Targeting EGFL7 Expression through RNA Interference Suppresses Renal Cell Carcinoma Growth by Inhibiting Angiogenesis

Renal cell carcinoma (RCC) is the most lethal of all urological cancers and tumor angiogenesis is closely relatedwith its growth, invasion, and metastasis. Recent studies have suggested that epidermal growth factor-like domainmultiple 7 (EGFL7) is overexpressed by many tumors, such as colorectal cancer and hepatocellular carcinoma;it is also correlated with progression, metastasis, and a poor prognosis. However, the role of EGFL7 in RCC isnot clear. In this study, we examined how EGFL7 contributes to the growth of RCC using a co-culture systemin vitro and a xenograft model in vivo. Downregulated EGFL7 expression in RCC cells affected the migrationand tubule formation of HMEC-1 cells, but not their growth and apoptosis in vitro. The level of focal adhesionkinase (FAK) phosphorylation in HMEC-1 cells decreased significantly when co-cultured with 786-0/iEGFL7cells compared with 786-0 cells. After adding rhEGFL7, the level of FAK phosphorylation in HMEC-1 cells wassignificantly elevated compared with phosphate-buffered saline (PBS) control. However, FAK phosphorylationwas abrogated by EGFR inhibition. The average size of RCC local tumors in the 786-0/iEGFL7 group wasnoticeably smaller than those in the 786-0 cell group and their vascular density was also significantly decreased.These data suggest that EGFL7 has an important function in the growth of RCC by facilitating angiogenesis.     

下调VEGF表达影响鼻咽癌细胞放射敏感度的机制

目的　应用RNA干扰技术抑制人鼻咽低分化鳞状上皮细胞癌细胞株CNE-2中血管内皮生长因 子（VEGF）表达,研究阻断VEGF基因表达对鼻咽癌细胞放射敏感度的影响及机制。方法 构建针对 VEGF的siRNA真核表达载体pU-VEGF-siRNA（CNE-2组）、1个阴性对照质粒（CNE-2/Neg-siRNA 组）、经脂质体转染至CNE-2细胞（CNE-2/VEGF-siRNA组）,用平板克隆形成实验检测在6MV-X线 0、2、4、6、8、10 Gy照射后克隆形成能力及通过单击多靶模型、线性二次模型拟合放射生物学参 数,流式细胞检测分析细胞周期和细胞凋亡的变化,用RT-PCR定量分析三组细胞中Cyclin D1、Cyclin E、P16和P53的mRNA表达。结果 经6MV-X线0、2、4、6、8、10 Gy照射后细胞存活率显著下降, CNE-2/VEGF-siRNA组细胞经D0和2 Gy照射后的存活分数明显低于CNE-2组、CNE-2/Neg-siRNA组; CNE-2/VEGF-siRNA组中G1/S期细胞周期阻滞更为明显。在Cyclin D1、Cyclin E、p16和p53基因中, Cyclin D1mRNA表达在放疗后6、12和24 h进行性升高,差异有统计学意义,而其他基因变化差异无统 计学意义,Western blot检测显示Cyclin D1蛋白表达在放疗后24 h明显升高。结论 下调VEGF表达可 增加鼻咽癌细胞的放射敏感度,其机制可能是通过Cyclin D1信号通路途径使细胞周期发生G1/S期阻滞。     

RNAi抑制iASPP基因表达对大肠癌细胞凋亡的影响及机制

摘 要：［目的］ 探讨RNAi抑制iASPP基因表达对大肠癌细胞凋亡的影响。［方法］ 参照脂质体LipofectamineTM2000转染说明转染iASPP的siRNA（iASPP-siRNA组）进入人大肠癌LoVo细胞株,并设置阴性对照组（转染无义的siRNA序列）和空白对照组（仅加入脂质体）,Western bloting检测转染48h的3组细胞中iASPP的蛋白表达;CCK8法于转染的24h、48h、72h检测细胞活力;流式细胞术检测转染48h的细胞凋亡率;Western blotting检测Ki-67、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase3）、STAT3和磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)的蛋白表达。［结果］ iASPP-siRNA组（0.108±0.013）LoVo细胞株iASPP的蛋白表达显著低于空白对照组（0.389±0.036）（P<0.05）;iASPP-siRNA组细胞在24h（0.267±0.034）、48h（0.495±0.067）和72h（0.682±0.068）的活力细胞均显著低于空白对照组（0.385±0.042、0.688±0.074、0.977±0.097）（P<0.05）,在48h的细胞凋亡率（11.18%±0.78%）显著高于空白对照组（2.13%±0.45%）（P<0.05）。Ki-67（0.126±0.018）和p-STAT3（0.110±0.012）的蛋白表达水平显著低于空白对照组（0.365±0.045、0.169±0.018）,Caspase3（0.197±0.020）表达水平高于空白对照组（0.086±0.009）（P<0.05）,3组间STAT3蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。［结论］通过RNAi抑制iASPP基因表达可降低大肠癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,机制可能是下调STAT3信号,对细胞增殖的影响是下调Ki-67表达,凋亡的影响是上调Caspase3表达。     

