枸杞糖缀合物LbGp2的理化性质和活性研究

目的　分离纯化枸杞糖缀合物(LbGp2 )并研究其理化性质及活性。方法　采用柱色谱法得到LbGp2 ,经HPLC ,CE ,GC ,SEC及糖含量分析、元素分析和氨基酸分析等研究其理化性质,并用半体内法、形态学计数法和比色法等研究了Lbp2对腹腔巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞的转化以及对小鼠血清半数溶血等的影响。结果　LbGp2是均一组份,其分子量为6.8×10⁴,糖含量为90.7% ,糖组成为Ara Gal 3∶4(摩尔比) ,并含有18种天然氨基酸。免疫活性试验表明Lbp2具有显著的免疫增强作用。同时还具有很好的抗氧化作用。结论　LbGp2是均一的糖缀合物,有免疫活性和抗氧化活性     

肉苁蓉多糖的巨噬细胞活化作用

目的观察肉苁蓉多糖(CDPS)对巨噬细胞的活化作用。方法采用中性红法测定吞噬活性;Griess试剂法测定NO释放量;L929细胞法及小鼠胸腺细胞法测定TNF-α及IL-1释放。结果CDPS在6.25～50mg.L-1剂量范围内可剂量依赖性地增强BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红能力和促进NO释放;在2.8～100mg.L-1剂量范围内可使正常和免疫抑制的RAW264.7细胞NO释放明显增加;在0.56～7.2mg.L-1或3.6～10mg.L-1范围促进RAW264.7细胞TNF-α或IL-1产生,均具有良好的量效关系。结论CDPS可明显提高巨噬细胞吞噬及分泌功能,活化巨噬细胞。肉苁蓉免疫增强作用可能与此有关。     

黑灵芝多糖对体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

目的研究黑灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。方法用不同浓度的黑灵芝多糖作用于正常的和LPS活化的腹腔巨噬细胞;测定巨噬细胞代谢MTT活力;Griess法测定NO的产生;ELISA法检测巨噬细胞培养上清中TNF-α、IL-1β的分泌水平。结果黑灵芝多糖对细胞代谢MTT活力有增强作用;在20～160mg·L-1范围内,多糖呈剂量依赖性地促进正常的巨噬细胞分泌NO、TNF-α、IL-1β,增强免疫;而巨噬细胞经LPS激活后,与LPS组比较,多糖不同程度地抑制NO、TNF-α、IL-1β的过量分泌。结论黑灵芝多糖能有效地增强小鼠腹腔巨噬细胞的免疫,可改善LPS对小鼠腹腔巨噬细胞的诱导作用。     

枸杞糖缀合物及糖链的化学结构与免疫活性

为研究枸杞多糖的化学结构 ,免疫活性并探讨其构效关系 ,应用色谱法 ,凝胶过滤法和十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)技术从枸杞粗多糖 (LBP)中分离纯化了 5个组分 (LBP1 LBP5) ,并进一步从LBP1,LBP3,LBP4中纯化得到组分均一的糖缀合物LbGp1,LbGp3和LbGp4及其糖链LbGp1 OL ,LbGp3 OL和LbGp4 OL ,用甲基化 ,部分酸水解和核磁共振 (NMR)技术基本阐明了其化学性质 ,糖组成 ,氨基酸组成及主要结构特征 ,并用小鼠脾细胞增殖反应研究免疫活性表明 ,6个样品均具有直接增强小鼠脾细胞增殖反应的作用 .结果提示 ,枸杞子中具有免疫活性的有效成分是一类结构复杂的糖缀合物 ,其糖链部分可能是其发挥免疫活性的主要活性结构 .     

