肺纤维化肺成纤维细胞产生透明质酸的实验动态研究

目的：阐明肺纤维化过程中肺成纤维细胞（ＬＦ）产生透明质酸（ＨＡ）的动态变化及作用。方法：检测和对比博莱霉素（ＢＬＭ）致大鼠肺纤维化不同时期支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）和ＬＦ培养上清中ＨＡ水平。结果：（１）ＢＬＭ组ＬＦ培养上清中ＨＡ水平于第１天明显升高，第３天达高峰，第１４～２８天时降至正常。（２）ＢＬＭ组ＢＡＬＦ中ＨＡ水平于第３天明显升高，第７天达高峰，随后下降，但至第１４天时仍高于正常水平，第２８天降至正常。（３）ＢＬＭ组ＢＡＬＦ和ＬＦ上清中ＨＡ水平与ＢＡＬＦ细胞成分之间均具有明显的正相关；ＢＡＬＦ和ＬＦ培养上清中ＨＡ水平之间也有明显的相关性。结论：ＬＦ在肺纤维化的早期肺泡炎阶段就处于活化状态，产生ＨＡ增多，导致肺内ＨＡ的过多聚积；ＬＦ产生ＨＡ增多和ＢＡＬＦ中ＨＡ水平的增高可反映肺泡炎的强度和疾病的活动性     

成纤维细胞来源外泌体在疾病相关细胞外基质重构中的作用

成纤维细胞是介导组织细胞外基质(ECM)重构的重要细胞类型,外泌体是一种新型胞间通讯方式.近年有证据表明,成纤维细胞来源外泌体参与ECM组成和代谢,并存在自分泌作用,与多种疾病发生发展密切相关.深入研究成纤维细胞来源外泌体对ECM重构的调控作用,有望揭示疾病病因机制及精准治疗靶点.     

基质金属蛋白酶与肺纤维化

基质金属蛋白酶 (matrixmetalloproteinases,MMPs) ,也称matrixins,是一类含有Zn2 + ,活性依赖Ca2 + 结构高度同源性内肽酶的总称 ,因含有金属离子而得名。现在认为MMPs是最重要的一类降解细胞外基质 (ECM )的蛋白酶类 ,这是因为MMPs直接以酶原的形式分泌到ECM中 ,并在生理条件下发挥作用 ;MMPs表达和活性受严格调控 ,在ECM重构的部位予以表达 ;MMPs中一些酶是能分解纤维性胶原的酶。1　MMPs家族1.1　MMPs的分类　至今至少 2 0种具有共同前肽区和催化区的MMP被认定 ,构成了MMPs超家族。按照底物的特异性可分为 7类 ,即①胶…     

COX-2抑制剂对成纤维细胞的增殖和细胞外基质产生的影响

目的: 探讨COX-2抑制剂对成纤维细胞增殖、活力及细胞外基质产生的影响,研究COX-2抑制剂抗肝纤维化的机制. 方法:采用体外培养的NIH/3T3成纤维细胞作为肝星状细胞(HSC)的替代模型,常规培养. COX-2特异性抑制剂塞来昔布(celecoxib)(终浓度为5,10,20,40 μmol/L)加入细胞中,用MTT法检测塞来昔布对NIH/3T3细胞的增殖,活力的影响;用放射免疫法测定培养上清细胞外基质(HA, LN, PCIII, IVC)的生成;用Western blot法检测NIH/3T3细胞上的COX-2的蛋白表达. 结果:NIH/3T3细胞的COX-2蛋白表达阳性,是塞来昔布作用靶点;塞来昔布在所用浓度下对细胞无明显毒性,但可显著抑制细胞增殖,呈浓度依赖性(P<0.01), 抑制HA及LN的合成. 5~40 μmoL/L对LN的抑制率分别为19.74%, 18.16%, 22.05%和24.65%;20~40 μmoL/L对HA的抑制率分别为17.53%和24.24%, HA及LN的含量与对照组比较差异显著(P<0.05). 结论:塞来昔布可显著抑制NIH/3T3细胞增殖和细胞外HA及LN的合成,在体外具有一定的抗肝纤维化作用.     