RNA干扰技术抑制涎腺腺样囊性癌的研究进展

涎腺腺样囊性癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一,具有早期易血行转移,嗜神经侵袭,术后易局部复发及远处转移等特点。目前,对丧失手术机会的患者尚缺乏有效的治疗手段。RNA干扰作为一种可高效、特异性沉默目的基因的手段已被广泛应用于各种肿瘤研究。通过利用RNA干扰技术沉默腺样囊性癌的癌基因、抗凋亡因子及黏附、迁移相关因子等基因的表达后,腺样囊性癌的发展受到了明显的抑制。本文拟对涎腺腺样囊性癌的RNA干扰治疗进展进行综述。     

大肠癌组织中血管内皮生长因子的表达及其临床意义

目的探讨大肠癌患者血管内皮生长因子(VEGF)与组织学分级和Dukes分期的关系.方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测了68例大肠癌患者肿瘤组织中VEGF表达水平.结果肿瘤组织中VEGF表达水平在不同组织学分级之间比较,无显著性差异;Dukes C、D期组显著高于Dukes A、B期.结论检测大肠癌患者VEGF的表达,可作为判断大肠癌分期、预测淋巴结转移和远处转移的1个指标.     

结直肠癌VEGF和MMP-9基因的表达

目的 :探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因在结直肠癌组织的表达,以明确其在结直肠癌浸润和转移过程中的变化规律。 方法 :采用定量逆转录聚合酶链式反应方法,检测30例结直肠癌手术切除标本之肿瘤及切端结肠组织中VEGF、MMP-9mRNA转录水平,采用免疫组织化学方法检测VEGF、MMP-9蛋白表达水平;并结合临床病理指标进行分析。 结果 :肿瘤组织VEGF、MMP-9的mRNA转录水平显著高于切端结肠组织(P<0.01),肿瘤组织VEGF、MMP-9的mRNA转录水平分别在不同的浸润深度、有无淋巴结转移及Dukes分期之间具有统计学意义(P<0.01或P<0.05);肿瘤组织VEGF、MMP-9的蛋白表达阳性率分别为56.67%(17/30)、73.33%(22/30),显著高于切端结肠组织(P<0.01),肿瘤组织VEGF、MMP-9的蛋白表达水平分别在不同的浸润深度、有无淋巴结转移及Duke’s分期之间具有统计学意义(P<0.01或P<0.05);无论是在mRNA转录水平,还是在蛋白表达水平,肿瘤组织VEGF与MMP-9两基因之间均具有相关性(P<0.01)。 结论 :VEGF和MMP-9在结直肠癌的恶性生物学行为中起重要作用,其高表达者肿瘤易于侵袭、转移,可作为判断肿瘤恶性进程和浸润转移的生物学指标。     

RNA干扰抑制Skp2表达对人喉癌细胞系Hep-2的影响

[目的]研究RNA干扰抑制Skp2表达对喉癌鳞状细胞p27表达、细胞增殖和凋亡的作用.[方法]利用脂质体将重组质粒转染Hep-2细胞,用慢病毒系统建立干扰Skp2基团的稳定细胞株;荧光实时定量PCR和Western blot法检测转染细胞株中Skp2和p27mRNA及其蛋白表达;采用MTr法和流式细胞仪检测转染细胞的增殖和凋亡情况.[结果]通过慢病毒siRNA技术,Skp2可持续稳定抑制Hep2喉癌细胞,siRNA可诱导抑制Skp2,增加p27表达,降低细胞增殖,增加喉癌细胞的凋亡.[结论]靶向Skp2基因的siRNA对Hep-2细胞的抑制作用可能是通过上调p27基因水平来实现的,Skp2是基因疗法治疗喉癌的有利靶点.     

