Bcl-2、Bax在百草枯诱导大鼠视网膜损伤中的表达

目的观察百草枯对SD大鼠视网膜损伤的作用及对Bcl-2、Bax表达的影响,并探讨Bcl-2、Bax在百草枯诱导的视网膜细胞凋亡中的作用及意义。方法将大鼠随机分成对照组和模型组,对照组玻璃体腔注射0.1 mol.L-1 PBS,模型组玻璃体腔注射一定浓度的百草枯,分别在12 h、1 d、2 d、5 d处死动物,HE染色观察视网膜的损伤程度,TUNEL法检测视网膜细胞的凋亡情况,同时采用Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果①HE染色观察随着时间的增加,外核层逐渐变得稀疏并观察到核固缩,内核层可观察到核固缩,神经节细胞出现空泡样,5 d时内丛状层消失,外核层内核层紊乱。②TUNEL法检测凋亡结果:对照组没有发现凋亡阳性细胞,PQ可以诱导视网膜细胞凋亡,2 d凋亡指数达到高峰③Western blot结果:百草枯诱导的大鼠视网膜损伤可上调Bcl-2的表达,在1 d时达到高峰,与对照组相比差异有显著性(P<0.01),2 d开始下降;同时上调Bax的表达,在2 d时达到高峰,5 d时下降,各组之间差异均具有显著性(P<0.01);下调Bcl-2/Bax的比值,在2 d时达到最低,与对照组相比差异有显著性(P<0.01),到5 d时升高,与对照组比仍较低(P<0.01)。结论百草枯诱导了视网膜细胞的凋亡,可能是通过调节Bcl-2和Bax的表达来诱导视网膜细胞的凋亡,Bcl-2/Bax也与凋亡的发生密切相关。     

迷迭香酸抗过氧化氢诱导血管平滑肌细胞凋亡作用的研究

目的探讨迷迭香酸对过氧化氢(H2O2)诱导血管平滑肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法流式细胞术检测细胞凋亡率;吖啶橙(acridine orange,AO)染色观察细胞形态学变化;MTT法检测细胞活性;Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、Fas和FasL蛋白的表达。结果经500μmol·L-1H2O2处理24h后,细胞凋亡率为34.9%±2.55%,出现核固缩、核碎裂等典型的凋亡形态学改变,所以随后实验选择500μmol·L-1H2O2为诱导血管平滑肌细胞凋亡的最佳浓度。①500μmol·L-1的H2O2处理血管平滑肌细胞24h能引起细胞活性明显降低;细胞凋亡率明显增加,达35.7%±1.33%;细胞中Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,Bcl-2/Bax蛋白比值减少,Fas和FasL蛋白表达升高。②用迷迭香酸(10、20、40μmol·L-1)预处理细胞30min,可以增加细胞活性;降低细胞凋亡率,呈浓度依赖性;细胞中Bcl-2/Bax蛋白比值升高,Fas和FasL蛋白表达降低。结论迷迭香酸能拮抗H2O2诱导血管平滑肌细胞凋亡;其作用机制可能与升高细胞中Bcl-2/Bax蛋白比值,减少Fas、FasL蛋白表达有关。     

姜黄素诱导食管癌Eca-109细胞凋亡机制的研究

目的观察姜黄素诱导食管癌Eca-109细胞凋亡,并初步探讨其作用机制。方法通过CCK-8法检测不同浓度、不同时间点作用于Eca-109细胞的增殖抑制率。应用Caspase 3活性检测试剂盒检测胱天蛋白酶3活性。流式细胞技术检测细胞早期凋亡。免疫细胞化学法检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达情况。结果随浓度增加时间延长各组生长抑制率有明显增高,且呈剂量浓度依赖性,组间差异有显著性(P<0.01)。胱天蛋白酶3活性检测发现:姜黄素20μmol·L-1,40μmol·L-1作用24 h后OD值与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测到姜黄素作用后,细胞凋亡率明显升高。免疫细胞化学染色显示,随着姜黄素浓度的增高和作用时间的增长,Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强。结论姜黄素可能是通过诱导胱天蛋白酶3表达活性增高,上调促凋亡基因Bax及下调抗凋亡基因Bcl-2的表达,诱导Eca-109发生凋亡。     