促肝细胞生长素对人皮肤成纤维细胞及大鼠肝星状细胞产生细胞外基质的影响

细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的过量沉积是形成肝纤维化的主要病理基础,ECM成分复杂,主要含胶原蛋白、结构糖蛋白、多糖类物质等。在胶原蛋白中,Ⅰ、Ⅲ型胶原是纤维化肝脏的主要成分,蛋白多糖中透明质酸（hyalu—ronic acid,HA）是肝纤维化中研究较多的大分子物质之一,     

肺纤维化大鼠细胞外基质蛋白的变化

目的：阐明细胞外基质（ＥＣＭ）蛋白在实验性肺纤维化发病中的作用。方法：以大鼠气管内灌注博莱霉素（ＢＬＭ）和生理盐水分为两组,采用放免法和间接免疫荧光法观察纤维联结蛋白（ＦＮ）和层粘连蛋白（ＬＮ）的变化。结果：（１）ＢＬＭ组于灌注后第３～１４天,肺泡巨噬细胞（ＡＭ）分泌ＦＮ增加（Ｐ＜０．０１）,肺泡隔内ＦＮ荧光增宽、紊乱;（２）灌注后第３天,支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中ＬＮ增加,呈渐进性升高,第２８天达峰值（Ｐ＜０．０１）,３～７天肺泡隔内ＬＮ荧光增强,晚期明显增粗、紊乱。结论：活化的ＡＭ分泌ＦＮ、ＬＮ,ＦＮ主要参与肺纤维化早期病变的发生与发展,ＬＮ参与了ＢＬＭ肺纤维化的全过程。     

苦参素对NIH/3T3成纤维细胞增殖及细胞外基质合成的影响

目的 观察苦参素对NIH／3T3成纤维细胞增殖及其细胞外基质(ECM)合成的影响,探讨苦参素抗肝纤维化的可能作用机制。方法 采用噻唑蓝比色法、流式细胞技术检测苦参素对NIH／3T3成纤维细胞增殖及细胞周期的影响,采用放射免疫方法检测苦参素对其合成透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)等ECM的影响。结果 苦参素可抑制NIH／3T3成纤维细胞的增殖,减少S期细胞,降低细胞增殖指数,抑制ECM的合成,并呈剂量依赖关系。结论 苦参素可能通过影响成纤维细胞的增殖、抑制成纤维细胞的分裂和ECM的合成发挥其抗肝纤维化作用。     

鼠肺成纤维细胞在细胞外基质支架中的生长特性

目的:研究鼠肺成纤维细胞(lung fibroblast,LF)在细胞外基质(extracellular matrix,ECM)支架中的生长特性.方法:将纤维蛋白原、层黏连蛋白和纤黏连蛋白按一定比例混合后,在新鲜大鼠血浆促凝作用下,构建单层毯状细胞外基质支架,并同时加入转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β).将原代培养并纯化传代的鼠LF植入支架,应用倒置显微镜、免疫荧光和免疫印迹方法观察鼠LF在三维培养中的生长特性.结果:鼠LF在ECM支架及加入TGF-β的支架中的细胞增殖、转化及Ⅰ型胶原合成能力均明显强于普通单层培养.结论:鼠LF在ECM支架中有良好的生长特性,为体外研究LF在肺间质纤维化中的作用提供了一种新的方法.     

SARS肺纤维化细胞外基质及间质效应细胞免疫表型研究

目的探讨严重急性呼吸综合征(SARS)肺组织急性损伤后发生肺纤维化及其发病机制。方法应用免疫组织化学染色方法,检测4例不同病程和病变的SARS肺组织和2例正常肺组织的细胞外基质(FN,LN,ColⅠ,ColⅣ)及间质效应细胞骨架蛋白表型(Des,Vim,HHF-35,SMA)的变化。结果FN在SARS肺组织急性渗出期大量出现,并逐渐增强至纤维增殖期,而在胶原硬化期明显减弱,LN仅在纤维增殖期呈强阳性,急性渗出期和胶原硬化期阳性信号弱,ColⅠ及ColⅣ在急性渗出期近乎看不见,而在纤维增殖期和胶原硬化期逐渐增强,以ColⅣ为主。Des,Vim,HHF-35和SMA从急性渗出期向纤维增殖期增强的趋势,在胶原硬化期逐渐减弱,以HHF-35和Des减弱直至消失。结论SARS肺组织纤维化是细胞外基质过多积聚的结果,原始间叶细胞的增生和分化是肺纤维化的重要因素。     

Fn14诱导人皮肤成纤维细胞分泌细胞外基质

目的研究成纤维细胞生长因子诱导分子-14(Fn14)对人皮肤成纤维细胞(HSF)分泌细胞外基质的影响,探讨皮肤纤维化新的干预环节。方法分离HSF,构建Fn14表达载体,将其转染HSF,用Western blot方法检测Fn14、平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)蛋白表达水平;Real-time PCR(RT-qPCR)检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原(ColⅢ)m RNA表达水平。结果构建的Fn14表达载体可成功转染HSF细胞,并使HSF细胞α-SMA和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达水平升高。结论 Fn14能促进HSF胶原的表达,提示其在促进皮肤纤维化的病理过程中起着重要的作用。     

