两种检测华支睾吸虫囊蚴方法的比较

目的 比较肌肉压片法和消化法检测野生淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴的检出率.方法 从华支睾吸虫病重流行区广西横县旺天塘采集野生淡水鱼样本,分别采用肌肉压片法和消化法检测每尾鱼感染华支睾吸虫囊蚴情况.计算华支睾吸虫囊蚴的检出率,采用配对卡方检验对2种方法的检出率进行比较.结果 共检测了210尾鱼,总检出率为36.67％(77/2...     

免疫金电转移印斑技术检测华支睾吸虫病人血清抗体

我们应用电转移印斑结合免疫金技术,进行了华支睾吸虫病人血清中抗体的研究,以寻找一个敏感、特异的华支睾吸虫病免疫诊断方法。一、材料和方法 (一)抗原的制备自人工感染华支睾吸虫囊蚴的猫肝中取华支睾吸虫成虫100条,以生理盐水洗涤数次.超声粉碎100w,10min,4℃冰箱冷浸72h,5000r/min离心15min,取上清液。 (二)实验血清1.华支睾吸虫病人血清:采自山东金乡县及宁阳县,经粪便检查,华支睾吸虫虫卵阳性     

两种方法纯化的抗体筛选华支睾吸虫模拟抗原表位的比较

目的比较用不同方法纯化的IgG从噬菌体随机12肽库中筛选出的华支睾吸虫模拟抗原表位。方法用饱和硫酸铵沉淀法和饱和硫酸铵沉淀法加层析法(两步法)纯化提纯的华支睾吸虫病患者血清IgG筛选华支睾吸虫模拟抗原表位,扩增随机挑取噬菌斑并进行序列分析和免疫学鉴定。结果硫酸铵沉淀法纯化IgG筛选的20个噬菌体克隆,6个有不同的DNA插入序列,Western blot显示6个克隆均可与华支睾吸虫患者血清反应,斑点免疫金银染色法有3个克隆可被华支睾吸虫患者血清识别。两步法纯化IgG筛选的20个噬菌体克隆,9个有DNA插入序列,其中有2个序列相同;Western blot和斑点免疫金银染色法显示9个克隆均可与华支睾吸虫患者血清反应。结论两种方法纯化的IgG均筛选到了可与华支睾吸虫患者血清结合的模拟抗原表位,用两步法纯化IgG筛选的模拟抗原表位更具有潜在的诊断价值。     

PVC-Fast-DOt-ELISA法检测华支睾吸虫抗体的研究

了解和掌握华支睾吸虫在苏北南通不同人群中的感染情况,分析和找出华枝睾吸虫感染与人们的年龄,职业和生活尤其是饮食习惯等因素之间有可能存在的联系。方法应用ＰＶＣ－Ｆａｓｔ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法检测受检者血清华枝睾吸虫抗体。     

ABC-ELISA检测华支睾吸虫抗体的动态研究

本文报道了用ABC-ELISA观察人工感染华支睾吸虫家兔血清特异性抗体的变化。结果表明,抗体最早出现阳性时间在感染后第14d,轻、重感染组抗体高峰时间分别在第10周和第8周,以后呈下降趋势。抗体水平与虫卵计数呈直线正相关,重感染组平均阳性时间提前,平均光密度值(OD)高。实验结果还表明,抗体应答表现与宿主个体反应性有关,但主要取决于感染度。     

重组抗原应用于SPG-ELISA检测华支睾吸虫循环抗体的效果评价

目的评价重组抗原用于SPG-ELISA诊断华支睾吸虫感染的价值。方法分别使用重组华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶（Cs-CysB）与华支睾吸虫成虫可溶性抗原（CAA）,以SPG-ELISA检测华支睾吸虫病患者血清特异性IgG,比较两种抗原包被SPG-ELISA方法的敏感性与特异性。结果检测50份华支睾吸虫感染者血清,重组Cs-CysB与CAA包被的SPG-ELISA阳性率均为94.00%,健康人血清50例均为阴性;检测日本血吸虫病血清20份、并殖吸虫病血清20份、囊虫病血清10份,交叉反应率分别为5.00%、10.00%、20.00%和5.00%、0、20.00%。结论以重组Cs-CysB为包被抗原用SPG-ELISA检测血清华支睾吸虫抗体具有较高的敏感性及特异性,检测效果与CAA包被的SPG-ELISA相当。     

