电镜半薄切片应用于光镜研究的探讨

电镜半薄切片通常用于电镜超薄切片前的定位观察 ,我们在定位观察时发现 ,由于切片薄 ,结构显示清晰 ,可用于光镜研究 ,其观察结果优于石蜡切片。多年来 ,我们已将电镜半薄切片应用于实验研究和研究生课题实验。方法 :取材后将组织修为 1立方毫米左右 ,常规电镜样品处理 ,环氧树脂 6 18包埋 ,修块 ,L KBV型超薄切片机切片 ,切片厚度 1微米 ,脱树脂后 ,苏木精染色 ,H· E或甲苯胺兰染色 ,37℃温箱烤干 ,封片 ,观察。结果 :苏木精染色显示 ,细胞核呈紫兰色 ,胞浆淡兰色 ;H·E染色显示 ,细胞核为紫兰色 ,细胞质淡粉红色 ,但伊红染色较石蜡…     

环氧树脂半薄切片肾小球基底膜六胺银染色法

环氧树脂半薄切片肾小球基底膜六胺银染色法肖莎陈浦辉郭琳琅在肾脏疾病的研究中，肾小球基底膜银染色技术具有重要意义。如若采用半薄切片染色，在光镜下观察则可获得比石蜡切片更为清晰的结果。但因树脂包埋块为非水溶性质，故其半薄切片的特殊染色就较为困难。我们运用...     

锇酸显示肾球旁细胞法

作者试用电镜的半薄切片,经锇酸浸镀后再复染,这样就能清楚显示肾球旁细胞。本方法,操作简单,染色过程短,方法易掌握。同时在100x的光镜下能分辨肾球旁细胞内的颗粒,以及肾小球基底膜,肾小管等的微细组织结构,基本可达到科研和教学的要求。现将方法介绍如下:一、半薄切片的制备按常规的电镜样品制作过程进行,用环氧树酯(Epoxy resin)包埋剂(Epon812)包埋。二、用超薄切片机(玻璃刀装水槽)连续切片厚1微米,裱在载玻片上,放入45℃温箱内烤干,4-24小时。三、将切片脱去环氧树酯,浸入氢氧化钾无水酒精饱和液(氢氧化钾在     

HE染色在环氧树脂半薄切片中的应用

目前 ,对Ｅｐｏｎ812包埋的半薄切片进行光镜观察 ,其染色多数采用盐基性染料如美蓝、甲苯胺蓝、结晶紫、硫堇和碱性品红等无需脱脂的单色染色法。虽然方法简单、时间短 ,但效果很差 ,细胞核、细胞质、细胞膜与细胞间质的区别不明显 ,有时结构不清、难以定位 ,而且染色后的切片易褪色 ,不易做长期保存。笔者应用ＨＥ染色法 ,染色效果比较理想 ,特别对临床肾活检超微病理诊断定位有重要意义。现将方法和体会介绍如下。1　染色方法1.1　常规环氧树脂Ｅｐｏｎ812包埋 　组织经 3%戊二醛前固定 2ｈ ,1%锇酸后固定 1 5ｈ ,梯度乙醇 (5 0 %、70 %…     

庆大霉素在肾近端小管吸收途径的形态学证据

利用活体肾小管显微穿刺技术 ,将 3H-庆大霉素注入近端小管腔内 ,间隔 5分钟、2 0分钟后 ,用 1%戊二醛分别固定各自的肾小管 ,摘除肾脏 ,将含有显微穿刺的肾小管取出 ,1%锇酸后固定 1小时 ,逐级酒精脱水 ,Epon812包埋 ,半薄、超薄切片 ,铀铅双重染色。光镜放射自显影切片 ,浸入 L M- 1乳胶 7～ 8秒钟 ,置 4℃冰箱中 1～ 2周 ,显影、定影、甲苯胺兰染色 ,显微镜观察并摄影。电镜放射自显影超薄切片 ,碳喷镀后 ,利用金属套环法将 Ilfore- L4核乳胶涂片 ,放置 4℃冰箱中 2～ 3个月 ,显影、定影。JEM- 12 0 0型电子显微镜观察。结果 :光镜放…     

显示大鼠下颌下腺颗粒曲管细胞方法的探讨

本应用几种方法观察研究了大鼠下颌下腺颗粒曲管（GCT）细胞，包括石蜡切片Malory染色，树脂包埋半薄切片甲苯胺蓝染色，石蜡切片、半薄切片免疫组织化学法（PAP法，免疫金银法），和透射电镜观察。应用这些方法进行比较与印证，对GCT细胞的形态结构、功能及异质性特征等提出可靠的见解。本对上述几种方法步骤的具体条件和要领进行了探讨。     

