应用聚合酶链反应检测胃液诊断幽门螺杆菌感染

应用聚合酶链反应检测胃液诊断幽门螺杆菌感染徐晓华刘凤霖陈悦高文英我们采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测胃液中的幽门螺杆菌（Ｈｐ），以胃粘膜组织学检测为对照，探讨胃液检测在诊断儿童Ｈｐ感染的应用价值。对象：１９９５年８月～１９９６年３月因有消化道症状接受胃...     

应用胃小球采取胃液用PCR方法诊断胃幽门螺杆菌感染

检测幽门螺杆菌（Ｈｐ）感染有多种方法,除１３Ｃ尿素呼气试验和血清检查抗体外,均为有创性检查,因而儿科应用受到很大限制。为此,我们应用胃小球取胃液经ＨｐＰＣＲ诊断小儿Ｈｐ感染,获得满意效果。对象及方法：１对象：临床疑似Ｈｐ感染的门诊患儿３３例,年龄...     

PCR技术在儿童幽门螺杆菌感染中的应用

目的 建立一套适合儿童幽门螺杆菌感染的PCR检查方法，了解儿童幽门螺杆菌感染的可能途径。方法 对37例4～14岁患儿采用聚合酶链反应检测胃粘膜、胃液和唾液中的幽门螺杆菌，并作胃粘膜快速尿素酶、病理W—S银染色及细菌培养。结果 37例患儿中尿毒酶、病理W—S银染色、细菌培养、胃粘膜PCR、胃液PCR和唾液PCR的检出率分别为35．14％、40．54％、35．14％、45．95％、35．14％和5．40％；敏感性为68．8％、81．2％、81.3％、93．8％、81.3％、12．5％；特异性为90．5％、90．5％、100％、90．5％、100％、100％；2项或2项以上检出率阳性判断为幽门螺杆菌感染，37例患儿中阳性16例。结论 胃粘膜、胃液PCR方法同其他幽门螺杆菌检测手段相比幽门螺杆菌阳性检出率相似，PCR方法具有操作简便，特异性、敏感性高的优点，是诊断儿童幽门螺杆菌感染、判断药物疗效的有效检查手段。唾液PCR阳性率低可能与口腔缺乏特定的幽门螺杆菌生长环境有关，但也提示口-口传播是幽门螺杆菌感染的可能途径。     

广州地区患儿感染幽门螺杆菌vacA、cagA及iceA基因研究

目的探讨广州地区患儿感染幽门螺杆菌（Hp）的vacA、cagA、iceA的基因亚型和优势基因亚型。方法105例胃、十二指肠疾病患儿的胃窦处取3块胃黏膜,分别进行快速尿素酶反应、病理检查和聚合酶链反应（PCR）。抽提胃黏膜基因组DNA,用11对引物,检测HpureA、vacA、cagA和ieeA基因,分析HpvacA、cagA、iceA基因亚型。结果快速尿素酶反应、病理检查和PCR三者均阳性的标本52例,其中感染Hp vacA s1as1c／m2、s1as1c／m1T亚型菌株的阳性率分别是82．7％（43／52）、9．6％（5／52）,m区不能分型占7．7％（4／52）,Hp vacA s1as1c／m2与其他基因亚型相比较,差异有统计学意义。Hp vacA s1a和s1c亚型总是同时检出,未发现Hp vacA s1b、s2、m1亚型。HpcagA^＋菌株检出率是90．4％（47／52）,cagA^-菌株检出率9、6％（5／52）,二者比较,差异有统计学意义。Hp iceA1亚型菌株单独检出率78．8％（41／52）,Hp iceA2亚型菌株单独检出率是1．9％（1／52）,Hpi ceA1和ieeA2亚型均阳性是3．8％（2／52）,iceA1和iceA2亚型均阴性的比率是15．4％（8／52）,Hp iceA1亚型阳性率与其他基因亚型相比较,差异有统计学意义。结论Hp的Hp vacA s1as1c／m^2、cagA^＋、iceA1亚型是广州地区患儿感染的Hp的优势基因亚型,Hp vacA s1as1c／m^2、cagA。和iceA1基因组合是广州地区患儿感染的Hp的优势基因亚型组合。     