肝脏SDF-1表达与结直肠癌肝转移

 目的 探讨SDF-1在人体不同正常组织中的表达差异以及这种差异的临床意义,探讨SDF-1在结直肠癌患者肝脏组织中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组化方法对30例3种不同人体组织的SDF-1的表达进行检测、分析SDF-1在不同组织中的表达;应用免疫组化方法对67例结直肠癌中原发组织及其正常的肝脏组织和25例肝转移癌组织标本中的SDF-1、CXCR4的表达进行研究,观察SDF-1/CXCR4在结直肠癌肝转移中的作用。结果 SDF-1在皮肤组织中的阳性表达率为20%（6/30）,在小肠黏膜中的阳性表达率为26.7% (8/30),在肝组织中的阳性表达率为83.3%。SDF-1在正常人体肝组织中的表达明显高于其他两种组织(P<0.05);SDF-1在结直肠癌患者的正常肝脏组织中的阳性率为80.9% (54/67),其表达与结直肠癌肝转移的发生率有关,表达高者,转移率高。结论 正常肝组织中CXCR4特异性配体SDF-1表达升高,而高表达SDF-1的肝组织可能成为表达CXCR4的结直肠癌转移靶点。SDF-1/CXCR4在结直肠癌肝特异性转移过程中起重要的作用。     

同时抑制VEGF、hTERT和Bcl-xl表达对喉癌细胞生长增殖的影响

 目的 研究同时抑制VEGF、hTERT和Bcl-xl的表达对体内、外喉癌细胞生长增殖的影响。 方法 使用针对VEGF、hTERT和Bcl-xl mRNA的shRNA真核表达载体：pshRNA-VEGF-hTERT-Bcl-xl。通过脂质体的介导将该质粒转染至体外培养的喉鳞癌Hep-2细胞。四甲基偶氮唑蓝(MTT) 检测该质粒对Hep-2细胞的毒性作用;构建喉鳞癌荷瘤裸鼠动物模型,采用瘤体内多点注射的方式将质粒导入瘤体内,观察质粒对移植瘤的生长抑制作用。 结果 质粒pshRNA-VEGF-hTERT-Bcl-xl成功转染到喉癌细胞中并表达。经质粒pshRNA-VEGF- hTERT-Bcl-xl处理后,MTT结果显示癌细胞增殖能力显著下降,与0.9%氯化钠溶液治疗的对照组比较,在处理后24h、48h和72h,细胞增殖活性分别降至62.22%,28.77%和10.24%。pshRNA-VEGF-hTERT-Bcl-xl质粒治疗组裸鼠移植瘤生长缓慢,体积明显小于对照组,首次治疗后28天抑瘤率为90.2％,与0.9%氯化钠溶液治疗的对照组比较,P<0.01。 结论 同时抑制VEGF、hTERT、Bcl-xl表达可显著提高喉鳞癌的治疗效果。该实验为多基因靶向的肿瘤基因治疗提供了新思路。     

Endoglin与VEGF在大肠癌发生发展中的表达及意义

目的研究Endoglin与VEGF在大肠癌发生、发展中的表达及意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测10例正常大肠黏膜组织、45例大肠腺瘤组织和41例大肠腺癌组织的Endoglin、VEGF的表达,对Endoglin单抗标记的血管在×200显微镜下计数MVD。结果Endoglin阳性的微血管主要分布在癌和腺瘤组织的表面,其所标记的MVD值在结直肠癌发生发展过程中逐渐增加。结直肠腺瘤-腺癌序列中,VEGF的阳性表达率逐渐增加,各组织间VEGF表达率差异有统计学意义(P<0·01)。结论Endoglin标染新生微血管的特异性更强,可以作为常规的活性增殖期血管内皮标记物进行大肠癌血管生成方面的研究。     

鼻咽癌尿激酶型纤溶酶原激活物及VEGF 表达与侵袭转移关系

 目的　探讨鼻咽癌 ( NPC)组织尿激酶型纤溶酶原激活物 ( u PA)及血管内皮细胞生长因子 ( VEGF)表达与癌生物学行为的关系。方法　采用免疫组织化学方法检测了 45例 NPC组织中的 u PA及 VEGF表达。结果　NPC有淋巴结转移组 u PA及 VEGF的阳性率较无淋巴结转移组高 ,复发或远处转移组与无复发组之间有显著性差异 ;u PA与 VEGF表达有相关性 ( P<0 .0 5 )。结论　u PA与 VEGF与鼻咽癌的浸润及转移密切相关 ,在鼻咽癌的发生、发展和转移过程中可能起促进作用.     