重组华支睾吸虫诊断抗原研究进展

华支睾吸虫多种诊断抗原的基因已被克隆和重组表达，一些重组抗原已初步应用于华支睾吸虫病的免疫学诊断，显示出较高的诊断价值。     

ABC-ELISA检测粪便华支睾吸虫抗原的初步探讨

本实验用ABC-ELISA双抗体夹心法检测人工感染家兔粪便华支睾吸虫抗原(CsAg)。结果表明,此法能测出CsAg的最低含量为0.045μg/ml PBS,粪便中CsAg含量与感染兔的虫荷呈直线正相关。检测轻、重感染兔粪便各28份,正常兔粪便29份,阳性数分别为7、23和2。3组兔粪便中CsAg含量有显著性差异(P<0.001)。5只感染日本血吸虫家兔粪便CsAg检测均为阴性。     

免疫金银染色法对华支睾吸虫病人血清中抗体的检测

胶体金(Colloidal-gold)能和许多生物大分子结合,形成胶体金探针,与相应抗原(或抗体)形成抗原抗体复合物,经过银显影处理后,使金颗粒周围吸附大量银颗粒,在光镜下即可见到黑褐色的金银颗粒。八十年代以来金标记技术发展很快,可以检测单一或多种抗原,与细胞化学、免疫细胞化学相结合,应用于光镜和电镜的许多领域,上海免疫研究所利用免疫     

佛山市华支睾吸虫保虫宿主调查

佛山市是华支睾吸虫病重度流行区。为了解华支睾吸虫保虫宿主情况,我们作了一次较全面的调查。一、材料与方法所检动物标本均采自我市所属县、区。剖检肝胆系统,查找华支睾吸虫成虫。用清水沉淀集卵法检查粪便,收集虫卵置于一般清水内自然存放;收集虫卵阳性粪便.于室内自然条件下存放,用普通显微镜观察虫卵形态经贮存后所起的变化。观察时间在8～9月份。二、结果 (一)各种动物感染华支睾吸虫情况剖检阳性率依次为家猫89.7％(78/87)、狗84. 2％(64/76)、家鼠     

后尾蚴抗原免疫荧光技术检测华支睾吸虫病血清抗体的研究

本研究以华支睾吸虫后尾蚴为抗原,用华支睾吸虫病人和实验动物血清及滤纸于血滴进行IFA,并与以成虫石蜡切片为抗原的IFA检测做了比较,同时还就实验大鼠不同时间血清抗体的变化进行了动态观察。     

江门地区两种淡水鱼华支睾吸虫感染情况调查

目的了解江门地区鲩鱼和鳙鱼两种常见食用淡水鱼华支睾吸虫囊蚴的感染情况。方法用人工消化法对鱼肉进行处理,显微镜下检查和计数鱼肉中的华支睾吸虫囊蚴。结果在江门市的蓬江区、新会区和鹤山市三地共检查鲩鱼484条,阳性232条,华支睾吸虫感染率47.93%,阳性鱼平均感染度为6.69个/尾;在蓬江区和新会区共检查鳙鱼286条,阳性45条,华支睾吸虫感染率15.73%,阳性鱼平均感染度为2.27个/尾。结论江门地区的鲩鱼和鳙鱼华支睾吸虫感染严重,鲩鱼感染率高于鳙鱼。蓬江区、新会区和鹤山市三地间淡水鱼的华支睾吸虫感染率也存在差异。     

亲和层析法纯化华支睾吸虫抗原的研究

目的 探索华支睾吸虫特异性抗原的纯化方法。方法从华支睾吸虫病流行区的淡水鱼中分离华支睾吸虫囊蚴，接种动物，收集成虫，制备匀浆液（粗抗原），借助偶联华支睾吸虫病人血清抗体的Sepharose4B亲和层析柱，提取特异性抗原，用浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳（CG-PAGE）和免疫印迹方法鉴定纯化抗原的纯度和特异性。结果亲和层析法纯化抗原经CGPAGE显示5条蛋白带，免疫印迹试验鉴定均有抗原性，强阳性带蛋白分子质量单位为31ku，各区带蛋白与并殖吸虫、血吸虫血清抗体无交叉反应。粗抗原有16条蛋白带。结论经亲和层析法纯化的华支睾吸虫抗原特异性高。亲合层析是获取华支睾吸虫诊断用抗原的较佳方法。     

