进行生存曲线分析、构建列线图及预测模型并对模型进行检验。结果 从多种数据库下载得到胃癌差异表达基因和自噬基因,从中筛选出102个重合基因即胃癌ARGs,Lasso回归和COX多因素分析筛选最终得到2个关键ARGs,即DYNC1I1、RNASE1。基于两个基因建立1、3、5年生存期预测模型和诺莫列线图校正曲线,C值为0.68,提示该模型有相对较好的预测能力。结论 本研究构建了基于DYNC1I1、RNASE1两个关键ARGs胃癌预后风险模型,该模型可有效预测胃癌患者预后。     

子宫内膜异位症在位内膜中自噬相关基因及ceRNA网络的作用

目的 通过筛选子宫内膜异位症在位内膜中的自噬相关基因,明晰竞争性内源性RNA(ceRNA)网络在子宫内膜异位症中的作用。方法 从GEO数据库和Human Autophagy Database数据库分别获取子宫内膜异位症数据集和自噬相关基因列表,查找自噬相关基因,通过预测和相关性筛选miRNA和LncRNA并构建ceRNA网络。验证筛选得到的关键基因在其他子宫内膜异位症在位内膜数据集的表达及诊断效能。结果 子宫内膜异位症在位内膜中有39个自噬相关基因存在表达差异,通过PPI查找到7个关键基因,功能富集在巨自噬、线粒体自噬和激活转录因子等,信号通路主要涉及E2F、FOXO、DNA损伤修复、FAS信号通路、PI3K/Akt/mTOR等。构建11个ceRNA调控网络,包括4个mRNA(CASP3、HIF1A、CDKN1A、RPS6KB1)、7个miRNA(hsa-let-7e-5p、hsa-miR-124-3p、hsa-miR-199a-5p、hsa-miR-200c-3p、hsa-miR-24-3p、hsa-miR-30a-5p和hsa-miR-382-5p)和8个LncRNA(NORAD、...     

自噬促进IL-1β诱导的大鼠INS-1胰岛β细胞凋亡

目的观察自噬在IL-1β促进INS-1胰岛β细胞凋亡中的作用。方法体外培养大鼠INS-1胰岛β细胞株,给予不同浓度IL-1β干预,用CCK-8法检测在不同作用时间点INS-1细胞的存活率;用Western blot技术检测不同IL-1β浓度下自噬相关蛋白LC3、Beclin1、P62的表达水平;Western blot法和流式细胞术检测INS-1细胞的凋亡水平。结果 IL-1β可以降低INS-1细胞的存活率,且呈浓度及时间依赖性(P<0.05,P<0.01)。与对照组相比,随着IL-1β浓度的增高,INS-1细胞凋亡水平逐渐升高(P<0.05),且细胞自噬水平也随着IL-1β浓度的增高而逐渐增高(自噬相关蛋白LC3、Beclin1表达上升,P62降低,P<0.05)。采用自噬激动剂雷帕霉素预处理细胞上调自噬可进一步增加IL-1β诱导的细胞凋亡,而用自噬抑制剂3-MA预处理抑制细胞自噬后则可逆转IL-1β诱导的INS-1胰岛细胞凋亡。结论 IL-1β通过诱导自噬增加促进INS-1胰岛β细胞凋亡。     

