炭疽毒素受体2表达受miR-145-5p调控在胰腺癌的作用机制研究

目的：探讨炭疽毒素受体2(anthrax toxin receptor 2,ANTXR2)在胰腺癌组织和细胞中的表达、临床意义和细胞功能,验证miR-145-5p在胰腺癌细胞中调控ANTXR2的作用机制。方法：分析GEO和TCGA数据库中胰腺癌的转录数据和临床数据。通过CCK-8实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell实验进行细胞功能验证。采用miRNA靶点预测数据库反向预测可能通过ceRNA机制抑制ANTXR2表达的miRNA,并使用双荧光素酶报告实验进行验证。结果：ANTXR2在胰腺癌组织和细胞中的表达均上调（均P<0.05）,ANTXR2上调预示着原发肿瘤等级（P<0.05）、肿瘤细胞分化等级（P<0.05）和总体生存期（P<0.05,HR=1.72）均较差。ANTXR2可以促进胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭（均P<0.05）。ANTXR2是miR-145-5p下游的靶标（P<0.01）,miR-145-5p可以通过抑制ANTXR2的表达抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。结论：ANTXR2在胰腺癌组织和细胞中过表达,促进胰腺癌细胞增殖、迁移和侵...     

甲基化结合蛋白2对人胰腺癌PANC1细胞增殖和迁移的影响

目的: 探讨甲基化结合蛋白2 (methyl-CpG-binding protein 2, MeCP2)对人胰腺癌PANC1细胞增殖和迁移能力的影响。方法: 采用qRT-PCR和免疫印迹法检测MeCP2在PANC1、PaTu8988、SW1990 3种胰腺癌细胞株中的表达水平;将干扰质粒shMeCP2(实验组)与对照质粒shEGFP(对照组)分别转入PANC1细胞中,CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞迁移能力。结果： MeCP2在3种胰腺癌细胞中差异性表达。与对照组相比,实验组PANC1细胞中MeCP2 mRNA和蛋白表达明显降低(t分别为6.58,8.42,P均<0.05);细胞相对增殖率、细胞克隆形成数及迁移能力明显降低(P均<0.05)。结论： 下调MeCP2表达可降低胰腺癌PANC1细胞的增殖和迁移能力。     

车叶草苷通过内质网应激促进胰腺癌细胞凋亡的机制研究

目的:探讨车叶草苷(ASP)通过内质网应激(ERS)诱导胰腺癌(PC)细胞凋亡的机制。方法:选取人胰腺癌PANC-1细胞作为研究对象。将PANC-1细胞按照随机数字表法分为4组,分别为对照组、ASP组、ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-Phenylbutyric acid, 4-PBA)组和ASP+4-PBA组。采用CCK-8检测细胞增殖情况,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell法检测细胞迁移,蛋白质印迹法检测细胞中活化转录因子6(ATF6)、C/BEP环腺苷酸反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)、活化的半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase 3)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)及肌醇依赖性激酶1α磷酸化蛋白(p-IRE1α)相对表达水平。结果:随着ASP浓度的增加,PANC-1细胞增殖率呈下降趋势。与对照组相比,ASP组迁移细胞数量降低,细胞凋亡率增加,ATF6、CHOP、cleaved-caspase-3、PERK及p-IRE1α蛋白相对表达水平上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。与ASP组相比,ASP+4-PBA组细胞迁移数量增多、细胞凋亡...     

胃泌素受体拮抗剂抑制胰腺癌细胞生长的初步研究

目的探讨应用胃泌素受体拮抗剂治疗胰腺癌的可行性。方法在体外条件下观察胃泌素及其受体拮抗剂丙谷胺对胰腺癌细胞株的细胞活力及细胞增殖的影响。结果在体外条件下,胃泌素能促进胰腺癌细胞株的增殖,而丙谷胺能完全阻断胃泌素的作用。结论胃泌素受体拮抗剂能够抑制胃泌素受体阳性的胰腺癌细胞生长,有望为胰腺癌的治疗提供一种新手段。     