异莲心碱对HepG2细胞周期和凋亡的影响

摘要：目的:研究异莲心碱对人肝癌Hep G2细胞周期与凋亡的影响。方法:采取流式细胞术检测不同浓度异莲心碱诱导Hep G2细胞24 h后对周期的影响; Hoechst33258染色观察异莲心碱诱导Hep G2细胞凋亡后细胞核形态的变化; JC-1染色检测细胞线粒体膜电位变化;蛋白免疫印记法(Western blot)检测Bax、Bcl-2蛋白的表达量。结果:流式结果显示,G0/G1期和G2/M期比例明显升高,而S期比例明显下降,并呈现剂量依赖性; Hoechst33258结果表明,药物诱导Hep G2细胞后,细胞数量减少,形态皱缩或改变,蓝色荧光加深; Western bolt检测可知,异莲心碱上调Bax蛋白并下调Bcl-2蛋白的表达水平。结论:异莲心碱可使Hep G2细胞阻滞于G0/G1期、G2/M期,诱导Hep G2细胞发生早期凋亡,其作用可能与Bax、Bcl-2两种凋亡蛋白表达水平变化相关。     

藤黄酸对胃腺癌细胞株AGS凋亡的影响

目的探讨藤黄酸对人胃腺癌细胞株AGS的增殖和凋亡作用。方法用不同浓度藤黄酸处理AGS细胞后,MTT法测定AGS细胞的增殖活性,流式细胞术分析藤黄酸诱导AGS细胞凋亡,Western blot法检测B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)和Bcl相关X蛋白(Bax)表达的变化。结果藤黄酸能剂量依赖性地抑制AGS细胞增殖、诱导AGS细胞凋亡、下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达;24h半数抑制浓度(IC50)为0.9μmol/L。结论藤黄酸能明显抑制胃癌细胞株AGS的增殖,诱导AGS细胞凋亡。其促凋亡作用可能与Bcl-2、Bax的表达有关。     

Effect of gambogic acid on apoptosis of gastric adenocarcinoma cell line AGS

目的 探讨藤黄酸对人胃腺癌细胞株AGS的增殖和凋亡作用.方法 用不同浓度藤黄酸处理AGS细胞后,MTT法测定AGS细胞的增殖活性,流式细胞术分析藤黄酸诱导AGS细胞凋亡,Western blot法检测B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)和Bcl相关X蛋白(Bax)表达的变化.结果 藤黄酸能剂量依赖性地抑制AGS细胞增殖、诱导AGS细胞凋亡、下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达;24 h半数抑制浓度(IC50)为0.9μmol/L.结论 藤黄酸能明显抑制胃癌细胞株AGS的增殖,诱导AGS细胞凋亡.其促凋亡作用可能与Bcl-2、Bax的表达有关.     

丁香酚诱导癌细胞PC-12凋亡的研究

目的 研究丁香酚诱导大鼠嗜铬细胞瘤PC-12的凋亡作用机制。方法 用不同浓度的丁香酚处理PC-12细胞,MTT法检测细胞相对存活率,荧光染色观察细胞凋亡情况;比色法检测Caspase-3酶活性;real-time PCR检测Bax和Bcl-2 mRNA水平的变化,Western blot检测蛋白水平的变化。结果 丁香酚能显著降低PC-12细胞存活率,促进Bax mRNA及蛋白表达,抑制Bcl-2 mRNA及蛋白表达,进而提高Caspase-3酶活性。结论 丁香酚可能通过上调Bax、下调Bcl-2表达,激活Caspase-3酶活性,诱导PC-12细胞凋亡。     