苍术素调节腺苷酸活化蛋白激酶 /沉默信息调节因子 1信号通路对白细胞介素 -1β诱导软骨细胞自噬和凋亡的影响

目的探讨苍术素(ATR)通过调节腺苷酸活化蛋白激酶 /沉默信息调节因子 1(AMPK/SIRT1)信号通路对白细胞介素 1β(IL-1β)诱导的乳鼠软骨细胞自噬与凋亡的影响。方法 2022年 1―8月从乳鼠中分离软骨细胞并鉴定;使用不同浓度苍术素(0、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 μmol/L)预处理软骨细胞,再使用 IL-1β诱导软骨细胞培养 24 h,噻唑蓝( MTT)法检测增殖活性,筛选最佳药物浓度;将软骨细胞分为对照组、 IL-1β组( 10 μg/L IL-1β)、苍术素组( 10 μg/L IL-1β+20μmol/L苍术素)、苍术素 +AMPK抑制剂组(苍术素 +compound C组, 10 μg/L IL-1β+20 μmol/L苍术素 +50 μmol/L compound C);流式细胞术与 TUNEL法检测软骨细胞凋亡,单丹磺酰尸胺( MDC)染色观察自噬小体;蛋白质印迹法检测自噬及 AMPK/SIRT1通路相关蛋白表达。结果与对照组比较, IL-1β组软骨细胞增殖活性、自噬水平、微管相关蛋白轻链 3Ⅱ/Ⅰ(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)［( 0.47±0.08)比( 1.23±0.14)］、 Beclin-1［( 0.67±0.09)比( 1.45±0.19)］、自噬相关基因 -5(Atg5)［( 0.35±0.06)比( 1.14±0.13)］、磷酸化 AMPK(p-AMPK)［(0.37±0.05)比( 0.91±0.05)］、SIRT1［(0.51±0.06)比( 1.31±0.14)］磷酸化 Unc-51样自噬激活蛋白酶(p-ULK1)蛋白表达［(0.25±0.04)比(0.85±0.11)］降低,细胞凋亡率［(28.46±3.55)%比( 2.54±0.82)%］升高( P<0.05);与 IL-1β组比较,苍术素组细胞增殖活性、自噬水平、 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、Atg5、p-AMPK、SIRT1、p-ULK1蛋白表达升高,细胞凋亡率降低( P<0.05); compound C可逆转苍术素对 IL-1β诱导的软骨细胞自噬激活作用。结论苍术素通过激活 AMPK/SIRT1信号通路促进 IL-1β诱导的大鼠软骨细胞自噬,抑制细胞凋亡。     

基于生物信息学及机器学习算法筛选脓毒血症铁死亡相关基因的研究分析

目的利用公共数据库中相关数据联合机器学习算法筛选脓毒血症中铁死亡相关基因, 并分析其作用的理论依据, 为脓毒血症的诊疗提供理论依据。方法从GEO数据库获取脓毒血症患者的样本, 其中GSE185263作为训练数据集分析, GSE154918作为外部验证数据集。先获取铁死亡相关的差异表达基因(differentially expressed genes, DEGs), 并进行基因本论(gene ontology, GO)富集分析、京都基因与基因组百科全书(Kyotoencyclopedia of genes and genomes, KEGG)通路分析和疾病本体(disease ontology, DO)富集分析。再运用LASSO回归、SVM-RFE机器学习算法筛选铁死亡相关基因, 并基于获得基因的表达含量, 构建列线图用以预测脓毒血症。最后, 分析正常对照组和脓毒血症组之间的免疫细胞浸润差异。结果共获取87个铁死亡相关的DEGs, GO富集显示生物学过程主要富集在氧化应激、凋亡信号的调控路径、细胞衰老、神经元死亡的调节等方面;细胞组分富集在自噬体、核包膜和二级溶酶体等方面;分子功能富集在...     