G蛋白信号调节蛋白2在胰腺癌组织中的表达及临床意义

目的: 探讨G蛋白信号调节蛋白2（G-protein signaling modulator 2,GPSM2）基因在胰腺癌组织中的表达及其临床意义。方法: 选取54例胰腺癌患者临床石蜡样本制作组织芯片,利用免疫组化检测GPSM2在胰腺癌组织中的表达并分析GPSM2的表达与患者临床病理参数及预后的关系;另选取同期10例新鲜胰腺癌标本及配对的癌旁组织,采用实时RT-PCR法和蛋白质印迹法检测GPSM2 mRNA和蛋白的表达水平。结果： 胰腺癌组织GPSM2 mRNA 及蛋白的表达均明显高于配对的癌旁组织（P均<0.05）。组织芯片检测结果显示,与配对的癌旁组织比较,胰腺癌组织中GPSM2表达明显上调（P<0.05）,其高表达（40例）比例达74.1%。GPSM2的表达与患者的肿瘤T分期、TNM分期、分化程度相关：T分期越差(χ2=12.654,P＜0.01),TNM分期越高(χ2=16.610,P＜0.01),肿瘤分化程度越差(χ2=10.355,P＜0.01),其GPSM2表达水平越高。生存分析表明,GPSM2高表达患者的中位生存期明显低于低表达患者（P＜0.05）。结论： 胰腺癌组织GPSM2过表达,其表达与患者的肿瘤T分期、TNM分期、肿瘤分化程度相关,且与胰腺癌的预后有一定相关性。     

大麻素受体-2对小鼠结肠炎作用机制研究

目的：观察大麻素受体-2( CB2)对急性实验性小鼠结肠炎的作用,探讨CB2对肠黏膜内质网应激( ERS)影响。方法32只SPF小鼠随机分为正常组、模型组、CB2激动剂组、CB2拮抗剂组,每组8只。记录小鼠疾病活动度及结肠组织病理学评分,ELISA法检测结肠组织中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)水平,免疫组化法检测结肠组织CB2及ERS相关蛋白GRP78、CHOP表达,RT-PCR法检测结肠组织中GRP78、CHOP mRNA水平。结果与正常组比较,模型组TNF-α水平显著上调、IL-10水平下降( P<0．05),GRP78、CHOP蛋白及mRNA显著增高(P<0．05)。与模型组比较, CB2激动剂组 CB2表达明显增多( P <0．05),TNF-α水平下降(P <0．05),IL-10水平增多(P <0．05),GRP78、CHOP 蛋白及 mRNA 显著下降(P <0．05)。CB2拮抗剂组TNF-α、IL-10、ERS标记物水平与模型组差异无统计学意义。结论实验性结肠炎小鼠肠黏膜存在剧烈的ERS,CB2激动剂激活CB2表达后缓解结肠炎小鼠肠道炎症,可能与CB2抑制肠黏膜ERS有关。     

甲基化调控microRNA表达影响胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的研究

目的 研究基因启动子区甲基化对胰腺癌相关microRNA（miR34a、miR34b、miR148a、miR203a）表达水平的调控,及其对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法 通过5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR)去甲基化处理胰腺癌细胞MIAPaca-2,使用甲基化特异性PCR (methylation-specific PCR,MSP)法检测60 μmol/L 5-Aza-CdR处理组及0 μmol/L对照组 MIAPaca-2细胞目标microRNA启动子甲基化水平的变化;用荧光实时定量PCR检测处理组及对照组目标microRNA表达水平的改变;CCK-8法、划痕实验以及Transwell法检测胰腺癌细胞去甲基化处理后处理组和对照组增殖、迁移、侵袭能力的变化。结果 MSP法结果显示处理组较未处理组目标microRNA甲基化M条带灰度值减弱,非甲基化U条带灰度值增强,处理组目标microRNA启动子甲基化程度较对照组减弱。荧光实时定量PCR结果显示处理组较未处理组目标microRNA相对表达量升高（ P<0.05）,处理组microRNA的表达水平随去甲基化处理而升高。CCK-8法显示随着药物处理浓度的增加,处理组细胞抑制率增高,去甲基化处理抑制了胰腺癌细胞的增殖能力。划痕实验结果显示处理组较未处理组细胞伤口愈合率降低（ P<0.01）,去甲基化处理降低了胰腺癌细胞的迁移能力。Transwell法结果显示处理组较未处理组穿膜细胞数减少（ P<0.01）, 去甲基化处理降低了胰腺癌细胞的侵袭能力。结论 肿瘤细胞去甲基化处理,导致4种目标microRNA高表达,抑制了胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

