大黄素提升人肝癌细胞活性氧对氟尿嘧啶促凋亡作用的影响

目的：观察大黄素提升人肝癌细胞HepG2活性氧（ROS）水平对氟尿嘧啶（5-FU）促凋亡作用的影响.方法：大黄素以不同方式作用于HepG2细胞,以流式细胞仪（FCM）检测细胞内ROS的动态变化.不同浓度大黄素单用或与5-FU联合作用于HepG2细胞,以MTT检测细胞活力;FCM检测细胞凋亡率及周期分布;透射电镜观察细胞超微结构改变.结果：大黄素剂量和时间依赖性地提升HepG2细胞的ROS水平,2～4h达到高峰.大黄素与5-FU联用,时间及剂量依赖性地增强5-FU对HepG2细胞的促凋亡作用.结论：应用大黄素提升人肝癌细胞HepG2的ROS水平可能是提高化疗药物抗肿瘤疗效的一种手段.     

白杨素对5- 氟尿嘧啶诱导人肝癌Bel-7402 细胞凋亡的增敏机制研究

目的 探讨白杨素对5- 氟尿嘧啶（5-FU）诱导肝癌Bel-7402 细胞凋亡的增敏作用。方法 白 杨素单独或联合5-FU 作用Bel-7402 细胞,用MTT 法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡与周期分 布变化;Western blotting 检测Bcl-2、Bax、Bad 及Cleaved Caspase-3 蛋白。结果 50 ～ 250μmol/L 白杨 素作用Bel-7402 细胞48 h 呈浓度依赖性的抑制细胞活力,且100μmol/L 白杨素组细胞存活率为（82.261± 7.793）%。100μmol/L 白杨素单独作用24 h 对Bel-7402 细胞活力和凋亡均无影响（P >0.05）。与空白对照 组比较,100μmol/L 白杨素作用24 h 后,不同浓度5-FU（12.5、25.0 及50.0μg/ml）作用48 h 对Bel-7402 细胞活力的抑制作用增强（P <0.05）;25.0μg/ml 5-FU 诱导Bel-7402 细胞凋亡率增加（P <0.05）;G2/M 期 细胞比例升高（P <0.05）;促凋亡蛋白Bax、Bad 及Cleaved Caspase-3 蛋白表达水平上调（P <0.05）;抗凋亡 蛋白Bcl-2 表达水平下调（P <0.05）。结论 白杨素增强5-FU 诱导人肝癌Bel-7402 细胞凋亡,其机制可能 与线粒体凋亡通路激活有关。     

5—Fu诱导食管癌细胞凋亡的观察

用倒置显微镜，光镜，电镜的形态学方法和ＤＮＡ断片检测方法观察了人食管癌Ｅｃａ－１０９细胞在５－Ｆｕ作用后的形态学变化和生化改变。结果，肿瘤细胞回缩亦圆，体积缩小，有的细胞呈出芽状。核染色质凝、环状核形成，核碎裂及凋亡小体形成。     

大黄素联合5-氟尿嘧啶对人胃癌细胞MKN45增殖抑制及诱导凋亡

目的研究大黄素联合5-氟尿嘧啶（5-Fu）对人胃癌细胞MKN45增殖及诱导凋亡的作用。方法不同浓度大黄素单用或与5-Fu联合作用于人胃癌MKN45细胞,甲氮唑蓝法观察对MKN45的生长抑制作用;荧光染色法、流式细胞仪分析MKN45的凋亡。结果10、20μg／mL大黄素分别与5-Fu联用对人胃癌MKN45细胞有明显的生长抑制作用,其抑制作用呈时间及浓度依赖性（P〈0．05）;流式细胞仪分析大黄素联合5-Fu能浓度依赖性诱导MKN45细胞凋亡和G2／M期阻滞,大黄素与5-Fu联用细胞凋亡率与5-Fu单用组相比差异有统计学意义（P〈0．051;吖啶橙染色观察联合作用组细胞核内可见浓染致密的颗粒荧光、新月型改变、核固缩或片段化及凋亡小体的形成。结论大黄素联合5-Fu可显著增强诱导人胃癌MKN45细胞凋亡的作用。     

软脂酸诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡

目的探讨软脂酸(PA)对肝细胞的损害作用及其机制.方法采用人肝癌细胞系HepG2细胞为研究对象,观察PA对细胞生存力的影响.用Trypan blue法检测细胞死亡率;流式细胞记数仪检测细胞周期;AnnexinV和碘化丙啶双重染色定量检测早期凋亡及Bcl-2/Bax的表达.结果在人HepG2细胞系中PA诱导了时间相关性细胞死亡和剂量依赖性的细胞生存能力下降;PA诱导了HepG2细胞随处理时间而增加的早期凋亡,PA处理后HepG2细胞中Bcl-2/Bax的比值下降.结论PA能诱导肝细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2/Bax比值有关.     