钙络合剂BAPTA-AM对胞外酸化诱导大鼠关节软骨细胞自噬作用的影响及其可能机制

目的观察BAPTA-AM对胞外酸化诱导大鼠关节软骨细胞自噬作用的影响,探讨其可能的作用机制。方法体外使用胰酶-Ⅱ型胶原酶消化法分离提取大鼠关节软骨细胞,分为正常组(p H 7.4)、酸化组(p H 6.0)、以及分别经BAPTA-AM处理的正常组和酸化组,激光共聚焦技术检测软骨细胞胞内钙离子变化,实时荧光定量PCR法检测细胞自噬基因Beclin-1、ULK1 mRNA的表达,Western blot法检测自噬蛋白LC3的表达,吖啶橙染色分析细胞自噬溶酶体形成情况。结果与p H 7.4正常组比较,p H 6.0酸化刺激明显增加大鼠关节软骨细胞内Ca2+的浓度,且自噬标志物Beclin-1、ULK1 mRNA及LC3Ⅱ蛋白表达均明显升高,酸性自噬溶酶体形成增多,同时酸化刺激能引起Ca MKKβ及pAMPK蛋白表达水平增高,磷酸化蛋白p-m TOR水平明显降低。BAPTA-AM酸化组自噬水平和Ca MKKβ及p-AMPK表达明显降低,p-m TOR表达明显升高。结论 BAPTA-AM能明显减弱胞外酸化诱导软骨细胞自噬作用,其机制可能与抑制胞内Ca2+有关。     

Cu~(2+)抑制小胶质细胞内自噬-溶酶体途径介导的Aβ寡聚体清除

目的探讨Cu~(2+)对小胶质细胞(MG)内自噬-溶酶体途径介导的Aβ寡聚体(Aβo)清除功能的调控作用及其机制。方法应用ELISA检测MG对Aβo的摄取和细胞内降解;应用Western蛋白印迹法及免疫荧光技术检测Cu~(2+)刺激下MG内自噬相关蛋白及溶酶体相关蛋白的表达变化;应用单荧光和双荧光质粒转染实验检测自噬体和自噬流变化;应用Lyso Tracker red荧光探针检测溶酶体体积改变。结果 (1) Cu~(2+)处理BV-2细胞后可导致Aβo清除(包括摄取和细胞内降解)障碍。(2)并引起自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ和自噬底物P62蛋白水平升高;GFP-LC3转染结果显示,Cu~(2+)刺激后自噬体数量增加。(3)溶酶体酸化抑制剂bafilomycin A1处理后,LC3-Ⅱ蛋白水平较赋形剂处理组明显升高,但bafilomycin A1+Cu~(2+)刺激未导致LC3-Ⅱ蛋白水平的进一步升高;自噬体形成抑制剂3-MA预处理后,Cu~(2+)仍可以增强LC3-II水平;提示Cu~(2+)可能是通过抑制溶酶体降解过程导致LC3-Ⅱ蛋白水平升高,即抑制自噬降解过程。(4) RFP-GFP-LC3质粒转染结果显示,Cu~(2+)可导致自噬流障碍。(5) Cu~(2+)可导致溶酶体LAMP1和总Cat B(包括pro Cat B和mature Cat B)表达下降,并降低溶酶体体积。(6) Cu~(2+)处理后,转录因子TFEB蛋白水平及其溶酶体相关靶基因的表达均有下调;(7) Cu~(2+)可增强m TOR及其底物蛋白p70S6k磷酸化水平,提示m TORC1可能参与了Cu~(2+)调控自噬及溶酶体功能的作用;(8)应用m TORC1抑制剂PP242预处理,可显著改善Cu~(2+)导致的LC3-Ⅱ和P62蛋白水平升高及自噬流障碍,TFEB及其靶基因表达下调,溶酶体生物合成及体积下降,以及Aβo清除障碍。结论Cu~(2+)可能通过m TORC1-TFEB通路抑制性调控MG自噬-溶酶体途径介导的Aβo清除;m TORC1抑制剂PP242可改善Cu~(2+)作用。     