胰腺癌组织β2肾上腺素受体蛋白表达及临床意义

目的 探讨β2肾上腺素受体(β<,2>-AR)在胰腺癌组织表达及其与胰腺癌临床病理特征之间的关系.方法 采用免疫组织化学技术,检测40例胰腺癌及10例远癌正常胰腺组织中β<,2>-AR的表达情况,分析β<,2>-AR表达与胰腺癌临床病理特征之间的关系.结果 胰腺癌组织β<,2>-AR的阳性表达率为77.5%(31/40),正常胰腺组织为40.0%(4/10),二者之间差异有显著性(Z=-22.475,P<0.05).胰腺癌组织中β2-AR蛋白阳性表达与TNM分期及有无淋巴结转移有关(Z=-3.372、-3.073,P<0.05),而与病人的性别、年龄、肿瘤大小、分化程度无关(Z=-1.395～-0.060,P>0.05).结论 β<,2>-AR蛋白在胰腺癌浸润转移中发挥着重要作用,β<,2>-AR阻断剂有可能用于胰腺癌的预防和治疗.     

LncRNA LOC100506123对胰腺癌细胞增殖及迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA (long non-coding RNA,LncRNA) LOC100506123对胰腺癌细胞增殖及迁移的影响.方法 采用实时定量PCR (qRT-PCR)技术检测胰腺癌组织及细胞系(AsPC-1、BxPC-3、Panc-1、CFPAC-1,以正常胰腺导管上皮细胞HPDE为对照)中LOC 100506123的表达情况.并通过siRNA技术下调LOC 100506123表达,构建siRNA经Lipofectamine 2000TM脂质体转染细胞(对照组为siR-NC,实验组为siR-1、siR-2),采用CCK-8、Transwell小室实验分别检测胰腺癌细胞增殖和转移能力.结果 ①LncRNA LOC100506123在胰腺癌组织及细胞系中表达显著升高(P＜0.05).②下调LOC 100506123表达,胰腺癌细胞的增殖及迁移能力显著降低(P＜0.05).结论 高表达的LncRNALOC100506123能促进胰腺癌细胞的增殖及迁移.     

硒蛋白K基因干扰对T淋巴细胞内质网钙稳定蛋白的影响

目的探讨SelK mRNA干扰效果及其硒蛋白K(SelK)基因干扰后对细胞内质网钙稳态蛋白(endoplasmicreticulum calcium homeostasis protein,CHERP)的表达,观察T淋巴细胞内Ca~(2+)浓度的变化。方法从SelK m RNA(NM_019979.2)的编码序列中符合设计要求的靶位点设计特异性干扰SelK mRNA的RNAi片段,构建shRNA干扰载体靶向干扰SelK RNA,用核酸序列分析方法分析重组片段的正确性,利用荧光定量PCR和Westeron blot鉴定SelK mRNA的干扰效果,采用Real time-PCR的方法检测SelK干扰后细胞内的CHERP的变化。结果阳性重组载体可以被BamH I酶切。酶切片段序列分析重组子质粒结果与所设计片段完全一致,正确率为100.0%。三个ShRNA表现了不同的干扰效果,sh222、sh102和sh101的干扰效率分别为12.13%、16.46%和42.37%,在核酸水平上重组质粒sh101对SelK的干扰效果最佳,与sh222和sh102相比,差异有统计学意义(P0.01)。Western blot检测重组质粒sh101在蛋白水平上的干扰效率为45.4%,干扰组细胞中CHERP的表达与对照组相比抑制率达到40.0%。结论重组质粒sh101对SelK在核酸和蛋白质水平上都有较好的干扰效率,SelK干扰对细胞中CHERP的表达有抑制的作用,或因此打乱了内质网与胞质中的钙离子平衡,从而影响到了细胞内游离的钙离子浓度,是导致T淋巴细胞激活的因素之一。     