青蒿素通过线粒体途径诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的分子机制研究

目的探讨青蒿素能否通过激活人肝癌细胞HepG2的线粒体凋亡途径,诱导细胞凋亡。方法不同浓度青蒿素与人肝癌细胞HepG2共培养24 h,采用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测HepG2细胞周期与凋亡,Hoechst荧光染色法观察细胞凋亡形态,Western blot检测HepG2细胞内线粒体凋亡途径相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9和细胞色素C(Cytochrame,Cyto-C)表达水平。结果与对照组相比,青蒿素作用HepG2细胞24 h后,细胞增殖明显受到抑制,差异有统计学意义(P0.05)。0.2、0.4和0.8 mmol/L青蒿素给药组,细胞G_2/M期比例明显升高(P0.05),细胞核出现染色质不均匀,核浓缩聚集、碎裂凋亡形态,细胞凋亡比例升高,上述差异均有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示,青蒿素作用后细胞内Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高,Caspase-3、Caspase-9和Cyto C蛋白表达升高,上述差异均有统计学意义(P0.05)。结论青蒿素对HepG2细胞增殖具有抑制作用并能诱发细胞凋亡,其机制可能与线粒体凋亡途径相关,使细胞周期阻滞于G_2/M期。     

三叶青乙酸乙酯提取物对人胰腺癌PANC-1细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨三叶青乙酸乙酯提取物(ethylacetate fraction,EAF)对人胰腺癌PANC-1细胞的凋亡作用及其机制。方法 MTT法检测三叶青EAF对人胰腺癌PANC-1细胞的生长抑制作用;光镜及Hoechst 33258荧光染色分别观察药物作用后细胞形态和细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白印记法(Western blot)检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2和P53的表达情况。结果与对照组比较,三叶青EAF能显著地抑制人胰腺癌细胞PANC-1的生长,并呈明显的量-效关系。药物作用后,细胞形态改变,有明显的凋亡特征。流式细胞术检测细胞凋亡率有浓度依赖性。Western blot检测表明三叶青EAF可以促进Bax、P53蛋白表达升高,Bcl-2表达下降。结论三叶青EAF对人胰腺癌PANC-1细胞具有抑制增殖和促进凋亡作用,其机制可能与上调p53和Bax的表达,下调Bcl-2的表达有关。     

马钱子碱对乳腺癌细胞MDA-MB-231作用的实验研究

目的本研究旨在观察马钱子碱（Brucine）对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖抑制和诱导凋亡作用,并分析Brucine在诱导细胞凋亡过程中对Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的调控作用。方法人乳腺癌细胞株MDA-MB-231（雌激素受体阴性）细胞以L-15培养基体外培养,用MTT法测定Brucine对细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜观察细胞形态;以碘化丙啶（PI）单染流式细胞仪检测细胞凋亡;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测Brucine对MDA-MB-231的诱导凋亡作用;Western蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase3的表达。结果Brucine对MDA-MB-231细胞有明显的增殖抑制作用;观察到典型的细胞凋亡形态学特征性改变;流式细胞术PI染色结果显示随着Brucine浓度的增加细胞凋亡率逐渐增高并呈明显的浓度依赖,与对照组相比差异有显著性（P〈0.05）;早期凋亡率和晚期凋亡率先增加后降低,但死亡细胞逐渐增加;且随着Brucine浓度的增加抗凋亡基因Bcl-2表达水平明显降低,而促凋亡基因Bax和Caspase-3表达明显增高。结论Brucine能够诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡,其分子机制可能与激活Bax、Caspase-3和抑制Bcl-2等凋亡调控基因有关。     

美洲大蠊多肽提取物对SMMC-7721细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的：研究美洲大蠊多肽提取物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及其分子机制。方法：采用不同质量浓度的美洲大蠊多肽提取物作用于SMMC-7721,以Cell Counting Kit-8（CCK-8）法检测细胞抑制率;Hoechst33342/PI与Annexin V-FITC/PI双染法相结合检测SMMC-7721细胞的凋亡;蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：不同质量浓度的美洲大蠊多肽提取物可抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导其凋亡,呈一定的量效关系;Western Blot法显示Bax表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,Bcl-2/Bax比值降低。结论：美洲大蠊多肽提取物可明显诱导SMMC-7721细胞凋亡,抑制其增殖,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,降低Bcl-2/Bax比值有关。     