基于生物信息学和CMap数据库分析肺癌相关基因及潜在治疗药物

目的 基于生物信息学和关联性图谱(CMap)数据库筛选肺癌相关基因及其潜在的治疗药物,为肺癌的治疗提供新思路。方法 从基因表达数据库(GEO)中选择GSE89039、GSE118370和GSE136043,采用R软件筛选差异表达基因(DEGs),将DEGs进行GO和KEGG富集分析,并构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络;使用基因表达谱交互分析(GEPIA)验证枢纽基因的表达以及预后价值;采用CMap数据库筛选具有肺癌治疗作用的潜在候选药物。结果 我们共确定了530个DEGs,包括150个上调基因和380个下调基因。这些DEGs主要富集在细胞外基质(ECM)-受体相互作用、细胞黏附等方面。PPI网络由527个节点,1 298条连接线组成,前十个枢纽基因分别为SDC1、CDH5、FGF2、PECAM1、IL6、CAV1、MMP9、SPP1、VWF、PPARG。通过GEPIA分析这些枢纽基因相关的总生存期(OS),结果显示SPP1对OS具有显著影响。使用CMap数据库筛选出的对肺癌具有潜在治疗作用的FDA批准上市的候选药物,包括腺苷脱氨酶抑制剂(克拉屈滨)、核糖苷还原酶抑制剂(氯法拉滨...     

丙泊酚对新生小鼠海马组织基因表达谱的影响研究

目的 通过生物信息学分析丙泊酚对新生小鼠海马组织基因表达谱的影响,对差异表达基因(DEGs)涉及的功能进行预测,并找出关键的差异表达基因,为后续的机制研究提供理论基础.方法 从基因芯片公共数据库(GEO)中获取丙泊酚处理的新生小鼠海马组织基因表达谱数据集GSE106799,以|logFC|＞1及FDR＜0.05为筛选标...     

小胶质细胞通过外泌体释放烟酰胺磷酸核糖转移酶

目的探索炎症条件下小胶质细胞释放烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)的机制。方法采用原代培养的小胶质细胞和小胶质细胞株BV2细胞,以缺糖缺氧再灌注(OGD/R)、TNF-α和ATP诱导细胞炎症,以经典的蛋白释放途径抑制剂和P2X7受体阻断剂、钙离子载体、钙离子螯合剂、磷脂酶D(PLD)途径抑制剂为干预,并采用普通透射电镜、免疫电镜、超速离心法分离和Western蛋白印迹法等确定NAMPT的定位和表达。结果 OGD/R和TNF-α诱导细胞的炎症中,(1)小胶质细胞可主动释放NAMPT;(2) NAMPT不经过经典的内质网/高尔基体途径释放;(3)胞外ATP可增强炎症条件下的NAMPT释放,且NAMPT释放由P2X7受体和细胞内Ca2+介导;(4) PLD抑制剂正丁醇,PLD si RNA和PI3K抑制剂wortmannin显著降低OGD/R和ATP诱导的小胶质细胞NAMPT释放;(5)在排除释放性自噬、内体和释放性溶酶体的机制后,以普通扫描电镜和免疫电镜鉴定具有外泌体的大小和形态特征的细胞外囊泡含有大量NAMPT;(6)以超速离心收集经OGD/R处理的小胶质细胞释放的外泌体,Western蛋白印迹实验进一步证实NAMPT和外泌体标记蛋白有共同表达;(7) NAMPT相对于外泌体蛋白标记的量保持不变,表明小胶质细胞外泌体中的NAMPT负荷量是一定的。结论神经炎症过程中,NAMPT由小胶质细胞通过外泌体主动释放。     

自噬基因AMBRA1在宫颈癌中的表达及其临床意义

目的:探讨自噬基因AMBRA1在宫颈癌中的表达及其与临床病理参数的关系。方法:利用量子点免疫荧光组织化学技术检测自噬基因AMBRA1在组织芯片包括97例宫颈癌组织和15例非癌变宫颈黏膜上皮组织中的表达。结果:AMBRA1蛋白在宫颈癌组织的阳性表达率为54.7%,与非癌变宫颈黏膜上皮组织比较,差异有统计学意义(P<0.05);AMBRA1的阳性表达与宫颈癌组织学类型和TNM分期均显著相关(P<0.05),而与其他临床病理参数均无关(P>0.05)。结论:自噬基因AMBRA1表达缺失可能促进宫颈癌的形成和恶性进展。     