RAB10对胰腺癌细胞生物学功能的影响及临床意义

目的 研究RAS癌基因家族成员RAB10在胰腺癌中的表达情况及其对人胰腺癌细胞系SW1990细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 利用癌症基因数据库GEPIA和TCGA中胰腺癌的数据分析RAB10 mRNA在胰腺癌组织中的表达;Cox回归分析RAB10 mRNA表达水平与胰腺癌患者预后关系;靶向RAB10的小干扰RNA(RAB10-siRNA)作为沉默组、构建过表达RAB10质粒(RAB10-OE)作为过表达组;使用Q-PCR检测沉默及过表达效果;Western blot实验检测蛋白表达水平;EdU细胞增殖实验、划痕实验、Transwell实验、流式细胞实验分别分析RAB10对SW1990增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。结果 胰腺癌组织中RAB10 mRNA的表达量明显高于正常胰腺组织(P<0.05);EdU细胞增殖实验结果显示,RAB10-OE组的SW1990细胞的增殖率明显高于对照组,RAB10-siRNA组SW1990细胞的增殖率低于对照组(P<0.05);Transwell实验和划痕实验结果显示,RAB10-OE组细胞侵袭率及迁移率均高于对照组,RAB10-siR...     

EphB2蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨EphB2蛋白在胰腺癌中的表达同肿瘤临床病理特征之间的关系。方法：选取中国医科大学盛京医院病理科2003年2月至2006年2月期间外科手术切除胰腺癌标本24例,胆管下段癌行胰十二指肠切除术而切除的正常胰腺组织6例．应用免疫组化方法,检测胰腺癌组织及正常胰腺组织标本中EphB2蛋白的表达情况。结果：EphB2蛋白表达免疫组织化学检测结果显示,阳性染色主要定位于细胞胞浆,呈棕黄色或棕褐色。EphB2蛋白在胰腺癌组织中表达阳性率为66．67％（16／24）,评分值为3．08±1．349,明显高于正常组织中的表达16．67％（1／6）,评分值为1．17±1．169,差异有统计学意义（P〈0．01）。在胰腺癌各病理分级组之间的差别无统计学意义（P〉0．05）。淋巴结转移组的EphB2蛋白表达高于淋巴结未转移组,差别有统计学意义（P〈0．05）。结论：EphB2蛋白可能与胰腺癌的发生发展相关。且可能参与了胰腺癌的转移。     

p53和MDM2蛋白在胰腺癌组织中表达的临床病理学意义

目的：探讨胰腺浸润性导管癌中p53和MDM2蛋白表达的临床病理学意义。方法：应用免疫组织化学方法检测59例胰腺癌标本中p53和MDM2蛋白表达,观察与胰腺癌临床病理学参数的关系。结果：p53与MDM2蛋白阳性表达率分别为67．8％和28．8％;p53蛋白在〈65岁中表达率较高,MDM2蛋白表达与年龄无关;p53和MDM2蛋白阳性表达组与其他组相比。生存时间明显缩短。结论：p53和MDM2蛋白的过表达可能反映了胰腺癌的恶性增生过程,两者的联合表达有助于判定肿瘤的预后。     

MAL2在胰腺癌中表达及预后的相关性研究

目的 探究髓鞘和淋巴细胞蛋白2 (MAL2)基因在胰腺癌组织中的表达情况以及与胰腺癌患者预后的关系。方方法 整合人类癌症基因组图谱（TCGA）和基因表达数据库（GTEx）,分析MAL2在胰腺癌组织和胰腺正常组织中的表达差异,高通量基因表达数据库（GEO）选取基因芯片用于进一步验证,人类蛋白质表达图谱（HPA）数据库用于获取正常胰腺组织以及胰腺癌组织免疫组化样本。提取胰腺癌患者的基线资料用于评估MAL2的临床相关性。生信分析用于预测MAL2可能参与的生物学机制。结果 MAL2在胰腺癌组织中的表达水平显著高于胰腺正常组织,临床相关性分析的结果显示MAL2的表达水平与胰腺癌患者的年龄、T分期有关。Cox相关分析和Kaplan Meier生存曲线的结果显示MAL2是胰腺癌患者生存的危险因素,与不良预后有关。生信分析的结果显示,MAL2在胰腺癌中发挥的生物学功能可能与NF-κB信号通路有关。结论 MAL2在胰腺癌中异常上调,是潜在的胰腺癌预后相关生物标记物。     

