健脾益气方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与侵袭能力的影响

目的:观察健脾益气方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与侵袭能力的影响。方法:以TGF-β1诱导人肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化(EMT)模型,制备健脾益气方大鼠含药血清,分别以0%、5%、10%、15%、20%、30%含药血清浓度干预人肝癌细胞SMMC-7721 12 h、24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞的增殖能力,采用Transwell细胞体外侵袭实验观察细胞的侵袭能力。结果:健脾益气方对SMMC-7721 EMT细胞的增殖有抑制作用,且随含药血清浓度增高而递增,呈时间依赖性;12 h 10%含药血清,24 h 15%、20%、30%含药血清,48 h 15%含药血清与相对应浓度空白血清比较,均具有显著性差异(P0.01),其中以48 h 15%含药血清浓度对细胞增殖的抑制效果最明显。健脾益气方含药血清各个浓度组与对照组相比,细胞侵袭能力均有不同程度的下降,其中10%、15%、20%、30%浓度的含药血清都具有显著性差异(P0.01);而与空白血清组相比,15%、20%、30%浓度的含药血清均具有显著性差异(P0.01),其中以15%浓度的含药血清对细胞侵袭的抑制作用最明显。结论:15%健脾益气方含药血清作用48 h,对人肝癌细胞SMMC-7721EMT模型增殖与侵袭的抑制效果最好。     

二母颗粒含药血清对肺腺癌A549及肝癌SMMC-7721细胞株凋亡的影响

目的:观察二母颗粒含药血清对肺腺癌A549及肝癌SMMC-7721细胞株增殖和凋亡的影响。方法:采用形态学及MTT法观察二母颗粒组(10g/kg)5%、10%、20%含药血清对A549及SMMC-7721细胞株增殖的抑制作用;通过流式细胞法观察药物对细胞凋亡的影响。结果:形态学观察表明二母颗粒含药血清使A549及SMMC-7721细胞株发生形态改变;MTT结果显示二母颗粒含药血清对A549及SMMC-7721细胞株增殖有抑制作用,且随含药血清浓度的增高以及作用时间的延长,抑制作用亦有所加强。其中20%含药血清作用于A549及SMMC-7721细胞株48h,10%含药血清作用于A549 48h,其OD值与对照组比较均有统计学差异;流式细胞技术检测结果表明20%含药血清作用于A549细胞株24h及48h,10%含药血清作用于A549 48h,与同时间段阴性对照组比较凋亡率明显升高;20%、10%含药血清作用于SMMC-7721细胞株24h及48h,对肿瘤细胞的凋亡率也有明显升高的作用。结论:二母颗粒含药血清对A549及SMMC-7721细胞株的增殖有抑制作用,其作用机制与其诱导细胞凋亡有密切的关系。     

不同三叶青提取物体外抗肿瘤细胞作用研究

目的明确三叶青水、乙醇、乙酸乙酯三种提取物体外对乳腺癌细胞(MCF-7)的抑制作用,分析不同提取方式对肿瘤细胞抑制强弱差异。方法 MTT法检测三叶青三种提取物含药血清分别在2、10、50、100、200μg·m L-1时对MCF-7细胞存活率的影响;采用流式细胞仪检测三种提取物含药血清在200μg·m L-1浓度时对MCF-7细胞凋亡的影响。结果三种提取物均具有与浓度相关的MCF-7细胞体外抑制作用(P0.05),作用强弱依次是乙酸乙酯提取物乙醇提取物水提取物;三种提取物均能促进MCF-7细胞凋亡(水、乙醇组P0.05,乙酸乙酯组P0.01);乙酸乙酯提取物比水提物组、乙醇组具有更强的凋亡促进作用(P0.05)。结论三种提取物均具有体外抗乳腺癌MCF-7细胞作用,其中乙酸乙酯提取物作用最强。     

10种壮药含药血清抗人肝癌细胞的实验研究

目的:观察10种壮药含药血清对体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用,筛选出具有较强抑癌作用的药物,以指导临床用药。方法:选用清洁级成年Wistar大鼠,分别制备金刚藤、龙葵、解毒蕨、半枝莲、排钱草、石见穿、绞股蓝、透骨消、叶下珠、藤梨根10种壮药含药血清,设低、中、高浓度作用于人肝癌SMMC-7721细胞,同时设生理盐水(NS)空白血清对照组及环磷酰胺(CTX)阳性血清对照组,用MTT法检测含药血清在24 h、48 h对细胞增殖的影响。结果:MTT法筛选结果显示,金刚藤、半枝莲、叶下珠、藤梨根的含药血清在24 h及48 h对人肝癌SMMC-7721细胞均有较好的抑制作用,且金刚藤高剂量组在48 h抑制作用最强。结论:金刚藤、半枝莲、叶下珠、藤梨根的含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞有较好的抑制作用。     

癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404体外增殖及凋亡的影响

目的观察癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404体外增殖及凋亡的影响,探讨其作用机制。方法癌痛消饱和溶液按86.4、43.2、21.6 g/kg剂量给予SD大鼠灌胃1周,取血制备含药血清,加入SMMC-7721及Bel-7404肝癌细胞培养液。不同浓度癌痛消药物血清处理人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404肝癌细胞后,MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞术检测细胞凋亡。结果体外研究显示,癌痛消方药物血清低、中、高剂量组对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404均具有不同程度的抑制作用,且这种抑制作用在一定范围内呈浓度依赖性,癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404有促凋亡作用。结论癌痛消方药物血清在体外对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404肝癌细胞有抑制增殖作用和促凋亡作用。     

肝癥口服液含药血清对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:探讨肝口服液含药血清对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响,为临床应用肝口服液治疗肝癌提供实验室依据。方法:选取Ⅱb或Ⅲ期肝癌病人和健康志愿者各5例,分别在用药前及用药后8周采集血清,与SMMC-7721细胞共同培养24h、48h后,应用噻唑氮蓝(MTT)比色法测定肝癌细胞SMMC-7721增殖水平。结果:HCC患者含药血清对SMMC-7721细胞增殖抑制率在24h、48h分别为45.00%3、9.32%;而健康志愿者为4.58%、7.70%,HCC患者含药血清对肝癌细胞增殖抑制作用明显高于健康志愿者。结论:肝口服液含药血清对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用并促进其凋亡,表明肝口服液有抗肿瘤作用。     

基于微流控芯片技术研究水红花子复方抗肿瘤的作用

目的：基于微流控芯片技术研究水红花子复方含药血清对肝肿瘤SMMC-7721细胞的凋亡坏死影响及血管内皮生长因子（VEGF）分泌的影响。方法：设计与制作玻璃-PDMS复合浓度梯度芯片,并对芯片药物浓度梯度进行表征;将SMMC-7721细胞长期培养在芯片中,绘制细胞的生长曲线,AO／EB法检测细胞死活率;将预制备的含药血清通入微流控芯片,分别作用于SMMC-7721细胞24h和48h,凋亡坏死试剂盒检测凋亡坏死率;收集各通道的细胞上清液,ELISA法测定VEGF的蛋白含量。结果：细胞在芯片中培养7d,细胞增殖活性良好,培养72h期间细胞存活率≥97％。芯片可产生稳定的浓度梯度,线性相关系数为0．9964。芯片中含有药物血清的培养液分别作用SMMC-7721细胞24h和48h后,发生凋亡坏死细胞的数量随含药血清作用浓度升高而逐渐升高,细胞培养上清液中VEGF蛋白含量随含药血清作用浓度升高而逐渐减少,都呈现出一定的时间与浓度依赖性。结论：基于微流控芯片技术,进一步证明水红花子复方含药血清对肝肿瘤SMMC-7721细胞具有促凋亡作用,且能抑制其分泌VEGF从而间接抑制肿瘤血管新生达到抗肿瘤作用。     

西黄丸含药血清干预人乳腺癌细胞增殖的药效强度及其与采血时间的关系

目的探讨西黄丸大鼠含药血清对人乳腺癌细胞增殖的作用特点。方法 SD大鼠48只随机分为空白对照组12只及西黄丸0. 5 h组、西黄丸1 h组、西黄丸2 h组、西黄丸3 h组各9只。西黄丸各时间组给予2. 4 g/(kg·d)西黄丸混悬液灌胃,每日2次,空白对照组大鼠给予等体积蒸馏水,连续给药7次。于末次给药0. 5、1、2、3 h后对相应组采血,制备含药血清。MDA-MB-435和MCF-7细胞分别设10%空白血清组、20%空白血清组、30%空白血清组、10%西黄丸血清组、20%西黄丸血清组和30%西黄丸血清组,每组6个复孔。加入相应含药血清培养后,采用MTT方法检测不同采血时间点、不同浓度的西黄丸大鼠含药血清对乳腺癌细胞株增殖的抑制作用。结果与其他时间点相比,西黄丸大鼠各浓度含药血清作用24、48 h均为采血时间2 h含药血清对MDA-MB-435细胞的抑制增殖作用最强;西黄丸大鼠各浓度含药血清作用24、48、72 h均为采血时间3 h含药血清对MCF-7细胞的抑制增殖作用最强(P 0. 05);且均为30%西黄丸含药血清对MDA-MB-435、MCF-7两种细胞株增殖的抑制作用最强(P 0. 05)。结论西黄丸采血时间2 h含药血清对MDA-MB-435细胞的抑制增殖作用最强,采血时间3 h含药血清对MCF-7细胞的抑增殖作用最强,且以30%含药血清抑制作用最强。     

鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721肝癌细胞凋亡的影响

目的研究鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721肝癌细胞凋亡的影响。方法采用MTT法检测鳖甲煎丸不同浓度含药血清(0%、2%、4%、6%、8%、10%、12%、14%、16%)对肝癌细胞增殖抑制作用;流式细胞术检测鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR检测鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721细胞BAX、Bcl-2、STAT3 mRNA表达;Western blot法检测细胞BAX、Bcl-2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果分别处理SMMC-7721细胞24、28 h,鳖甲煎丸含药血清能明显抑制肝癌细胞的增殖,具有浓度依赖性。鳖甲煎丸含药血清(5%、10%、15%)作用肝癌细胞24 h后,细胞总凋亡率显著增高(P0.01),随浓度增加而增高。与空白对照组比较,鳖甲煎丸含药血清(10%、15%)上调BAX mRNA表达(P0.05),而BAX蛋白表达不明显;除5%含药血清鳖甲煎丸组Bcl-2 mRNA外,鳖甲煎丸含药血清(5%、10%、15%)下调Bcl-2、STAT3 mRNA和蛋白表达,并能抑制STAT3磷酸化,升高BAX/Bcl-2比值(P0.05,P0.01)。结论鳖甲煎丸含药血清诱导SMMC-7721肝癌细胞发生凋亡可能与影响STAT信号通路有关。     

四君子汤含药血清抑癌作用的实验研究

目的:观察四君子汤含药血清体外抑制肿瘤细胞增殖的作用.方法:以人胃癌细胞系SGC-7901和人肝癌细胞系SMMC-7721为病理模型,采用血清生物化学方法,酶标仪MTT比色法和倒置显微镜观察四君子汤不同剂量、不同浓度含药血清对人胃癌细胞系SGC-7901、肝癌细胞系SMMC-7721的增殖抑制状况,并计算各组细胞生长抑制率.结果:加药组细胞变小、变圆、脱落、悬浮情况较对照组明显,且以20%高剂量血清组最为明显.四君子汤含药血清对这两种细胞增殖均有明显的抑制作用,呈剂量、浓度依赖性.结论:四君子汤含药血清能明显抑制胃癌和肝癌细胞生长.     

柴胡舒肝散含药血清对乳腺癌MCF-7细胞的体外抑制作用及Bcl-2与VEGF的影响

目的 探讨柴胡舒肝散含药血清对人乳腺癌MCF-7细胞株体外抑制作用及Bcl-2与VEGF的影响.方法 选取SD雌性大鼠48只,随机分为空白对照组、他莫昔芬组和柴胡疏肝散高、低剂量组.利用他莫昔芬片和不同浓度的柴胡疏肝散进行干预,留取含药血清检测MCF-7细胞凋亡,Bcl-2的蛋白表达及血清中血管内皮生长因子(VEGF)...     

陕重楼提取物对人肝癌SMMC_(-7721)细胞bc_(l-2)和Bax基因表达的影响

目的:探讨陕重楼乙酸乙酯提取物含药血清对肝癌SMMC-7721细胞bcl-2和Bax基因的影响。方法:采用血清药理学方法,以20mg/kg、10mg/kg和5mg/kg药量提取物给SD大鼠灌胃,分离血清配制成10%含药血清培养基后,加入人肝癌细胞SMMC-7721中培养48h,制作细胞爬片,采用免疫细胞化学测定法检测bcl-2和Bax蛋白在肝癌细胞中的表达情况,观察陕重楼乙酸乙酯提取物对人肝癌SMMC-7721细胞中bcl-2和Bax基因表达的影响。结果:高、中、低浓度提取物10%含药血清制作的细胞爬片在人肝癌细胞系SMMC-7721中的bcl-2蛋白阳性细胞计数率分别为6.50%、8.47%和8.85%,Bax蛋白阳性细胞计数率分别为44.12%、43.88%和37.66%。结论:与肝癌细胞系SMMC-7721空白对照组的bcl-2、Bax蛋白阳性细胞计数率相比,给药组培育48h后肝癌细胞系中bcl-2蛋白表达水平降低,Bax蛋白的表达上调,bcl-2/Bax比值降低,陕重楼乙酸乙酯提取物应用在线粒体途径促进细胞凋亡过程中能发挥协同作用,并可能通过此途径诱导肿瘤细胞的凋亡。     