层粘连蛋白与大肠癌转移的相关性研究

目的 :探讨大肠癌患者血清中层粘连蛋白 (laminin ,LN)水平与大肠癌转移的相关性 ,为临床尽早发现复发和转移提供依据。方法 :采用ELISA方法比较了 4 7例健康人和 171例大肠癌患者血清LN水平 ;以及大肠癌患者性别、年龄、Dukes分期、肿瘤分化程度、DNA指数、CEA、转移状况与LN的关系。结果 :大肠癌患者血清中LN阳性率为 63 16% ;大肠癌的LN ( 2 10 0 1μg/mL)水平明显高于健康人( 5 3 85 μg/mL) ,P <0 0 1;大肠癌转移者的LN水平高于未转移者 ,尤以结肠癌肝转移者更为显著 ,P <0 0 5。其余诸因素与LN未见相关性 ,P >0 0 5。结论 :大肠癌血清LN水平明显增高者可能与肿瘤转移密切相关     

Glut1、MVD在大肠癌的表达及与肝转移关系

[目的]探讨大肠癌组织中Glut1、MVD表达及其与肝转移的关系。[方法]采用免疫组化SP法,检测42例大肠癌组织中Glut1及MVD的表达。[结果]Glut1阳性表达率为91%,MVD值为15~145(43.2±25.4)。大肠癌组织中Glut1表达与MVD表达呈显著正相关(r=0.421,P<0.01)。两者均与肝转移和Dukes分期呈正相关(P<0.05,P<0.01),且在肝转移组中两者表达呈高度一致性,其表达一致率为84.2%,与非肝转移组(34.8%)比较有显著性差异(P<0.01)。[结论]Glut1、MVD与大肠癌恶性演进有关。Glut1、MVD共同检测有利于大肠癌患者肝转移的预测。     

RNA干扰抑制胃癌SGC-7901细胞中Livin基因的表达

背景与目的： 利用RNA干扰(RNAi)技术在体外抑制Livin基因表达,探讨RNA干扰用于胃癌治疗的可行性。 材料与方法： 设计靶向Livin基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA),构建重组表达质粒pTZU6＋1-siRNA-Livin,并导入SGC-7901细胞,在体外诱导RNA干扰。并分别采用流式细胞术检测细胞周期变化,RT-PCR和免疫化学技术检测Livin基因表达,末端标记细胞凋亡法(TUNEL)检测细胞凋亡。 结果： 重组质粒pTZU6＋1-siRNA-Livin导入SGC-7901细胞株后,细胞S期比例由对照组的42.78％降低至19.15％(P<0.05), G1/G0期细胞由对照组的52.68％增至72.98％(P<0.05);pL1-siRNA质粒处理组细胞的Livin mRNA表达水平明显低于对照组(P<0.05),并出现明显的诱导细胞凋亡。 结论： RNA干扰可抑制SGC-7901细胞靶基因Livin的表达及细胞增殖,并诱导细胞凋亡,为胃癌的基因治疗提供了新思路。     

HIF-1α和VEGF 的表达与肝细胞癌侵袭转移的关系

 目的 探讨HIF-1α、VEGF的蛋白表达与肝细胞癌血管新生及侵袭转移特性之间的关系。方法 采用免疫组化SP法检测肝细胞癌、癌旁肝组织和正常肝组织中HIF-1α、VEGF的表达，并计数MVD值。结果 HIF-1α在肝细胞癌中的阳性表达率为50．0％，显著高于癌旁（16．1％）和正常肝组织的（8．3％）（P=0．001）；VEGF在肝细胞癌中的阳性表达率为81）％，显著高于癌旁（59．4％）和正常肝组织（41．7％）（P=0．044）；肝细胞癌组织中MVD值显著高于癌旁和正常肝组织（P=0．001）。HIF-1α蛋白表达与有无门静脉或胆管癌栓及肿瘤分化程度有关（P〈0．05）；VEGF蛋白的表达与有无肝内或淋巴结转移及有无门静脉或胆管癌栓有关（P〈0．05）。HF-1α与VEGF表达有关（P=0．005）；HF-1α与VEGF共同表达阳性组的MVD值显著高于共同表达阴性组MVD值（P=0．001）。结论 HF-1α可能通过调节VEGF的表达促进肝细胞癌血管新生，从而促使肝细胞癌侵袭转移。     

MK、CD105及VEGF在大肠癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨MK、CD105和VEGF的表达与大肠癌生物学行为的关系及对预后的意义。方法采用免疫组织化学方法检测50例大肠癌组织MK、CD105和VEGF表达水平,并对其与大肠癌临床病理特征的关系进行统计学分析。结果本组50例大肠癌组织中,MK阳性表达率为72%,VEGF的阳性表达率为64%,MK和VEGF均为阳性时CD105标记的大肠癌组织MVD值(73.87±6.13)明显高于MK和VEGF均为阴性组的MVD值(62.94±6.99)(P<0.01)。三者的表达均与大肠癌的Dukes分期、淋巴结转移、浸润深度有关。结论MK的阳性表达与大肠癌的发生、发展和预后密切相关,可联合VEGF和CD105作为1组有价值的肿瘤标记和预后指标。     