培养细胞的免疫细胞化学操作体会

对培养的细胞进行免疫细胞化学反应 ,可以在培养皿内直接进行 ,亦可经树脂包埋后 ,在半薄切片上进行。本实验应用上述二种方法 ,对培养的大鼠内耳血管纹的组织细胞进行了免疫细胞化学显示。组织细胞处理 :1 )平皿培养和盖玻片上培养的大鼠内耳血管纹处组织细胞 ,经Bouin固定液固定 4h,0 .0 1 Mol/L PBS浸洗 ,0 .1 %的 Triton x- 1 0 0处理 2 0 min;2 )平皿培养的细胞经酶处理 ,离心收集 ,2 %戊二醛固定液固定 4h,经丙酮脱水与锇酸固定( - 2 0℃ )、树脂包埋、半薄切片。免疫细胞化学反应 :上述处理的细胞或切片进行免疫细胞化学反应 ,其…     

改良半薄切片多色性染色方法

半薄切片有助于电子显微镜超薄切片的准确定位。现有的半薄切片有各种不同的染色方法,但在观察时往往组织结构、细胞核及细胞浆分辨不够清楚。我们在半薄切片中改进染色液的配制和染色方法,并     

用Bouin液固定不脱钙制作胎儿指骨整体切片

组织学观察是骨组织研究的重要手段之一[1],由于骨组织致密、坚硬,并含有骨胶等成分,所以要制作一张高质量的切片(和软组织相比)有一定的困难[2].近年来出现的塑料包埋等[3,4]不脱钙骨切片及染色技术尚不够成熟和稳定[2].我们在教学过程中用胎儿指骨的整体切片做为观察软骨内成骨和骨组织组成及细胞结构的标本,制作时采用Bouin液做为固定液,用氯仿做为透明剂,不需脱钙制作出切片的组织和细胞的形态结构完整,染色鲜明、色泽深浅适当.而将皮肤和结缔组织等一起固定包埋制作骨切片的文献极少.现将我们的经验报道如下.     

用Bouin液固定不脱钙制作胎儿指骨整体切片

组织学观察是骨组织研究的重要手段之一[1],通常由于骨组织致密,坚硬,并含有骨胶等成分,所以要切好一张高质量的切片(和软组织相比),有一定的困难[2].近年来推出了塑料包埋等[3,4]不脱钙骨切片及染色技术,但目前尚不够成熟稳定[2].我们在教学过程中用胎儿指骨的整体切片做为观察软骨内成骨和骨组织组成及细胞结构的标本,我们在制作此标本时,用Bouin液做为固定液,用氯仿做为透明剂,不需脱钙制作出切片的组织和细胞的形态结构完整,染色鲜明、色泽深浅适当,用于教学效果良好.而连着皮肤和结缔组织等一起固定包埋制作骨切片的文献极少.现将我们的经验报道如下(图1～4).     

显示石蜡组织切片脂质的染色方法

在实验动物脂质代谢模型中，为了观察组织中脂质的分布情况，笔者采用石蜡包埋连续切片，进行脂质染色，克服了冷冻切片不能有效原位固定脂质的局限性。经过改进油红乙醇液和Tracy染色法的石蜡制片，获得较好的染色效果。     

制作运动终板电镜标本的一种简单方法

在运动终板的超微结构形态学研究中,由于在半薄切片中寻找到运动终板比较困难,因而在电镜下难以观察到运动终板,特别在长肌中要在电镜下观察到运动终板更加困难。由此导致在电镜制样时,工作量大;在电镜观察时,失败概率高。我们在工作实践中,逐步摸索出一种比较容易观察到运动终板的制样方法,即将长肌及其支配神经进行整体包埋,以神经进入肌束处为标志进行半薄切片,便于在半薄切片中寻找到运动终板,然后进行定位,再进行超薄切片观察的方法,现简要报道如下:1　标本的取材　捣毁蟾蜍脑脊髓,处死蟾蜍。剥皮去内脏后,将蟾蜍下半身固定于蛙板上,腹…     

三种固定液对Feulgen反应显示DNA的比较

<正>本实验用10%福尔马林(10%FA),FAA液(甲醛、95%酒精、冰醋酸按10:85:4体积比)及Carnoy氏液作为固定液,对一个月SD大鼠睾丸组织(约3mm~2/块)进行固定.制得5μm的切片后,分别用Felugen反应显示DNA和H—E染色法染切片,并对Feulgen染色切片中的糖原细胞用图象分析仪进行DNA定量测定.结果发现:(1)选择60个左右大小、染色深浅均相近的精原细胞进行图象分析,用平均光密度值进行比较.发现Carnoy固定的切片,其均值最大而变异系数(CV)最小;10%FAA固定的居中,FAA固定的切片均值最小而CV最大.在镜下观察中,发现10%FA及FAA液固定后的切片染色均匀而Carnoy所染切片中曲细精管着色深浅不一.所以我们认为,(1)用10%FA作固定液对DNA的定量分析较适合.(2)对细胞核及细胞质的形态而言,经FAA液和Carnoy氏液固定的组织,其染色效果较由10%FA固定的组织好.经 FAA液和Carnoy氏液固定的切片,低倍镜下可见曲精小管管腔内初级精母细胞的丝状染色体及其他细胞的颗粒状染色质,高倍镜下核的结构更加清晰.而经10%FA固定的组织切片,低倍镜下管腔内的各级生精细胞的胞核呈现均匀成片的紫红色,观察不到丝状染色体,高倍镜下仔细分辨,才可隐约见到.但因Carnoy氏液固定的组织块脆性大,不易切片,所以FAA液固定最适于形态观察.     