小半夏加茯苓颗粒含药血清体外对肝癌细胞SMMC-7721生长增殖的影响

目的: 采用血清药理学的方法,观察小半夏加茯苓颗粒对肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用。 方法: 设空白对照组、环磷酰胺(CTX)组、原方汤剂组及颗粒剂不同剂量组,分别制备成含药血清与体外培养的肝癌SMMC-7721细胞共孵,倒置显微镜观察各组SMMC-7721细胞生长形态变化以及用MTT法检测其细胞增殖抑制率。 结果: 与空白对照组比较,CTX组、原方汤剂组以及颗粒不同剂量组均使SMMC-7721细胞生长形态发生明显改变,细胞生长不良,细胞数量减少;MTT实验结果显示CTX组、汤剂组、颗粒不同剂量组对SMMC-7721细胞作用24 h、48 h、72 h后,细胞增殖抑制率逐渐升高(P<0.05)。各时段内各中药组对细胞的抑制率均低于CTX组(P<0.05),原方汤剂组与颗粒大剂量组无显著差异(P>0.05)。 结论: 小半夏加茯苓颗粒含药血清对体外培养的肝癌SMMC-7721细胞具有明显的抑制作用,且其作用呈现时间-效应关系和剂量-效应关系。     

水龙骨体外抗肝癌作用研究

目的 研究水龙骨对人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721的生长增殖抑制作用.方法 制备水龙骨含药血清,用MTT法观察细胞增殖情况.结果 水龙骨含药血清在体外对人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721均有抑制作用,对HepG2的最高抑制率为87.4%,对SMMC-7721的最高抑制率为85.9%,抑制肝癌细胞的效果优于含5-氟尿嘧啶血清.结论 水龙骨对肝癌细胞的体外增殖有明显的抑制作用.     

发酵虫草菌粉对人肝癌细胞增殖、凋亡及VEGF,MMP-2表达的影响

目的:探讨从天然冬虫夏草中分离出的虫草拟青霉Cs-4菌株,经人工发酵所得发酵虫草菌粉对SMMC-7721人肝癌细胞的生长抑制作用。方法:20只体重(200±20)g雄性SD大鼠随机分为4组(每组5只):空白组及Cs-4低、中、高剂量组,空白组ig予蒸馏水,Cs-4低、中、高剂量组(0.77,1.54,3.08 g·kg-1,ig);给药3 d后,制备含药血清。肝癌细胞悬液调整至4×104/m L,96孔板每孔加入100μL,培养24 h后加入大鼠含药血清及顺铂注射液;干预48 h MTT法测各组细胞增殖抑制率。将SMMC-7721细胞悬液调整至2.8×104/m L,接种于6孔板培养24 h,加入大鼠含药血清及顺铂,干预培养48 h后Annexin V-FITC/PI染色,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;ELISA检测各组细胞上清液中血管内皮生长因子(VEGF),金属基质蛋白酶-2(MMP-2)表达量。结果:SMMC-7721细胞增殖被Cs-4含药血清明显抑制(与空白组比较P0.05),低、中、高剂量组抑制率分别为12.2%,23.2%,38.1%,呈剂量依赖性(Cs-4不同剂量组间比较P0.05)。Cs-4含药血清低、中、高剂量组细胞凋亡率分别为13.9%,23.5%,24.9%,均高于空白组(P0.05)。Cs-4含药血清低、中、高剂量组细胞上清液中VEGF分别为443.5,436.9,411.0 ng·L-1,低于空白组(P0.05);Cs-4低、中、高剂量组细胞上清液中MMP-2浓度与空白组比无显著差异。结论:Cs-4含药血清能抑制SMMC-7721细胞增殖,提高体外培养的SMMC-7721细胞凋亡率,抑制SMMC-7721细胞VEGF表达,提示Cs-4有抗肝癌作用,对SMMC-7721细胞MMP-2表达无显著影响。     