苦参碱联合5-FU诱导人胃癌细胞凋亡的机制

目的探讨苦参碱和5-氟尿嘧啶(5-FU)联用诱导人胃癌细胞SGC7901凋亡的机制。方法1.0mg/mL苦参碱联合20mg/L5FU作用于SGC7901细胞48h,RTPCR和免疫细胞化学检测bcl-2、bax、Fas、Fas-L的mRNA和蛋白表达;免疫细胞化学、酶联免疫吸附试验和Westernblot检测活性caspase3的表达,并与空白对照组和单独苦参碱或5-FU用药组比较。结果联合用药组bcl2下调,bax、Fas上调,与空白对照组有显著差异(P<0.05),与单独用药组相比无显著性差异(P>0.05);联合用药组活性caspase-3表达显著增高,与各组比较均有显著差异(P<0.01)。结论苦参碱和5FU联用通过上调bax、下调bcl2/Fax,显著提高活性caspase3的表达,从而协同诱导胃癌细胞SGC7901的凋亡。     

靶向Survivin基因microRNA诱导肝癌细胞凋亡的实验

目的:探讨靶向Survivin的microRNA转染肝癌细胞阻抑Survivin表达,及其对肝癌细胞凋亡、增殖的影响。方法:设计合成特异性靶向Survivin的microRNA的序列。肝癌细胞株HepG2接种于细胞培养板内,分为5组,空白对照组、脂质体组和低、中、高浓度转染组(分别给予50、100和200 nmol/L microRNA转染);作用后收集各组细胞。四氮唑盐(MTT)法检测不同浓度的microRNA对细胞的生长抑制率。流式细胞术检测各组细胞增殖率和凋亡指数。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测靶向Survivin的mRNA表达水平。结果:通过MTT检测,不同浓度microRNA转染组细胞的抑制率明显高于对照组(P<0.05)。各浓度mi-croRNA转染组细胞凋亡指数明显高于对照组(P<0.05),高浓度转染率最明显(P<0.05)。各浓度microRNA转染组细胞增殖指数明显低于对照组(P<0.05),高浓度转染组最明显(P<0.05)。各浓度microRNA转染组细胞Sur-vivin的mRNA转录水平有不同程度减弱。结论:不同浓度Survivin的microRNA转录能下调Survivin的mRNA表达,诱导肝癌细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

FB1诱导肝癌细胞凋亡FasL表达的变化

目的：了解不同浓度富马毒素（FB1）诱导肝癌细胞产生凋亡时FasLmRNA表达的变化方法：采用流式细胞术检测细胞的凋亡;荧光定量RT-PCR测定细胞FasLmRNA表达的水平。结果：5—40μmol／LFB1实验组均诱导肝癌细胞出现凋亡,经流式细胞仪检测凋亡率与对照组相比差异有显著性（P〈0．05）。荧光定量PCR检测结果显示,各实验组FasLmRNA与对照组相比表达均有一定程度降低,差异有显著性（P〈0．05）。结论：一定浓度的FB1可诱导肝癌细胞凋亡;各实验组FasLmRNA均无表达的增加并且降低。     

HSS促进人肝癌细胞凋亡的研究

目的：研究肝刺激物（hepatic stimulator substance,HSS)对人肝癌细胞凋亡的影响。方法：用无血清培养人肝癌细胞诱导典型的细胞凋亡，以此为模型应用流式细胞术及流式细胞免疫荧光技术，检测HSS作用不同时间后，对无血清培养人肝癌细胞诱导凋亡比率的影响，并观察HSS对常规培养人肝癌细胞的P53蛋白表达变化的影响。结果：HSS作用于无血清培养的人肝癌细胞，细胞凋亡比率随时间延长而增加；HSS作用于常规培养的人肝癌细胞，P53蛋白的表达随时间延长而减弱。结论：HSS对无血清培养人肝癌细胞凋亡有促进作用。     

5-Fu诱导Eca-109细胞凋亡过程中白介素1β转化酶的表达

用５氟尿嘧啶（５Ｆｕ）在体外诱导人食管癌Ｅｃａ１０９细胞凋亡，并用免疫细胞化学方法检测了白介素１β转化酶（ＩＣＥ）在５Ｆｕ作用前后的表达情况。结果表明：①光镜及电镜的形态学方法证实，５Ｆｕ引起细胞死亡的形式为凋亡；②未用药处理的对照细胞ＩＣＥ呈阴性表达，而５Ｆｕ作用后阳性表达的细胞数目增加，表达强度增强。结果提示：ＩＣＥ基因可能参与５Ｆｕ诱导细胞凋亡的调节，ＩＣＥ蛋白介导５Ｆｕ引起的细胞凋亡。     