胃液实时聚合酶链反应检测儿童幽门螺杆菌及宿主基因型的临床研究

目的探讨胃液实时聚合酶链反应(real-time PCR)检测儿童幽门螺杆菌(HP)感染、克拉霉素敏感性和宿主CYP2C19基因代谢型方法的准确性,旨在寻求一种方便、快速、准确检测儿童HP感染,克拉霉素敏感性和CYP2C19基因代谢型的方法。方法选取2013年7月至2014年11月北京儿童医院消化科123例13C呼气试验检查阳性的胃炎或消化性溃疡患儿进行电子胃镜检查,胃镜下取胃黏膜并收集胃液标本。从胃液中提取DNA,然后通过聚合酶链式反应(PCR)扩增Rnase P酶和cag H以检测幽门螺旋杆菌的存在。通过PCR限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分别检测HP23SrRNA和宿主CYP2C19基因代谢型。研究共利用5对引物和9条探针进行HPcag H基因和23SrRNA基因,以及人Rnase P基因和CYP2C19*2、CYP2C19*3基因检测。将胃液结果与胃黏膜活检标本HP培养和E-test药敏试验及CYP2C19基因代谢型检测结果进行比较分析。结果以胃黏膜HP培养、E-test药敏试验及CYP2C19基因代谢型检测结果为金标准,胃液实时PCR检测HP感染诊断敏感度为100%...     

幽门螺杆菌相关性慢性胃炎患儿胃肠激素的变化

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)相关性胃炎患儿血促胃液素(GAS)、胃动素(MTL)、生长抑素(SS)分泌的变化。方法观察组50例慢性胃炎患儿,其中Hp阳性21例,Hp阴性29例;对照组30例为体检健康患儿。检查两组儿童空腹血GAS、MTL、SS水平,均采用放射免疫法进行测定,并对50例观察组患儿行胃镜检查,取胃窦黏膜2块及十二指肠球部黏膜1块作病理组织Giemsa染色。结果1.Hp阳性组血GAS含量(173±46)ng/L,明显高于Hp阴性组(110±20)ng/L,t=3.274 P<0.01,有显著性差异。2.Hp阳性组血MTL含量(187±53)ng/L,Hp阴性组(212±69)ng/L,两组比较无明显差异(t=2.494 P>0.05)。3.Hp阳性组血SS含量(144.5±11.0)ng/L,明显低于Hp阴性组(187.4±26.0)ng/L(t=3.897 P<0.01)。结论Hp阳性患儿血中存在GAS、SS的异常分泌,其分泌水平的异常为慢性胃炎的发病机制、诊断和治疗提供重要依据。     

再发性腹痛患儿幽门螺杆菌粪便抗原检测分析

目的　探讨儿童再发性腹痛与幽门螺杆菌 (Hp)的关系。方法　再发性腹痛 78例患儿分为学龄前组、学龄组 ,采用ELISA法测定粪便幽门螺杆菌抗原 (HpSA)。结果　再发性腹痛HpSA总阳性率 52 .2 % ,学龄前组阳性率 38.7% ,学龄组阳性率59.6 % ,两组比较差异显著性 ,性别、病程、症状比较差异无显著性。结论　儿童再发性腹痛与Hp感染关系密切 ,随年龄增长有上升趋势     

幽门螺杆菌与小儿慢性胃炎的研究

为探讨幽门螺杆菌（ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ，Ｈｐ）与小儿慢性胃炎关系，应用细菌培养及组织病理学技术，对７３例具有消化道症状行胃镜检查患儿胃粘膜标本进行研究，并测定患儿血清抗幽门螺杆菌抗体ＨｐＩｇＧ、ＨｐＩｇＡ。结果显示，７３例患儿中Ｈｐ总检出率为３７％（２７／７３），在慢性胃炎者中检出率为４４％（２７／６１），与组织学检查正常者比较差异有非常显著意义（精确概率Ｐ＝０．００２１）；Ｈｐ的检出与胃粘膜炎症程度相关，表明Ｈｐ可能是慢性胃炎的一种致病因素。细菌学Ｈｐ阳性组和阴性组ＨｐＩｇＧ、ＨｐＩｇＡ抗体水平比较，阳性组高于阴性组，差异有非常显著意义（ｔ＝６．９３６，Ｐ＜０．０１）。提示与胃粘膜Ｈｐ检查相对照，ＨｐＩｇＧ有较好的敏感性、特异性，有助于Ｈｐ感染的诊断，ＨｐＩｇＡ抗体水平在两组间重叠较多。     