6，8- 二- 三氟甲基-5- 羟基-7- 乙酰氧基白杨素的抗胃癌作用

目的研究6,8-二-三氟甲基-5-羟基-7-乙酰氧基白杨素（dFMAChR）的体外抗胃癌作用。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞。MTT比色法测定细胞活性。PI染色流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡率。WesternBlot检测细胞NF-κB、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 dFMAChR显著抑制体外培养人胃腺癌SGC-7901细胞活性,呈剂量依赖性;dFMAChR有效诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡;dFMAChR下调NF-κB（p65）、Bcl-2蛋白表达,同时,上调Bax蛋白表达,呈浓度依赖性。结论 6,8-二-三氟甲基-5-羟基-7-乙酰氧基白杨素具有抗胃癌作用,其机制可能与其抑制NF-κB活化、下调Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白表达相关。     

维生素D对过氧化氢诱导MIN6细胞凋亡的保护作用

目的探讨维生素D(vitamin D,VitD)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H 2O 2)诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞凋亡的保护作用及机制。方法VitD预处理后,用H 2O 2处理MIN6细胞,分别运用CCK-8法、Hoechst 33258荧光染色法、流式细胞术检测MIN6细胞增殖、形态及凋亡百分率。Western blot检测增殖与凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3以及Cleaved caspase-3的表达。结果H 2O 2呈时间和剂量依赖性抑制MIN6细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低Bcl-2表达、增加Bax及Cleaved caspase-3表达,Bcl-2/Bax比值降低,Cleaved caspase-3/caspase-3比值增加;当用VitD预处理后,Bcl-2表达增加,Bax、Cleaved caspase-3表达降低,Bcl-2/Bax比值增加,Cleaved caspase-3/caspase-3比值降低,MIN6细胞活力增加。结论VitD预处理后,通过增加抗凋亡Bcl-2表达,降低促凋亡Bax和Cleaved caspase-3表达,减少由H 2O 2诱导的小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞凋亡。     

葛根异黄酮对MPP~+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨葛根异黄酮(Total isoflavones from puerarialobata,TIP)对甲基-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyr-idinium,MPP+)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制。方法用不同浓度TIP预处理体外培养的PC12细胞后,加入MPP+诱导多巴胺能神经损伤模型,用MTT法检测PC12细胞活力,采用实时定量RT-PCR检测Bcl-2和BaxmRNA的表达水平。结果MPP+处理48~96 h,细胞活力较空白对照组降低,阴性对照组Bax 2-ΔΔCt升高,而Bcl-22-ΔΔCt降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。与阴性对照组比较,葛根异黄酮组Bax 2-ΔΔCt降低,而Bcl-2 2-ΔΔCt升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论葛根异黄酮对MPP+诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用,下调Bax和上调Bcl-2 mRNA表达可能是其作用的机制之一。     

依达拉奉对硝普钠诱导PC12细胞氧化应激的保护作用

目的研究依达拉奉对硝普钠诱导PC12细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法以500μmol.L-1硝普钠诱导PC12细胞氧化应激损伤,MTT法测定细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹检测Bax和Bcl-2表达变化。结果依达拉奉在25μmol.L-1能增加氧化应激损伤细胞活力,在75μmol.L-1其保护作用达到峰值,能明显改善细胞形态结构,减少早期凋亡细胞数目,升高细胞Bcl-2/Bax比值。结论依达拉奉对硝普钠诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,其机制可能与依达拉奉清除NO,抑制线粒体凋亡通路有关。     

红景天苷对百草枯所致PC12细胞凋亡的抑制作用及相关机制

目的探讨红景天苷(salidroside)的神经保护作用及其可能的作用机制。方法采用百草枯(PQ)诱导的具有多巴胺神经元特性的PC12细胞凋亡作为帕金森病的体外模型。实验分对照组、PQ诱导组和红景天苷3个浓度(终浓度10,20和30μmol.L-1)预处理组。用MTT法测定细胞存活率,流式细胞术和Hoechst33258染色法测定细胞凋亡,比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3活性,免疫组化法检测细胞色素c(Cytc)的释放和Bcl-2蛋白的表达。结果PQ(800μmol.L-1)作用于PC12细胞24h后,与正常对照组比较,细胞存活率降低,细胞染色质固缩,细胞核呈致密浓染,细胞凋亡百分率升高;红景天苷3个浓度预处理后,细胞存活率增加,细胞核凝聚明显减少,细胞凋亡率降低,且具有量-效关系。另外,PQ可使PC12细胞caspase-3活性增强,Cytc的释放增加,Bcl-2的表达代偿性升高;红景天苷预处理后,PC12细胞增高的caspase-3活性和Cytc的释放明显降低,Bcl-2的表达进一步升高。结论红景天苷对PQ诱导的细胞凋亡具有浓度依赖性的抑制作用,其作用机制可能是促进Bcl-2的表达,抑制Cytc的释放和caspase-3的激活,提示红景天苷可能具有神经保护作用。     

