影响地高辛标记TNF cDNA探针原位杂交效果的因素

应用地高辛标记肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）ｃＤＮＡ探针原位杂交检测ＴＮＦ ｍＲＮＡ在烧伤大鼠内脏组织中的表达。并参考文献比较了几个影响原位杂交效果的因素如冰冻与石蜡切片，蛋白酶Ｋ，组织固定，脱片，热变性和试剂配制等。并提出了改良方法。     

应用地高辛标记的cRNA探针原位杂交法检测大上丘脑生长抑素mRNA

用成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，经４％多聚甲醛灌注固定，取下丘脑组织，和再固定２４ｈ，常规石蜡包埋和切片，用地高辛标记的ｃＲＮＡ探针进行原位杂交，结果显示在弓状核及其邻近区域见到阳性神经元，阳性信号为蓝色颗粒，胞质、核膜及核仁呈阳性，阴性对照均无阳性反应出现，本实验证实，用石蜡切片进行原位杂交组织化学研究，能检测下丘脑生长抑素神经元基因表达产物ｍＲＮＡ，方法稳定，重复性好，便于普通实验室开展工作。     

应用地高辛标记的cRNA探针原位杂交法检测大鼠下丘脑生长抑素mRNA

用成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，经４％多聚甲醛灌注固定，取下丘脑组织，行再固定２４ｈ，常规石蜡包埋和切片，用地高辛标记的ｃＲＮＡ探针进行原位杂交，结果显示在弓状核及其邻近区域见到阳性神经元，阳性信号为蓝色颗粒，胞质、核膜及核仁呈阳性。阴性对照均无阳性反应出现。本实验证实，用石蜡切片进行原位杂交组织化学研究，能检测下丘脑生长抑素神经元基因表达产物ｍＲＮＡ，方法稳定，重复性好，便于普通实验室开展工作。     

标记肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体-2地高辛探针

目的：标记肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）受体-2的地高辛探针。方法：查阅核酸序列数据库上TRAILR-2的基因全序列，计算机辅助设计引物，RT-PCR扩增目的条带，用地高辛（Digoxin，DIG）进行标记，制作TRAILR-2的探针。结果：地高辛标记的TRAILR-2电泳能力下降，标记成功。结论：TILCILR-2地高辛探针的标记成功为进一步研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体-2与喉鳞状细胞癌的关系奠定了一定的基础。     

地高辛标记反义RNA探针对大鼠不同组织生长抑素mRNA原位杂交的实验研究

应用地高辛（ＤＩＧ）标记的生长抑素（ＳＯＭ）反义ＲＮＡ探针，与Ｗｉｓｔａｒ大鼠胃、十二指肠和甲状腺组织进行原位分子杂交，以显示不同组织中ＳＯＭｍＲＮＡ对ＳＯＭ细胞进行分子水平的细胞定位和形态学观察。结果显示：杂交阳性信号呈蓝色位于胞质内，背景清晰，细胞轮廓清楚，主要分布于胃粘膜底部，十二指肠阳性细胞较少，在甲状腺滤泡旁和滤泡上皮细胞之间均可见到形态不一的杂交阳性细胞。用ＲＮａｓｅＡ预处理标本和免去探针均无杂交信号出现。表明ＤＩＧ标记的反义ＲＮＡ探针具有高度的敏感性和特异性。     

地高辛标记探针原位杂交法检测人脑胶质瘤组织猴病毒40的表达

目的：检测猴病毒40（SV40）DNA在人脑胶质瘤中的定位表达,探讨其在脑胶质瘤发生发展中的生物学意义。方法：采用地高辛标记探针原位杂交技术,检测256例人脑胶质瘤和11例正常脑组织标本。结果：SV40 DNA定位于胶质瘤细胞核,阳性细胞呈弥漫性或局灶性分布;SV40 DNA阳性率40.6％（104／256）,正常脑组织均未检测出SV40 DNA;SV40 DNA阳性率与病理分级无关（P＞0.05）。结论：SV40感染与人脑胶质瘤病因学密切相关;地高辛标记探针原位杂交技术,是探讨SV40病毒核本以在组织中定位、分布和感染机制的一种新的特异性方法。     

地高辛精标记cRNA探针原位杂交法检测大鼠胃肠胰系统生长抑素mRNA

目的：建立敏感的非放射性原位杂交技术检测胃肠调节肽基因的表达．方法：用体外转录法制备地高辛精（Ｄｉｇ）标记生长抑素ｃＲＮＡ探针，在４％多聚甲醛固定的胃、十二指肠和胰腺恒冷箱切片标本上进行了原位杂交，结果：杂交阳性部位呈紫蓝色，位于胞浆，背景浅淡，反差强烈．含生长抑素ｍＲＮＡ细胞与以前所报道的生长抑素免疫反应细胞的形态、分布均一致。结论：Ｄｉｇ标记ｃＲＮＡ探针原位杂交法敏感、简便、迅速、可靠，可用于胃肠调节肽基因表达的研究．     