Detection of congenital cytomegalovirus infection in Chinese newborn infants using polymerase chain reaction

Polymerase chain reaction (PCR) amplification was used to detect cytomegalovirus (CMV) in 1000 urine specimens from Chinese newborns for defining the incidence of congenital CMV infection in the Chinese population. The major immediate-early and the late antigen genes of CMV were amplified and detected by gel electrophoresis. There were 18 congenitally infected infants found when tests were performed with one or both primer pairs. Comparing with tissue culture, PCR of both primer sets provided a sensitivity of 94%, a specificity of 100% and a predictive value of positive result of 100%.     

原位聚合酶链反应检测在B细胞系非霍奇金病中的作用

目的 探讨用原位聚合酶镇反应(PCR)检测B细胞系非霍奇金病的意义。方法 用免疫球蛋白重链(IgH)第三互补决定区引物，生物素标记扩增产物直接原位PCR扩增15例非霍奇金病患儿外周血淋巴细胞。结果 15例非霍奇金病中，12例检测到特异性基因重排，4例呈现淋巴瘤性白血病，治疗后骨髓完全缓解，2例间期细胞原位PCR仍显示有IgH基因重排，分别于3个月及6个月复发。结论 原位聚合酶镇反应检测非霍奇金病不失为一种简单、快速、灵敏的方法，并能帮助预测复发。     

聚合酶链反应与点状免疫结合法在小儿结核性脑膜炎诊断中比较

目的为结核性脑膜炎早期诊断提供一个较好的实验室诊断方法。方法运用点状免疫结合法(dotIba)、聚合酶链反应(PCR)两种方法对临床诊断为结核性脑膜炎的20例患儿和20例对照患儿进行研究,分别从脑脊液中分离出38KD抗原和目的分段,分别计算其敏感性、特异性,并进行统计分析。结果dotIba在20例病例组中检测出10例阳性,PCR检出5例,两者敏感性和特异性分别是50%、25%和100%、95%。结论dotIba简单、方便、快速,敏感性比PCR高,特异性好,适合基层实验室运用,可以作为一种快速的辅助诊断结核性脑膜炎的实验室方法;PCR敏感性受结核药物的影响,因此对于初治病例敏感性高,而对接受了抗结核治疗的病例则敏感性差。     

Mycobacterium ulcerans infection diagnosed by polymerase chain reaction

Mycobacterium ulcerans infection is the third most important mycobacterial infection world-wide affecting immunocompetent individuals and causes chronic progressive skin ulcers. It has been described in many different regions world-wide. The diagnosis of M. ulcerans infection is often delayed because the diagnosis is difficult to make when new cases appear outside known endemic areas. However, molecular methods are now available to diagnose and distinguish M. ulcerans from other mycobacteria, allowing rapid diagnosis. Presented here is the case of a previously well girl from Townsville, Queensland, with extensive M. ulcerans infection involving the elbow joint, triceps tendon and underlying bone. Rapid diagnosis by polymerase chain reaction confirmed M. ulcerans infection. This is the first known case of M. ulcerans infection from Townsville in over 25 years, highlighting the changing epidemiology of this disease.     