糖基化细胞外基质对成纤维细胞生物学行为的影响

目的研究皮肤组织中细胞外基质(ECM)成分的糖基化对成纤维细胞(FB)黏附增殖能力的影响.方法对糖尿病患者皮肤组织中晚期糖基化终末产物(AGEs)的表达进行免疫组化测定;体外将FB的ECM糖基化处理,观察FB细胞的形态变化和糖基化基质对其黏附、增殖能力的影响,以非糖尿病皮肤组织作为对照.结果糖尿病患者皮肤组织中FB的细胞浆和ECM中AGEs的阳性表达明显多于非糖尿病皮肤;体外糖基化基质上接种的FB较小,胞体突起既少又短,黏附的细胞明显少于对照组(P＜0.01);接种1 h,黏附细胞增多,逐渐与对照组接近,但仍低于对照组.结论糖尿病患者皮肤组织中的ECM被糖基化,产生的AGEs可抑制FB的黏附、增殖,可能是糖尿病创面愈合延迟的重要机制之一.     

干扰素γ对实验性肺纤维化大鼠血清IL-4、SP-A含量的影响

目的观察干扰素γ(IFN-γ)对实验大鼠肺纤维化的治疗作用,初步探讨其抗纤维化的作用机制.方法大鼠随机分为正常对照组、模型组、IFN-γ治疗组.气管内注入博莱霉素造模后,于当天开始每日给药,分别于1、3、7、14、28d处死,取肺组织和血清,行电镜观察及HE染色,ELISA测定血清IL-4含量及Western Blotting测定表面活性蛋白A(SP-A)含量.结果 IFN-γ组与模型组比较,肺纤维化程度明显减轻,血清IL-4、SP-A含量显著减低(P<0.01).结论 IFN-γ对博莱霉素所引起的肺纤维化具有明显的治疗作用,可能通过调节失衡的Th细胞及减轻肺组织损伤发挥抗纤维化作用.     

冬虫夏草对人成纤维细胞的形态及细胞外基质合成功能的影响

冬虫夏草（虫草）具有良好的抗肝纤维化作用,然而其抗肝纤维化机制尚不清楚。作者经动物实验证实,虫草能使纤维化肝组织中细胞外基质成份明显减少,可能与其抑制储脂细胞合成细胞外基质（ＥＣＭ）功能有关［１］。作者观察虫草对人成纤维细胞的形态及合成ＥＣＭ的功能影...     

肺组织的细胞外基质和肺部疾病

肺组织的细胞外基质与肺纤维化关系最为密切。肺纤维化可由多种疾病引起 ,致病因素首先造成肺组织损伤 ,在此后的修复过程中 ,细胞外基质成分可以过度沉积 ,最后形成肺纤维化。此病理过程导致肺组织重建 ,使肺结构破坏 ,换气面积减少 ,肺泡膜增厚 ,最终发生呼吸衰竭。细胞外基质与感染及肿瘤也有密切关系。因此研究细胞外基质对于认识上述疾病的发病机制 ,从而对诊断、防治具有重要意义。肺内的细胞外基质成分主要有四种 ,它们是胶原蛋白、弹性蛋白、蛋白多糖及粘连糖蛋白。胶原蛋白和弹性蛋白为纤维状结构。蛋白多糖及粘连糖蛋白为无定型物…     