TRAIL受体在胆管癌组织中的表达及意义

目的 :探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)的受体在人胆管癌组织、癌旁胆管组织和胆管癌细胞株 (QBC939)的表达及其临床意义。 方法 :应用原位杂交组织化学法检测TRAIL受体mRNA在人胆管癌组织、癌旁胆管组织和胆管癌细胞株 (QBC939)中的表达。 结果 :DR4mRNA、DR5mRNA在人胆管癌组织、癌旁胆管组织和胆管癌细胞株 (QBC939)均呈阳性表达。只有 3例DcR1(3/5 2 )和 7例DcR2 (7/5 2 )在人胆管癌组织呈弱阳性表达。DcR1、DcR2 mRNA在癌旁胆管组织呈阳性表达 ,而在胆管癌细胞株 (QBC939)均不表达。 结论 :TRAIL死亡受体和诱捕受体在人胆管癌、癌旁胆管组织和胆管癌细胞株 (QBC939)的表达不同 ,这些受体表达的变化可能在调控人胆管癌凋亡中发挥重要作用。     

卵巢恶性肿瘤VEGF mRNA和bFGF mRNA的表达及其意义

应用原位分子杂交技术研究卵巢恶性肿瘤组织中VEGFmRNA和bFGFmRNA的表达及其意义。结果发现 :浆液性腺癌和内胚窦癌两者表达阳性率高于粘液性腺癌和颗粒细胞瘤 ;临床分期Ⅰ期和未转移病例两者表达阳性率低于临床分期Ⅲ～Ⅳ期和转移病例。结果提示VEGFmRNA和bFGFmRNA表达与卵巢恶性肿瘤病理类型、临床分期和转移发生关系密切 ,阳性表达者可能预后较差。     

bFGF mRNA的转录与喉粘膜良性及恶性病变的关系

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子(ｂＦＧ）与喉癌生长、浸润、转移的关系及其可能的作用机制．方法：用原位杂交的方法观察ｂＦＧＦｍＲＮＡ在正常喉粘膜上皮（Ｎ）、慢性非特异性炎症（ＩＦ）、不典型增生（ＤＹＳ）及鳞癌（ＳＣＣ）中的表达．结果：在Ｎ,ＩＦ．ＤＹＳ及ＳＣＣ的间质中均检测到ｂＦＧＦｍＲＮＡ的表达．上皮细胞未见阳性表达．在Ｎ及ＩＦ,阳性反应部位位于血管内皮细胞、成纤维细胞;ＩＦ的阳性反应略有提高,此外部分炎细胞也见阳性反应;ＤＹＳ及ＳＣＣ中的阳性反应程度较Ｎ及ＩＦ有所增强,尤其是新生血管内皮细胞的阳性率及反应程度明显提高．在ＳＣＣ中,分化差的ｂＦＧＦ表达较分化好的ＳＣＣ阳性反应程度强．结论：ｂＦＧＦ不仅可以促进喉癌新生血管及间质的形成．而且可能参与肿瘤细胞生长．在喉癌中,ｂＦＧＦ以旁分泌生长方式影响肿瘤的生长．     

用原位杂交和RNA斑点杂交法检测人肝细胞癌和癌旁肝中甲胎蛋白mRNA

用生物素标记AFP cDNA探针作原位杂交,检测了12例人肝细胞癌和癌旁肝冰冻切片和石蜡组织切片中的AFP mRNA,同时分别抽提了3例人肝癌和癌旁肝总RNA作斑点杂交.结果提示癌和癌旁肝组织中均有AFP基因的过量表达,AFP mRNA在癌内分布比较均一,而在癌旁肝组织中则比较多样,可散在分布、小灶性分布或成片状分布,从而证实不仅肝癌细胞可以自己合成AFP,而且癌旁肝细胞也可以自己合成AFP。     

生长相关性癌基因-1在喉癌中的表达及其与CD34的相关性研究

目的探讨生长相关性癌基因-1（GRO-1）在喉癌组织中的表达及其与喉癌部分临床生物学特性的相关性。方法采用免疫组织化学染色方法检测48例喉癌组织中GRO-1和CD34的表达。结果免疫组织化学染色结果显示,GRO-1表达和CD34的表达与喉癌分期（早期与进展期）及淋巴结转移相关,染色度随喉鳞状细胞癌分期增高而增高并且有淋巴结转移的癌组织GRO-1染色度和CD34的表达,明显高于无淋巴结转移的喉癌组织（P〈0.01）;GRO-1表达和CD34的表达与喉癌分化程度无关（P〉0.05）;GRO-1与CD34在不同年龄和性别的表达均无统计学意义（均P〉0.05）。GRO-1和CD34的表达存在显著的正相关关系（r=0.722,P〈0.01）。结论GRO-1能够通过多种作用影响喉癌的发生、发展和转移,其中在微血管形成方面GRO-1的高表达可能在喉癌的发生发展中起重要作用。     