应用实时聚合酶链反应技术检测儿童呼吸道标本中的呼吸道合胞病毒

目的建立实时聚合酶链式反应（PCR）技术检测儿科呼吸道标本中呼吸道合胞病毒（RSV）的方法.方法（1）根据RSV N基因序列设计合成分别用于扩增RSV A亚型和B亚型的TaqMan探针和引物,建立实时PCR方法,进行灵敏度和特异性检测.（2）采用实时PCR检测61例RSV检测阳性的冻存标本和103例新收集的呼吸道标本,并与病毒分离、间接免疫荧光、巢式PCR结果相比较.结果（1）实时PCR对A亚型RSV检测的灵敏度为5.25 pfu,B亚型为3.75 pfu,与巢式PCR相同.（2）实时PCR检测其他呼吸道病毒阳性标本,结果均为阴性;A亚型和B亚型之间无交叉.（3）实时PCR检测其他方法检测过的RSV阳性的冻存标本61例,A亚型（30例）阳性为27例（90%）,B亚型（31）阳性为27例（87.1%）.（4）103例新鲜标本中,实时PCR检出RSV 35例（A亚型7,B亚型28）,阳性率34.0%,其中巢式PCR阳性31例,阳性率30.1%;间接免疫荧光阳性22例,阳性率21.4%;病毒分离阳性9例,阳性率8.7%.实时PCR阴性的68例,其他方法均为阴性.实时PCR与三种方法的一致性检验,一致率在74.76%～96.12%（P均＜0.01）;差异性检验结果说明,实时PCR阳性检出高于间接免疫荧光和病毒分离（P均＜0.01）,而与巢式PCR差异无统计学意义（P＞0.05）.结论实时PCR检测儿科鼻咽分泌物标本中RSV的方法,敏感性、特异性和可重复性好,可用于急性呼吸道感染患儿标本中的RSV检测.     

16SrRNA基因PCR加反相杂交检测细菌DNA方法的建立与初步应用

目的探讨聚合酶链反应(PCR)加反相杂交技术在细菌DNA检测中的应用。方法以16SrRNA基因为靶序列,设计引物及寡核苷酸探针,采用PCR法加反相杂交检测标准菌株及临床标本细菌NDA。结果对20种标准菌株进行PCR扩增,均出现371bp长度的DNA片段,敏感性试验可检测出1×10-12g的细菌DNA,与人基因组及病毒无交叉反应;22份血培养阳性标本及4份脑脊液培养阳性标本均扩增出371bp长度DNA条带,反相杂交区分革兰阳性或阴性细菌与培养结果相符。结论16SrRNA基因PCR加反相杂交技术检则细菌DNA,具有特异、敏感、快速、准确的特点,可为细胞感染的临床诊断提供依据。     

Quantitation of human parvovirus B19 DNA by real-time polymerase chain reaction

BACKGROUND: There have been no reports on either the serial quantification of genomic copies in the various parvovirus B19 infections or the comparison of the viral amount in erythema infectiosum, unlike with that in other parvovirus B19 infections. METHODS: A total of 19 children with parvovirus B19 infection were classified into a group of seven (group A) with erythema infectiosum and a group of 12 (group B) without erythema infectiosum, and their serum levels of parvovirus B19 DNA were quantified by real-time polymerase chain reaction. A total of 30 boys and girls with some symptoms but no parvovirus B19 infection served as a control group (group C). RESULTS: The amount of parvovirus B19 DNA differed significantly between groups A and C (P < 0.01) and between groups B and C (P < 0.01). The amount of viral DNA was significantly higher in group B than in group A (P < 0.01). Sequential determination showed that the amount of viral DNA in group B rapidly decreased over several days. Erythema infectiosum developed in two patients of group B on the 6th and 29th days after onset when the amount of viral DNA was similar to that in group A. CONCLUSIONS: The amount of parvovirus B19 DNA correlated well with the stage of infection, and its quantitation was useful for determining disease status and prognosis. In parvovirus B19 infection, the viremia is associated with rare but varied pathological states different from erythema infectiosum, such as transient aplastic crisis, hemophagocytic syndrome, lupus-like syndrome, and papular-purpuric gloves and socks syndrome.     

应用聚合酶链反应技术检测微量残留白血病

为早期诊断和检测白血病患儿体内微量残留白血病（MRD），应用聚合酶链反应（PCR）技术及生物素标记克隆特异性探针斑点杂交方法，检测45例初发或复发急性白血病患儿免疫球蛋白重链（IgH）基因重排产生的第3互补决定区（CDR-Ⅲ），并对6例完全缓解患儿进行随访。结果表明，28例B-系急性淋巴细胞白血病（ALL）中25例（89．3％），9例T-系ALL中2例（22．2％）及1例粒-淋双标记白血病检出克隆性CDR-Ⅲ重排片段，7例急性非淋巴细胞白血病（ANLL）未见有意义的扩增带。6例完全缓解中，1例PCR扩增产物电泳后检测为阳性，但斑点杂交6例均显示阳性结果，且彼此间无交叉反应，检测肿瘤细胞的敏感度达10－5。研究提示本方法对早期诊断和监测MRD有重要意义。