陈皮挥发油对大鼠肺纤维化的干预作用

目的：研究陈皮挥发油（essential oil extracted from Citrus reticulata,EOcR）对人胚肺成纤维细胞（humanembryonic lung fibroblast,HELF）增殖的影响,以及对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型的干预作用,并探讨其作用机制。 方法：将HELF传代培养,待细胞进入对数生长期后进行实验,采用四甲基偶氮唑盐比色法测定不同浓度陈皮挥发油对HELF增殖的影响。大鼠随机分为正常组、模型组、强的松组、陈皮挥发油25mg（EOCR-25）组、陈皮挥发油50mg（EOCR-50）组、陈皮挥发油100mg（EOCR-100）组和陈皮挥发油200mg（EOCR-200）组。除正常组外,其余各组气管内注入博来霉素建立大鼠肺纤维化模型。建模后除正常组、模型组两组大鼠外,其余各组大鼠分别给予相应药物灌胃。各组大鼠于实验第28天处死并留取血清和肺组织。分光光度法测定血清和肺组织超氧化物岐化酶（superoxi dedismutase,SOD）及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量;双抗夹心酶联免疫吸附法测定肺组织I型胶原蛋白（typeⅠcollagen,ColⅠ）含量;根据积分量表对肺组织病理学变化进行半定量分析;免疫组织化学和原位杂交法检测肺组织中结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）蛋白及mRNA表达,并进行图像半定量分析。结果：不同浓度EOcR均可抑制HELF的增殖。建模后第7、14、21、28天时,EOCR-50、EOCR-100和EOCR-200组大鼠体质量增幅较模型组显著增加（P〈0．05或P〈0．01）;EOCR-100和EOCR-200组肺泡炎、肺纤维化积分显著低于模型组（P〈0．01）;EOCR-50、EOCR-100和EOCR-200组血清及肺组织SOD活性显著高于模型组（P〈0．01）;EOCR-50、EOCR-100和EOCR-200组血清及肺组织MDA含量显著低于模型组（P〈0．05）;EOCR-100和EOCR-200组肺组织ColⅠ含量显著低于模型组（P〈0．01）,肺组织CTGF蛋白及mRNA表达量显著低于模型组（P〈0．01）。结论：陈皮挥发油对博莱霉素诱导所致大鼠肺纤维化具有干预作用,其作用机制可能是通过调节氧化和抗氧化失衡,降低CTGF蛋白及其mRNA表达,减少胶原沉积以减轻纤维化程度。     

乙胺嗪对博莱霉素致鼠肺纤维化影响的实验观察

博莱霉素(Bleomycin,BLM)是多肽类抗肿瘤药,单次气管内注射可复制出与人肺间质性疾病相似的动物模型,但其致病机制尚未完全阐明。我们观察了白三烯(leukotrienes,LTs)生物合成抑制剂乙胺嗪(Diethylcarbamazine,DEC)腹腔注射对BLM所致SD大白鼠肺间质纤维化实验及病理改变的影响,探讨白三烯在肺纤维化发病机理中的作用。1 材料与方法1.1 试剂及配制:博莱霉素A_5(天津河北制药厂)用生理盐水配成.2mg/ml;乙胺嗪(南京制药厂)配     

肾小球内皮细胞培养及产生细胞外基质的实验研究

作者成功地培养了肥儿及牛肾小球内皮细胞，将内皮细胞克隆后传代培养了７代，并利用间接免疫荧光方法进行鉴定，观察胎儿及牛肾小球内皮细胞都可以表达第ＶＩＩＩ因子相关抗原，纤维连接蛋白，ＩＶ型胶原及层粘连蛋白。测定了不同时胎儿肾小球内皮细胞培养上清中细胞外基质的水平。结果证实不加任何刺激因子，肾小球内皮细胞可以稳定地产生细胞外基质。     

布洛芬对小鼠肺纤维化的保护作用

  目的 研究布洛芬对博莱霉素诱导的肺纤维化的治疗保护作用。方法 通过气管内滴注博莱霉素复制小鼠肺纤维化模型,实验分为正常对照组、模型组、布洛芬5 mg/kg治疗组、布洛芬10 mg/kg治疗组和布洛芬20 mg/kg治疗组。采集血清行一氧化氮（NO）化学法检测小鼠血清中NO含量;收集肺泡灌洗液行ELISA方法测定肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）含量;留取肺组织行HE染色观察各组小鼠肺组织形态变化,制备肺组织匀浆测定匀浆中丙二醛（MDA）含量;采用RT-PCR和Western blot方法检测肺组织中转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad2和p-Smad2的表达水平。结果 与正常对照组比较,肺纤维化模型组肺组织中发生炎性细胞浸润、肺泡间隔增厚情况,同时血清中NO含量和肺泡灌洗液中炎性因子TNF-α和IL-6含量显著增加,小鼠肺组织中MDA含量也有所增加,TGF-β1和p-Smad2的表达显著升高。经布洛芬给药治疗后,各项生化指标有所下降,同时肺纤维化损伤得以缓解。结论 布洛芬可缓解由博莱霉素诱导的肺纤维化,其作用机制可能与下调NO含量、TNF-α和IL-6等炎性因子含量及调控TGF-β信号通路有关。     

细胞外基质对离体大鼠睾丸支持细胞的影响

本实验利用组成细胞外基质的两种糖蛋白──纤维粘连蛋白和层粘连蛋白，以及来源于肝、肺组织的两种生物基质，在体外研究了细胞外基质对大鼠支持细胞的贴壁和铺展及形态的影响。结果证明两种糖蛋白均能促进支持细胞的贴壁和铺展。来源于肺组织的生物基质能在体外保留体内支持细胞的柱状细胞形态，而来自肝组织的生物基质则没有这种特性。