健脾柔肝方含药血清抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖及诱导凋亡作用

目的:探讨健脾柔肝方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法:SMMC-7721细胞体外培养,以健脾柔肝方低、中、高剂量含药血清培养液作用SMMC-7721细胞,并设立空白血清及5-Fu组。MTT法检测细胞增殖程度,TUNEL法检测细胞凋亡指数。结果:健脾柔肝方含药血清各组均有一定的抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,均能不同程度的诱导细胞凋亡;而以化疗药5-Fu组作用最强,健脾柔肝汤中剂量含药血清组次之。结论:健脾柔肝方含药血清不仅可直接抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,而且可有效诱导细胞凋亡。     

薏苡仁脂肪酸类成分对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞周期及细胞凋亡的影响

目的研究薏苡仁脂肪酸类成分对人肝癌细胞株SMMC-7721增值的影响及作用机制初探。方法采用MTT法考察不同给药剂量,不同给药时间下薏苡仁脂肪酸类成分对SMMC-7721细胞的增值抑制作用及其与时间、剂量的关系;碘化丙啶PI单染色法检测薏苡仁脂肪酸作用后,SMMC-7721细胞周期DNA水平变化;Annexin V-EGFP/PI双染法研究薏苡仁脂肪酸对SMMC-7721细胞凋亡率的影响。结果不同质量浓度的薏苡仁脂肪酸作用SMMC-7721细胞24、48、72 h后,均呈现出较好的细胞增殖抑制作用,且具有明显的时间-剂量-效应关系,差异有统计学意义(P<0.05);不同质量浓度的薏苡仁脂肪酸处理SMMC-7721细胞22 h后可显著增加肝癌细胞凋亡率,(P<0.001);作用36 h后,可显著降低G2/M期细胞比例,(P<0.001)。结论薏苡仁脂肪酸对人肝癌SMMC-7721细胞具有明显的抑制作用并可诱导其凋亡,其作用是通过抑制G2/M细胞周期实现的。     

六神丸抗肿瘤血管生成的体外实验研究

目的:观察六神丸对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用,并从抗肿瘤血管生成角度探讨了其作用机制。方法:大鼠灌服六神丸水溶液,制备含药血清,以顺铂(DDP)作为对照组,分别作用于体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞,检测相关指标。结果:六神丸含药血清对MCF-7细胞的增殖有明显抑制作用,可破坏正常形态,阻碍其生长,抑制作用随含药血清浓度增大而增强,流式细胞仪检测证明,经六神丸含药血清作用后的人乳腺癌MCF-7细胞的b-FGF及MMP-9荧光强度明显下降。结论:六神丸具有对肿瘤细胞的直接杀灭作用,此作用是通过抗肿瘤血管生成机制实现。     

地鳖纤溶蛋白含药血清对人肝癌和乳腺癌抑制作用

目的研究地鳖纤溶蛋白(EFP)及含药血清对人肝癌HepG-2和人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用。方法制备EFP,并制备不同浓度EFP小鼠含药血清;采用MTT法分别将EFP和EFP含药血清加入HepG-2和MCF-7细胞悬液中,分别检测增殖抑制效果。结果 EFP直接用药各组均对HepG-2无抑制作用,而EFP含药血清各组对HepG-2细胞均有明显抑制细胞增殖作用;EFP组和EFP含药血清组均能不同程度的抑制MCF-7细胞增殖。结论 EFP有较强的体外抗肿瘤活性;血清药理学方法更能真实的反映药物作用。     

六神丸逆转灯盏细辛抑制MCF-7细胞凋亡作用的实验研究

目的观察六神丸与灯盏细辛注射液对人乳腺癌MCF-7细胞的作用,并从细胞凋亡角度探讨其相互作用机制。方法将六神丸含药血清及灯盏细辛注射液作用于体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞,检测其对细胞增殖的直接抑制作用,流式细胞仪检测其对细胞凋亡及对Caspase-3表达的作用。结果六神丸含药血清对MCF-7细胞的增殖均有直接抑制作用,24、48、72 h生长抑制率分别为41.23%、36.93%、36.82%;灯盏细辛注射液对MCF-7细胞的增殖均亦有直接抑制作用,24、48、72 h生长抑制率分别为27.09%、19.40%、25.58%;两者合用作用增强,24、487、2 h生长抑制率分别为67.89%、65.57%、68.31%。流式细胞仪检测证明,灯盏细辛注射液可抑制MCF-7细胞凋亡及Caspase-3表达,六神丸含药血清可促进MCF-7细胞凋亡及Caspase-3表达。两者合用,MCF-7细胞凋亡及Caspase-3表达较对照组增强,效果界于两者单用之间。结论六神丸可通过逆转灯盏细辛注射液抑制MCF-7细胞凋亡及Caspase-3的表达而表现出促MCF-7细胞凋亡的作用。