基于GEO数据库筛选阿尔茨海默病的关键基因

目的 应用生物信息学方法筛选阿尔茨海默病的关键基因。方法 从GEO数据库下载GSE5281和GSE138260数据集，用R语言对数据集进行去批次效应；WGCNA分析构建共表达网络，筛选与疾病相关基因模块并绘制基因聚类图和相关性图；以WGCNA筛选出的模块基因为对象进行差异表达基因分析，绘制火山图及热图；对差异表达基因进行Lasso回归分析，筛选关键基因；对差异表达基因进行京都基因和基因组数据库(KEGG)和基因本体(GO)富集分析，绘制气泡图。结果 通过WGCNA分析获得包含704个基因的brown模块与疾病高度相关；brown模块差异表达分析得到39个差异表达基因，其中10个下调基因，29个上调基因；进一步Lasso回归后筛选出9个关键基因。GO和KEGG富集分析表明，差异表达基因在矿物质元素的吸收、氧化还原驱动的活性跨膜转运蛋白等方面富集。结论 GEO数据库初步筛选出潜在的阿尔茨海默病关键基因，但还需进一步实验验证。     

乳腺癌组织miR-20a的表达及其对乳腺癌细胞自噬的影响

目的 探究乳腺癌患者肿瘤组织中miR-20a的表达情况及其对乳腺癌细胞自噬功能的作用。 方法 收集芜湖市第一人民医院2016年1月至2017年12月间收治的接受手术治疗的乳腺癌患者56例,逆转录实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肿瘤组织与癌旁组织miR-20a与自噬相关基因Beclin1、LC3、ATG5及ATG7 mRNA的表达水平。脂质体法转染pcDNA3/pri-miR-20a质粒至MCF7细胞,免疫蛋白印记实验检测Beclin 1与饥饿条件下LC3Ⅱ表达水平,免疫荧光实验检测自噬斑点。 结果 肿瘤组织miR-20a的平均表达水平为211.35±67.43,癌旁组织miR-20a的平均表达水平为126.72±24.37,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,肿瘤组织较癌旁组织Beclin1 mRNA表达量降低(P<0.05),ATG5、ATG7与ATG12 mRNA的表达量差异无统计学意义 (P>0.05)。过表达miR-20a后MCF7细胞Beclin1蛋白表达量降低,饥饿刺激下LC3Ⅱ表达水平降低且自噬斑点减少。 结论 乳腺癌组织中miR-20a呈高表达,并且降低自噬调节蛋白Beclin1的表达以抑制自噬活化。     

黄芪甲苷对心脏保护作用的研究现状

黄芪甲苷通过抑制核因子-кB(NF-кB)通路、降低NF-кB的表达水平来抑制缺氧心肌细胞的凋亡。黄芪甲苷通过调节自噬基因、上调B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2),降低Bcl-2相关X蛋白(Bax)及半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达以及上调低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达等途径对缺血再灌注心脏发挥保护作用。黄芪甲苷也可降低心肌转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2/3和Smad4蛋白表达,抑制心肌纤维化,保护心脏。黄芪甲苷对异丙肾上腺素致心脏损伤、对血管紧张素Ⅱ致心脏损伤、对高血糖性心脏损伤都具有一定的保护作用。     

对乙酰氨基酚对肝细胞自噬行为的研究

目的研究对乙酰氨基酚对肝细胞自噬行为的影响。方法采用肝细胞模型,对乙酰氨基酚浓度1~8 mmol·L~(-1),检测肝细胞活力指标、肝细胞形态指标以及肝细胞自噬指标。结果对乙酰氨基酚在浓度1~8 mmol·L~(-1)范围内,浓度依赖的抑制肝细胞活力,改变肝细胞的形态结构;MDC观察自噬体结果提示在浓度0.5~8 mmol·L~(-1)范围内,能使肝细胞自噬明显升高,上调基因Beclin~(-1)的表达,自噬升高幅度呈现上升后下降的趋势,转折点为1 mmol·L~(-1)。结论本研究结果得出,对乙酰氨基酚能影响肝细胞的自噬行为,在0.5~1 mmol·L~(-1)浓度范围内,促进自噬;在2~8 mmol·L~(-1)浓度范围内,对自噬的促进作用逐渐减弱。     