斑蝥酸钠体外诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨斑蝥酸钠体外诱导肝癌细胞的凋亡。方法 :应用MTT法、流式细胞仪、透射电镜和琼脂糖凝胶电泳综合分析肝癌细胞的变化。结果 :斑蝥酸钠作用 4 8h使肝癌细胞生长明显抑制 ;细胞凋亡率达 4 0 .0 2 %±2 .0 5 % ,并出现典型的凋亡峰 ,细胞增殖于G2 +M期阻滞 ;细胞核染色质出现凝集、边集等超微结构变化 ;细胞DNA电泳也显示了凋亡特有的“梯子”状条带。结论 :斑蝥酸钠体外可诱导肝癌细胞的凋亡 ,细胞生长阻断在G2 +M期。     

奥沙利铂对人肝癌细胞株SMMC7721的体外抗肿瘤作用

目的研究奥沙利铂对人肝癌细胞株SMMC7721生长抑制及诱导凋亡的作用并探讨其机制。方法以不同浓度的奥沙利铂作用于SMMC7721细胞,应用MTT法检测奥沙利铂对SMMC7721细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化;采用分光光度法检测caspase-3、cas-pase-8、caspase-9的活性。结果奥沙利铂可抑制SMMC7721细胞的生长并具有时间和剂量依赖性,Hoechst33258荧光染色可见典型的细胞凋亡特征,流式细胞仪检测到细胞阻滞于S期和SubG1峰。经过奥沙利铂诱导,caspase-3、caspase-9活性被上调,较对照组明显升高（P〈0.05）,caspase-8活性未见明显改变（P〉0.05）。结论奥沙利铂具有抑制肝癌细胞株SMMC7721增殖及诱导凋亡作用,此作用可能通过激活内源性凋亡途径实现。     

大黄素对HCT116结肠癌细胞凋亡作用及机制研究

目的 研究大黄素促进人结肠癌细胞HCT116细胞凋亡的作用及其分子机制。方法 通过CCK8法检测大黄素对细胞活力的影响,并计算出IC₅₀。Annexin-V/PI流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期和荧光探针DCF-DA细胞内活性氧(ROS)的水平,Western blot法检测Bax、Bcl-2、p-ERK1/2、ERK1/2和c-Myc的表达。结果 不同浓度的大黄素抑制HCT116细胞的活力,并且具有浓度依赖性。大黄素将HCT116细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05),并且能够明显诱导ROS的产生(P<0.01),Western blot结果显示大黄素能够引起Bax/Bcl-2表达的上调,p-ERK1/2和c-Myc表达的降低(P<0.05)。结论 大黄素可以通过上调Bax/Bcl-2,下调c-Myc和p-ERK/ERK的表达从而促进结肠癌细胞的凋亡,阻滞细胞周期和增加ROS的产生。      

DR5上调在5，7-二甲氧基黄酮增敏TRAIL诱导肝癌细胞凋亡中的作用

目的 研究5,7-二甲氧基黄酮(5,7-DMF)是否能增强人肝癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)介导细胞凋亡的敏感性及其作用机制.方法 体外培养人肝癌Hep 3B细胞.MTT法测定细胞毒性;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;免疫酶联吸附法测定caspase-3和caspase-8的活性.Western blot 分析DR4和DR5表达.结果 5,7-DMF能增强Hep 3B细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性和诱导DR5表达.5,7-DMF与TRAIL合用诱导Hep 3B细胞凋亡依赖于caspase-3和caspase-8活化.DR5特异拮抗性嵌合抗体减弱5,7-DMF增强TRAIL诱导Hep 3B细胞凋亡作用.结论 5,7-DMF通过上调DR5增强TRAIL诱导人肝癌细胞凋亡.     

Bevacizumab对肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响

目的探讨Bevacizumab对肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响。方法应用免疫细胞化学法检测肝癌细胞株HepG2中血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFRs）蛋白的表达；ELISA法检测HepG2细胞培养上清液中VEGF蛋白的表达；Bevacizumab处理HepG2细胞48h后，MTT法检测Bevacizumab对细胞增殖的抑制作用，用流式细胞仪检测并分析细胞凋亡变化。设不加药物的HepG2细胞为对照组。结果HepG2细胞中VEGF和VEGFR蛋白呈阳性表达，其细胞培养上清液中存在VEGF蛋白分泌；Bevacizumab可抑制HepG2细胞增殖；并可诱导HeF，G2细胞的凋亡，凋亡率为（17．04±0．14）％，明显高于对照组（2．85±0．08）％（P〈0．05）。结论Bevacizumab町直接抑制肝癌细胞株HepG2的增殖，并诱导其凋亡；为Bevacizumab除抗血管生成之外的抗肿瘤作用机制提供新的研究依据；为Bevacizumab在肝细胞癌治疗的应用提供理论依据。     