化疗联合免疫疗法对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞活性的影响

目的探讨IL-2活化特异性瘤苗联合氟尿嘧啶(5-FU)腹腔化疗,增强腹腔巨噬细胞抗肿瘤转移的效果及其免疫机制。方法建立小鼠结肠癌腹腔转移模型,用5-FU化疗后,辅助结肠癌特异性瘤苗皮下和IL-2腹腔注射,观察对小鼠腹腔巨噬细胞生物学的影响。结果IL-2联合瘤苗注射组腹腔巨噬细胞分泌IL-1、TNF-α和NO水平增高,巨噬细胞的吞噬能力和对肿瘤细胞的杀伤活性提高,显著提高腹腔巨噬细胞抗肿瘤免疫的能力。结论化疗辅助IL-2联合瘤苗免疫治疗,能优化肿瘤局部的抗肿瘤微环境,活化腹腔巨噬细胞抗肿瘤的生物学活性,对抑制结肠癌术后腹腔转移有着重要的临床意义。     

炎痛喜康对小鼠免疫功能的影响

炎痛喜康按２０ｍｇ／ｋｇ剂量每天灌胃一次，连续４—５ｄ，实验结果：提高腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数，炎痛喜康提高小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数的作用被强的松龙阻断，降低鸡红细胞致敬小鼠的溶血素形成；鸡红细胞致敏的小鼠免疫器官重量无明显影响，对ＰＨＡ诱导的小鼠外周血淋巴细胞转化作用圣促进作用．     

枸杞多糖对小鼠巨噬细胞免疫功能的影响研究

目的了解枸杞多糖对小鼠巨噬细胞免疫功能的影响。方法采用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验,以不同浓度枸杞多糖溶液连续灌胃小鼠后,经腹腔注射鸡红细胞悬液,取腹腔洗液制作涂片,固定染色观察,计数,并计算吞噬率和吞噬指数,对结果进行统计学分析。结果枸杞多糖低浓度（10mg/kg）、中浓度（20mg/kg）、高浓度（40mg/kg）浓度组吞噬百分率及吞噬指数与正常对照组比均具有显著性差异,有统计学意义。结论枸杞多糖能够提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力,从而增强机体的免疫功能。     

蛇六谷葡苷露聚糖对小鼠巨噬RAW264.7细胞免疫调节作用及机制研究

目的探讨蛇六谷葡苷露聚糖(KGM)对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用及机制。方法采用MTT法检测KGM对小鼠巨噬RAW264.7细胞存活率的影响,观察巨噬细胞形态的变化;采用吞噬中性红和流式细胞仪测FITC-dextran的方法检测KGM处理后小鼠巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性;采用Griess法测定NO,ELISA法检测细胞培养液中IL-6,IL-1β和TNF-α等细胞因子的含量;采用qRT-PCR法检测小鼠巨噬细胞RAW264.7相关基因iNOS,IL-6,TNF-α,IL-1β,TLR4,My D88,TRAF-6,TRAM和NF-κB等的表达。结果 KGM在50～400 mg·L~(-1)对小鼠巨噬细胞RAW264.7没有细胞毒性。KGM处理24 h后,RAW264.7细胞体积增大,胞内颗粒小泡增多,呈不规则多边形,部分细胞伸出伪足,表现为典型的激活态;中性红吞噬实验和流式测定FITC-dextran实验结果表明,KGM 50～200 mg·L~(-1)能显著提升小鼠巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性,与对照组相比,KGM 100 mg·L~(-1)分别使细胞吞噬活性提高101.4%和404.3%。Griess法检测表明,KGM能显著增加小鼠巨噬细胞RAW264.7合成和释放NO,其中KGM100 mg·L~(-1)处理组细胞NO含量与LPS 5 mg·L~(-1)作用相当,与对照组相比,NO含量提高318.1%。ELISA检测表明,KGM 50～200 mg·L~(-1)能诱导RAW264.7细胞分泌IL-6,TNF-α和IL-1β等细胞因子,与对照组相比,KGM 100 mg·L~(-1)明显使细胞因子分泌量分别增加415.5%,158.6%和458.0%(P<0.01)。qRT-PCR的结果显示,与对照组相比,KGM组IL-6,i NOS,TNF-α,IL-1β,TLR4,My D88,TRAF-6和NF-κB的mRNA表达水平升高(P<0.05),表明KGM可以激活小鼠巨噬细胞RAW264.7中的核转录因子NF-κB和TLR4。结论 KGM对小鼠巨噬RAW264.7细胞具有免疫调节活性,能够显著提升小鼠细胞RAW264.7的吞噬能力,促进分泌与释放NO和TNF-α等相关细胞因子,推测可能是通过激活TLR4/My D88/NF-κB信号通路发挥免疫调节作用。     