维生素D衍生物EB1089对胰腺癌细胞系生长抑制作用的实验研究

目的：观察维生素D衍生物EB1089对人胰腺癌细胞系BxPC-3的生长抑制作用及其可能机制。方法：应用MTT比色法、流式细胞术、Western blot法免疫印记电泳进行检测。结果：EB1089抑制人胰腺癌细胞系BxPC-3的生长，抑制50％细胞生长的药物浓度(IC50)为10～mmol／L。癌细胞在EB1089作用下，G0／G1期细胞比例增加23％，S期细胞比例下降12％。胰腺癌细胞系BxPC-3的P^21蛋白的表达随EB1089的作用时间和药物浓度的提高而增强。结论：EB1089对胰腺癌细胞系BxPC-3具有生长抑制作用，其作用机制可能与P^21表达上调有关。     

胰腺癌组织中p53蛋白和IGF-r的表达及临床意义

目的：探讨胰腺癌组织中p53蛋白、胰岛素生长因子受体（IGF-r）的表达及临床意义。方法：应用抗生蛋白链菌素-生物素标记法（LSAB）检测39例胰腺癌和19例慢性胰腺炎组织中p53蛋白和IGF-r的表达，并对胰腺癌和慢性胰腺炎及不同分化程度胰腺癌组织中p53蛋白和IGF-r的阳性表达率进行比较。结果：（1）p53蛋白、IGF-r的表达产物主要定位于细胞核或细胞浆中，细胞分布不均匀；（2）胰腺癌组织中p53蛋白、IGF-r的阳性表达率分别为61．5％、66．7％，明显高于慢性胰腺炎组织（5．2％、36．8％）（P〈0．05）；（3）高分化胰腺癌中p53蛋白、IGF-r的阳性表达率分别为20．0％、33．3％，明显低于中、低分化胰腺癌（81．8％～92．3％、76．9％～81．8％）（P〈0．05）。结论：（1）p53抑癌基因突变与IGF-r的异常表达在胰腺癌的发生、发展过程中具有重要作用；（2）p53蛋白、IGF-r的过度表达与癌组织的分化程度有关；（3）p53蛋白与IGF-r可以作为鉴别胰腺良、恶性病变和进行诊断及判断预后的分子指标。     

MicroRNA-219a-5p和AFAP1L2对胰腺癌细胞的作用研究

目的 探讨microRNA-219a-5p（miR-219a-5p）和肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2（AFAP1L2）对胰腺癌细胞的作用。方法 分别采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western blotting法检测胰腺癌细胞株（PANC-1、BXPC-3、SW1990、Capan-1）及正常胰腺导管上皮细胞（HPDE）miR-219a-5p、AFAP1L2的表达,采用siRNA及过表达质粒下调或上调AFAP1L2表达,CCK-8法观察胰腺癌细胞株增殖变化。采用mimics或inhibitor上调或下调miR-219a-5p表达,CCK-8法观察胰腺癌细胞株增殖变化。流式细胞术检测不同干预条件下细胞凋亡和细胞周期。生物信息学预测两者可能具有靶向调控关系。qRT-PCR和Western blotting法检测AFAP1L2 mRNA及蛋白表达,荧光素酶实验观察二者碱基配对关系,进一步验证miR-219a-5p对AFAP1L2具有靶向调控作用。结果 与HPDE细胞比较,胰腺癌细胞株中miR-219a-5p表达较低（P <0.05）。AFAP1L2 mRNA及蛋白在胰腺癌细胞株中的表达高于在HPDE细胞中的表达（P <0.05）。Capan-1或SW1990细胞培养48 h后,与空白对照组（NC组）比较,pCMV-EGFP-AFAP1L2组光密度（OD）值升高（P <0.05）,siAFAP1L2组OD值下降（P <0.05）,AFAP1L2对胰腺癌细胞增殖具有正向调控作用。Capan-1及SW1990细胞培养48 h后,与miR-NC组比较,miR-219a-5p mimics组OD值下降（P <0.05）,miR-219a-5p inhibitor组OD值升高（P <0.05）,miR-219a-5p表达对胰腺癌细胞增殖具有负向调控作用;上调miR-219a-5p表达,可诱导细胞S期阻滞,导致细胞凋亡增加。miR-219a-5p负向调控AFAP1L2表达;荧光素酶实验显示,miR-219a-5p与AFAP1L2的3''-URT互补结合,miR-219a-5p与AFAP1L2存在靶向调控关系。结论 miR-219a-5p通过靶向调控AFAP1L2表达负向介导胰腺癌细胞增殖及凋亡。