锇酸固定组织的包埋后免疫电镜胶体金标记方法的改进

目的建立一种适用于中枢神经系统蛋白质抗原定位的包埋后免疫电镜胶体金标记方法。方法利用还原锇酸固定大鼠脑组织切片,首先在冰冻漂浮切片上用NaIO4确定待检抗原的可修复性,然后在亲水树脂Technovit7100包埋的半薄切片寻找使抗原得以最大程度修复的最佳NaIO4浓度,最后在超薄切片上进行相应抗原的免疫胶体金标记。结果NaIO4对不同抗原的修复作用明显不同。对于可修复抗原,低浓度NaIO4即可以使其充分修复。低浓度NaIO4处理组织可使组织超微结构保持完好,并可使胶体金高密度标记。     

H-E染色在环氧树脂半薄切片中的应用

半薄切片是进行超薄切片前的必要环节，有助于准确定位。常用的染色方法有甲苯胺蓝、吉姆萨染色法等。这些染色单一，仅能提供组织细胞着色深浅不同的蓝色，对特殊组织与特殊结构则不能选择性的染色。若经H-E染色则可提供更为详细的结构，弥补石腊切片的不足，且结构介于光镜和电镜之间，可应用到临床中，提高病理诊断水平。为此，我们在实验工作中摸索出改进的苏木素、伊红(H-E)染色法用于半薄切片，清晰地显示组织结构，提高切片分辨率。现介绍如下。     

Mallory三色法在小肠染色上的应用

本法主要是显示肌纤维、血细胞、结缔组织纤维和神经纤维等结构。原来我们将此法用在垂体染色上 ,现在我们用来染小肠、皮肤及含有结缔组织的器官等 ,可供教学及科研定性、定量分析 ,效果好 ,较传统的 H.E染色可更清晰地分辨各种结构。1 .组织固定 :取一小段用 Bouin氏液固定 2 4hr,常规包埋、切片、脱蜡。 2 .染色液的配制 :磷钨酸 5 g,橘红 G lg,苯胺蓝 0 .5 g,酸性复红 1 .5 g,蒸馏水 1 0 0 ml。先使磷钨酸溶于水内 ,逐次将染料加入 (要在前一染料完全溶解后 ,再加次一染料 )将三种染料混在一起用。 3.染色方法如下 :( 1 )常规方法脱蜡…     

微波骨髓活组织快速半薄石蜡切片的制备

骨髓穿刺活组织检查（骨髓活检）是确诊血液疾病的主要技术之一。微波骨髓活检组织快速半薄石蜡切片的制备，把微波辐射应用到骨髓活检组织的固定、脱水、透明、浸蜡及其切片染色等主要步骤中，结果仅需２～３ｈ即可完成切片制作，而且制片质量近似骨髓组织塑料包埋切片技...     

介绍一种新的弹性纤维染色法——改良Luna法

在研究人及某些脊椎动物视神经筛板的发育及结构过程中,我们将Luna弹性纤维染色法加以改良,后发现新方法能较清晰地显示弹性纤维的组织分布情况。现介绍如下。1 材料和方法标本用10%中性缓冲甲醛溶液或2.5%～5%戊二醛磷酸缓冲固定液(pH7.4)固定。石蜡包埋、切片厚5μm。染液配方:     

胃癌组织中淋巴细胞的超微结构研究

为了观察胃癌组织中癌细胞和癌间质中淋巴细胞的超微结构改变及两者之间的关系,我们对3例胃低分化腺癌进行了电镜观察。每例取肿瘤和正常组织交界处组织多块,以2.5%戊二醛作前固定;1.0%锇酸1.5%亚铁氰化钾作后固定;Epon 812包埋;半薄切片定位后超薄切片,在H-500型透射电镜下观察。结果发现,胃癌间质中有两种形态的淋巴细胞:一种细胞体积小,胞浆内细胞器少,核大呈圆形,细胞没有伪     

小鼠肾脏发育中凋亡细胞的超微结构变化

1　材料和方法1 1　动物取昆明小鼠 ,雌雄比例 3∶1同窝饲养 ,以雌鼠阴道精栓出现为第 1日计算胎鼠胚龄。部分孕鼠分笼饲养 2 0日后 ,每天早八时观察分娩情况 ,新生仔鼠按生后计算日龄。选取 1 4、1 8日胎鼠各 4只 ,生后 1、7、1 4日龄仔鼠各 4只为观察对象。1 2　光镜和电镜标本制作　在冷操作条件下切开胎鼠和仔鼠腹部 ,取左肾于 2 5 %戊二醛内固定。胎鼠做全肾树脂包埋 ,仔鼠肾脏经肾门做矢状面切开 ,皮质和髓质分别进行树脂包埋。ＬＫＢ Ｖ型超薄切片机半薄连续切片 ,甲苯胺蓝染色 ,按Ｋｏｓｅｋｉ判断光镜下凋亡细胞后制超薄切片 ,…