自噬相关基因Beclin 1在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的 探讨自噬相关基因beclin 1在不同卵巢组织中的表达及其临床意义.方法 免疫组化和RT-PCR方法分别检测正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤以及上皮性卵巢癌组织中的beclin 1的蛋白及其mRNA的表达,比较三组间的表达差异.结果 正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤beclin 1蛋白表达阳性率明显高于上皮性卵巢癌组织(83.3％和70.0％ vs.36.7％)(P＜0.05);正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤beclin 1 mRNA的表达强度明显高于上皮性卵巢癌组(0.695±0.123和0.615±0.119 vs.0.243±0.103)(P＜0.05).结论 beclin 1在上皮性卵巢癌中的表达下降;上皮性卵巢癌发生、发展可能与自噬相关基因beclin 1自噬活性的抑制有关.     

基于生物信息学分析的呼吸机相关肺损伤免疫因子及信号通路预测

目的 探讨呼吸机相关肺损伤(ventilator-induced lung injury,VILI)发生过程中基因表达和生物学过程的改变,为VILI的分子机制研究提供生物信息学依据.方法 在公共基因表达数据库(gene expression omnibus)检索2019年12月前与VILI相关的基因表达谱数据,下载GSE86229基因表达谱数据,并选择其中两组数据(对照组和高潮气量机械通气组)进行后续分析.首先通过标准化和注释对基因表达谱进行预处理,然后选用Limma方法筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs).随后对筛选出的DEGs进行聚类分析,以及基因本体论(gene ontology,GO)和信号通路(KEGG)富集分析.最后,通过STRING数据库、Cytoscape分析蛋白质相互作用网络中关键蛋白质.结果 数据预处理后初步获取了20310个基因,并筛选出337个DEGs.富集分析结果显示DEGs主要参与细胞对炎症、脂多糖和中性粒细胞趋化的生物过程,并主要富集于TNF信号通路;蛋白质相互作用网络分析发现白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、整联蛋白αM(ITGAM)、白细胞介素1β(IL-1β)和Toll样受体2(TLR-2)为关键蛋白质.结论 生物信息学分析结果显示VILI与炎症反应过程密切相关,可能与IL-6、TNF-α、ITGAM、IL-1β和TLR-2免疫因子密切相关,TNF信号通路在VILI发生过程中起到重要的作用.     

大黄素对鼻咽癌CNE-1细胞放射增敏作用与细胞自噬关系的研究

目的研究大黄素在放射增敏过程中对鼻咽癌CNE-1细胞是否产生自噬现象,并探讨其放射增敏作用与自噬相关基因mRNA表达的关系。方法鼻咽癌细胞分为空白组、大黄素组、照射组和大黄素联合射线增敏组,采用透射电镜观察各组细胞内自噬小体的形成及超微结构的改变,并运用荧光定量PCR方法检测基因ULK1、GABARAPL1、Beclin1、Bcl-2的mRNA表达水平。结果除空白组外其余各实验组均可观察到自噬小体的形成。与空白组比较,各组ULK1mRNA表达均升高(P<0.05),其中大黄素增敏组表达最高(P<0.01);而Beclin1和Bcl-2 mRNA表达下调;GABARA-PL1除大黄素增敏组升高外(P<0.05),其它各组变化不明显。结论大黄素在鼻咽癌细胞放射增敏过程伴随着自噬产生,自噬性死亡可能是大黄素放射增敏的途径之一。