双氯灭痛对小鼠免疫功能的影响

双氯灭痛按25mg/kg和50mg/kg两种剂量每天灌胃1次,连续4～5d。结果表明,(1) 双氯灭痛可降低小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数;(2) 在免疫抑制状态下,降低小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数更明显;(3) 降低鸡红细胞致敏小鼠的溶血素形成;(4) 能使鸡红细胞致敏小鼠胸腺重量明显减轻,但使脾脏增重;(5) 对PHA诱导的小鼠外周血淋巴细胞转化呈促进作用。     

猪苓多糖通过Toll样受体4对小鼠腹腔巨噬细胞的活化作用

目的观察猪苓多糖(PPS)对小鼠腹腔巨噬细胞的活化作用,并研究Toll样受体4(TLR4)在其中的作用。方法用PPS12.5,25,50及100mg·L-1刺激C3H/HeN小鼠和TLR4缺陷的C3H/HeJ小鼠脾细胞72h或腹腔巨噬细胞24h,以[3H]TdR掺入法检测脾细胞增殖反应;以Griess法测定腹腔巨噬细胞培养上清一氧化氮(NO)水平,ELISA检测白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;以溴化氰活化多糖的方法制备荧光胺(Flu)标记的PPS(Flu-PPS)及Flu-葡聚糖,应用流式细胞仪及激光共聚焦显微镜检测Flu-PPS与小鼠腹腔巨噬细胞的结合。结果 PPS可明显促进C3H/HeN小鼠脾细胞增殖并诱导腹腔巨噬细胞分泌NO,IL-1β和TNF-α,且具有浓度依赖性(r=0.999,P<0.01)。用抗TLR4单抗20mg·L-1与C3H/HeN小鼠腹腔巨噬细胞预孵育1h后加入PPS50mg·L-1,与单独PPS50mg·L-1孵育比较,巨噬细胞培养上清IL-1β和TNF-α浓度分别由(0.38±0.06)μg·L-1和(0.29±0.05)μg·L-1降至(0.18±0.01)μg·L-1和(0.12±0.02)μg·L-1,降幅达52.6%和58.6%(P<0.01)。PPS对C3H/HeN小鼠的脾细胞增殖、腹腔巨噬细胞产生IL-1β和TNF-α的作用明显强于C3H/HeJ小鼠:PPS12.5～100mg·L-1组脾细胞增殖分别增加了2.4,1.7,1.5和22.2倍,IL-1β增加了0.9,1.3,1.2和1.1倍,TNF-α增加了1.3,0.9,0.6和0.6倍,差异均有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪及激光共聚焦显微镜分析结果表明,Flu-PPS1mg·L-1与小鼠腹腔巨噬细胞结合的荧光强度显著高于Flu-葡聚糖,增加Flu-PPS浓度至5mg·L-1,荧光强度并未相应增强,表明Flu-PPS与小鼠腹腔巨噬细胞的结合具有饱和性;未标记的PPS100mg·L-1及抗TLR4单抗200mg·L-1可明显阻断Flu-PPS与巨噬细胞的结合。结论 PPS可能通过TLR4活化小鼠腹腔巨噬细胞。     