多发性肌炎/皮肌炎患血清肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的测定及其临床意义

目的：检测多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM）患者血清肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（sTRAIL）的水平及其在多发性肌炎/皮肌炎中的临床意义.方法：采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测2012年10月～2013年8月中日友好医院风湿免疫科40例PM/DM患者,20例健康人血清中sTRAIL的水平.分析sTRAIL水平与PM/DM各临床特点的关系.结果：PM/DM患者组血清sTRAIL水平为1380.71±126.49ng/L,显著高于健康对照组493.89±33.32ng/L（P＜0.05）.吞咽困难的PM/DM患者血清sTRAIL水平（1775.76±321.95ng/L）显著高于无吞咽困难者（958.24±155.66ng/L,P＜0.05）.是否合并肺间质病变,其血清sTRAIL水平无显著性差异（P＞0.05）.Jo-1阳性的患者组血清sTRAIL水平为562.36±52.99ng/L,显著低于Jo-1阴性的患者组1334.57±181.21ng/L（P＜0.05）.PM/DM患者血清sTRAIL水平与乳酸脱氢酶（LDH）显著负相关（r=-4.03,P＜0.05）.结论：TRAIL在多发性肌炎/皮肌炎的发病机制中起作用,其异常表达与患者的临床特征密切相关.     

简便,敏感的地高辛标记DNA探针原位分子杂交技术

本文应用人乳头瘤病毒6B和11型基因探针原位分子杂交技术检测了57例尖锐湿疣和假性湿疣。同时用免疫组化ABC法做对照检测。探针标记选择地高辛随机引物延伸法。原位分子杂交的主要步骤包括:石蜡切片的预处理;杂交;免疫检测及显色。结果显示:在尖锐湿疣中,人乳头瘤病毒的阳性率为94.4％;免疫组化核壳抗原检测阳性率为47.2％;假性湿疣杂交结果均为阴性。结果表明:原位分子杂交方法比免疫组化方法敏感,提高了阳性率。本实验过程中遇到并试图解决的主要技术问题有:(1)防止脱片;(2)蛋白酶K的浓度;(3)显色时间的掌握;(4)左旋脒唑的剂量。     

人喉鳞癌放射抗拒细胞株与其亲本细胞增殖和侵袭能力的比较

目的比较人喉鳞癌放射抗拒细胞株Hep-2R与其亲本细胞株Hep-2的体外增殖、运动及侵袭能力。方法分别培养人喉鳞癌放射抗拒细胞株Hep-2R和Hep-2,通过克隆形成实验测定其增殖能力,Transwells小室法测定运动及侵袭能力。结果Hep-2和Hep-2R的克隆形成率分别为(20.75±1.29)%和(19.17±0.82)%,二者有显著性差异(P<0.05);运动力(6个镜下视野的穿膜细胞数)分别为(122.0±6.8)和(117.0±5.8),二者无显著性差异(P>0.05);侵袭力(6个镜下视野的穿膜细胞数)分别为(166.0±9.8)和(166.4±8.4),二者无显著性差异(P>0.05)。结论人喉鳞癌放射抗拒细胞株Hep-2R较其亲本细胞株Hep-2的体外增殖能力弱,而运动和侵袭能力无显著性差异。     

PTTG mRNA及其蛋白在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的:探讨食管鳞癌组织中PTTG mRNA与蛋白的表达及其二者间的相互关系。研究它们的表达与肿瘤临床资料之间的联系。方法:采用原位杂交技术检测30例食管鳞癌及相应的癌旁组织中PTTGmRNA的表达,同时采用免疫组织化学SP法检测相应标本中PTTG蛋白的表达。结果:在食管鳞癌和相应的癌旁组织中PTTG mRNA表达的阳性率分别为66.7%(20/30),10%(3/30)。PTTG蛋白表达的阳性率分别为76.7%(23/30),16%(5/30)。食管鳞癌组远高于癌旁组,有显著性差异(P<0.01)。PTTG mRNA与蛋白在食管鳞癌组织的阳性表达具有一致性(P>0.05),其阳性率高低与性别、年龄、肿瘤大小无关,而与组织学分级、淋巴结转移、TNM分期有关。结论:PTTG基因的异常表达可能对食管鳞癌的发生和发展起重要作用,它可能为食管鳞癌的早期诊断和基因治疗提供新的靶点。     

生物素标记HBV DNA探针在肝石蜡切片上作原位杂交技术的研究——Ⅱ、与斑点杂交、吸印杂交的比较

对生物素标记HBV DNA探针的原位杂交与~(32)P标记的HBV DNA探针的斑点杂交和吸印杂交作了比较。三者阳性率分别为33.33％(25/75)、36.36(16/44)和15.38％(4/26),三者无统计学差异。16例同时用原位杂交和吸印杂交检测,4例二者均为阳性,9例二者均为阴性,原位杂交多检出3例阳性,二者有显著的相关性(p=0.0192)。30例同时作了原位杂交和斑点杂交,其中17例结果一致,13例结果不一致,两者无显著相关性(p>0.05)。并比较了原位杂交与其它两种杂交方法的优缺点。