珠子参总皂苷对H2O2诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用

目的:观察珠子参总皂苷对H2O2诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用,并探讨其作用机制.方法:Wistar乳鼠心肌细胞原代培养,用H2O2建立氧化应激损伤模型,然后用珠子参总皂苷(100,200 μg/mL)孵育24 h后,MTT法检测珠子参总皂苷对细胞活力的影响,流式细胞仪和Hoechst33258染色检测珠子参总皂苷对氧化应激诱导细胞凋亡及胞内ROS含量的影响,比色法测定心肌细胞Caspase-3、Caspase-9的活性,荧光定量PCR测定心肌细胞Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值.结果:珠子参总皂苷(100,200 μg/mL)能显著改善心肌细胞活性,有效保护线粒体膜电位的稳定,抑制心肌细胞凋亡和改善细胞形态,降低细胞内活性氧(ROS)含量;下调Bax mRNA表达,上调Bcl-2mRNA表达及Bcl-2与Bax的比值;降低H2O2所致新生大鼠心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的活性.结论:珠子参总皂苷对H2O2诱导心肌细胞凋亡有显著的抑制作用,其机制可能与其稳定心肌细胞膜、清除ROS及调节心肌细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3、Caspase 9表达有关.     

二氢青蒿素诱导HL-60细胞凋亡

目的探讨二氢青蒿素对人早幼粒白血病细胞(HL-60)的治疗作用。方法采用台盼蓝染色法和MTT法测定二氢青蒿素对HL-60细胞存活的影响,吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染色、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹分析凋亡相关蛋白的表达。结果二氢青蒿素可抑制HL-60细胞存活,诱导HL-60细胞凋亡,同时降低HL-60细胞Bcl-2蛋白的表达,增加Bax蛋白和凋亡执行蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达,并呈浓度依赖性。结论二氢青蒿素可诱导HL-60细胞凋亡,其机制可能是通过对线粒体凋亡通路中Bcl-2,Bax和caspase-3蛋白表达的调控而发挥作用。     

微RNA-24对过氧化氢诱导的人脐静脉血管内皮细胞凋亡的影响及作用机制

目的探讨微RNA-24(miR-24)对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)存活、迁移和凋亡的影响及作用机制。方法通过转染miR-24高表达、miR-24抑制物(anti-miR-24)及其阴性对照慢病毒质粒(miR-24 NC)构建稳转细胞,3种细胞用H2O2500μmol·L^-1处理12 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,划痕实验检测细胞迁移率,Hoechst33258染色及流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-24,Bax,Bcl-2和胱天蛋白酶3 mRNA表达水平,Western印迹法和免疫细胞化学法检测Bax、Bcl-2和胱天蛋白酶3蛋白表达水平。结果与miR-24 NC组比,miR-24高表达组miR-24表达升高(P<0.05),而anti-miR-24组降低(P<0.05)。与正常对照组比,H2O2组细胞凋亡率增加(P<0.05)、细胞存活和迁移率降低(P<0.05),表明氧化损伤模型构建成功。与H2O2+miR-24 NC组比,H2O2+miR-24高表达组上述指标较H2O2+miR-24 NC组升高(P<0.05),促凋亡蛋白Bax和胱天蛋白酶3 mRNA与蛋白表达量增加,抑凋亡蛋白Bcl-2 mRNA和蛋白表达量降低(P<0.05),而H2O2+anti-miR-24组可降低细胞凋亡率、增加细胞存活和迁移率,降低Bax和胱天蛋白酶3 mRNA与蛋白表达水平,增加Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论氧化应激状态下,miR-24可通过上调Bax、胱天蛋白3表达和下调Bcl-2蛋白表达,促进HUVEC凋亡和抑制其存活和迁移能力。