豹皮樟总黄酮对胶原性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞产生细胞因子及其免疫功能的影响

目的研究豹皮樟总黄酮(total flavonoids of LitseacoreanaLeve,TFLC)对胶原性关节炎大鼠(collagen-inducedarthritis,CIA)腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophage,PMΦ)产生细胞因子及其免疫功能的影响。方法Ⅱ型胶原蛋白(collagenⅡ,CII)和氟氏完全佐剂(CFA)诱导大鼠胶原性关节炎(CIA)模型,采用体重、足爪肿胀及病理组织学变化等指标评价TFLC对CIA大鼠的治疗作用;无菌取PMΦ,体外用药(TFLC0.05、0.5、5mg·mL-1),采用小鼠胸腺细胞增殖法检测CIA大鼠PMΦ分泌白细胞介素1(interleukin-1,IL-1)的水平,小鼠脾淋巴细胞增殖法检测CIA大鼠脾细胞分泌白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)的水平,放射免疫测定法和反转录RT-PCR法分别检测CIA大鼠PMΦ中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的分泌和表达,中性红法测定CIA大鼠PMΦ的吞噬功能。结果TFLC(50、100、200mg.kg-1)能抑制关节肿胀,增加CIA大鼠体重,改善膝关节病理损伤。TFLC(0.05、0.5、5mg·mL-1)可降低CIA大鼠PMΦ过强的吞噬功能,下调脾细胞IL-2的分泌水平和腹腔巨噬细胞IL-1的分泌水平,同时抑制PMΦTNF-α的分泌水平以及TNF-αmRNA的表达。结论TFLC对CIA大鼠关节炎具有明显抑制作用,其抗炎和免疫抑制作用与其降低CIA大鼠PMΦ过强的吞噬功能,抑制细胞因子的分泌和表达有关。     

聚乙二醇化重组复合干扰素对小鼠免疫功能的影响研究

目的研究聚乙二醇化重组复合干扰素(PEG-IFNcon)对小鼠免疫功能的影响。方法以重组复合干扰素(IFNcon,商品名:干复津)为对照,分别采用鸡红细胞吞噬法和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定巨嗜细胞吞噬功能和淋巴细胞增殖作用,以3H-TdR掺入法测定刀豆蛋白A(Con A)诱导的淋巴细胞增殖活动。结果PEG-IFNcon能提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能,显著改善环磷酰胺所致的小鼠淋巴细胞功能降低作用,在50~150μg/mL剂量范围内亦能增强小鼠Con A诱导的淋巴细胞增殖反应。结论PEG-IFNcon可显著增强小鼠免疫功能。     

毛蚶多肽提取物的体外免疫活性

目的考察毛蚶多肽提取物(PEAS)的体外免疫活性。方法 MTT法测定PEAS对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响及对小鼠NK细胞杀伤活性的影响;中性红吞噬法测定PEAS对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响;流式细胞术测定PEAS所致小鼠脾淋巴细胞周期的变化;双抗体夹心ELISA法测定PEAS对主要细胞因子IFN-γ和IL-4分泌水平的影响。结果 PEAS能够显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖(P<0.05或0.01),能够增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红活性和小鼠NK细胞杀伤活性(P<0.05或0.01);PEAS能够促进脾淋巴细胞G0/G1期向DNA合成期(S期)转化;PEAS协同Con A作用,能够增加IFN-γ的分泌(P<0.05或0.01),并且能够抑制IL-4的分泌(P<0.05或0.01)。结论 PEAS体外可促进小鼠脾淋巴细胞、腹腔巨噬细与NK细胞的免疫功能,其机制可能与促进脾淋巴细胞DNA合成,增加IFN-γ的分泌量有关。     

橙皮苷对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用及机制

目的研究橙皮苷(hesperidin,HDN)对佐剂性关节炎(AA)大鼠的治疗作用及部分机制。方法用弗氏完全佐剂(FCA)诱导大鼠AA模型;足容积法测量继发侧足肿胀度;MTT法检测刀豆蛋白(ConA)和脂多糖(LPS)诱导的脾淋巴细胞增殖反应;放免法测定脾淋巴细胞产生IL-2的水平以及腹腔巨噬细胞(PMΦ)IL-1,IL-6和TNF-α的水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定PMΦ产生IL-10的水平。结果致炎后d12,大鼠继发性关节炎出现,同时灌胃给予不同剂量的HDN(40、80、160mg·kg-1),连续12d,从致炎后d20开始,HDN(80、160mg·kg-1)对AA大鼠继发性炎症有明显抑制作用;HDN各剂量可不同程度地纠正AA大鼠低下的脾淋巴细胞增殖反应和脾细胞IL-2的产生,降低AA大鼠PMΦ产生过高的IL-1,IL-6和TNF-α,同时上调AA大鼠PMΦ低下的IL-10水平。结论HDN对AA大鼠继发性炎症具有治疗作用,其作用机制可能与调节机体异常的免疫功能和维持细胞因子网络平衡有关。     