三氧化二砷对Bel-7402人肝癌细胞株的促凋亡作用

目的 :研究三氧化二砷 (As2 O3 )在体外是否具有抗肝癌作用 ,并对其作用机制进行初步探讨。方法 :用不同浓度的As2 O3 处理Bel 740 2人肝癌细胞株及L 0 2正常人肝细胞株 ,应用四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT法 )观察As2 O3 对细胞生长的影响 ,并用电镜、流式细胞仪、DNA电泳等检测方法研究其作用机制。结果 :MTT法发现As2 O3 0 .5～ 2 .0mg·L-1的浓度均可显著抑制Bel 740 2人肝癌细胞株的生长 ,而对L 0 2正常人肝细胞株的抑制作用较弱。经As2 O3 作用后 ,透射电镜和扫描电镜观察均显示Bel 740 2细胞发生了显著的凋亡形态改变 ;提取细胞DNA行琼脂糖凝胶电泳可见典型的梯形条带 ;流式细胞仪分析可见有亚G1峰出现 ,凋亡率呈时间和剂量双重依赖性特点。结论 :As2 O3 在体外可显著抑制肝癌细胞株生长 ,其作用机制主要是诱导肿瘤细胞凋亡     

一氧化氮诱导肝癌细胞凋亡过程bcl-2和bax mRNA表达水平的变化

目的 探讨在一氧化氮(NO)诱导肝癌细胞凋亡过程bcl-2和bax mRNA表达水平的动态变化。方法 用NO供体硝普钠(SNP)诱导SMMC-7721和HepG2肝癌细胞株凋亡，RT-PCR的方法检测bcl-2、ba xmRNA表达水平，并采用凝胶分析系统进行半定量分析。结果 1．0mmol/L可降低SMMC-7721和HepG2细胞bcL2、bax mRNA的表达水平，提高bax/bc1-2 mRNA的比值并呈时间依赖性。HepG2细胞bcl-2和bax mRNA降低的幅度较SMMC-7721细胞小(P＜0．05)，开始变化的时间也较SMMC-7721细胞迟。结论 NO诱导肝癌细胞株的凋亡，可能与其bcl-2、bax mRNA表达水平变化导致bax/bc1-2 mRNA比值上升有关。     

人肝癌细胞和成纤维细胞共育时超微结构的改变

采用定位培养技术 ,将人肝癌细胞和成纤维细胞有序地接种在同一容器内培养 ,电镜下观察 2种细胞接触时细胞切面超微结构的变化。结果 :与肝癌细胞伪足接触的成纤维细胞膜下出现多个吞饮泡 ,使骨架纤维下移 ,局部断裂。 2种细胞的线粒体肿胀 ,溶酶体增多 ,胞质中出现许多泡状结构。提示 ,在肝癌细胞侵袭成纤维细胞早期、成纤维细胞膜尚未受到破坏时 ,细胞内的结构已发生了改变。     

API通过耗竭GSH抑制人肝癌Hep G2细胞活性和诱导凋亡

目的:研究芹菜素(apigenin,API)是否通过耗竭谷胱甘肽(glutathione,GSH)诱导人肝癌Hep G2细胞活性抑制和凋亡。方法:体外培养Hep G2细胞。分光光度法测定细胞GSH水平。MTS比色法测定细胞活力。PI染色FCM分析细胞凋亡率。结果:API降低Hep G2细胞GSH水平(P<0.05),呈浓度依赖性。API以浓度依赖方式抑制Hep G2细胞活性(P<0.05),同时,诱导Hep G2细胞Sub G1百分率增高(P<0.05);500μM GSH预孵育30min,能有效阻断API降低细胞GSH水平、抑制细胞活性和诱导细胞凋亡作用(P<0.05)。结论:API通过耗竭细胞GSH抑制Hep G2细胞活性和诱导细胞凋亡。     

凋亡抑制因子Survivin mRNA在肝癌组织中的表达及其意义

目的：检测凋亡抑制因子Survivin mRNA在肝癌组织中的表达．探讨Survivin mRNA在肝癌诊断及治疗方面的应用。方法：采用逆转录多聚酶联反应（RT—PCR）技术检测46例肝癌组织、30例肝硬化组织及10例正常肝脏组织中Survivin mRNA的表达。结果：46例肝癌组织中Survivin mRNA阳性表达率为100％,而在30例肝硬化活检病理标本和10例正常肝脏组织中未表达。结论：Survivin mRNA有望成为新的肿瘤标志物,应用于临床以协助肝癌诊断和靶向性基因治疗。