肝素酶在大肠癌转移中的作用

目的探讨乙酰肝素酶在大肠癌中的表达搜意义。方法应用原位杂交方法检测乙酰肝素酶mRNA在60例大肠癌组织中的定位及表达。结果60例大肠癌组织中,乙酰肝素酶mRNA阳性表达31例（51．66％）。34例大肠癌伴淋巴结转移者,其原发灶内乙酰肝素酶mRNA表达明显高于无转移组,差异有统计学意义（P〈0．01）。乙酰肝素酶mRNA表达与大肠癌组织浸润深度、淋巴结转移有关。结论乙酰肝素酶可能在大肠癌的生长、浸润和转移中起一定作用。     

大肠癌中nm23-H1的表达与淋巴结转移的关系

 目的　探讨大肠癌中nm23-H1的表达与淋巴转移的关系。方法　应用免疫组化方法研究96例大肠癌中nm23-H1蛋白的表达。结果　nm23-H1蛋白低表达与淋巴结或远处转移显著相关(P<0.05);nm23-H1蛋白低表达预测大肠癌转移的灵敏性为88.4%,特异性为79.3%。结论　检测nm23-H1蛋白可以预测大肠癌淋巴结或远处转移,从而可能成为临床治疗的判断依据。     

EGFR、VEGF和PTEN在结直肠癌中表达及与其临床病理特征的关系

目的探讨结直肠癌中表皮生长因子受体（EGFR）、血管内皮生长因子（VEGF）和张力蛋白同源物基因（PTEN）蛋白表达及与其临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学技术,检测98例结直肠癌和20例正常结直肠黏膜组织中的EGFR、VEGF和PTEN蛋白表达,并结合临床病理特征进行分析。结果 8例结直肠癌中EGFR、VEGF和PTEN蛋白阳性表达率分别为61.2%（60/98）、66.3%（65/98）和48.0%（47/98）。结直肠癌中EGFR和VEGF表达阳性率显著高于正常结直肠黏膜组织（χ2=21.05,χ2=15.90,P〈0.05）,而PTEN表达阳性率显著低于正常结直肠黏膜组织（χ2=14.72,P〈0.05）。EGFR、VEGF和PTEN表达与结直肠癌Dukes分期、浆膜浸润和淋巴结转移相关（P〈0.05）。结直肠癌中EGFR表达与VEGF表达呈正相关（χ2=8.36,P〈0.05）,EGFR和VEGF表达与PTEN表达呈负相关（χ2=19.73,χ2=22.85,P〈0.05）。结论 EGFR、VEGF和PTEN表达与结直肠癌浸润和转移密切相关,可作为判断结直肠癌预后的客观指标。     

Silencing of Lysyl Oxidase Gene Expression by RNA Interference Suppresses Metastasis of Breast Cancer

Objective: The aim of this study was to investigate possible mechanisms of LOX gene effects on invasion andmetastasis of breast cancer cells by RNA interference. Methods: LOX-RNAi-LV was designed, synthesized, andthen transfected into a breast cancer cell line (MDA-MB-231). Expression of LOX, MMP-2 and MMP-9 wasdetermined by real-time PCR, and protein expression of LOX by Western blotting. Cell migration and invasivenesswere assessed with Transwell chambers. A total of 111 cases of breast cancer tissues, cancer-adjacent normalbreast tissues, and 20 cases of benign lesion tissues were assessed by immunohistochemistry. Results: Expressionof LOX mRNA and protein was suppressed, and the expression of MMP-2 and MMP-9 was significantly lowerin the RNAi group than the control group (P<0.05), after LOX-RNAi-LV was transfection into MDA-MB-231cells. Migration and invasion abilities were obviously inhibited. The expression of LOX protein in breast cancer,cancer-adjacent normal breast tissues and benign breast tumor were 48.6% (54/111), 26.1% (29/111), 20.0% (4/20),respectively, associations being noted with clinical stage, lymph node metastasis, tumor size and ER, PR, HER2,but not age. LOX protein was positively correlated with MMP-2 and MMP-9. Conclusion: LOX displayed animportant role in invasion and metastasis of breast cancer by regulating MMP-2 and MMP-9 expression whichprobably exerted synergistic effects on the extracellular matrix (ECM).