蒿甲醚对小鼠免疫功能的影响

JCR鼠按200mg/kg·d~(-1)每天蒿甲醚灌胃2次,连续给药4～7d。实验结果可见:(1)蒿甲醚能引起小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率降低,但对巨噬细胞的吞噬指数无明显影响。(2)降低鸡红细胞致敏小鼠血清IgG含量。(3)促进鸡红细胞致敏小鼠的溶血素形成。(4)能使鸡红细胞致敏小鼠胸腺重量明显减轻。(5)对PHA诱导的小鼠外周血淋巴细胞转化无明显影响。     

双氢青蒿素保护刀豆蛋白A诱导的小鼠肝损伤及机制探讨

目的研究双氢青蒿素(dihydroqinghaosu,DQHS)对刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)诱导的小鼠免疫性肝损伤的保护作用及可能机制。方法小鼠尾静脉注射ConA建立肝损伤模型;改良赖式法和ELISA法分别测定DQHS预给药对该模型小鼠血浆转氨酶和TNF-α水平的影响;MTT法检测DQHS对ConA诱导体外小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;RT-PCR检测DQHS对LPS刺激的RAW264.7巨噬细胞IL-1β和TNF-αmRNA表达水平的影响。结果与模型组比较,DQHS 40μg.g-1给药组可降低ConA诱导的肝损伤小鼠血浆转氨酶水平,各DQHS组均可降低该小鼠血浆TNF-α水平;DQHS 40μmol.L-1和100μmol.L-1处理组能抑制ConA诱导的体外脾淋巴细胞增殖,减少LPS刺激的巨噬细胞炎症因子IL-1β和TNF-αmRNA的表达。结论DQHS对ConA诱导的小鼠免疫性肝损伤有保护作用,该作用可能通过抑制脾淋巴细胞增殖和巨噬细胞相关炎症细胞因子表达来实现。     

TREM-1siRNA对内毒素刺激巨噬细胞杉RAW264．7分泌炎性因子影响

目的探讨靶向小鼠髓样细胞触发受体1（triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1）的小分子干扰RNA（small inter-feting RNA,siRNA）在体外对内毒素刺激小鼠巨噬细胞株RAW264．7分泌肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白纽胞介素1p（interleukin1B,IL-1β）的抑制作用。方法合成1条靶向小鼠TREM-1分子的siRNA序列,以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）作为报告因子,荧光显微镜观察EGFP的荧光强度,验证siRNA序列的干扰率。以pLKO1-1为载体构建针对TREM-1的pLKO1．1-TREM1-shRNA干扰质粒。将小鼠巨噬细胞株RAW264．7分为4组：空白组;内毒素组（LPS组）;空质粒组（pLKO1．1组）：采用脂质体法将pLKO1．1转染细胞;干扰组（siRNA组）：将pLKO1．1-TREM1-shRNA转染细胞;转染72h后用内毒素刺激24h,并以实时定量PCR分别检测TREM．1、TNF-α与IL-1β的表达;以ELISA分别检测上清液中TNF-α、IL-1β含量。结果与LPS组比较,siRNA组中TREM．1、TNF—α、IL-1β的mRNA显著下降（P〈0．01）,上清液中TNF-α、IL-1β含量明显降低（P〈0．01）。结论小分子干扰RNA可能通过抑制TREM-1基因的表达而减少内毒素诱导小鼠巨噬细胞264．7中TNF-α、IL-1β的分泌。