亲和层析法纯化华支睾吸虫抗原的研究

目的探索华支睾吸虫特异性抗原的纯化方法。方法从华支睾吸虫病流行区的淡水鱼中分离华支睾吸虫囊蚴,接种动物,收集成虫,制备匀浆液(粗抗原),借助偶联华支睾吸虫病人血清抗体的Sepharose4B亲和层析柱,提取特异性抗原,用浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳(CG-PAGE)和免疫印迹方法鉴定纯化抗原的纯度和特异性。结果亲和层析法纯化抗原经CG-PAGE显示5条蛋白带,免疫印迹试验鉴定均有抗原性,强阳性带蛋白分子质量单位为31ku,各区带蛋白与并殖吸虫、血吸虫血清抗体无交叉反应。粗抗原有16条蛋白带。结论经亲和层析法纯化的华支睾吸虫抗原特异性高。亲合层析是获取华支睾吸虫诊断用抗原的较佳方法。     

生物素——亲和素系统检测华支睾吸虫特异性抗体的研究

用ABC-ELISA检测华支睾吸虫粪检阳性病人130例,粪检阴性受试者101例及其它疾病82例,并与粪检及另外两种血清学方法(SPA-ELISA、常规ELISA)比较。粪检阳性符合率93.08％,阴性符合率63.37％。ABC-ELISA的阳性反应强度是常规ELISA的1.31倍(P<0.05),其平均几何滴度是SPA-ELISA的1.77倍(P<0.05)。特别在轻度感染病人,ABC-ELISA的平均几何滴度明显高于后两种血清学方法,而且非特异性反应较低。     

城市居民华支睾吸虫感染的调查

为了解华支睾吸虫在城市人群的感染现状,我们于1985～1997年,连续对韶关市居民进行本虫的感染调查。1　方　法1.1　对象　为市区机关、企事业单位、工厂和街道的居民。1.2　方法　收集粪便,采用水洗自然沉淀法检查华支睾吸虫卵。2　结　果2.1　人群华支睾吸虫感染情况　1985～1997年,共粪检51445人,虫卵阳性者7　886人,平均感染率15.3%.各年的检出率分别为7.0%、9.1%、13.5%、13.1%、13.6%、16.1%、23.5%、19.6%、23.0%、16.6%、16.9%、12.0%和21.3%。2.2　不同年龄和性别感染情况　感染年龄2～82岁,但以成人为主。19岁以下为3.3%,20～39岁2…     

免疫金银染色法、斑点ELISA和斑点免疫金银染色法检测华支睾吸虫病人血清中抗体的研究

用免疫金银染色法(IGSS)、斑点ELISA和斑点免疫金银染色法(Dot-IGSS)三种方法,同时检测40份华支睾吸虫病人血清,阳性率分别为100％、90％和95％,检测40份正常人血清,阴性率分别为100％、97.5％和97.5％,显示三种方法均有较高的敏感性和特异性。     

淡水鱼华支睾吸虫囊蚴 LAMP 检测方法的建立

目的 建立一种高效灵敏的环介导等温扩增(LAMP)方法检测淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴。 方法 以华支睾吸虫 ITS2 基因序列为靶序列,合成 Cs-1、Cs-2、Cs-3 三组 LAMP 引物体系。 以华支睾吸虫囊蚴 DNA 样本为模板,日本血吸虫成虫、带绦虫成虫、蛔虫虫卵及其他吸虫囊蚴 DNA 样本为参考,比较三组引物体系的特异度;以不同浓度的华支睾吸虫成虫基因组 DNA 为模板,比较三组引物体系的灵敏度;用 LAMP 法及 PCR 法平行检测 16 份华支睾吸虫囊蚴样本和 23 份其他吸虫囊蚴样本,评价 LAMP 法的敏感性和特异性。 结果 三组引物体系的灵敏度及特异度以 Cs-3 为最优,以其建立的 LAMP 法反应体系,检测华支睾吸虫成虫 DNA 的最低检出浓度可达到 3. 33×10^-4ng / μL,敏感性和特异性与 PCR 法一致,均为 100%。 结论 成功建立了一种可用于检测淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴的 LAMP 方法,为淡水鱼寄生虫病监测工作提供了便捷高效的检测手段。